КУЛЬТУРА КЛЕТОК КАК МОДЕЛЬ ИЗУЧЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ВЫХЛОПНЫХ ГАЗОВ АВТОТРАНСПОРТА Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

щать испаритель и соединительную трубку. Перфорированная муфта со стальными стружками, находящаяся в испарителе, плохо задерживала пробы воды объемом даже в несколько микролитров. Нам все же пришлось остановиться на прямом анализе проб крови, так как гексановые вытяжки обусловливали появление на хроматограммах очень больших и размытых пиков гексана. ✓

Затруднение возникло также при отборе проб крови у животных (крысы). При отборе малых разовых проб из хвоста живых животных обнаруживались незначительные количества СС14 (0,5-10~3 л*г/20 мкл) вследствие его улетучивания. Значительно больше (2,2-10~3 мг/20 мкл) было найдено в крови убитого животного, объем которой составлял около 5 мл и испарение СС14 было замедлено. На рис. 1, б приведены хроматограммы крови и калибровочный график. Затравку животных проводили per os и ингаляционнЬ.

Концентрации СС14 в крови составляли около 6 мг/100 мл.

%

Выводы

9

1. Для определения микропримесей токсических веществ в крови и других биосредах рекомендуется применять газовые хроматографы с конструкцией испарителя, обеспечивающей его удобную и быструю очистку.

2. Оптимальными условиями для определения СС14 являются следующие: насадка сферохром-1, температура колонки 80—100°, температура испарителя 150°, газ-носитель азот со скоростью 50 мл/мин, детектор ПИД. Определяемый минимум СС14 в воздухе составляет 0,01 мг/л.

3. Наилучшим способом устранения мешающего влияния основного компонента (воды) при анализах проб крови является насыщение потока газа-носителя водяными парами. Применение осушителей (ангидрона и безводного К2СОа) связано с неудобствами, обусловленными недостаточно продолжительной поглотительной способностью осушителей (10—12 определений при длине слоя осушителя около 20 см).

ЛИТЕРАТУРА

Й % У

Пономарев В. Ф. Одновременное обнаружение алифатических спиртов и определение этилового алкоголя в крови и моче методом газо-жидкостной хроматографии. Дисс. канд. Душанбе, 1967.— Устиновская И. А., Г а в р и л и н a J1. Я., Малахов В. В. Завод, лабор., 1969, № 5, с. 553.— Шугаев Б. Б. В кн.: Общие вопросы промышленной токсикологии. М., 1967, с. 24.— Butler R.A., Freeman J., Brit. J. Anaesth., 1962, v. 34, p. 440.—С incotta J. J., Feinland R., Analyt., Chem., 1964, v. 36, p. 488.— Foster Y. S., Murfin J.W., Analyst., 1965, v. 90, p. 64.— L о w e H. J., BeckhamM. D., Biomedical Applications of Gas Chromatography. New York, 1964, v. 1, p. 307.—R о n k a i n e n P., Kern Teollisuus, 1969, No. 3, p. 215.— S w R. I., Chem. and Eng. News, 1960, v. 38, p. 36.

Поступила 3/VII 1970 r.

УДК 615.9:621 43.019.13].076:576.3.085.23

%

КУЛЬТУРА КЛЕТОК КАК МОДЕЛЬ ИЗУЧЕНИЯ

ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ВЫХЛОПНЫХ ГАЗОВ АВТОТРАНСПОРТА

Канд. мед. наук Л. 3. Гомелаури, доктор мед. наук В. И. Бахуташвили

Научно-исследовательский институт санитарии и гигиены им. Г. М. Натадзе, Тбилиси

Для оценки воздействия выхлопных газов автотранспорта в последнее время все более широкое распространение получает метод тканевых культур, который с успехом используется при исследовании самых разнообразных вопросов в биологии, вирусологии ит. д. (Robins и Endens, 1950). Появились работы, посвященные изучению влияния на тканевые культуры различных химических соединений. Так, Rounds и соавт. (1962) использовали культуру

тканей из эпителиальных клеток конъюнктивы для изучения воздействия выхлопных газов автомобилей. О. П. Шаламберидзе и соавт. (1968) показали дитопатическое действие двуокиси азота на клетки тканевых культур.

Исходя из сказанного, мы поставили перед собой цель выяснить возможность применения культуры клеток в качестве модели для изучения токсического влияния выхлопных газов транспорта, а также изучить совместное действие выхлопных газов и вирусов на клетках культуры тканей. Этот опыт продиктован клиническими наблюдениями, показывающими, что парагриппозное заболевание протекает у некоторых водителей и механиков гаражей по сравнению с другими специальностями более тяжело. Нами было высказано предположение, что более тяжелое проявление заболевания обусловливается развитием парагриппозной инфекции на хронически пораженной выхлопными газами слизистой оболочке верхних дыхательных путей.

В работе были использованы перевиваемые культуры НЕр-2, НеЬа (человеческие опухолевые клетки), Ь-мышиноэмбриональные клетки, первичные культуры ЛЧЭ (легочные клетки эмбриона человека) и КФ (куриные фибробласты). Перевиваемые клетки культивировали общепринятым методом в среде 199 с добавлением 10% коровьей сыворотки, 100 ЕД пенициллина и 50 ЕД стрептомицина на 1 мл среды. Культуры выращивали на покровных стеклах, помещенных в матрацы емкостью 500 мл, куда вносили клетки в количестве 2х 10 в 50 мл среды. Ткани для получения первичных культур подвергали трипсинизации по общепринятой методике. Клеточную взвесь рассевали в матрицах с покровными стеклами. Среда состояла из 0,5% раствора гидролизата лактальбумина на растворе Хэнкса с 10% телячьей сывороткой, пенициллином и стрептомицином. Опыт начинали после образования клеточного монослоя на покровных стеклах.

Источником выхлопных газов служил двигатель автомашины «Волга», который работал на холостом режиме с использованием бензина марки «А-72». Опыты проводили при температуре воздуха 15°. Газы поступали непосредственно из выхлопного отверстия в матрац, где находились стекла с монослоем культуры ткани.

Клетки обрабатывали газом в течение 15 мин. Затем матрац отсоединяли от системы. Производили замену питательной среды и продолжали культивирование ткани в термостате. Через 24 часа покровные стекла извлекали из матраца; культуру ткани фиксировали в растворе Буэна, окрашивали «азур-эозином и просматривали под микроскопом. Контрольные клетки обрабатывали чистым воздухом. В I серии опытов (клетки+газ) через 24 часа обнаружено резкое уменьшение количества клеток. На препаратах они лежали изолировано или небольшими группами.

Перевиваемые культуры ткани НеЬа и НЕр-2 — клетки, которые имели эпителиальную структуру, резко изменили форму, стали фибробластоподоб-ными, уродливыми. Число митозов сократилось вплоть до единичных. Клетки изменили окраску и из базофильных стали эозинофильными, что, возможно, связано с изменением их химизма. Встречалось довольно много пик-нотических ядер. В препаратах, приготовленных из первичных клеточных культур, легочных клеток, эмбриона человека и КФ отмечалось развитие цитопатического эффекта, выражающегося в почти полном подавлении митоза, прекращающемся делении, дегенерации и отслоении погибших клеток.

В контроле никаких изменений не установлено. Следовательно, к воздействию выхлопных газов оказались чувствительными все взятые в опыт линии клеток — как клетки перевиваемых, так и первичных культур ткани. Не удалось заметить какой-либо связи между происхождением клеточной линии и ее чувствительностью. Одинаково чувствительными были клетки человеческие и животного происхождения.

II серию опытов (клетка+выхлопные газы и вирус парагриппа 3 типа) •ставили в 4 вариантах. Эксперимент продолжался 24 часа после заражения вирусом и обработкой клеток выхлопными газами.

С целью изучения динамики размножения, характера цитоморфологи-ческих изменений и локализации синтеза вирусного антигена использована наиболее чувствительная культура (НЕр-2) к действию выхлопных газов и размножению вируса парагриппа 3 типа. Инфицирующая доза вируса равнялась 0,1 ИД50 на клетку. Локализацию вирусного антигена определяли методом иммунофлюоресценции.

Эксперименты ставили в такой последовательности. В первом варианте опытов после 15 мин. обработки газом клетки НЕр-2 заражали вирусом парагриппа 3 типа, во втором эти клетки обрабатывали только газом, в третьем — только вирусом парагриппа 3 типа и в четвертом — чистым воздухом. Три последних варианта служили контрольными опытами для сравнения ассоциированного действия газа и вируса с клетками.

В первом варианте найдены наиболее выраженные необратимые изменения, характерные для действия как выхлопных газов, так и вируса парагриппа 3 типа. Обнаружены единичные клетки, у которых цитоплазма содержит ниточные структуры. Митозов совсем нет. Выявились ярко лю-минесцирующие гранулы, указывающие на наличие антигена парагриппоз-ного вируса. Во втором варианте количество клеток, обработанных только выхлопными газами, резко уменьшилось. В третьем варианте монослой сохранился, встречались симпласты, какие-либо включения отсутствовали,, отмечалось наличие митозов. В перинуклеарной зоне и во всей цитоплазме четко выделялись ярко люминесцирующие гранулы.

Контрольные клетки были без изменений.

Выводы

%

1. Культура тканей может быть использована как модель для изучения токсического действия выхлопных газов автотранспорта.

2. Комбинированное действие выхлопных газов и вируса парагриппа 3-

вызвало наиболее выраженные изменения.

*

ЛИТЕРАТУРА

I *

Шаламберидзе О. П., Бахуташвили В. И., Мер аби ш в и • л и Д. Г. В кн.: Сборник трудов Научно-исслед. ин-та санитарии и гигиены Грузинск. ССР, 1968, т. 6, с. 93.— Rounds D. S., A w а А., Р о m е v a s С. М., Arch, enviroum. Н 1th., 1962, .5, 4, 3119.

Поступила 26/1 1971 г-

л УДК 613.632.4:66.062.522.91-07'

К МЕТОДУ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТИЛЕНХЛОРГИДРИНА В ВОЗДУХЕ

ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ПОМЕЩЕНИЙ

Э. Г. Долматова-Г у сева, В. С. Айзенштадт

Научно-исследовательский институт гигиены, Куйбышев

фы

Существующие методы определения этиленхлоргидрина (ЭХ Г) в воздухе предназначены для обнаружения чистого вещества и непригодны, если он находится в смеси с другими соединениями. Определение ЭХ Г по хлору, использованное В. Г. Ковязиным для обоснования предельно допустимой концентрации ЭХ Г в воздухе производственных помещений (0,5 мг/м*)у неизбирательно. Метод, основанный на определении ЭХ Г по формальдегиду с помощью хромотроповой кислоты (Е. Ш. Гронсберг), оказался непригоден по двум причинам. Во-первых, из-за недостаточной специфичности, так как хромотроповая кислота является реактивом для многих органических соединений, гидролизующихся в кислой среде, а также и для аммиака. Во-вторых, как показали результаты наших исследований, хромотроповая