CC BY
46
МЕТОДИ I МЕТОДИКИ
© Кушнарева Е. А.
УДК 611. 631. 3/. 44:616. 681-007. 41]-003. 93-02 -089. 882-092. 9 Кушнарева Е. А.
КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИЯ СЕМЕННИКА
ГУ «Днепропетровская медицинская академия» МОЗ Украины
(г. Днепропетровск)
Данная работа является фрагментом научной темы кафедры урологии, оперативной хирургии и топографической анатомии Днепропетровской медицинской академии «Морфофункцюнальы осо-бливост судинного русла та регенерацмы можли-вост внутршых оргаыв пюля органозбер1гаючих оперативних втручань малошвазивними методами», № гос. регистрации 0111Ш08101.
Вступление. На сегодняшний день актуальной остается проблема снижение рождаемости населения, что связано с большим количеством бесплодных браков. Причиной этого часто является снижение андрогенной функции у мужчин. [3, 10, 17]. Проблема восполнения гормонального дефицита остается до конца нерешенной. Гормональная терапия, проводимая при андрогенной недостаточности, зачастую оказывается неэффективной [3, 7, 8, 9, 12, 21, 23]. В последние годы для восполнения андрогенного дефицита помимо гормонального лечения применяются методы трансплантации мужской половой железы или трансплантации ее культур клеток и тканей [2, 4, 5, 7, 8, 9, 17]. Также в литературе описаны методы свободной трансплантации семенника, взятого у неполовозрелого донора [6, 11, 13, 14, 15, 18, 19, 20, 22].
Целью данного исследования явилось изучение способа ксенотрансплантации неполовозрелого семенника.
Объект и методы исследования. Для исследования послужили донорские яички (семенники) 15 нелинейных белых мышей самцов массой 12 ± 2 г (М ± т) в возрасте 5-7 суток, трансплантированные в семенники реципиентов. Реципиентами послужили 30 взрослых белых крыс-самцов линии Wistar. Содержание животных и эксперименты проводились согласно положений «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются для экспериментов и других научных целей» (Страссбург, 1985), «Загальних етичних принцип1в експеримент1в на тваринах», утвержденных Первым национальным конгрессом по биоэтике (Киев, 2001).
Трансплантант помещался под белочную оболочку семенника реципиента согласно методике [16]. Всех животных после трансплантации выводили из эксперимента на 10, 30, и 60 сутки наблюдения. Контролем послужили семенники 5 взрослых нелинейных белых мышей самцов. Производилось
окрашивание гематоксилин-эозином, толуидино-вым синим; свежезамороженные срезы окрашивались суданом III и ставилась реакция на щелочную фосфатазу. В основу морфометрического анализа положены системные подходы в изучении паренхиматозных органов [1]. Полученные данные подвергали статистической обработке.
Результаты исследований и их обсуждение. Эффективность проведенной трансплантации семенника наблюдалась в 23 случаях из 30 операций. Отсутствие эффекта отмечалась в 7 случаях: животные погибли. При вскрытии у всех погибших животных была выявлен некроз трансплантантов и гнойная деструкция тимуса и щитовидной железы.
На 10 сутки наблюдения извитые семенные канальцы и кровеносные сосуды сохранялись в периферических отделах трансплантата. В ин-терстициальной ткани наблюдались как дифференцированные зрелые клетки Лейдига, так и малодифференцированные (фетальные) эндокри-ноциты. Дифференцированные клетки были крупные, овальной или округлой формы; ядра данных клеток располагались в центре и содержали большое количество хроматина. В среднем наблюдалось 5,80±0,60 эндокриноцитов в поле зрения (в контроле 8,10±0,40) (р<0,05), из них малодифференцированные эндокриноциты составляли до 26 % от общего количества. Средний объем ядер составлял 52,2±1,8 мкм3 (в контроле 76,30±5,26) (р<0,05). Митозы эндокриноцитов наблюдались редко. Центральная часть трансплантированного семенника характеризовалась запустением, отсутствием сосудов и извитых семенных канальцев. В интерсти-циальной ткани наблюдалось большое количество молодых фибробластов. При дальнейшем развитии трансплантированного семенника происходила последовательная смена двух морфологических типов клеток Лейдига: фетальные эндокриноциты по мере дифференцировки заменялись зрелыми клетками Лейдига с высокой секреторной активностью.
На 30-60 сутки наблюдения основная популяция клеток Лейдига была представлена высокодиффе-ренцированными зрелыми (дефинитивными) клетками. В среднем наблюдалось 7,90±0,60 эндокриноцитов в поле зрения (в контроле 8,10±0,40) (р<0,05). Средний объем ядер составлял 75,20±5,28 мкм3 (в контроле 76,30±5,26) (р<0,05). Интерстициальная
ткань семенника характеризовалась двумя типами расположения эндокриноцитов: групповой (кластерный) и одиночный. Групповой вариант расположения наблюдался вблизи кровеносных сосудов интерстиция (перивазально), одиночные эндокри-ноциты встречались вблизи оболочки некоторых извитых семенных канальцев (перитубулярно). Цитоплазма клеток Лейдига была светлой, с многочисленными вакуолями, что указывало на их гормо-нопродуцирующую функцию. Реакция отторжения трансплантанта отсутствовала.
Выводы. Данные настоящего исследования позволяют сделать выводы об эффективности
способа ортотопической ксенотрансплантации неполовозрелого семенника. для восполнения андро-генного дефицита.
Перспективы дальнейших исследований. Мы
считаем, что данный способ может быть применен для лечения больных гипогонадизмом. Использование банка криоконсервированных ксенотрансплан-тантов семенников, как донорского материала, поможет решить проблему дефицита донорских органов и свести к минимуму технические и юридические трудности, возникающие при использовании в качестве донорского органа яичка человека.
Литература
1. Автандилов Г. Г. Медицинская морфометрия: Руководство / Г. Г. Автандилов. - М.: Медицина, 1990. - 384с.
2. Артюхин А. А. Способ лечения больных с нарушением мужской половой функции методом трансплантации / Артюхин А. А., Зарайский Е. И., Романов А. И. // Патент РФ RU (11) 2200012 (13) C1 2003. 03. 10.
3. Бондаренко В. О. Ппоандрогенем1я та чолов1ча неплщнють / В. О. Бондаренко, О. М. Демченко, Т. Ю. Бурма, 6. I. Скорняков // Сексология и андрология / Под ред. Проф. И. И. Горпинченко. - К.: Ин-т урологии и нефрологии АМН Украины, 2000. - Вып. 5 - С. 112 - 114.
4. Бондаренко Т. П. Коррекция гормонального статуса у кастрированных и с экспериментальным гипогонадизмом крыс путем алло- и ксенотрансплантации органотипических культур / Т. П. Бондаренко, Салех Абу-Жаяб, Г. А. Божок,
H. М. Алабедалькарим, Е. И Легач. // Проблеми екологп та медицини - 2003 - Т. 7, №1-2. - С. 3-7.
5. Грищенко В. И. Криобиология и проблема бесплодия / В. И. Грищенко, Ю. С. Паращук, Ф. В. Дахно, Г. Г. Юрченко. -Киев, 1990. - 136 с.
6. Карпухин В. Т. Экспериментальная имплантация яичка / В. Т. Карпухин // Вопр. урологии. - Запорожье, 1964. -С. 57-60.
7. Кирпатовский И. Д. Хирургическая коррекция эндокринной импотенции / И. Д. Кирпатовский, Д. Л. Горбатюк // Ана-томо-экспериментальные аспекты. - М.: Университет дружбы народов, 1986. - 170 с.
8. Кирпатовский И. Д. Разработка методики субкапсулярной интратестикулярной пересадки гипофиза / И. Д. Кирпатовский, Е. С. Дендеберов // Проблемы репродукции. - 2000. - № 5. - С. 75-77.
9. Кирпатовский И. Д. Поддержание гормонального гомеостаза сочетанной и изолированной аллотрансплантацией, или возможность сочетанных эндокринных пересадок по принципу «три в одном» / И. Д. Кирпатовский // Тез. докл. Второго Российского конгр. по патофизиологии «Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы». - М., 2000. - С. 317-318.
10. Воз1анов О. Ф. Кшшчна сексолопя i андролопя / За ред. О. Ф. Воз1анова, I. I. Горпинченко. - К.: Здоров'я, 1996. - 536 с.
11. Кушнарев А. А. Ксенотрансплантация яичка / А. А. Кушнарев // Проблемы криобиологии. - 2005. - Т. 15, №3. - С. 346348.
12. Лучицький. В. 6. Андрогенодефщитний стан у чоловшв, хворих на цукровий дiабет 2 типу / В. 6. Лучицький // Ендокринолопя. - 2012. - № 2. - С. 28-36.
13. Нехвядович В. З. Сравнительная оценка результатов гомотрансплантации яичек / В. З. Нехвядович // Трансплантация органов и тканей. - Горький, 1970. - С. 176-177.
14. Петросьян Ж. Л. Морфофункциональный анализ аллотрансплантированных семенников собак и крыс разного возраста: автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук: спец. 03. 00. 11 «Эмбриология и гистология» / Ж. Л. Петросьян. - М.: Ин-т морфологии человека АМН СССР, 1978. - 21 с.
15. Райцина С. С. Значение возрастных изменений и изменений, возникающих под влиянием синэстрола в семеннике крыс, для его приживления при гомотрансплантации / С. С. Райцина, И. С. Казакова // Материалы докл. 3-й Всесоюз. Конф. По пересадке тканей и органов. Ереван, 1963. - C. 428-430.
16. Топка Е. Г. Спосiб трансплантацп яечка / Е. Г. Топка, О. А. Кушнарьов // Пат. 56412 А УкраУни, МПК А61В17/00 №2002032248; Заявл. 21. 03. 2002; опубл. 15. 05. 2003. Бюл. №5. 2 с.
17. Турчин I. С. Транспланта^я культур кштин i тканин сiм'яникiв при гiпогонадизмi / I. С. Турчин, М. Д. Тронько,
I. В. Комюаренко [та ш.]. - КиУв: «Медекол» МН!Ц БЮ-ЕКОС, 1999. - 25 с.
18. Bressler R. Differentiaion of peritubular myoid cells of the testis. Effects of intratesticular implantation of newborn mouse testis into normal and hypophisecto-mized adults / R. Bressler, M. H. Ross // Biol. Reprod. -1972. - Vol. 6, № 1. - P. 148-159.
19. Brooks J. R. Endocrinology / Brooks J. R., Hill G. H., deScoville A., Priario J. C., Crocker D., Selenkow H. A. // - 1960. -Vol. 66 - P. 392.
20. Buck A. C. Differentiation of first- and second set grafts of neonatal testis, ovary, intestine and spleen implanted beneath the kidney capsule of adult albino rat hosts / A. C. Buck // Amer. J. Anat. - 1963. - Vol. 113, № 2. - P. 189-213.
21. Kitahara S. Secondary treatment failure without anti-human choriogonic gonadotropin antibody in patient with Kallmann syndrome / S. Kitahara, K. Yoshida, K. Ishizaka [et al.] // Int. J. Urol. - 1998. - № 5, Vol. 4. - P. 398-400.
22. Larkin J. H. Differentiation of first and second-set grafts of embrionic, neonatal and adult testis implanted beneath the kidney-capsule of adult rat hosts / J. H. Larkin // Amer. J. Anat. - 1960. - Vol. 106. - P. 73-82.
23. Parker S. Experience with transdermal testosterone replacement therapy for hypogonadal men / S. Parker, M. Armitage // Clin. Endocrinol. Oxf. - 1999. -№ 1. - P. 57.
УДК 611. 631. 3/. 44:616. 681-007. 41]-003. 93-02 -089. 882-092. 9
КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦИЯ СЕМЕННИКА
Кушнарева Е. А.
Резюме. Целью данного исследования явилось изучение способа ксенотрансплантации неполовозрелого семенника.
При свободной ортотопической ксенотрансплантации неполовозрелого семенника наблюдалось приживление трансплантанта с полной дифференцировкой клеток Лейдига, что указывало на их гормоно-продуцирующую функцию. Реакция отторжения трансплантанта отсутствовала. Данные настоящего исследования позволяют сделать выводы об эффективности способа ортотопической ксенотрансплантации неполовозрелого семенника. для восполнения андрогенного дефицита.
Ключевые слова: ксенотрансплантация, семенник, клетки Лейдига.
УДК 611. 631. 3/. 44:616. 681-007. 41]-003. 93-02 -089. 882-092. 9
КСЕНОТРАНСПЛАНТАЦ1Я С1М'ЯНИКА
Кушнарьова К. А.
Резюме. Метою даного доогмдження було вивчення способу ксенотрансплантацп статевонезртого Ым'яника.
При втьно! ортототчно! ксенотрансплантацп статевонезртого Ым'яника спостер1галося приживлення трансплантанта з повним диференцюванням кгмтин Лейд^а, що вказувало на ix гормонопроду^рующую функцю. Реак^я вщторгнення трансплантанта була вщсутня. Дан цього доотдження дозволяють зробити висновки про ефективнють способу ортототчно'| ксенотрансплантацii статевонезртого Ым'яника для запо-внення андрогенного дефiциту.
Ключов1 слова: ксенотранспланта^я, сiм'яник, клiтини Лейдiга.
ЫйС 611. 631. 3/. 44:616. 681-007. 41]-003. 93-02 -089. 882-092. 9
Xenotransplantation of testes
Kushnaryova E. A.
Abstract. The aim of study was to investigate a method of free orthotopic xenotransplantation immature testis. The object of the study were donated testicles (testes) 15 nonlinear white male mice weighing aged 5-7 days, transplanted into the testes of recipients. Recipients have served 30 adult albino male Wistar rat. All animals were obtained from a transplant experiment 10, 30, and 60 day observation. Served as control testes 5 nonlinear white adult male mice. Staining was performed with hematoxylin-eosin, toluidine blue; frozen sections were stained with Sudan III and posed reaction for alkaline phosphatase. The basis of morphometric analysis is based on a systemic approach to the study of parenchymal organs. The data obtained were subjected to statistical processing.
Effectiveness of transplantation of the testis was observed in 23 cases out of 30 operations. Transplant rejection reaction was absent. This is due to the fact that in the convoluted seminiferous tubules of immature testis no spermatocytes of the first order and differentiated germ cells are antigens for their own body, and for the recipient's body and causing subsequent rejection reaction trasplantanta. Performing in orthotopic transplantation of the testis position includes maintaining optimal temperatutry and vascularization of the transplanted organ. As a result, achieved the preservation of the blood- testicular barrier graft and its subsequent protection from the immune cells of the recipient.
No effect was observed in 7 cases: animals died. At autopsy all the dead animals was revealed necrosis transplants and purulent destruction of the thymus and thyroid.
On the 10th day of observation convoluted tubules and blood vessels remained in the peripheral regions of the graft. In the interstitial tissue were observed as differentiated mature Leydig cells and poorly differentiated (fetal) endocrinocytes. Differentiated cells were large, oval or round shape; nucleus of these cells were located in the center and contained a large amount of chromatin. Endocrine mitosis were rarely seen. The central part of the transplanted testis was characterized by desolation, absence of vessels and convoluted seminiferous tubules. In the interstitial tissue was observed a large number of young fibroblasts.
With the further development of the transplanted testis occurred a succession of two morphological types of Leydig cells: fetal endocrinocytes as differentiation replaced mature Leydig cells with high secretory activity.
On the 30-60 day of observing the main population of Leydig cells was presented highly differentiated mature (definitive) cells. Interstitial tissue of the testis was characterized by two types of endocrine location: group (cluster) and single. Group option was observed near the location of the blood vessels of the interstitium (perivazal), single endocrinocytes met near the shell of some convoluted seminiferous tubules (peritubular). Leydig cell cytoplasm was light, with numerous vacuoles, indicating that their hormone producing function. Transplant rejection reaction was absent.
The data of this study allow us to make conclusions about the effectiveness of the method orthotopic free xenotransplantation immature testis. to compensate for androgen deficiency. We believe that this method may be used to treat patients with hypogonadism. Using a bank of cryopreserved testis xenotransplantant material, will help solve the problem of shortage of donor organs and to minimize technical and legal difficulties when used as a human testis donor organ.
Key words: xenotransplantation, testis, Leydig cells.
Рецензент - проф. Саричев Л. П.
Стаття надшшла 4. 04. 2014 р.
