CC BY
53
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ КОРРЕКЦИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА... 19
УДК 615.277.3.099:557.114
Е.А. Сафонова, К.А. Лопатина, Т.Г. Разина, Е.П. Федорова, А.В. Пахомова, А.В. Вычужанина,
Е. П. Зуева, Л. А. Ефимова
КОРРЕКЦИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ПАКЛИТАКСЕЛА НА СИСТЕМУ КРОВИ И ЭПИТЕЛИЙ ТОНКОЙ КИШКИ
ВОДОРАСТВОРИМЫМИ ПОЛИСАХАРИДАМИ МАТЬ-И-МАЧЕХИ ОБЫКНОВЕННОЙ,
АИРА БОЛОТНОГО И ЭХИНАЦЕИ ПУРПУРНОЙ
НИИ фармакологии СО РАМН
Контактная информация:
Сафонова Елена Андреевна, аспирант лаборатории онкофармакологии НИИ фармакологии СО РАМН адрес: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3; тел.: +7(3822)41-83-78 e-mail: zep0929@ mail.ru
Статья поступила: 01.10.2009, принята к печати 01.04.2010.
Резюме
В эксперименте на мышах с LLC исследована способность ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной, аира болотного и эхинацеи пурпурной повышать эффективность противоопухолевой терапии. Водорастворимые полисахариды уменьшают токсическое действие паклитаксела на систему крови и эпителий тонкой кишки, а также повышают противометастатическое действие цитостатика.
Ключевые слова: полисахариды, паклитаксел, система крови, тонкая кишка.
E.A. Safonova, K.A. Lopatina, T.G. Razina, E.P. Fedorova, A.V. Pahomova, A.V. Vychuzhanina, E.P. Zueva, L.A. Efimova
CORRECTION PACLITAXEL TOXIC EFFECT ON BLOOD SYSTEM AND EPITHELIUM OF INTESTINE BY WATER-SOLUBLE POLYSACCHARIDES FROM TUSSILAGO FARFARA, ACORUS CALAMUS AND ECHINACEA PURPUREA
Institute of Pharmacology of Siberian Branch RAMS, Tomsk
Abstract
Water-soluble polysaccharides from Tussilago farfara, Acorus calamus and Echinacea Purpurea enhance the antimetastatic efficiency of paclitaxel in mice with lung Lewis carcinoma. Water-soluble polysaccharides reduce pacli-taxel toxic action on blood system and epithelium of intestinal.
Key words: polysaccharides, paclitaxel, blood system, intestine.
Введение
ХТ - один из основных методов лечения распространенных злокачественных новообразований. Но цитостатики не обладают опухолевой специфичностью, повреждая также здоровые органы и ткани. Наиболее часто встречается гематологическая (85-90 %) и гастроинтестинальная (до 90 %) токсичность [9]. Паклитаксел - современный антибластомный препарат для лечения злокачественных опухолей, однако наряду с высокой эффективностью он проявляет высокую токсичность [5; 6]. В связи с этим актуальна разработка методов фармакологической коррекции эффективности ХТ и снижения побочного действия противоопухолевых препаратов.
Перспективны для создания такого рода средств полисахариды растительного происхождения, которые стимулируют иммунную систему, обладают гиполипидемическим, противовоспалительным, противоопухолевым действием. Установлен факт активации процессов кроветворения некоторыми полисахаридами: при введении в организм растительные полисахариды стимулируют обмен веществ, способствуя процессам регенерации и роста, усилению пролиферации наиболее быстро делящихся клеток [7; 11; 12].
Ранее было показано повышение противоопухолевого эффекта при совместном использовании ЦФ и ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной, аира болотного и эхинацеи пурпурной [4]. Цель исследования - изу-
чение влияния ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной, аира болотного и эхинацеи пурпурной на систему крови и эпителий тонкого кишечника, а также на рост и мета-стазирование ЬЬС на фоне терапии паклитакселом.
Материалы и методы
Эксперименты выполнены на мышах-самках линии С57В1/6 массой 19-20 г. Животные 1 категории разводки лаборатории экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии СО РАМН содержались в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей» (Страсбург, 1986). Использование животных в эксперименте было осуществлено в соответствии с нормами локального независимого этического комитета НИИ фармакологии СО РАМН (протокол № 8/09 от 22-10-2009). До и в период эксперимента мыши находились в виварии при температуре воздуха +20-22 °С, влажности - не более 50 %, объеме воздухообмена (вытяжка: приток) - 8:10, в световом режиме - день-ночь, в стандартных пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой и получали стандартный рацион (гранулированный корм ПК120-3 согласно приказу №1179 МЗ СССР от 10.10.83).
Для исключения сезонных колебаний исследуемых показателей эксперименты проводились в осенне-зимний период.
Изменение клеточного состава лейкоцитарной формулы у мышей-самок линии С57В1/6 с ІХС под влиянием ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной,
аира болотного и эхинацеи пурпурной на фоне терапии паклитакселом (Х±т), г/л_______________________________________________________________________________
Группа наблюдения Количество лейкоцитов Нейп эофилы Лимфоциты Моноциты Эозинофилы
Палочкоядерные С егменто -ядерные
5 сут после введения паклитаксела
1. Контроль 12,66±0,85 0,06±0,40 4,38±0,24 6,46±0,87 1,66±0,22 0,10±0,04
2. Паклитаксел 12,58±0,32 0,10±0,45 0,82±0,10 1-2Р<0,01 9,32±0,89 2,34±0,67 □
3. Паклитаксел + ВРПС мать-и-мачехи 13,74±0,57 □ 0,72±0,16 11,80±0,60 2-ЗР<0,05 1,22±0,10 □
4. Паклитаксел + ВРПС аира 11,42±0,91 0,10±0,04 0,59±0,08 9,34± 0,84 1,35±0,14 0,04±0,02
5. Паклитаксел + ВРПС эхинацеи 12,00±1,14 0,02±0,02 1,26±0,25 8,98±0,97 1,66±0,2 0,08±0,03
8 сут после введения паклитаксела
1. Контроль 14,86±1,34 0,02±0,02 2,90±0,27 10,64±0,96 1,30±0,25 □
2. Паклитаксел 18,82±2,30 0,14±0,07 2,20±0,30 1-2Р<0,05 13,54±1,72 2,88±0,67 0,06±0,04
3. Паклитаксел + ВРПС мать-и мачехи 22,46±1,22 0,13±0,05 5,90±0,37 2-ЗР<0,01 13,62±0,79 2,51±0,47 0,30±0,06 2-ЗР<0,01
4. Паклитаксел + ВРПС аира 19,78±2,90 0,12±0,08 6,04±0,62 2-4Р<0,01 11,60±1,93 1,76±0,36 0,26±0,17
5. Паклитаксел + ВРПС эхинацеи 23,20±2,97 0,10±0,06 6,36±0,91 2-5Р<0,01 14.34: 1.64 2,18±0,64 0,22±0,13
Табл. 1С2 кровь на анализ брали у 5 животных в группе; табл. 1-4 перед уровнем значимости Р указаны номера сравниваемых групп.
Таблица 2
Изменение показателей красной крови у мышей-самок линии С57В1/6 с ЬЬС под влиянием ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной,
аира болотного и эхинацеи пурпурной на фоне терапии паклитакселом (Х±т)_________________________ _____________________________________________________________
Группа наблюдения Гемоглобин, г/л Количество эритроцитов, 101 /л Гематокрит, % Количество тромбоцитов, 107л
5 сут после введения паклитаксела
1. Контроль 145,2±14,21 8,32±0,78 33,90±3,28 3,59±0,52
2. Паклитаксел 113,4±4,04 1-2Р<0,05 6,57±0,31 1-2Р<0,05 27,34±1,49 6,21±0,34
3. Паклитаксел + ВРПС мать-и-мачехи 149,0±11,96 2-ЗР<0,05 8,99±0,89 2-ЗР<0,05 36,64±3,65 2-ЗР<0,05 6,79±1,11
4. Паклитаксел + ВРПС аира 145,2±11,47 2-4Р<0,05 8,70±0,82 2-4Р<0,05 35,16±3,27 2-4Р<0,05 5,50±0,70
5. Паклитаксел + ВРПС эхинацеи 135,25±12,78 8,23±0,82 33,23±3,33 5,04±0,69
8 сут после введения паклитаксела
1. Контроль 128,0±13,77 7,73±0,87 32,40±3,62 1,11±0,15
2. Паклитаксел 163,2±15,20 1-2Р<0,05 10,16±1,04 1-2Р<0,05 43,36±4,52 1-2Р<0,05 1,91±0,74
3. Паклитаксел + ВРПС мать-и-мачехи 190,6±16,81 12,11±1,10 50,70±4,60 4,55±0,51 2-ЗР<0,05
4. Паклитаксел + ВПРС аира 147,2±21,62 8,70±1,36 37,30±5,92 2,61±0,14
5. Паклитаксел + ВРПС эхинацеи 150,2±13,13 8,74±0,69 37,14±3,50 2,98±0,58
Численность клеточных популяций эпителия тонкой кишки и митотический индекс у мышей с ЬЬС
при введении паклитаксела в сочетании с ВРПС аира болотного, мать-и-мачехи обыкновенной и эхинацеи пурпурной (Х±т)
Группа наблюдения Количество клеток в криптах Количество клеток на ворсинках Митотический индекс, %
1. Контроль 31,98±0,35 145,04±1,28 4,40±0,17
2. Паклитаксел 31,52±0,15 137,58±0,59 1-2Р<0,01 1,65±0,14 1-2Р<0,01
3. Паклитаксел + ВРПС мать-и-мачехи 34,10±0,13 127,46±0,96 2-ЗР<0,01 2,51±0,11 2-ЗР<0,01
4. Паклитаксел + ВРПС аира 34,72±0,38 2-4Р<0,01 141,50±0,91 2-4Р<0,01 3,51±0,09 2-4Р<0,01
5. Паклитаксел + ВРПС эхинацеи 39,44±0,98 2-5Р<0,01 123,04±0,79 2-5Р<0,01 3,03±0,15 2-5Р<0,01
Подсчет показателей производили у 5 животных в группе.
Влияние ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной, аира болотного.
Таблица 4
Группа наблюдения, доза препарата (количество животных) Масса опухоли (Х±ш), г Торможение либо стимуляция (-) роста опухоли, % Частота метастазирования, % Количество метастазов на 1 мышь (Х±т) Площадь метастазов на 1 мышь (Х±ш), м2 НИМ, %
1. Контроль (9) 5,34±0,29 □ 100 25,56±1,79 23,23±4,40 □
2. Паклитаксел 20 мг/кг □ 1 (10) 5,18±0,14 5 100 20,50±3,02 30,87±11,9 20
3. Паклитаксел 20 мг/кг □ 1 + ВРПС мать-и-мачехи 10 мг/кг □ 12 (10) 5,01±0,21 6 100 17,10±1,66 1-ЗР<0,01 17,20±3,30 33
4. Паклитаксел 20 мг/кг □ 1 + ВРПС эхинацеи 10 мг/кг х 12 (10) 5,69±0,23 -6 100 19,90±1,98 1-4Р<0,01 23,60±4,20 22
5. Паклитаксел 20 мг/кг □ 1 + ВРПС аира 10 мг/кг □ 12 (9) 5,38±0,14 1 100 27,11±3,41 26,85±4,71 -6
LLC перевивали внутримышечно по З-б млн опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. Для моделирования токсического действия на систему крови и эпителий тонкой кишки использовали паклитаксел («Taxol», «Доктор Редди'с Лабора-торис Лтд», Индия, г. Хайдерабат). Цитостатик вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 20 мг/кг на 10 сутки развития опухоли (день трансплантации считали 1 сут развития LLC).
ВРПС листьев мать-и-мачехи обыкновенной (Tussilago farfara L.), корневищ аира болотного (Acorus calamus L.) и цветков эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea M.) получены из фармакопейного растительного сырья фракционным методом на кафедре химии ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Томск). Начало лечения полисахаридами приходилось на В сут развития LLC. Полисахариды предварительно растворяли в дистиллированной воде и вводили животным внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг в течение 10 сут (с одним перерывом на 13 сут).
На З и В сут после введения паклитаксела (1 сут считали день введения цитостатика) определяли показатели периферической крови на гематологическом анализаторе «Abacus» («Diatron») в ветеринарном режиме.
Определяли концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, тромбоцитов, общее число лейкоцитов. Для подсчета лейкограммы проводили микроскопическое исследование цитологических препаратов, окрашенных азуром 11-эозином.
На 19 сут развития опухоли (10 сут после введения паклитаксела) проводили морфологическое исследование эпителия верхней трети тонкого кишечника, для этого кусочек тонкой кишки фиксировали в жидкости Карнуа, заливали в парафин и готовили срезы толщиной З мкм.
Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилин-эозином по Караци. На продольных срезах подсчитывали среднее количество эпителиальных клеток в криптах (не менее чем в 10). В этих же криптах подсчитывали количество митозов и вычисляли митотический индекс как процент клеток в митозе от общего количества просмотренных клеток. Количество клеток на ворсинках подсчитывали от основания до вершины, выбирая 10 ворсинок на каждом препарате [2].
Эксперимент заканчивали на 19 сут развития LLC, в это же время оценивали способность ВРПС влиять на противоопухолевую и антиметастатиче-скую эффективность паклитаксела. В конце эксперимента определяли процент торможения роста опухоли, частоту метастазирования, количество и площадь метастазов в легких мышей. Различие метаста-зирования опухоли между контролем и опытом по индексу ингибирования метастазирования:
ИММ ■
((A X Д) - (A2 XB2)) (A: X Д)
X100, где
А1 - частота метастазирования в контрольной группе;
А 2 - частота метастазирования в опытной группе;
В1 - среднее количество метастазов у животных контрольной группы;
В 2 - среднее количество метастазов у животных опытной группы [1].
Статистическую обработку результатов проводили с помощью критерия Вилкоксона-Манна-Уитни и углового преобразования Фишера [3].
Результаты и обсуждение
При оценке действия цитостатика на систему периферической крови получены следующие результаты: на 5 и на 8 сут после однократного введения паклитаксела мышам с LLC наблюдалась выраженная нейтропения: количество сегментоядерных нейтро-филов было в 5,3 раза (Р<0,01) и в 1,3 раза (Р<0,05) меньше соответствующих контрольных значений. При анализе показателей красной крови выявлено, что на 5 сут после инъекции цитостатика количество эритроцитов и концентрация гемоглобина уменьшились в 1,3 раза (Р<0,01) относительно контроля, а к 8 сут эти данные оказались достоверно выше контрольного уровня (табл. 1; 2).
При добавлении в схему лечения паклитак-селом ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной на 5 сут после введения цитостатика число лимфоцитов оказалось выше в 1,3 раза (Р<0,05) по сравнению с этим значением у мышей, получавших только цитостатик. К 8 сут повысилось количество сегментоядерных нейтрофилов в 2,7 раза (Р<0,01) относительно такового у мышей, леченных паклитаксе-лом. Анализ показателей красной крови выявил, что на 5 сут после введения паклитаксела концентрация гемоглобина и гематокрит были выше в 1,3 раза, количество эритроцитов - в 1,4 раза (P<0,05); к 8 сут увеличение этих данных оказалось на уровне тенденции, в то же время достоверно возросло число тромбоцитов в 2,4 раза относительно такового у мышей, которым вводили один антибластом-ный препарат (ibidem).
На 5 сут после введения цитостатика у мышей, леченных паклитакселом и ВРПС аира болотного, количество нейтрофильных лейкоцитов не отличалось от такового у животных группы монохимиотерапии, в то время как к 8 сут был зафиксирован их достоверный прирост в 2,7 раза. Со стороны красной крови у мышей данной группы на 5 сут обнаружено, что показатели гемоглобина, гематокрита, количества эритроцитов превосходили в 1,3 раза (P<0,05) эти значения у леченных только пак-литакселом животных.
При совместном использовании паклитаксе-ла и ВРПС эхинацеи пурпурной на 8 сут после инъекции паклитаксела зафиксировано увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов в 2,9 раза (Р<0,01) относительно таковых у мышей группы монохимиотерапии; со стороны красной крови у животных этой группы достоверных изменений не отмечено (см. табл. 1-2).
На 10 сут после однократного введения пак-литаксела в дозе 20 мг/кг мышам с LLC было выявлено его токсическое действие на слизистую оболочку тонкого кишечника: достоверно меньше оказалось количество эпителиальных клеток на ворсинках, митотический индекс снизился в 2,7 раза (Р<0,01), число энтероцитов в криптах оставалось на уровне контроля (табл. 3).
У мышей, получавших паклитаксел совместно с применением ВРПС аира болотного, достоверно больше оказалось количество эпителиальных клеток в криптах и на ворсинках, митотический индекс при этом был выше в 2,1 раза (Р<0,01) по сравнению с этими показателями у мышей, леченных только цитостатиком.
При использовании ВРПС эхинацеи пурпурной и мать-и-мачехи обыкновенной на фоне цито-статической терапии численность клеточных популяций ворсинок в этот срок наблюдения была ниже таковой у мышей группы монохимиотерапии.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ КОРРЕКЦИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА... 23
В то же время, следует отметить, что комбинированное лечение паклитакселом и ВРПС эхина-цеи привело к усилению репаративных процессов в криптах, о чем свидетельствовало увеличение количества клеток в криптах и митотического индекса (в 1,3 и 1,8 раза соответственно, Р<0,01) относительно этих показателей у мышей, получавших только цитостатик (табл. 3).
При добавлении в схему лечения паклитаксе-лом ВРПС мать-и-мачехи зафиксировано достоверно меньшее количество клеток на ворсинках, однако митотический индекс был выше в 1,5 раза (Р<0,01) по сравнению с этими показателями у мышей группы монохимиотерапии. Кроме того, у животных в этой группе наблюдения отмечена тенденция к увеличению количества клеток в криптах (табл. 3).
Паклитаксел в используемой дозе не оказал достоверного влияния на развитие ЬЬС, в то время как при совместном применении цитостатика и ВРПС мать-и-мачехи количество метастазов в легочной ткани уменьшилось в 1,5 раза (Р<0,01), а их площадь - в 1,4 раза по сравнению с контролем, индекс ингибирования метастазирования составил 33 % против 20 % в группе мышей, получавших паклитаксел. Сочетанное введение паклитаксела и ВРПС эхинацеи привело к снижению числа метастазов в 1,3 раза (Р<0,01) по сравнению с контролем. Добавление в схему лечения паклитакселом ВРПС аира не изменяло противоопухолевого и ан-тиметастатического эффекта цитостатика (табл. 4).
Полученные результаты свидетельствуют о защитном влиянии ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной, аира болотного и эхинацеи пурпурной на активно обновляющиеся ткани организма - систему крови и эпителий тонкой кишки, которые в наибольшей степени подвержены токсическому действию ХТ.
Обнаружено также, что совместное использование паклитаксела с ВРПС мать-и-мачехи и эхинацеи приводит к уменьшению количества и площади метастазов в легких мышей.
Механизм антиметастатического действия ВРПС на фоне цитостатической терапии, помимо активизации клеточных эффекторов системы естественной резистентности организма, может быть связан с непосредственной блокадой выработки сосудистого эндотелиального фактора роста и мат-риксной металлопротеиназы-9, что, в конечном итоге, препятствует образованию новых сосудов в ткани опухоли [10].
Тесная сопряженность процессов метастази-рования и ангиогенеза доказана, поэтому не исключено, что достоверное снижение количества метастатических колоний у мышей, принимавших полисахариды, имеет в основе замедление образования новых сосудов.
Возможный механизм действия ВРПС на систему крови в комбинации с паклитакселом связан с их способностью стимулировать процессы созревания и размножения кроветворных клеток в костном мозге, что, в свою очередь, приводит к выходу созревших клеток в кровоток и увеличению их количества в периферической крови.
ВРПС активизируют клетки стромы костного мозга, синтезирующие гликозаминогликаны и про-теогликаны - регуляторы процессов гемопоэза, действие которых приводит к ускорению процессов пролиферации и дифференцировки в костном мозге.
Репаративный эффект ВРПС на эпителий тонкой кишки может быть обусловлен увеличением количества РНК в энтероцитах, что приводит к усилению синтетических процессов и активации обмена веществ [7; 8].
Выводы
Таким образом, введение в схему лечения паклитакселом ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной, аира болотного и эхинацеи пурпурной приводит к уменьшению токсического влияния паклитаксела на систему крови и эпителий тонкого кишечника мышей с карциномой легких Льюис. Кроме того, при совместном использовании ВРПС мать-и-мачехи обыкновенной и эхинацеи пурпурной с паклитакселом снижается количество и площадь метастатического поражения легких животных с ЬЬС.
Литература
1. Архипов С.А., Юнкер В.М., Грунтенко Е.В. Изменение интенсивности метастазирования в легкие перевиваемых опухолей мышей в зависимости от величины перевивочной дозы опухолевых клеток. - Исследование по индукции и метастазированию опухолей у экспериментальных животных. - Новосибирск, 1984. - С. 14-32.
2. Зуфаров К.А., Байбеков И.М., Ходжиметов А.А. Компенсаторно-приспособительные процессы в кишечнике. - М.: Медицина, 1974. - 208 с.
3. Лакин Г. Ф. Биометрия. - М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.
4. Лопатина К.А., Гурьев А.М. Влияние водорастворимых полисахаридных комплексов растительного происхождения на эффективность цитостатической терапии перевиваемых опухолей // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы конференции. - Томск, 2005. - С. 23-5.
5. МашковскийМ.Д. Лекарственные средства. - М.: «Новая волна», 2008. - 1206 с.
6. СтенинаМ.Б. // Паклитаксел в клинической практике / Под ред. Н.И. Переводчиковой. - М., 2003. - С. 81-117.
7. Сычев И.А., Порядин Г.В., Смирнов В.М. Действие полисахаридов на систему крови крыс // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. - 2006. - № 5. - С. 530-3.
8. Сычев И. А., Смирнов В. М., Порядин Г. В. Механизм радиопротекторного действия полисахарида донника желтого - пектина//Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2008. - № 1 (60). - С. 49-53.
9. Химиотерапия опухолевых заболеваний / Под ред. Н.И. Переводчиковой. - М., 2000. - 392 с.
10. Bandyopadhyay A., Wang L., Lopez-Casillas F. et al. Systemic administration of a soluble betaglycan suppresses tumor growth, angiogenesis, and matrix metalloproteinase-9 expression in a human xenograft model of prostate cancer // Prostate. - 2005. - 63(1). - P. 81-90.
11. Hana F., Yaoa W., Yangb X. et al. Experimental study on anticoagulant and antiplatelet aggregation activity of a chemically sulfated marine polysaccharide YCP // International Journal of Biological Macromolecules. - 2005. -36(4). - P. 201-7.
12. Popov S.V., Popova G.YU., Ovodova R.G. et al. Antiinflammatory activity of the pectic polysaccharide from Co-marum palustre // Fitoterapia. - 2005. - 76(3-4). - P. 281-7.
ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ СТАТЕЙ ДЛЯ ПУБЛИКАЦИИ В «РОССИЙСКОМ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКОМ ЖУРНАЛЕ»
Работа может быть статьей экспериментального или клинического характера, теоретической или концептуальной, обзором по материалам литературы, рецензией, сообщением дискуссионного, исторического или хроникального характера, рефератом зарубежных работ.
Статьи экспериментального или клинического характера имеют разделы: Резюме; Введение; Материалы и методы; Результаты и обсуждение; Выводы (Заключение); Литература.
Обзоры литературы, статьи теоретического и концептуального характера имеют разделы: Резюме; Введение; Разделы по отдельным обсуждаемым вопросам; Выводы; Литература.
Статья должна быть представлена в виде файла формата RTF на дискете или CD и распечатана в 2 экземплярах. На внешней стороне дискеты или коробке CD должны быть указаны фамилия первого автора, названия статьи и файлов.
В основном файле должен содержаться текст статьи, таблицы, подписи и надписи к рисункам, список литературы. Кроме того, на дискете или CD должны быть записаны рисунки (каждый в виде отдельного файла).
Штриховые и тоновые рисунки (фотографии, рентгенограммы и т. д.), то есть растровая графика, должны быть сохранены в виде файлов формата TIF или JPEG, графики и диаграммы (векторная графика) - в виде файлов формата EPS. Если автор не работает с современными программными пакетами для создания векторной графики, можно прислать график в виде файла Microsoft Excel 3.G/93 с обязательным приложением в виде таблицы, по которой данный график построен.
Обзорные статьи не должны превышать 17 страниц, оригинальные статьи - 12 страниц.
Весь текст должен быть набран шрифтом Times New Roman 12 через полуторный интервал. Текст должен быть выровнен по левому краю.
Все страницы должны быть пронумерованы. Номер страницы должен быть расположен внизу справа, начина со второй. Каждый абзац должен начинаться с красной строки, которая устанавливается меню «Абзац».
Не следует использовать для красной строки клавишу Tab. Десятичные дроби следует писать через запятую. При наборе текста следует различать дефис и тире. Последнее вводится одновременным нажатием клавиш Ctrl+Alt+дефис с дополнительной клавиатуры при горящем указателе Num Lock.
Набирая заголовки, названия разделов, таблиц, подписи и надписи на рисунках, точку в конце ставить не нужно. Выравнивать по центру и устанавливать красную строку для всего перечисленного также не нужно.
В начале статьи следует указать имя, отчество и фамилии авторов полностью, НАЗВАНИЕ СТАТЬИ, место работы в именительном падеже (если авторы работают в разных учреждениях, уточнить это дополнительно), должность и контактную информацию для каждого автора (почтовый адрес, e-mail). Авторы несут ответственность за точность предоставляемой ими информации о себе и месте своей работы.
В начале статьи должно быть приведено Резюме. В нем должны быть кратко без рубрикации указаны цель исследования, материалы и методы, полученные автором результаты и основные выводы. В конце резюме автор приводит Ключевые слова работы (не более З). Рекомендуемый объем реферата - 3GG-1GGG печатных знаков. Отступление от этой схемы допустимо только в отношении обзорных статей.
Далее необходимо на английском языке дать фамилии авторов и их инициалы, название статьи, название учреждений, резюме (Abstract) и ключевые слова (Key words).
Статья должна быть написана ясно, четко, лаконично, тщательно выверена авторами, не содержать повторов и исправлений. Сокращения допустимы только в отношении часто встречающихся в статье терминов. Сокращение вводится при первом вхождении в круглых скобках и в дальнейшем используется по всему тексту.
(продолжение см. на стр. 1QS)
