CC BY
118
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ И ТЕХНОЛОГИИ
УДК б1б-002.5-084:[б15.371:579.973.21]-07&33-053.2)
КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ БЦЖ
Л. П. Санакоева, Л. А. Четвертных, Н. Н. Чекмарева
Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е. А. Вагнера, г. Пермь
Проведенное исследование по оригинальной методике специфической адгезивной способности лимфоцитов крови и специфического антителообразования, основанное на расчете индексов специфической адгезии и специфического расположения объектов адгезии, а также индекса специфического сдвига антител, у здоровых БЦЖ-вакцинированных детей в динамике через 1,5 месяца — 7 лет позволило количественно оценить процесс иммунной перестройки наряду с оценкой местной кожной постпрививочной реакции и туберкулиновой чувствительности по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л. Формирование напряженного адаптивного противотуберкулезного иммунитета, согласно результатам, полученным при исследовании специфической адгезивной способности лимфоцитов крови, начиналось через 3—4 месяца с момента вакцинации БЦЖ, иммунитет достигал максимального уровня через 1—2 года, снижался через 3 года и сохранялся до 5—7 лет у 67% вакцинированных детей. Показатели специфической адгезии лимфоцитов крови были более информативны в отношении оценки состояния поствакцинального противотуберкулезного иммунитета, чем диаметр кожного рубчика и туберкулиновая чувствительность по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л.
Ключевые слова: БцЖ-вакцинация, здоровые дети, проба Манту, кожный рубчик, напряженность поствакцинального иммунитета, адгезивная способность лимфоцитов, антителообразование.
Введение
Охват детей БЦЖ-вакцинацией в последние годы достиг оптимальных цифр (95,9— 98%), и, несмотря на это, уменьшения инфи-цированности и заболеваемости туберкулезом среди детей раннего и дошкольного возраста не наблюдается [1]. Ухудшение состояния здоровья детей, регистрируемое повсеместно в России, может быть причиной низкой эффективности проводимой вакцинации. К сожалению, в системе оценки противотуберкулезного иммунитета, индуцированного введением БЦЖ, отсутствуют унифицированные объективные критерии анализа состояния прививочного иммунитета у вакцинированных детей. Такие критерии, как
туберкулиновые пробы и величина поствакцинального рубчика, не отражают истинной невосприимчивости к туберкулезной инфекции, особенно в отдаленные сроки после вакцинации, при отсутствии рубчика и отрицательной пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л [6].
Вместе с тем своей простотой, специфичностью и высокой чувствительностью привлекают внимание нетрадиционные методы инфекционной иммунологии, разработанные под руководством профессора В. Н. Кап-лина [4]: определение специфической адгезивной способности лимфоцитов крови, диагностическое исследование титра антител в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с модифицированной оценкой результатов. Исследований с применением это-
го комплекса реакций, характеризующих функциональное состояние специфического клеточного и гуморального иммунитета у БЦЖ-вакцинированных детей, не проводилось. Это и явилось целью данного исследования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Обследованы 225 клинически здоровых детей (I—II группы здоровья), в том числе 110 девочек и 115 мальчиков, в возрасте от
1 месяца до 7 лет, вакцинированных БЦЖ на 4—7-е сутки жизни (основная группа). Критериями отбора детей для оценки их поствакцинального статуса были отсутствие инфицирования микобактериями туберкулеза (МБТ), контакта с больным туберкулезом и заболевания дизентерией Зонне в анамнезе, а также отсутствие на момент взятия крови любых острых заболеваний в последние
2 месяца. Группу сравнения (при лабораторном исследовании поствакцинального статуса) составили 35 человек, отобранных по тем же критериям: 7 детей — в возрасте 1—4 месяца без вакцинации БЦЖ, 8 детей — перед первой ревакцинацией БЦЖ и 20 взрослых (доноры, студенты).
у вакцинированных детей проводили клинический осмотр, оценку характера и величины постпрививочного кожного знака, состояния регионарных лимфатических узлов, чувствительности к туберкулину по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л за все годы, предшествующие обследованию, и в момент обследования. Для оценки состояния противотуберкулезного иммунитета использовали метод определения специфической адгезивной способности лимфоцитов крови, разработанный под руководством профессора В. Н. Каплина и модифицированный авторами [8]. В качестве объектов адгезии использовали эритроциты из коммерческих сухих
антигенных эритродиагностикумов (ЭД) для РНГА: антигенного туберкулезного (Эаг/туб., специфический объект) и шигеллезного Зон-не (Эаг/диз., контрольный объект), выпускаемых серийно РАО «Биопрепарат» Санкт-Петербургского НИИВС. Особенностью метода являлось то, что адгезивную способность лимфоцитов исследовали в одной пробе крови одновременно к Эаг/туб. и Эаг/диз. При микроскопировании мазка одновременно учитывали количество Эаг/туб. и Эаг/диз., адгезированных розеткообразую-щими лимфоцитами (РОЛ), и лимфоцитами, адгезировавшими по одному объекту. В группу РОЛ включали лимфоциты с адгезией трех и более эритроцитов одной специфичности. Количественную оценку суммарной адгезии Эаг/туб. производили не по абсолютному числу адгезированных эритроцитов, а по унифицированному количественному показателю — индексу специфической адгезии (ИСА), величину которого рассчитывали по формуле:
арол^/арол^.
ИСА=— 7 -,
А (1)туб/А (1)диз.
где:
АРОЛтуб. и АРОЛдиз. — суммы адгезии Эаг/туб. и Эаг/диз. у розеткообразующих лимфоцитов;
А (1)туб. и А (1)диз. — суммы адгезии тех же объектов у лимфоцитов, адгезировавших по одному объекту.
Величина ИСА в группе контроля не превышала 1,8. При величине индекса выше 1,8 диагностировали наличие специфического иммунного ответа. Далее проводили количественный учет объектов разной специфичности, адгезированных только РОЛ, в зависимости от их расположения на мембране клеток. По расположению объектов адгезии на мембране лимфоцита выделяли два класса РОЛ. Один класс — высокоактивные РОЛ с плотным прилежанием 3 и более Эаг/туб.
или Эаг/диз., условно названные истинными или иммунными. Их наличие косвенно свидетельствовало о высокой плотности специфичных для лигандов паттерн-распознаю-щих рецепторов. Второй класс РОЛ — лимфоциты с разрозненным расположением 3 и более объектов адгезии, условно названные диффузными. Появление их косвенно отражало низкую плотность распределения пат-терн-распознающих рецепторов на наружной мембране лимфоцитов. Для количественной оценки адгезивной способности РОЛ с учетом расположения объектов адгезии введен другой показатель — индекс специфического расположения объектов (ИСРО), рассчитываемый по формуле:
^ и и
исро= туб.' о диз.,
ХроЧбДроЛиз.
где:
2РОитуб. — сумма Эаг/туб., адгезирован-ных РОЛ, образующими «иммунные» розетки;
2РОидиз. — сумма Эаг/диз., адгезированных РОЛ, образующими «иммунные» розетки;
2РОдтуб. и 2РОддиз. — суммы эритроцитов из соответствующих туберкулезного и дизентерийного ЭД, адгезированных РОЛ, образующими «диффузные» розетки.
Значения ИСРО в группе контроля были менее 2,0. При величине ИСРО 2,0 и выше диагностировали напряженный противотуберкулезный иммунитет, а при величине индекса ниже 2,0 — его отсутствие. Применяемый способ расчета позволял обходиться без формирования контрольной группы, а унифицированные показатели в виде индексов, имеющих альтернативный характер значений, давали возможность проводить индивидуально количественную оценку прививочного специфического иммунитета.
Специфическое антителообразование исследовали в РНГА классическим микроме-
тодом, но с модифицированной оценкой результатов реакции, повышающей ее диагностическую значимость [4]. В качестве антигена (АГ) для выявления в сыворотке крови циркулирующих противотуберкулезных антител (ПТАТ) применяли сухой туберкулезный (фосфатидный) ЭД для РНГА. В качестве неспецифического контроля в реакциях антителообразования использован титр противодизентерийных антител (ПДАТ), исследуемый в РНГА с соответствующим ЭД (Зонне). Оба ЭД серийного производства РАО «Биопрепарат» Санкт-Петербургского НИИВС. Антитела (АТ) определяли путем последовательных двойных разведений сыворотки, начиная с 1 : 2. Титр определяли по конечному разведению, при котором еще имелась агглютинация на 3+. При оценке результатов РНГА был использован унифицированный показатель — индекс специфического сдвига титров антител (ИСТ), который рассчитывали по формуле:
ИСТ=-
Ттуб./Тд1
СрТтуб./СрТд
где:
Твтуб. — титр АТ к туберкулезному АГ у вакцинированных;
Твдиз. — титр АТ к дизентерийному АГ у вакцинированных;
СрТктуб. и СрТкдиз. — средние титры АТ к соответствующим антигенам у контрольных лиц (или животных).
У детей контрольной группы в возрасте старше 1 года установлен диапазон контрольной величины ИСТ, равный 0,5—4,0. Это позволило проводить индивидуальную оценку результатов: при значении ИСТ более 4,0 констатировали специфический сдвиг титра АТ, свидетельствующий о стимуляции продукции ПТАТ; при ИСТ менее 0,5 — депрессию синтеза ПТАТ. При значениях 0,5—4,0 — отсутствие специфического гуморального
ответа. у детей контрольной группы в возрасте до 1 года контрольная величина ИСТ была в пределах 0—2,0. Значения ИСТ более 2,0 свидетельствовали о стимуляции продукции ПТАТ, значения ИСТ от 0 до 2,0 — об отсутствии специфического гуморального ответа. Дифференцированный учет ПТАТ в зависимости от принадлежности к классу иммуноглобулинов проводили в РНГА по методу Н. Р. Линга и д. Кэтти [2].
Статистическая обработка результатов проводилась с помощью компьютерной программы «Биостат» с использованием Ькрите-рия Стьюдента, критерия хи-квадрат для сравнения долей, критерия Манна — уитни для малого числа наблюдений. Степень связи между изучаемыми признаками определяли с помощью коэффициента корреляции (Спир-мена, Пирсона) для количественных данных. Различия или показатели связи считались значимыми при уровне p<0,05.
Результаты и их обсуждение
Клиническая реакция детей на введение вакцины БЦЖ, наблюдаемая в первые 4 месяца, не отличалась от той, которая приводится в литературе [3]. Ни у одного здорового ребенка не обнаружено значимого увеличения регионарных лимфатических узлов, все дети имели хорошее самочувствие и нормальное развитие. Экссудативно-инфильтративная фаза кожного процесса определялась у детей на протяжении первых 4 месяцев, наиболее часто — через 1,5—2 месяца (у 69,2%), реже — через 3—4 месяца (у 17,8%). На стадии инфильтрата у 35,7% детей определялась пустуляция, что существенно не отличалось от данных литературы. В эту фазу средний диаметр папулы нарастал в 1,7 раза (р<0,05) от 1,5—2 месяцев (3,8±0,5 мм) к 3—4 месяцам (6,6±1,3 мм) с одновременным уменьшением в 3,9 раза к этому сроку числа детей, имеющих папулу (с 69,2 до 17,8%, р=0,001). Чем
больше была папула, тем продолжительнее протекала стадия инфильтрации. Фаза фиброза начиналась у небольшого числа детей уже через 2 месяца после вакцинации. Процент детей с рубчиком увеличился в 2,5 раза через 3—4 месяца (78,6%). Завершилось формирование рубчика у всех вакцинированных через 5 месяцев с момента введения БЦЖ. Через 1 год рубчик определялся у 94,3% детей, в том числе у 81,8% — диаметром не менее 4 мм. установлена высокая прямая корреляционная связь между частотой отсутствия кожного знака и длительностью поствакцинального периода (г=0,88, p=0,001). С 3 месяцев до 2 лет количество детей без кожного знака было стабильным, в среднем около 4%, увеличение их числа в 2,5 раза произошло через 3 года (10,3%) и повторное увеличение в 2 раза — через 5—6 лет (19,2%) с момента вакцинации. Кожный знак в целом отсутствовал у 17 (7,5%) детей. Это не давало возможности оценить у них эффективность вакцинации. Сравнительная оценка полученных результатов и результатов исследования, проведенного нами в г. Перми в 1983— 1985 гг. [7], существенных изменений по течению местной кожной реакции не выявила. Эффективность вакцинации БЦЖ, если оценивать ее по размерам прививочных рубчиков, за 20 лет существенно не изменилась.
При исследовании чувствительности к туберкулину по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л установлено, что через 1—2 года после иммунизации поствакцинальная аллергия (ПВА) определялась у 76,6% детей, в том числе у 2/3 — в виде положительной реакции. ПВА не была выявлена через 1—1,5 года после вакцинации только у 22,9% детей. Ранее проведенные исследования в г. Перми (1983—1985 гг.), по результатам которых ПВА наблюдалась только у 24% детей через 1 год после вакцинации [7], свидетельствуют об увеличении детей с ПВА в настоящее время. Такая тенденция наблюдается и в других
регионах России, что порождает трудности в дифференциации ПВА и инфекционной аллергии. установлено, что с удлинением поствакцинального периода процент детей, положительно реагирующих на туберкулин, уменьшался (высокая обратная корреляционная зависимость, г=0,92, р=0,008): через 3 года — 31%, а через 7 лет — только 10,5% здоровых детей имели положительную реакцию. Процент детей с отрицательной пробой Манту, наоборот, с увеличением срока с момента вакцинации увеличивался (высокая прямая корреляционная связь, г=0,89, р=0,02): через 3 года их было 58,6%, а через 7 лет — 73,7%. Поствакцинальный срок 3 года — это тот период, когда достоверно полярно начала изменяться доля детей с положительной и отрицательной пробами Манту (р<0,04). Процент детей с сомнительной пробой Манту во все годы существенно не менялся (через 1 год — 8,5%, через 3 года — 10,3%, через 5—6 лет — 15%). Анализ интенсивности ПВА у детей с положительными результатами пробы Манту показал, что средняя величина папулы у детей в различные сроки с момента вакцинации существенно не менялась (через 1—1,5 года — 9,00±0,67 мм, через 3—4 года — 9,20± ±1,60 мм, через 5—7 лет — 9,10±1,40 мм). У вакцинированных детей преобладали слабо положительные реакции на туберкулин (5—9 мм) — 57,4%. Наиболее редкими были выраженные реакции (15—16 мм) — 7,4%. Гиперергические реакции (17 мм и более) не выявлены ни у одного здорового ребенка. У 77,9% вакцинированных детей диаметр папулы не превышал 11 мм, что характерно для ПВА [6]. Между размером вакцинального рубчика и величиной папулы по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л установлена умеренная прямая корреляционная связь только через 1— 1,5 года после вакцинации (г=0,49, р=0,02). Дети, имеющие рубчик менее 4 мм, имели и папулу меньшего диаметра, чем дети с руб-
чиком 5 мм и более (по критерию и, р=0,02). ПВА чаще выявлялась у детей, имеющих рубчик, а отрицательные реакции на туберкулин — у детей, у которых рубчик отсутствовал (р=0,02). Однако и при отсутствии рубчика через 1—1,5 года у 50% детей реакция по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л была положительной. В отдаленные сроки (через 2—7 лет) корреляционная связь между диаметрами вакцинального рубчика и папулы по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л не выявлена, что согласуется с результатами других авторов. При проведении анализа индивидуальной погодовой динамики ПВА у детей установлено, что во все сроки поствакцинального периода преобладали дети, у которых туберкулиновая чувствительность в динамике за 1 год оставалась неизменной (рис.). Доля таких детей возросла в 1,5 раза через 3 года и еще в большей степени (в 2 раза) — через 5—6 лет. Детей, у которых в динамике отмечалось повышение туберкулиновой чувствительности, было в несколько раз меньше. Доля детей с такой динамикой ПВА была наименьшей через 5—6 лет после вакцинации. Через 2 года у детей с положительной пробой Манту инфильтрат увеличился в среднем на 3,1±0,7 мм (1—7 мм), а через 3 года — еще на 2,8±0,7 мм (1—5 мм). Повышение чувствительности к туберкулину от отрицательной реакции до положительной («вираж») наблюдалось только через 2 года у 2 детей из 29. После 2 лет «вираж» туберку-
0 -- . ----
2 шла 1 I О, » 4 ГОШ "-&
- • - Ппплпснип.1 1 ('и иже/ не *—Я - ' 11111 '
Рис. Частота различных вариантов динамики реакции на туберкулин по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л у здоровых детей после вакцинации БЦЖ (' — по сравнению с предшествующим сроком, р<0,05)
линовых проб не выявлен ни у одного ребенка. Все дети, у которых наблюдалось повышение чувствительности к туберкулину в динамике с интервалом 1 год, имели по пробе Манту папулу, не превышающую 11 мм. У детей, имеющих папулу 12 мм и более, в 91% случаев наблюдалось ее уменьшение в динамике через 1 год, у 9% она сохранялась прежних размеров. Ни у одного ребенка с ПВА, имевшего величину инфильтрата 12 мм и более, не было выявлено нарастания туберкулиновой чувствительности через 1 год и позже.
Таким образом, существенное нарастание ПВА у детей установлено только в первые 2 года после вакцинации, через 3 года и в более поздние сроки чувствительность к туберкулину если и повышалась, то не более чем на 5 мм.
Снижение ПВА наиболее часто выявлялось у детей через 2 года после вакцинации (35%). В последующие годы число таких детей уменьшилось до 1/5. Через 2 года диаметр папулы по пробе Манту уменьшился в среднем на 4,1±1,0 мм (1—10 мм). Доля детей с разными вариантами динамики результатов пробы Манту через 4 года существенно не отличалась от таковой через 3 года после вакцинации. Установлено, что чем интенсивнее была ПВА через 1 год после вакцинации, тем длительнее она сохранялась. Установленные у здоровых вакцинированных детей закономерности ПВА по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л подтверждают имеющиеся в литературе данные [3, 6].
При исследовании адгезивной способности РОЛ крови у здоровых детей в различные сроки после вакцинации БЦЖ установлено ее повышение в отношении Эаг/туб.: средние значения ИСА были повышены на протяжении всего периода, начиная с 3— 4 месяцев и заканчивая сроком 5—7 лет, по сравнению с контролем. Величина ИСА повысилась через 3—4 месяца после вакци-
нации в 29 раз и оставалась стабильно повышенной до 2 лет. Через 3 года ИСА снизился, через 5—7 лет его значение достоверно не изменилось по сравнению с предыдущим показателем, оставаясь в 3 раза больше контрольного (табл. 1). При индивидуальной оценке через 1—2 месяца после прививки ни у одного ребенка не выявлено повышения адгезивной способности РОЛтуб. Через 3— 4 месяца оно было выявлено у 65% вакцинированных. Увеличение детей с диагностическим уровнем ИСА (более 1,8) наблюдалось через 5—9 месяцев (87,5%). Через 1—1,5 года все дети имели такую специфическую реакцию. Небольшое снижение частоты положительных результатов выявлено через 2 года, но еще у 85% детей в этот период имелось повышение адгезии Эаг/туб. Через 3—4 года его имели только 66% детей. Через 5—7 лет у более чем половины детей значения ИСА были уже в пределах нормы. В целом, с 5 месяцев до 2 лет повышение ИСА выявлено у 50 (90,9%) из 55 детей. Особенностью состояния вакцинированных детей явилось появление у них через 3—4 месяца иммунных РОЛтуб с повышенной адгезивной способностью, в результате чего на протяжении всего периода от 5—9 месяцев до 5—7 лет средние значения ИСРО превышали контрольные. ИСРО повысился почти в 2 раза через 5—9 месяцев с момента вакцинации, в 6 раз — через 1—1,5 года. Он оставался стабильно повышенным до 2 лет, снижаясь через 3—4 года и существенно не меняясь через 5—7 лет по сравнению с предыдущим сроком. При индивидуальной оценке у детей до 2 месяцев с момента вакцинации диагностического повышения ИСРО не выявлено. Через 3—4 месяца у 12% детей его значения превышали диагностический уровень ИСРО. Через 5—9 месяцев уже половина детей имела значения ИСРО не менее 2,0, через 1—1,5 года — 95% детей, через 2 года — все дети. Через 3—4 года доля детей с диагности-
Таблица 1
Показатели адгезивной способности лимфоцитов крови у здоровых детей в различные сроки после вакцинации БЦЖ
Срок после вакцинации ИСА (М±m) Варианты реакции ИСА ИСРО (М±m) Варианты реакции ИСРО
норма выше нормы норма выше нормы
абс. % абс. % абс. % абс. %
1—1,5 месяца (п=4) 0,20±0,11 * (0—0,4) 4 100 0 0 0 0 100 0 0
2 месяца (п=6) 0,29±0,09 * (0—0,5) 6 100 0 0 0 0 100 0 0
3—4 месяца (п=17) 8,59±3,41 */** (0,16—6,9) 6 35 11 65 1 1,37±0,69 (0—11,5) 15 88 2 12 1
5—9 месяцев (п=8) 8,34±2,22 * (1,5—21,2) 1 12,5 7 87,5 1 2,7±0,84 * (0—8) 4 50 4 50 1
1—1,5 года (п=20) 9,89±1,83 * (2,0—27,8) 0 0 20 100 1 8,27±3,13 */** (0,7—60,0) 1 5 19 95 1
2 года (п=27) 7,79±1,74 * (1,3—42) 4 15 23 85 1 8,58±1,71 * (2,2—40,0) 0 0 27 100 1
3—4 года (п=32) 4,73±1,30 */** (0,4—33,6) 11 34 21 661 5,89±1,87 */** (0—52) 14 44 18 56 1
5—7 лет (п=18) 2,94±0,74 * (0,2—10,6) 10 56 8 441 5,33±1,53 * (0,2—25,6) 6 33 12 67
Контроль (п=35) 0,86±0,07 35 100 — — 0,54±0,11 35 100 — —
Примечание. В скобках — диапазон колебаний значений; * — относительно контрольной группы, p<0,05; ** — относительно предыдущего срока, p<0,05; *** — относительно срока 3—4 мес., p<0,03; 1 — достоверные отличия в частоте от предшествующего срока, p<0,05.
ческим повышенным ИСРО снизилась, но его имели еще более половины вакцинированных детей, так же как и через 5—7 лет. В целом, с 5 месяцев до 2 лет ИСРО был повышен у 50 (90,9%) из 55 детей. Сохранение иммунных РОЛ, сенсибилизированных к туберкулезному фосфатиду, и повышение их адгезивной способности в отношении туберкулезного АГ могут свидетельствовать о наличии противотуберкулезного иммунитета, о напряженности которого можно судить по величине ИСРО. Значения ИСРО не менее 2,0 свидетельствуют о хорошо выраженном противотуберкулезном иммунитете. Установлено, что у детей, имеющих постпрививоч-
ный рубчик, диагностическое повышение значений ИСА и ИСРО наблюдалось чаще, чем у детей без рубчика (у 80,9 и 77,9% против 60% (р=0,002), и 60% (р=0,015) соответственно). У 60% вакцинированных детей при отсутствии рубчика выявлялась специфическая реакция лимфоцитов с повышением значений ИСА и ИСРО выше диагностического уровня. У детей через 1—1,5 года после вакцинации определялась прямая зависимость величины ИСА от диаметра рубчика. Через 2 года такая зависимость уже не просматривалась. Зависимости величины ИСРО от размера кожного рубчика не выявлено.
Через 1—2 года после прививки корреляционных связей между показателями адгезии и чувствительностью к туберкулину по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л не установлено ни по выраженности реакции, ни по ее частоте. Через 3—4 года после вакцинации также не выявлено зависимости средних величин ИСА и ИСРО от выраженности ПВА, однако определялась прямая зависимость частоты повышения этих показателей от выраженности ПВА. У детей с положительной реакцией повышение ИСА наблюдалось у 81,3%, повышение ИСРО — у 68,8%. В то время как у детей с отрицательной реакцией на туберкулин — у 66,7 и 41,7% соответственно (р<0,05). Таким образом, формирование адаптивного противотуберкулезного иммунитета согласно результатам, полученным при исследовании специфической адгезивной способности лимфоцитов крови, начиналось через 3—4 месяца с момента вакцинации БЦЖ. Иммунитет достигал максимального уровня через 1—2 года, снижался через 3 года и сохранялся до 5—7 лет у 67% вакцинированных. Показатели специфической адгезии лимфоцитов крови были более информативны в отношении оценки состояния поствакци-
нального противотуберкулезного иммунитета, чем оценка кожного рубчика и туберкулиновой чувствительности.
Специфическое антителообразование исследовано у 116 вакцинированных детей (табл. 2). Как видно из приведенных данных, с помощью РНГА удалось выявить очень короткий период стимуляции синтеза ПТАТ (через 1 месяц — 2 года) у небольшого количества детей (12,1%), что свидетельствует о низкой чувствительности данного метода в выявлении иммунного ответа на вакцину БЦЖ и второстепенной роли гуморального звена иммунитета в механизмах защиты от туберкулеза.
Вывод
Полученные результаты показали, что использованный комплекс специфических реакций может применяться для индивидуального контроля за течением БЦЖ-вакцинного процесса у детей. для индивидуальной оценки иммунологической эффективности вакцинации наиболее информативным является метод определения адгезивной способности РОЛ к туберкулезному АГ с вычислением
Таблица 2
Характеристика специфического антителообразования у здоровых детей
после вакцинации БЦЖ
Срок после вакцинации Процент обнаружения ПТАТ-^М ИСТ (М±m) Диапазон значений ИСТ Процент детей с диагностическим уровнем ИСТ
1—1,5 месяца (п=4) 0 2,50±1,03 * 0,5—4 50,0
2 месяца (п=6) 16,7 * 1,25±0,09 0,5—2 0 *
3—4 месяца (п=17) 5,9 * 1,21±0,14 0,5—2 0
5—9 месяцев (п=7) 0 * 1,71±0,46 * 0,5—4 14,3 *
1—1,5 года (п=24) 5,6 2,90±0,90 * 0,5—16 25,0
2 года (п=25) 4,8 1,46±0,30 0,5—8 4,0 *
3—4 года (п=20) 0 1,00±0,16 0,25—2 0
5—7 лет (п=13) 0 1,27±0,26 0,5—4 0
Контроль (п=26) 0 0,97±0,10 0,5—4 0
Примечание. * — относительно предыдущего срока, р<0,05.
ИСРО. Критерием защиты при противотуберкулезной вакцинации является уровень ИСРО не менее 2,0. Согласно полученным результатам, у 33,3% здоровых детей через 5—7 лет состояние противотуберкулезного иммунитета уже находится на уровне, не обеспечивающем их надежную защиту от туберкулезной инфекции.
Библиографический список
1. Аксенова В. А. Туберкулез у детей в России/
B. А Аксенова //Практика педиатра.— 2005.— № 1.— С. 6—9.
2. Антитела. Методы/Под ред. Д. Кетти. Пер. с англ.— М.: Мир, 1991.— 516 с.
3. Ефимова А. А. Специфическая профилактика туберкулеза у детей/А. А. Ефимова.— М.: Медицина, 1968.— 339 с.
4. Каплин В. Н. Нетрадиционная иммунология инфекций/В. Н. Каплин.— Пермь: ПГМА, 1996.— 163 с.
5. Митинская Л. А Противотуберкулезная ревакцинация БЦЖ/Л. А. Митинская.— М.: Медицина, 1975.— 152 с.
6. Особенности интерпретации пробы Манту с 2 ТЕ ППд-Л при определении виража туберкулиновых реакций у детей и подростков и методика определения инфици-рованности туберкулезом/Л. А. Митинская,
C. Я. Оспанова, Б. П. Бубочкин и др.//Метод. рекомендации.— М., 1981.— 11 с.
7. Санакоева Л. П. Специфическая фагоцитарная реакция лейкоцитов крови при вакцинации БЦЖ и туберкулезной инфекции у детей (клинико-лабораторное исследование): автореф. дис. ... канд. мед. наук/Л. П. Санакоева.— Пермь, 1988.— 16 с.
8. Санакоева Л. П. Способ иммунодиагностики инфекции, вызванной микобакте-риями/Л. П. Санакоева, В. А. Четвертных, Л. А. Фокина//Патент № 2302634 РФ.— Изобретения. Полезные модели: бюл.— 2007.— № 19.
L. P. Sanakoeva, L. A. Chetvertnykh, N. N. Chekmareva
ESTIMATION CRITERIA
OF ANTITUBERCULOUS IMMUNITY IN CHILDREN AFTER BCG VACCINATION
The investigation performed by the original technique of specific adhesive capacity of blood lymphocytes and specific antibody formation based on calculation of specific adhesion indices and specific location of adhesive objects as well as specific antibody shift index in healthy BCG-vaccinated children in the period of 1,5 months — 7 years (in dynamics) permitted to quantitatively estimate the process of immune rebuilding together with assessment of local cutaneous postinoculative reaction and tuberculin sensitivity by Mantoux test with 2 TE PPD-L. Formation of tense adaptive antitu-berculous immunity, by the results of investigation of specific adhesive blood lymphocyte capacity, began in 3—4 months from the moment of BCG vaccination; immunity reached maximum level in 1—2 years, lowered in 3 years and was kept up to 5—7 years in 67% of children. Specific adhesion indices of blood lymphocytes were more informative with respect to estimation of postinoculative antituberculous immunity state than cutaneous scar diameter and tuberculin sensitivity by Mantoux test with 2 TE PPD-L.
Keywords: BCG vaccination, healthy children, Mantoux test, cutaneous scar, tension of antituberculous immunity, lymphocyte adhesive capacity, antibody formation.
Контактная информация: Санакоева Людмила Павловна, доктор мед. наук, доцент кафедры педиатрии ФПК и ППС Пермской государственной медицинской академии им. ак. Е. А. Вагнера, 614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26, тел. 8 (342) 217-09-12
Материал поступил в редакцию 28.08.2010
