CC BY
37
ЖИРО-КИСЛОТНИИ СКЛАД ТКАНИНИ НИРКИ У ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ ТВАРИН З ВРОДЖЕНИМ Г1ПОТИРЕОЗОМ Кузьменко Ю.Ю.
В робой представлен результати по вивченню вмюту жирних кислот в тканинах нирки в динамщ розвитку вродженого гшотиреозу. Вроджений гiпотиреоз у тварин моделювали шляхом пригнiчення щитоподiбноi залози за допомогою тиреостатика - мерказолша. Домiнуючими кислотами тканини нирки в контрольнш групi виявились пальмитинова, стеаринова та оле'шова ЖК, яю зазвичай переважають i у вЫх iнших тканинах людини та тварин. Через 14 дiб пiсля початку експерименту зменшуеться у порiвняннi з вковим контролем вiдсоткове спiввiдношення вЫх насичених ЖК. Через 50 и 100 дiб розвитку ВГТ перерозподш насичених та ненасичених ЖК набувае характеру протилежному тому, що спостеркалось через 14 дiб експерименту: вмют НЖК збiльшуеться, а ННЖК - зменшуеться в порiвняннi з вковим контролем.
Ключовi слова: нирки, вроджений гшотиреоз, жирнi кислоти.
Стаття надiйшла 30.10.2014 р.
FATTY-ACID COMPOSITION OF KIDNEY TISSUE IN EXPERIMENTAL ANIMALS WITH CONGENITAL HYPOTHYRIOSIS Kuzmenko Y. Y.
This paper presents the results of studies of fatty acids in the tissues of the kidneys in the dynamics of development of congenital hypothyroidism. Congenital hypothyroidism in animals modeled by inhibiting thyroid using tireostatika - merkazolila. Predominant acids renal tissue of the control group were palmitic, stearic and oleic fatty acids that typically prevail in all other tissues of humans and animals. After 14 days from the start of the experiment is reduced, compared with age-controlled percentage of saturated fatty acids. After 50 and 100 days of congenital hypothyriosis redistribution of saturated and unsaturated fatty acids acquires character opposite to that observed after 14 days of the experiment: fatty acids content increases and EFAs - decreases as compared with age-control.
Key words: kidney, congenital hypothyriosis, fatty
acids.
Рецензент Старченко I.I.
УДК 611.631.3/.44:616.681-007.41]-003.93-02 -089.882-092.9
РЕГЕНЕРАЦИЯ ЭНДОКРИНОЦИТОВ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ СЕМЕННИКА
Данные настоящего исследования позволяют сделать выводы об эффективности способа трансплантации и ксенотрансплантации неполовозрелого семенника, способствующего преодолению реакции тканевой несовместимости и отторжения трансплантата. При свободной ортотопической трансплантации неполовозрелого семенника наблюдалось приживление трансплантанта с последующей регенерацией и полной дифференцировкой клеток Лейдига, что указывало на их гормонопродуцирующую функцию. Реакция отторжения трансплантанта отсутствовала. Выполнение трансплантации семенника в ортотопическом положении предусматривает поддержание оптимальной температутры и васкуляризацию пересаженной мужской половой железы. В результате этого достигается регенерация и восстановление эндокриноцитов. Принципы трансплантации мужской половой железы раширяют возможности существующего лечения восполнения андрогенного дефицита.
Ключевые слова: эндокриноциты, трансплантация, семенник.
Работа является фрагментом НДР «Морфофункцюналът особливостi судинного русла та регенерацшт можливостi внутрштх оргатв тсля органозбер^аючих оперативных втручанъ малошвазивними методами», № держреестраци 011Ш008101.
Проблема снижения рождаемости населения, что связано с большим количеством бесплодных браков, в настоящее время остается актуальной. Причиной этого часто является снижение андрогенной функции у мужчин. [3, 5, 17]. Проблема восполнения гормонального дефицита до конца не решена. Гормональная терапия, проводимая при андрогенной недостаточности малоэффективна [3, 8-10, 12, 21, 23]. В последние годы для восполнения андрогенного дефицита помимо лекарственных гормональных препаратов применяются методы трансплантации мужской половой железы или трансплантации ее культур клеток и тканей [2, 4, 6, 8-10, 17]. Также в литературе описаны методы свободной трансплантации яичка (семенника), взятого у неполовозрелого донора [7, 11, 13-15, 18-20, 22]. Существуют новые принципы восполнения андрогенного дефицита. Это компенсация дефицита гормонов не экзогенным их введением, а трансплантацией мужской половой железы или трансплантацией ее культур клеток и тканей [3, 4, 6, 9, 10, 12, 14].
Целью работы было изучение клеток Лейдига при свободной ортотопической трансплантации семенника.
Материал и методы исследования. Для исследования послужила группа донорских семенников 15 неполовозрелых белых крыс самцов линии в возрасте 5 суток,
трансплантированные в семенники реципиентов, которым была произведена предварительная
субкапсулярная орхидэктомия СО2 лазером. Реципиентами послужили 30 взрослых белых крыс самцов линии Wistar. Другую группу составили донорские яички (семенники) 15 нелинейных белых мышей самцов массой 12 ± 2 г ^ ± m) в возрасте 5 суток, трансплантированные в семенники реципиентов. Реципиентами также послужили 30 взрослых белых крыс самцов линии Wistar после предварительной субкапсулярной орхидэктомии СО2 лазером, согласно методике [11, 16]. Контролем послужили 10 взрослых белых крыс самцов линии Wistar и 10 нелинейных белых мышей самцов. Всех животных после трансплантации выводили из эксперимента на 10, 30 и 60 сутки наблюдения. Для световой и электронной микроскопии ткань семенника фиксировали и заливали в парафин и эпоксидные смолы. Производилось окрашивание гематоксилин-эозином, толуидиновым синим; свежезамороженные срезы окрашивались суданом III и ставилась реакция на щелочную фосфатазу.
Результаты исследования и их обсуждение. Эффективность проведенной трансплантации семенника наблюдалась в 85% случаев. Остальные животные погибли. При вскрытии у всех погибших животных была выявлен некроз трансплантантов и гнойная деструкция тимуса и щитовидной железы.
На 10-е сутки наблюдения в обеих группах единичные семенные канальцы и кровеносные сосуды сохранялись только по периферии трансплантанта возле его белочной оболочки, эпителий сохранившихся семенных канальцев был представлен сустентоцитами и сперматогониями. Центральная часть трансплантированного семенника характеризовалась запустением и отсутствием сосудов. В интерстициальной ткани, сохранившейся на периферии трансплантанта, наблюдались сохранившиеся дифференцированные зрелые клетки Лейдига и малодифференцированные (фетальные) эндокриноциты. Дифференцированные клетки были крупные, овальной или округлой формы; ядра данных клеток располагались в центре и содержали большое количество хроматина, малодифференцированные эндокриноциты составляли до 30 % от общего количества. Митозы эндокриноцитов наблюдались редко. Отмечалось обилие молодых фибробластов.
На 30-е сутки наблюдения между белочными оболочками донорского и трансплантированного семенников отмечалось появление капилляров, артериол и венул. Одновременно наблюдался ангиогенез и в строме самого трансплантанта с образованием новых капилляров, артериол и венул, что свидетельствовало о реваскуляризации трансплантанта. В паренхиме трансплантанта отмечалась частичная дифференцировка извитых семенных канальцев, наблюдался сперматогенез на разных стадиях.
На 30-60-е сутки наблюдения в обеих группах животных при дальнейшем развитии трансплантированного семенника происходила последовательная смена двух морфологических типов клеток Лейдига: фетальные эндокриноциты по мере дифференцировки заменялись зрелыми клетками Лейдига с высокой секреторной активностью.
Так, на 60-е сутки наблюдения основная популяция клеток Лейдига была представлена высокодифференцированными зрелыми (дефинитивными) клетками. В первой группе животных количество клеток Лейдига достигало 2,4±0,2 в поле зрения (в контроле 2,9±0,1) ф<0,05). Средний объем ядер составлял 49,2±1,8 мкм3 (в контроле 49,3±1,7) ф<0,05). Во второй группе животных в среднем наблюдалось 7,90±0,60 эндокриноцитов в поле зрения (в контроле 8,10±0,40) ф<0,05). Средний объем ядер составлял 75,20±5,28 мкм3 (в контроле 76,30±5,26) ф<0,05). Интерстициальная ткань трансплантированного семенника характеризовалась двумя типами расположения эндокриноцитов: групповой (кластерный) и одиночный. Групповой вариант расположения наблюдался вблизи кровеносных сосудов интерстиция (перивазально), одиночные эндокриноциты встречались вблизи оболочки некоторых извитых семенных канальцев (перитубулярно). Цитоплазма клеток Лейдига была светлой, с многочисленными вакуолями, что указывало на их гормонопродуцирующую функцию. Реакция отторжения трансплантанта отсутствовала.
Данные настоящего исследования позволяют сделать выводы об эффективности способа трансплантации и ксенотрансплантации неполовозрелого семенника, способствующего преодолению реакции тканевой несовместимости и отторжения трансплантата. Это обусловливается тем, что в извитых семенных канальцах неполовозрелого яичка отсутствуют сперматоциты первого порядка и дифференцированные половые клетки, являющиеся антигенными как для собственного организма, так и для организма реципиента и вызывающие
последующую реакцию отторжения трасплантанта. Выполнение трансплантации семенника в ортотопическом положении предусматривает поддержание оптимальной температуры и васкуляризацию пересаженной мужской половой железы. В результате этого достигается регенерация и восстановление эндокриноцитов.
Перспективы дальнейших исследований. Мы считаем, что свободную трансплантацию неполовозрелого яичка можно рассматривать как один из методов восполнения андрогенного дефицита реципиента, что требует своего дальнейшего изучения.
1. Автандилов Г. Г. Медицинская морфометрия: Руководство / Г. Г. Автандилов // М.: Медицина, - 1990. - 384 с.
2. Артюхин А. А. Способ лечения больных с нарушением мужской половой функции методом трансплантации / А. А. Артюхин, Е. И. Зарайский, А.И. Романов // Патент РФ RU (11) 2200012 (13) C1 2003.03.10
3. Бондаренко В. О. Гiпоандрогенемiя та чоловiча неплщшсть / В.О. Бондаренко, О.М. Демченко, Т. Ю. Бурма [та ш.] // Сексология и андрология / - К.: Ин-т урологии и нефрологии АМН Украины, - 2000. - Вып. 5 - С.112 - 114.
4. Бондаренко Т. П. Коррекция гормонального статуса у кастрированных и с экспериментальным гипогонадизмом крыс путем алло- и ксенотрансплантации органотипических культур / Т. П. Бондаренко, С. Абу-Жаяб, Г.А. Божок [и др.] // Проблеми екологп та медицини - 2003 - Т.7, №1 - 2. - С.3-7.
5. Возiанов О. Ф. Клтачна сексолопя i андролопя / О. Ф. Возiанова I. I. Горпинченко // - К.: Здоров'я, - 1996. - 536 с.
6. Грищенко В. И. Криобиология и проблема бесплодия /В.И.Грищенко, Ю.С.Паращук, Ф.В.Дахно [и др.] //Киев.:-1990.-136 с.
7. Карпухин В. Т. Экспериментальная имплантация яичка / В.Т. Карпухин // Вопр. урологии. - Запорожье, - 1964. -С.57-60.
8. Кирпатовский И. Д. Хирургическая коррекция эндокринной импотенции / И. Д. Кирпатовский, Д. Л. Горбатюк // - М.: Университет дружбы народов. - 1986. - 170 с.
9. Кирпатовский И. Д. Разработка методики субкапсулярной интратестикулярной пересадки гипофиза / И. Д. Кирпатовский, Е. С. Дендеберов // Проблемы репродукции. -2000. - №5. - С.75-77.
10. Кирпатовский И. Д. Поддержание гормонального гомеостаза сочетанной и изолированной аллотрансплантацией, или возможность сочетанных эндокринных пересадок по принципу «три в одном» / И.Д. Кирпатовский // - М., - 2000. - С. 317-318.
11. Кушнарев А. А. Ксенотрансплантация яичка / А. А. Кушнарев // Проблемы криобиологии - 2005 - Т.15, №3. - С. 346-348.
12. Лучицький. В. £. Андрогенодефщитний стан у чоловшв, хворих на цукровий дiабет 2 типу / В. £. Лучицький. // Ендокринолопя. - 2012.- №2.- С. 28-36.
13. Нехвядович В. З. Сравнительная оценка результатов гомотрансплантации яичек / В. З. Нехвядович // Трансплантация органов и тканей. - Горький, - 1970.-С.176-177.
14. Петросьян Ж. Л. Морфофункциональный анализ аллотрансплантированных семенников собак и крыс разного возраста: Автореф. дис^анд. мед. наук: Ин-т морфологии человека АМН СССР / Ж. Л. Петросьян //-М., - 1978.- 21 с.
15. Райцина С. С. Значение возрастных изменений и изменений, возникающих под влиянием синэстрола в семеннике крыс, для его приживления при гомотрансплантации / С. С. Райцина, И. С. Казакова // Материалы докл. 3-й Всесоюз. Конф. По пересадке тканей и органов. Ереван, - 1963.-C.428-430.
16. Топка Е. Г. Споаб трансплантацп яечка / Е.Г. Топка, О. А. Кушнарьов // Пат. 56412 А Укра'ши, МПК А61В17/00 №2002032248; Заявл. 21.03.2002; опубл. 15.05.2003. Бюл.№5. 2 с.
17. Турчин I. С. Трансплантащя культур клтн i тканин ам'яниюв при гiпогонадизмi / I. С. Турчин, М. Д. Тронько, 1.В. Комюаренко [та ш.] // Кшв: "Медекол" МНЩ БЮ-ЕКОС, - 1999. - 25 с.
18. Buck A. C. Differentiation of first- and second set grafts of neonatal testis, ovary, intestine and spleen implanted beneath the kidney capsule of adult albino rat hosts / A.C. Buck // Amer.J.Anat. - 1963.- Vol.113, №2. - P.189-213.
19. Bressler R. Differentiaion of peritubular myoid cells of the testis. Effects of intratesticular implantation of newborn mouse testis into normal and hypophisecto-mized adults / R. Bressler, M. H. Ross // Biol. Reprod. -1972.- Vol.6, №1. -P.148-159.
20. Brooks J. R. Endocrinology / J. R. Brooks, G. H. Hill, A. deScoville [et al.] // - 1960. -Vol.66 - 392 p.
21. Kitahara S. Secondary treatment failure without anti-human choriogonic gonadotropin antibody in patient with Kallmann syndrome / S. Kitahara, K. Yoshida, K. Ishizaka [et al.] // Int. J.Urol. -1998. - №5, Vol.4. - P. 398-400.
22. Larkin J. H. Differentiation of first and second-set grafts of embrionic, neonatal and adult testis implanted beneath the kidneycapsule of adult rat hosts / J. H. Larkin // Amer. J.Anat. -1960. - Vol.106. - P.73-82.
23. Parker S. Experience with transdermal testosterone replacement therapy for hypogonadal men / S. Parker, M. Armitage // Clin. Endocrinol. Oxf. -1999. -№1. - 57 p.
РЕГЕНЕРАЦ1Я ЕНДОКРШОЦИТ1В ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦП СШ'ЯНИКА Кушнарьова К. А.
Даш цього дослщження дозволяють зробити висновки про ефектившсть способу трансплантацп i ксенотрансплантацп статевонезршого ам'яника, що сприяе подоланню реакцп тканинно' несумюност i вщторгнення трансплантата. При вшьно'1 ортототчно' трансплантацп статевонезршого ам'яника спостер^алося приживлення трансплантанта з подальшою регенеращею та повним диференщюванням кл™н Левдга, що вказувало на ïx гормонопродуцируючу функщю. Реакщя вщторгнення трансплантанта була вщсутня. Виконання трансплантацп ам'яника в ортототчному положены передбачае тдтримання оптимальноï температури i васкуляризащю пересаджено' чоловiчоï статево' залози. В
THE REGENERATION OF LEYDIG CELLS IN TRANSPLANTATION TESTIS Kushnaryova E. A.
The data of this study allow us to make conclusions about the effectiveness of methods of transplantation and xenotransplantation immature testis, contributing to overcome the reaction of tissue incompatibility and graft rejection. This is due to the fact that in the convoluted seminiferous tubules of immature testis are no spermatocytes of the first order and differentiated germ cells, which are antigenic for both its own body, and for the recipient's body and causing the subsequent reaction of rejection of trasplantants. Transplantation of the testis in an orthotopic position includes maintaining optimal temperatutry and vascularization of transplanted male sexual glands. As a
результат! цього досягаеться регенеращя i вщновлення ендокршоци™. Принцини трaнснлaнтaцiï чолов1чо!' статево!' залози розширюють можливост юнуючого лкування заповнення андрогенного дефщиту.
Ключовi слова: ендокршоцити, трaнснлaнтaцiя, ам'яник.
Стаття надшшла 5.09.2014 р.
result, achieved recovery and restoration of endocrine cells. We believe that the free transplantation of immature testis can be considered as one of the methods of filling androgen deficiency of the recipient.
Key words: Leydig cells, transplantation, testis.
Рецензент Шеттько B.I.
УДК 615.32:547.96
ЛЕКТИНИ В IMУНGMGРФGЛGГIÏ
В наш час вщкриваеться i онисуеться все бшьш нових лектишв, нро що свщчать роботи вчених Львiвськоï школи морфолопв. В той же час лектинова характеристика визначае р1зн1 функцп одного i того ж лектина або системи лектишв iз одного i того ж джерела або однаюда функцп лектишв рiзного ноходження. Проте дослщження структурно-функцюнальних ознак подiбностей i вщмшностей лектишв ноки ще не дозволяе створити ч1тку i ясну ix клaсифiкaцiю. Проте дослщження структурно-функцiонaльниx ознак нодiбностей i вщмшностей лектинiв ноки ще не дозволяе створити ч1тку i ясну ïx клaсифiкaцiю. Таким чином, занрононована класифжована i систематизована вибiркa лектинiв для дослщження клiтин iмунноï системи.
Ключов1 слова: лектини, класифжащя лектишв, ¡мунокомпетентш юнтини.
Робота e фрагментом НДР «Лектuнгiстохiмiчна характеристика морфогенезу оргатв i тканин в раннъому постнаталъному перiодi в нормi i експерuментi» (№ держреестраци O1O9UOO3986).
В наш час вщбуваеться вщновлення наукового штересу до лектишв у зв'язку з дослщженням вшх вуглеводiв як е в оргашзм^ що дозволить розв'язати багато проблем рiзного науково нанрямку, таких як: ткомшронанобюнроцеси; будова i функщювання бiосенсорiв; структура лектинiв пробiотичниx оргaнiзмiв; лектини, як новий клас деструкторiв бiоплiвок пaтогенiв; фiзiологiчно aктивнi xaрчовi лектини [27]. В Укрaïнi лектинолопя е нрiоритетний науковим нанрямком в робот Зaнорiзькоï школи морфологiв, яку очолюе Заслужений дiяч науки та техшки, професор М.А. Волошин. Лектингiстоxiмiчний метод широко застосовують в професшнш дiяльностi нaуковцi нiд керiвництвом професорiв Луцика О.Д., Шепiтько В.1., Шaповaловоï, О.Ю. Черкасова В.Г.
В м^мунологн актуальною проблемою е вивчення меxaнiзмiв конститутивного або вродженого iмунiтету i набутого або адаптивного iмунiтету. Детекщя, контроль, захист i корекцiя взаемовщношень мiж глiкaнзв'язуючими бiлкaми, полiсaxaридaми i глшокон'югантами вiдбувaeться при всix бюлопчних процесах, таких як: зaплiднення, розвиток, мпращя клiтин, апоптоз та шше, тобто забезпечуеться цiлiсне iснувaння багатокл^инного оргaнiзму [18, 28].
Кожна наука, в тому чи^ i лектинолопя починаеться з клaсифiкaцiï i номенклатури. В наш час вiдкривaeться i описуеться все бiльш нових лектишв, про що свщчать роботи вчених Львiвськоï школи морфологiв [1, 26]. В той же час лектинова характеристика визначае рiзнi функцп одного i того ж лектина або системи лектишв iз одного i того ж джерела або однaковi функцп лектишв рiзного походження. Проте до^дження структурно-функцюнальних ознак подiбностей i вщмшностей лектинiв поки ще не дозволяе створити чггку i ясну ïx клaсифiкaцiю [36].
Mетою роботи було скласти класифшащю лектинiв, що застосовуеться в прaктицi iмуноморфологiв для типування клiтин iмунноï системи. При розробщ клaсифiкaцiï лектинiв враховувалися данш власних дослiджень та iншиx науковщв.
Mатерiал та методи дослiдження. Об'ектом дослщження стали шматочки плаценти щурiв, людини; шматочки шкiри, ясен, лiмфaтичнi вузли щурiв. Мaтерiaл плацент породшь забирався згiдно забору пaтологоaнaтомiчного мaтерiaлу. Зaбiр бiологiчного мaтерiaлу здiйснювaли у декаттованих тварин, згiдно законодавчим правилам про гуманне вщношення до тварин. Виготовляли пстолопчш препарати. Шматочки тканин фшсували в розчинi Буена, заливали в парафш. Ставили лектингiстоxiмiчну реакщю для виявлення антигенпрезентуючих клiтин, макрофапв, моноцитiв, лiмфоцитiв, застосовуючи панель лектишв: конконовалшу А (Con A), з насшня соï (Glycine max), з насшня сочевицi (Lens culinaris), з насшня aрaxiсу (Arachis hypogaea), виноградного слимака (Helix pomatia), кори бузини чорноï (Sambucus nigra), вiки посiвноï (Vicia sativa), лiмськоï фaсолi (Phaseolus limensis), лектину зaродкiв пшеницi (Triticum vulgare), проводячи вiзуaлiзaцiю бензидином. Для виявлення В1^мфоципв проводили
