ВЛИЯНИЕ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ НА АДЕНОВИРУСНУЮ ТРАНСДУКЦИЮ КУЛЬТУР ММСК Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

154

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

«избыточные» и «упущенные» результаты, соответственно, при использовании КП в качестве контроля. Для установления роли выявленных ДЭM при инсульте с помощью баз данных mirDB и Targetscan были отобраны мРНК, являющиеся мишенями ДЭM. Функциональный анализ генов, кодирующих мРНК-мишени, выявил 44 метаболических пути (KEGG), которые могут быть связаны с активностью ДЭM. Только 13 путей (GnRH, MAPK, Dopaminergic synapse и др.) выделялись при использовании как КП, так и ЛО в качестве контроля, в то время как 31 путь (Focal adhesion, Wnt, GABA и др.) выделялся только с помощью одного из контролей. Большинство из них (29 путей) относились к «упущенным» результатам при использовании КП в качестве контроля.

Таким образом, использование КП и ЛО контролей позволило выявить микроРНК-сигналы биполушарных изменений в мозге крыс после tMCAO. Показано значительное влияние выбора контролей на получаемые результаты анализа ДЭM в ИП и их функциональную интерпретацию. Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Правительства Mосквы в рамках научного проекта № 21-34-70048.

Литература:

1. Ramsay L.A., Quille M.L., Orset C. et al. Ann Clin Transl Neurol.

2019. V. 6. № 9. P. 1681-95.

2. Wegner S., Uhlemann R., Boujon V. et al. Mol Neurobiol. 2020.

V. 57. № 3. P. 1446-58.

ВЛИЯНИE НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ НА АДЕНОВИРУСНУЮ ТРАНСДУКЦИЮ КУЛЬТУР ММСК

В.О. Мокроусова1 2, И.А. Недорубова1, А.Ю. Меглей2, А.В. Васильев2, Т.Б. Бухарова1, Д.В. Гольдштейн1

1 ФГБНУ Медико-генетический научный центр им. академика Н.П. Бочкова, Москва, Россия

2 ФГБУ НМИЦ ЦНИИСиЧЛХ Минздрава России, Москва, Россия

e-mail: victoria-mok@Yandex.ru

Ключевые слова: нестероидные противовоспалительные средства, ибупрофен, диклофенак, кетопрофен, аденовирусная трансдукция.

На данный момент генная терапия с использованием аденовирусных конструкций является одним из наиболее перспективных направлений в регенеративной медицине. Такой подход обеспечивает высокую эффективность трансдукции как делящихся, так и неделящихся клеток, позволяет переносить трансгены до 35 т.п.о. и исключает риск инсерционного мутагенеза. Однако, существенным недостатков применения аденовирусных конструкций является иммунный ответ организма и, как следствие, невозможность повторного использования данной вирусной системы. Для снижения иммунной реакции могут быть использованы нестероидные противовоспалительные средства (НПВС). Целью исследования была оценка влияния различных НПВС на эффективность аденовирусной трансдукции и жизнеспособность мультипотент-ных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК).

Материалы и методы. В работе использовали ММСК, полученные из жировой ткани крыс. Клетки инкубировали в присутствии аденовирусных векторов с геном зеленого флуоресцентного белка (Ad-GFP) с вирусной нагрузкой

320 ТСЮ50/мл в течение 16 ч. В качестве НПВС были выбраны: ибупрофен (1Ьи) в концентрации 0,5 мг/мл, 0,25 мг/мл и 0,125 мг/мл, диклофенак Юю) в концентрации 0,015 мг/мл, 0,03 мг/мл, 0,3 мг/мл и кетопрофен (Ке^ в концентрации 0,25 мг/мл, 1,25 мг/мл, 2,5 мг/мл. НПВС присутствовали в среде на протяжении всего исследуемого периода. На 1 и 3 сутки исследовали жизнеспособность клеток методом МТТ-теста и эффективность вирусной трансдукции по наличию клеток, содержащих флуоресценный белок ЭРР с помощью микроскопии и проточной цитофлуориметрии.

Результаты. Были подобраны оптимальные концентрации для каждого НПВС, не оказывающие существенного цитотоксического действия на ММСК (гибель не более 20% клеток). Жизнеспособность клеток через 3 суток инкубации для 0,125 мг/мл 1Ьи составляла 96,3 ± 3,8%, для 0,015 мг/мл Ио - 81,0 ± 2,5%, а для 0,25 мг/мл ^ -79,9 ± 1,0%. Эффективность трансфекции ММСК АС-ЭРР через 3 суток составила при добавлении 1Ьи 60,0 ± 1,6%, Ио - 31,4 ± 7,9%, ^ - 51,7 ± 5,7%, а в контрольной группе - 48,5 ± 2,0% (в отсутствие НПВС).

Таким образом, 1Ьи является наиболее предпочтительным НПВС для использования с аденовирусными векторами, не вызывает гибели клеток и оказывает положительное влияние на трансдукцию ММСК. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант № 21-75-10147.

ЛОКАЛЬНОЕ ВВЕДЕНИЕ СЕКРЕТОМА МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК СНИЖАЕТ КОЛИЧЕСТВО М2 МАКРОФАГОВ В МОДЕЛЯХ ПОВРЕЖДЕНИЯ СПЕРМАТОГЕНЕЗА

A.О. Монакова1, 2, Г.Д. Сагарадзе2, Н.А. Басалова2, В.С. Попов1, 2,

B.Ю. Балабаньян1 2, А.Ю. Ефименко1 2

1 Факультет фундаментальной медицины, МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

2 Институт регенеративной медицины, Медицинский научно-образовательный центр, МГУ

им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

e-mail: monakova-anya@mail.ru

Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, секретом, М2 макрофаги, сперматогенез, бесплодие.

Идиопатическое мужское бесплодие относится к состояниям с неудовлетворённой медицинской потребностью, для которой практически не существует эффективных методов лечения. Среди новых перспективных подходов терапии этого заболевания нами исследуется секретом мезенхимных стволовых клеток (МСК), эффективность которого была ранее продемонстрирована на различных животных моделях. Однако для продвижения в клинику препаратов на основе секретома МСК требуются дальнейший поиск их основных клеточных мишеней и исследование механизмов действия. Ранее мы показали, что секретом МСК оказывает воздействие на различные клетки ниши сперматогониальных стволовых клеток, стимулируя восстановление ниши после повреждения. В данной работе в качестве клеточной мишени секретома МСК мы рассматриваем М2 макрофаги, поскольку изменение их количества и функции может играть решающую роль в патогенезе нарушений сперматогенеза. Кроме того, в составе секретома МСК содержится множество факторов, которые способны регулировать функции макрофагов.

Гены & Клетки XVII, №3, 2022