CC BY
9
Чтобы проверить нашу гипотезу, мы использовали две модели нарушения сперматогенеза у животных: док-сорубицин-индуцированное повреждение у мышей и абдоминальный крипторхизм у крыс. Затем мы выделили семенники интактных животных, животных с нарушенным сперматогенезом и животных, которым проводили инъекции секретома МСК под белочную оболочку яичка после повреждения сперматогенеза. Методом иммуноги-стохимического анализа мы оценили на срезах полученных семенников содержание клеток, экспрессирующих основные маркёры М2 макрофагов (CD163 и CD206).
По нашим и по литературным данным количество CD163+ макрофагов в семенниках крыс увеличивалось после повреждения в модели крипторхизма по сравнению с интактными животными. Инъекция секретома МСК значительно снижала количество CD163+ макрофагов. Число этих клеток также увеличивалось после повреждения сперматогенеза доксорубицином у мышей, однако значимо не уменьшалось после инъекции секретома МСК. Однако в данной модели мы выявили увеличение числа CD206+ макрофагов после повреждения и снижение их количества после введения секретома МСК.
Таким образом, локальная инъекция секретома МСК приводит к снижению инфильтрации семенников М2 макрофагами, вызванной повреждением сперматогенеза. Дальнейшее изучение общих и частных механизмов действия секретома МСК необходимо для будущих фармацевтических разработок. Исследование выполнено в рамках государственного задания МНОЦ МГУ им. М.В. Ломоносова (эксперименты in vivo) и при поддержке Российского научного фонда (проект 19-75-30007, гистологические исследования).
КЛИНИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ В ПСИХИАТРИИ И НЕВРОЛОГИИ
Я.В. Морозова1, С.И. Рябов1, С.М. Радаев2, В.А. Смирнов2, А.А. Гринь2, Д.А. Емелина3, Ж.Б. Семенова4, А.Б. Смулевич5
1 ФГБУ НМИЦ кардиологии им. академика
Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия;
2 ГБУЗ НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского ДЗМ, Москва, Россия;
3 ФГБУ НМИЦ психиатрии и неврологии
им. В.М. Бехтерева Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия;
4 НИИ неотложной детской хирургии итравматологии ДЗМ, Москва, Россия;
5 ФГБНУ Научный центр психического здоровья Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: Yanamorozova0@gmail.com
Ключевые слова: аутизм, шизофрения, детский церебральный паралич, посттравматическая энцефалопатия, черепно-мозговая травма, клетки пуповинной крови, восстановление когнитивных и двигательных функций.
Выполнен пул пилотных клинических исследований эффективности применения клеток пуповиной крови (КПК) в лечении ряда неврологических и психиатрических заболеваний у больных разных возрастных групп.
Применялась единая методика лечения — 4-кратное c интервалами в 14 дней внутривенное введение КПК в разовой дозе 250 млн клеток. Все этапы обработки КПК производились в соответствии с протоколом Netcord. Больным контрольных групп проводилась стандартная терапия.
Результаты. Во всех исследованиях применение КПК характеризовалось хорошей переносимостью и отсутствием значимых побочных явлений.
Аутизм: отмечено улучшение когнитивных функций и снижение выраженности аутистических симптомов у детей в возрасте до 12 лет. Выявлена положительная динамика в виде развития восприятия, снижении сома-тосенсорных нарушений, нормализации эмоционального статуса, развития социализации и коммуникативных способностей. Выраженность положительной динамики в группе клеточной терапии группе была значимо больше, чем у больных контрольной группы.
Шизофрения: в 6-летней серии наблюдений регистрировалось стойкое улучшение когнитивных функций и социального интеллекта, снижение выраженности расстройств астенического круга, что привело к увеличению продолжительности ремиссии и снижению частоты обращения за психиатрической помощью. Удалось преодолеть терапевтическую резистентность у хронических больных. Методом fМРТ были выявлены статистически значимые зона деактивации вербальной рабочей памяти в левой лимбической доле и зона активации краткосрочной памяти в левой нижней теменной извилине.
Посттравматическая энцефалопатия у взрослых: выявлено ускорение регресса очаговой симптоматики, восстановление регуляторной функции нервной системы. По данным нейрофизиологического исследования (вызванные когнитивные потенциалы) визуализированы изменения в структурах лимбической системы (гиппокамп и связанные с ним структуры).
Последствий тяжелой ЧМТ у детей: прослеживается стойкая положительная динамика как в восстановлении двигательных, так и когнитивных нарушений, наиболее выраженные изменения достигнуты по параметру ней-родинамика психических процессов. При анализе ЗВП отмечалась положительная динамика параметров коркового ответа различной степени выраженности, сопровождающаяся улучшением показателей неспецифической зрительной афферентации.
Спастические формы ДЦП: выявлено снижение патологического мышечного тонуса конечностей, возрастание мышечной силы, снижение частоты эпилептических приступов. Было отмечено улучшение в ментальной сфере (речь, память, внимание, интеллектуальное/эмоциональное развитие). В группе больных 2-6 лет положительная динамика достигалась быстрее и чаще. У больных с отягчающей ДЦП эпилепсией частота и тяжесть приступов снизились при сохранной дозе антиконвульсантов.
РЕГУЛЯЦИЯ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК МИКРОГЛИИ В МОЗГЕ МЫШЕЙ С ПОМОЩЬЮ ПЕКСИДАРТИНИБА ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ КОГНИТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ ПОСЛЕ ОБЛУЧЕНИЯ
Е.Ю. Москалева, А.В. Родина, А.С. Жирник, О.Д. Смирнова, О.В. Высоцкая, А.А. Парфёнова, Ю.П. Семочкина
НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
e-mail: moskalevaey@mail.ru
Ключевые слова: микроглия, нейровоспаление, пексидар-тиниб, когнитивные нарушения, регенерация, у-блучение, головной мозг.
Клетки микроглии (МГ) в головном мозге выполняют защитные функции, распознавая и фагоцитируя патогены,
погибающие клетки и фрагменты миелина, участвуют в процессах ремоделирования и устранения ненужных синапсов, в регуляции нейрогенеза, ремоделировании сосудистой сети, оказывают нейропротективное действие и обеспечивают гомеостаз в ЦНС. Пул клеток МГ поддерживается на постоянном уровне в результате сбалансированных процессов их пролиферации под действием С8Р-1 и гибели путем апоптоза. При нейродегенеративных заболеваниях разного генеза, в том числе в отдаленный период после облучения опухолей мозга, активированные клетки МГ определяют развитие длительного нейровоспаления и повреждение нейронов под действием медиаторов воспаления и непосредственного повреждения нейронов с участием системы комплемента. Одним из разрабатываемых подходов к лечению таких состояний является снижение количества клеток МГ при использовании ингибиторов рецептора СБР-1, в том числе перед облучением мозга. Цель работы — изучение степени снижения и восстановления количества клеток МГ в мозге после введения мышам ингибитора такого типа пексидартиниба (Р1_Х3397, ПД) в сравнении с уровнем нейровоспаления в гиппокампе и состоянием когнитивных функций. ПД вводили по двум схемам: только в течение 1 недели (40 мг/кг ежедневно) пред у-облучением головы в дозе 8 Гр (I) и пред облучением головы, а затем в отдаленный период во время развития нейровоспаления (II).
Клетки покоящейся МГ определяли в суспензии клеток мозга как популяцию С011Ь+/С045'°™, а активированной — как С011Ь+/Ш45М|911 с помощью проточной цитоме-трии. Нейровоспаление оценивали по уровню экспрессии генов провоспалительных цитокинов в гиппокампе с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, состояние когнитивных функций — с помощью тестов «распознавание нового объекта» (РНО) и «водный лабиринт Морриса» (ВЛМ).
После окончания введения ПД по схеме (I) количество клеток МГ снижалось до 14,4 ± 2,9%, а спустя 2 месяца оно восстанавливалось и составляло 85,2 ± 7,5%, а при схеме (II) — 75,1 ± 6,8% %. Показано более быстрое восстановление сниженного после облучения головы количества клеток МГ в случае облучения мозга после введения мышам ПД. Введение ПД приводило к снижению повышенного после облучения уровня экспрессии генов провоспалительных цитокинов Т|\1Ра и !Ыр в гиппокампе и сохранению экспрессии генов цитокинов И_-6, _ 10 и !_-4 на уровне контроля, что свидетельствует о снижении уровня нейровоспаления. Через 2 месяца после облучения головы у мышей обнаружено снижение эпизодической и пространственной памяти. Введение перед облучением ПД обеспечивало сохранение эпизодической памяти, но пространственная память оставалась сниженной. У контрольных мышей ПД не влиял на состояние эпизодической и пространственной памяти.
АНАЛИЗ ФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ И БИОРАСПРЕДЕЛЕНИЯ В НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ СВИНЕЙ АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА СЕРОТИПА OLIG001, КОДИРУЮЩЕГО КДНК ГЕНА АРИЛСУЛЬФАТАЗЫ А
A.И. Муллагулова, А.А. Шаймарданова,
B.В. Соловьева, Я.О. Мухамедшина, А.А. Костенников, A.A. Ризванов
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: aisilu.mullagulova@Yandex.ru
Ключевые слова: Метахроматическая лейкодистрофия, аденоассоциированный вирус, нейродегенерация.
Метахроматическая лейкодистрофия (МЛД) — ау-тосомно-рецессивное наследственное нейродегенера-тивное заболевание, относящееся к группе лизосомных болезней накопления (ЛБН), которое характеризуется поражением миелиновой оболочки, покрывающей большинство нервных волокон центральной (ЦНС) и периферической нервной системы (ПНС). МЛД возникает вследствие дефицита лизосомного фермента арилсульфатазы A, которая приводит к нарушению двигательной функции, спастическому тетрапарезу, атаксии, судорогам, атрофии зрительного нерва и когнитивным расстройствам. Целью данной работы является создание генного препарата на основе рекомбинантного аденоассоциированно-го вируса серотипа 0lig001 (AAB0lig001).
В этом исследовании был создан AAB0lig001-ARSA, который содержит уникальную кодон-оптимизирован-ную нуклеотидную последовательность гена ARSA. Полученный AAB0lig001-ARSA вводили интратекаль-но (1,45х1012 геномных копий/кг) двум мини-свиньям. Результаты сравнивали с группой интактных животных. Ферментативную активность ARSA в динамике анализировали в спинномозговой жидкости (СМЖ) и в образцах плазмы. Органы центральной нервной системы (ЦНС) использовали для анализа экспрессии ARSA с использованием количественной ПЦР и иммуногистохимии (ИГХ). Ферментативную активность ARSA в лизатах клеток, плазме, СМЖ в гомогенате органов ЦНС животных анализировали с помощью pNCS (#N7251, SIGMA). ИГХ проводили с использованием моноклональных антител к ARSA (#MAG619HU21, Cloud-Clone Corp).
Обнаружено повышение активности ARSA в плазме и СМЖ на 14-28 сутки. С помощью кПЦР подтвердили наличие мРНК ARSA в ЦНС. ИГХ анализ показал экспрессию белка ARSA в ЦНС.
Таким образом, мы показали, что после интратекаль-ного введения AAB0lig001-ARSA достигает ЦНС и приводит к сверхэкспрессии ARSA. Работа выполнена при поддержке Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030) и за счет средств субсидии, выделенной Казанскому федеральному университету для выполнения государственного задания № 06712020-0058 в сфере научной деятельности.
ПЛАЗМЕННОЕ ЭЛЕКТРОЛИТИЧЕСКОЕ ОКСИДИРОВАНИЕ ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТИ ДЕНТАЛЬНЫХ ИМПЛАНТАТОВ
А.А. Мураев1, А.И. Мурзабеков2, Е.А. Орлов3, Ю.В. Тарасов3
1 Российский университет дружбы народов, Москва, Россия
2 Центр оказания медицинской помощи при стоматологических заболеваниях, ФГБУ ЦКБ
с поликлиникой Управления Делами Президента Российской Федерации, Москва, Россия
3 ООО «Бета-Тех Медицина», Москва, Россия
e-mail: muraev_aa@pfur.ru
Ключевые слова: дентальные имплантаты, остеоинтегра-ция, поверхность дентального имплантата, технологии обработки поверхности, плазменное элетролитическое оксидирование, микродугового оксидирование, гидроксиаппатит, гидроксифосфат кальция.
Современные дентальные имплантаты обеспечивают предсказуемые долгосрочные результаты
