CC BY
5
«избыточные» и «упущенные» результаты, соответственно, при использовании КП в качестве контроля. Для установления роли выявленных ДЭM при инсульте с помощью баз данных mirDB и Targetscan были отобраны мРНК, являющиеся мишенями ДЭM. Функциональный анализ генов, кодирующих мРНК-мишени, выявил 44 метаболических пути (KEGG), которые могут быть связаны с активностью ДЭM. Только 13 путей (GnRH, MAPK, Dopaminergic synapse и др.) выделялись при использовании как КП, так и ЛО в качестве контроля, в то время как 31 путь (Focal adhesion, Wnt, GABA и др.) выделялся только с помощью одного из контролей. Большинство из них (29 путей) относились к «упущенным» результатам при использовании КП в качестве контроля.
Таким образом, использование КП и ЛО контролей позволило выявить микроРНК-сигналы биполушарных изменений в мозге крыс после tMCAO. Показано значительное влияние выбора контролей на получаемые результаты анализа ДЭM в ИП и их функциональную интерпретацию. Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Правительства Mосквы в рамках научного проекта № 21-34-70048.
Литература:
1. Ramsay L.A., Quille M.L., Orset C. et al. Ann Clin Transl Neurol.
2019. V. 6. № 9. P. 1681-95.
2. Wegner S., Uhlemann R., Boujon V. et al. Mol Neurobiol. 2020.
V. 57. № 3. P. 1446-58.
ВЛИЯНИE НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ НА АДЕНОВИРУСНУЮ ТРАНСДУКЦИЮ КУЛЬТУР ММСК
В.О. Мокроусова1 2, И.А. Недорубова1, А.Ю. Меглей2, А.В. Васильев2, Т.Б. Бухарова1, Д.В. Гольдштейн1
1 ФГБНУ Медико-генетический научный центр им. академика Н.П. Бочкова, Москва, Россия
2 ФГБУ НМИЦ ЦНИИСиЧЛХ Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: нестероидные противовоспалительные средства, ибупрофен, диклофенак, кетопрофен, аденовирусная трансдукция.
На данный момент генная терапия с использованием аденовирусных конструкций является одним из наиболее перспективных направлений в регенеративной медицине. Такой подход обеспечивает высокую эффективность трансдукции как делящихся, так и неделящихся клеток, позволяет переносить трансгены до 35 т.п.о. и исключает риск инсерционного мутагенеза. Однако, существенным недостатков применения аденовирусных конструкций является иммунный ответ организма и, как следствие, невозможность повторного использования данной вирусной системы. Для снижения иммунной реакции могут быть использованы нестероидные противовоспалительные средства (НПВС). Целью исследования была оценка влияния различных НПВС на эффективность аденовирусной трансдукции и жизнеспособность мультипотент-ных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК).
Материалы и методы. В работе использовали ММСК, полученные из жировой ткани крыс. Клетки инкубировали в присутствии аденовирусных векторов с геном зеленого флуоресцентного белка (Ad-GFP) с вирусной нагрузкой
320 ТСЮ50/мл в течение 16 ч. В качестве НПВС были выбраны: ибупрофен (1Ьи) в концентрации 0,5 мг/мл, 0,25 мг/мл и 0,125 мг/мл, диклофенак Юю) в концентрации 0,015 мг/мл, 0,03 мг/мл, 0,3 мг/мл и кетопрофен (Ке^ в концентрации 0,25 мг/мл, 1,25 мг/мл, 2,5 мг/мл. НПВС присутствовали в среде на протяжении всего исследуемого периода. На 1 и 3 сутки исследовали жизнеспособность клеток методом МТТ-теста и эффективность вирусной трансдукции по наличию клеток, содержащих флуоресценный белок ЭРР с помощью микроскопии и проточной цитофлуориметрии.
Результаты. Были подобраны оптимальные концентрации для каждого НПВС, не оказывающие существенного цитотоксического действия на ММСК (гибель не более 20% клеток). Жизнеспособность клеток через 3 суток инкубации для 0,125 мг/мл 1Ьи составляла 96,3 ± 3,8%, для 0,015 мг/мл Ио - 81,0 ± 2,5%, а для 0,25 мг/мл ^ -79,9 ± 1,0%. Эффективность трансфекции ММСК АС-ЭРР через 3 суток составила при добавлении 1Ьи 60,0 ± 1,6%, Ио - 31,4 ± 7,9%, ^ - 51,7 ± 5,7%, а в контрольной группе - 48,5 ± 2,0% (в отсутствие НПВС).
Таким образом, 1Ьи является наиболее предпочтительным НПВС для использования с аденовирусными векторами, не вызывает гибели клеток и оказывает положительное влияние на трансдукцию ММСК. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант № 21-75-10147.
ЛОКАЛЬНОЕ ВВЕДЕНИЕ СЕКРЕТОМА МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК СНИЖАЕТ КОЛИЧЕСТВО М2 МАКРОФАГОВ В МОДЕЛЯХ ПОВРЕЖДЕНИЯ СПЕРМАТОГЕНЕЗА
A.О. Монакова1, 2, Г.Д. Сагарадзе2, Н.А. Басалова2, В.С. Попов1, 2,
B.Ю. Балабаньян1 2, А.Ю. Ефименко1 2
1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт регенеративной медицины, Медицинский научно-образовательный центр, МГУ
им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, секретом, М2 макрофаги, сперматогенез, бесплодие.
Идиопатическое мужское бесплодие относится к состояниям с неудовлетворённой медицинской потребностью, для которой практически не существует эффективных методов лечения. Среди новых перспективных подходов терапии этого заболевания нами исследуется секретом мезенхимных стволовых клеток (МСК), эффективность которого была ранее продемонстрирована на различных животных моделях. Однако для продвижения в клинику препаратов на основе секретома МСК требуются дальнейший поиск их основных клеточных мишеней и исследование механизмов действия. Ранее мы показали, что секретом МСК оказывает воздействие на различные клетки ниши сперматогониальных стволовых клеток, стимулируя восстановление ниши после повреждения. В данной работе в качестве клеточной мишени секретома МСК мы рассматриваем М2 макрофаги, поскольку изменение их количества и функции может играть решающую роль в патогенезе нарушений сперматогенеза. Кроме того, в составе секретома МСК содержится множество факторов, которые способны регулировать функции макрофагов.
Чтобы проверить нашу гипотезу, мы использовали две модели нарушения сперматогенеза у животных: док-сорубицин-индуцированное повреждение у мышей и абдоминальный крипторхизм у крыс. Затем мы выделили семенники интактных животных, животных с нарушенным сперматогенезом и животных, которым проводили инъекции секретома МСК под белочную оболочку яичка после повреждения сперматогенеза. Методом иммуноги-стохимического анализа мы оценили на срезах полученных семенников содержание клеток, экспрессирующих основные маркёры М2 макрофагов (CD163 и CD206).
По нашим и по литературным данным количество CD163+ макрофагов в семенниках крыс увеличивалось после повреждения в модели крипторхизма по сравнению с интактными животными. Инъекция секретома МСК значительно снижала количество CD163+ макрофагов. Число этих клеток также увеличивалось после повреждения сперматогенеза доксорубицином у мышей, однако значимо не уменьшалось после инъекции секретома МСК. Однако в данной модели мы выявили увеличение числа CD206+ макрофагов после повреждения и снижение их количества после введения секретома МСК.
Таким образом, локальная инъекция секретома МСК приводит к снижению инфильтрации семенников М2 макрофагами, вызванной повреждением сперматогенеза. Дальнейшее изучение общих и частных механизмов действия секретома МСК необходимо для будущих фармацевтических разработок. Исследование выполнено в рамках государственного задания МНОЦ МГУ им. М.В. Ломоносова (эксперименты in vivo) и при поддержке Российского научного фонда (проект 19-75-30007, гистологические исследования).
КЛИНИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ В ПСИХИАТРИИ И НЕВРОЛОГИИ
Я.В. Морозова1, С.И. Рябов1, С.М. Радаев2, В.А. Смирнов2, А.А. Гринь2, Д.А. Емелина3, Ж.Б. Семенова4, А.Б. Смулевич5
1 ФГБУ НМИЦ кардиологии им. академика
Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия;
2 ГБУЗ НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского ДЗМ, Москва, Россия;
3 ФГБУ НМИЦ психиатрии и неврологии
им. В.М. Бехтерева Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия;
4 НИИ неотложной детской хирургии итравматологии ДЗМ, Москва, Россия;
5 ФГБНУ Научный центр психического здоровья Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: аутизм, шизофрения, детский церебральный паралич, посттравматическая энцефалопатия, черепно-мозговая травма, клетки пуповинной крови, восстановление когнитивных и двигательных функций.
Выполнен пул пилотных клинических исследований эффективности применения клеток пуповиной крови (КПК) в лечении ряда неврологических и психиатрических заболеваний у больных разных возрастных групп.
Применялась единая методика лечения — 4-кратное c интервалами в 14 дней внутривенное введение КПК в разовой дозе 250 млн клеток. Все этапы обработки КПК производились в соответствии с протоколом Netcord. Больным контрольных групп проводилась стандартная терапия.
Результаты. Во всех исследованиях применение КПК характеризовалось хорошей переносимостью и отсутствием значимых побочных явлений.
Аутизм: отмечено улучшение когнитивных функций и снижение выраженности аутистических симптомов у детей в возрасте до 12 лет. Выявлена положительная динамика в виде развития восприятия, снижении сома-тосенсорных нарушений, нормализации эмоционального статуса, развития социализации и коммуникативных способностей. Выраженность положительной динамики в группе клеточной терапии группе была значимо больше, чем у больных контрольной группы.
Шизофрения: в 6-летней серии наблюдений регистрировалось стойкое улучшение когнитивных функций и социального интеллекта, снижение выраженности расстройств астенического круга, что привело к увеличению продолжительности ремиссии и снижению частоты обращения за психиатрической помощью. Удалось преодолеть терапевтическую резистентность у хронических больных. Методом fМРТ были выявлены статистически значимые зона деактивации вербальной рабочей памяти в левой лимбической доле и зона активации краткосрочной памяти в левой нижней теменной извилине.
Посттравматическая энцефалопатия у взрослых: выявлено ускорение регресса очаговой симптоматики, восстановление регуляторной функции нервной системы. По данным нейрофизиологического исследования (вызванные когнитивные потенциалы) визуализированы изменения в структурах лимбической системы (гиппокамп и связанные с ним структуры).
Последствий тяжелой ЧМТ у детей: прослеживается стойкая положительная динамика как в восстановлении двигательных, так и когнитивных нарушений, наиболее выраженные изменения достигнуты по параметру ней-родинамика психических процессов. При анализе ЗВП отмечалась положительная динамика параметров коркового ответа различной степени выраженности, сопровождающаяся улучшением показателей неспецифической зрительной афферентации.
Спастические формы ДЦП: выявлено снижение патологического мышечного тонуса конечностей, возрастание мышечной силы, снижение частоты эпилептических приступов. Было отмечено улучшение в ментальной сфере (речь, память, внимание, интеллектуальное/эмоциональное развитие). В группе больных 2-6 лет положительная динамика достигалась быстрее и чаще. У больных с отягчающей ДЦП эпилепсией частота и тяжесть приступов снизились при сохранной дозе антиконвульсантов.
РЕГУЛЯЦИЯ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК МИКРОГЛИИ В МОЗГЕ МЫШЕЙ С ПОМОЩЬЮ ПЕКСИДАРТИНИБА ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ КОГНИТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ
Е.Ю. Москалева, А.В. Родина, А.С. Жирник, О.Д. Смирнова, О.В. Высоцкая, А.А. Парфёнова, Ю.П. Семочкина
НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: микроглия, нейровоспаление, пексидар-тиниб, когнитивные нарушения, регенерация, у-блучение, головной мозг.
Клетки микроглии (МГ) в головном мозге выполняют защитные функции, распознавая и фагоцитируя патогены,
