УДК 615.32: 612.017.1 © В.Б. Хобракова, Э.Т. Батоцыренова, О.Д.-Д. Цыренжапова
КОРРЕКЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА РАСТИТЕЛЬНЫМ СРЕДСТВОМ
В опытах на мышах линии F1 (СВАхС57В1/6) установлена иммунокорригирующая активность растительного средства - сухого экстракта астрагала перепончатого. Показано, что испытуемое средство в дозе 50 мг/кг способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на антителогенез и клеточноопосредованную иммунную реакцию, что выражается в повышении иммунологических показателей. Исследуемое средство не изменяет показатели иммунитета у интактных мышей.
Ключевые слова: сухой экстракт астрагала перепончатого, азатиоприн, клеточный иммунитет, гуморальный иммунитет, иммуномодулятор.
V.B. Khobrakova, E.T. Batotsyrenova, O.D.-D. Tsyrenzhapova
CORRECTION OF EXPERIMENTAL SECONDARY IMMUNODEFICIENCY BY PLANT REMEDY
The immunomodulating activity of the plant remedy - a dry extract of Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge has been allocated in experiments on the F1 (СВАхС57В1/6) mice. The extract in the dose of 50 mg/kg can relax the supressive action of azatioprin cytostatic on antibody genesis, cellularindirect immune reaction, which is expressed in the increasing of immune indices. The extract does not change the indices of immunity in intact mice.
Keywords: dry extract of Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge, azatioprin, cellular immunity, humoral immunity, immunomodulator.
В связи с широкой распространенностью иммунодефицитных состояний актуален поиск новых эффективных иммуномодуляторов, обладающих мягким действием, низкой токсичностью, отсутствием побочных эффектов. В этом плане перспективными являются лекарственные средства растительного происхождения. Преимущество их заключается в том, что они действуют на организм всем комплексом содержащихся в них веществ [1,2]. Объектом настоящего исследования стал сухой экстракт из корней астрагала перепончатого - Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge, полученный водной экстракцией в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН. Компонентный состав экстракта астрагала перепончатого: флавоноиды - каликозин и его 7-О-глюкозид, формононетин; тритерпены - астрагалозиды I, II, III, IV; аминокислоты - аспарагин, аспарагиновая кислота, глицин, аргинин, пролин; полисахариды - группа (-глюканов. Из данных литературы известно, что извлечения, полученные из астрагала перепончатого, обладают выраженными иммуномодулирующими свойствами [4,5,7,9,10].
Целью настоящего исследования явилось определение иммунокорригирующих свойств сухого экстракта из корней астрагала перепончатого в отношении клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа в условиях вторичного иммунодефицита, вызванного азатиоприном.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на мышах-самцах линии F1 (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Действие исследуемого средства на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета было изучено на интактных животных, а также животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней.
Сухой экстракт астрагала перепончатого (ЭАП) вводили 1-й опытной группе на фоне азатиоприна и 2-й опытной группе интактных мышей в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная группа животных получала воду, очищенную по аналогичной схеме.
Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ [3]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1 %-ной взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4-е сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена - 50 мкл 50%-ной взвеси ЭБ. В контрлатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 ч по разнице массы опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок.
Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham (1965) [6]. Мышей иммунизировали внутрибрюшинно ЭБ в дозе 2 х108 клеток/мышь. Величину иммунного ответа оценивали по числу АОК на селезенку и на 106 клеток с ядрами на 5-е сутки после иммунизации.
При статистической обработке экспериментальных данных вычислялась средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической ((m), критерий Стьюдента (t) и достоверность различий (Р). Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р ( 0,05).
Результаты и их обсуждение
Ранее нами сообщалось об иммуномодулирующем действии отвара астрагала перепончатого при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии [4]. В данной работе показано, что исследуемое средство способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на клеточно-опосредованную иммунную реакцию (гиперчувствительность замедленного типа) и антителогенез, что выражается в восстановлении иммунологических показателей до уровня таковых у интактных животных. В настоящей работе представляло интерес исследовать влияние сухого экстракта астрагала перепончатого на состояние основных звеньев иммунного ответа при экспериментальной иммунодепрессии.
При исследовании влияния сухого экстракта астрагала перепончатого на процессы антителообра-зования установлено, что данное средство восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 106 спленоцитов на 45% и 37% соответственно по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 1).
При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов; при этом первый показатель превышал уровень азатиоприновой супрессии в 2,1 раза, а второй — в 1,8.
При введении ЭАП интактным животным установлено, что данное средство не оказывает существенного влияния на показатели гуморального иммунитета у интактных животных.
Таблица 1
Влияние сухого экстракта астрагала перепончатого на антителообразование
Группы животных Абсолютное число АОК на селезенку Число АОК на 106 спленоцитов
Интактная, n=10 5233 І±34І6 317±17
Контрольная (азатиоприн), n=10 28982±2329 198±14
Первая опытная (азатиоприн + ЭАП), n=10 60844±3610* 349±28*
Вторая опытная (ЭАП), n=10 57451±2425 365±21
Примечание: здесь и далее n - количество животных в группе, * - означает, что разница существенна (р<0,05) по сравнению с контролем.
При исследовании влияния ЭАП на клеточно-опосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство восстанавливает индекс данной реакции (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению ИР ГЗТ на 44% по сравнению с тем же показателем в интактной группе (табл. 2).
Таблица 2
Влияние сухого экстракта астрагала перепончатого на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)
Группы животных ИР ГЗТ, %
Интактная, n=10 34,2 І±І,0І
Контрольная (азатиоприн), n=10 19,22±1,76
Первая опытная (азатиоприн + ЭАП), n=10 26,71±2,08*
Вторая опытная (ЭАП), n=10 38,65±2,17
При введении испытуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 1,4 раза по сравнению с контролем, тогда как у интактных животных при использовании экстракта не отмечали значимого изменения данного показателя по сравнению с данными в интактной группе. Таким образом, ЭАП способен ослаблять супрессивное действие азатиоприна на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа. Исследуемое средство не изменяет показатели иммунитета интактных животных. Это свойство присуще лишь истинным иммуномодуляторам, обладающим активностью только в условиях повреждения иммунитета.
Иммуномодулирующая активность исследуемого средства обусловлена совокупным действием комплекса биологически активных веществ, преимущественно, полисахаридами, флавоноидами и тритерпеновыми сапонинами [1, 2, 8, 11]. Наши данные согласуются с данными Д.Н. Лазаревой и др. (2005), из которых известно, что водный экстракт из корней астрагала перепончатого оказывает про-тективный эффект в условиях иммуносупрессии, вызванной метотрексатом (уменьшает угнетение пролиферации спленоцитов мышей, вызванное данным цитостатиком) [2]. Кроме того, китайскими исследователями установлено, что флавоноиды, выделенные из астрагала перепончатого, стимулируют пролиферацию лимфоцитов, увеличивают число Т-клеток [7].
Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что сухой экстракт астрагала перепончатого является эффективным иммунокоррегирующим средством, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения с целью создания новых растительных иммуномодулирующих препаратов.
Литература
1. Иммуномодуляторы растительного происхождения / А. Д. Бакуридзе [и др.] // Хим.-фармац. журн. 1993. № 8. С. 43- 47.
2. Растения, стимулирующие иммунитет / Д.Н. Лазарева [и др.]. Уфа, 2005. 96 с.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. М., 2005. С. 80.
4. Хобракова В.Б., Николаев С.М. Иммуномодулирующие свойства отвара астрагала перепончатого // Сибирское медицинское обозрение. 2009. №5. С.45-48.
5. Chu D.T., Wong W.L., Mavligit G.M. Immunotherapy with Chinese medical herbs. Immune restoration of local xenogenetic graft-versus-host reaction in cancer patients by fractionated Astragalus membranaceus in vitro // J. Clin. Lab. Immunol. 1988. V. 25. P. 119-123.
6. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. 1965. V. 207, № 5001. P. 1106-1107.
7. Jiao Y., Wen J., Yu X. Influence of flavonoid of Astragalus membranaceus stem and leaves on the function of cell mediated immunity in mice //Zhonguo Zhong Xii Yi, Jie Hl Za Zhi. 1999. V. 19, № 6. Р.356-358.
8. Kraus J., Franz G. Immunomodulating effects of polysaccharides from medicinal plants // Chem. Pharm. Bull. 1992. V. 40, № 2. P. 314 - 317.
9. Liu J.H., Zhong Y.Q., Huang B., Fang Q., HuO X., Hu H. The effects of endotoxin on the Th1/Th2 cells and immune modulation of Astragalus Membranaceus // Chinese Journal of Pediatrics. 2003. № 41. Р.613-614.
10. Pui Ying Yip, Hoi Shan Kwan. Molecular identification of Astragalus membranaceus at the species and locality levels // Journal of Ethnopharmacology. 2006. V.106. P. 222-229.
11. Tzianabos A.O. Polysaccharide immunomodulators as therapeutic agents; structural aspects and biologic function // Clin. Microbiol. Rev. 2000. V. 13. P. 523-533.
Хобракова Валентина Бимбаевна, кандидат биологических наук, доцент, старший научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, 670047, г.Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, тел.: 43-47-43, факс: 43-30-34, E-mail: val0808@mail.ru.
Батоцыренова Эльвира Токтохоевна, аспирант лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, 670047, г.Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.
Цыренжапова Октябрина Даши-Дондобовна, доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, 670047, г.Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.
Khobrakova Valentina Bimbaevna, candidate of biological sciences, associate professor, senior researcher, laboratory of experimental pharmacology, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str. 6, tel. 43-47-43, fax 43-30-34, E-mail: val0808@mail.ru.
Batotsyrenova Elvira Toktokhoevna, postgraduate student, laboratory of experimental pharmacology, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str. 6.
Tsyrenzhapova Oktyabrina Dashi-Dondobovna, doctor of medical sciences, professor, leading research fellow, laboratory of experimental pharmacology, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str. 6.
УДК 615.32: 612.017.1 © В.Б. Хобракова, Д.Н. Оленников
ВЛИЯНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ И ПОЛИСАХАРИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИММУНОДЕПРЕССИИ
В опытах на мышах линий СВА и F1 (СВАхС57В1/6) установлена иммуномодулирующая активность фенольных и полисахаридных соединений растительного происхождения. Показано, что испытуемые вещества способны ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на антителогенез и клеточноопосредованную иммунную реакцию, что выражается в повышении иммунологических показателей.
Ключевые слова: фенольные соединения, полисахариды, лекарственные растения, азатиоприн, клеточный иммунитет, гуморальный иммунитет, иммуномодулятор, иммунодефицит.
V.B. Khobrakova, D. N. Olennikov
THE INFLUENCE OF PHENOLIC AND POLYSACCHARID COMPOUNDS OF PLANT ORIGIN ON THE ORGANISM’S IMMUNE STATE AT EXPERIMENTAL IMMUNODEPRESSION
The immunomodular activity of phenolic and polysaccharide compounds of plant origin has been proved in experiments on the CBA and F1 (СВАxC57Bl/6) mice. The substances can relax supressive action of azatioprin cytostatic on antibody genesis, cellularindirect immune reaction, which is expressed in the increase of immune indices.
Keywords: phenolic compounds, polysaccharides, mnedicinal plants, azatioprin, cellular immunity, humoral immunity, immunomodulator, immunodeficiency.
В связи с широким распространением иммунодефицитных состояний актуален поиск новых эффективных иммуномодуляторов, обладающих мягким действием и способных воздействовать только на измененные звенья иммунной системы. Усилия большого количества ученых во всем мире направлены на поиск соединений, которые могли бы стать эффективными лигандами рецепторов им-мунокомпетентных клеток с целью специфической и неспецифической стимуляции функций данных клеток при иммунодефицитных состояниях.
В последние годы внимание многих исследователей привлекают работы по изучению иммуно-тропных свойств фенольных соединений и полисахаридов растительного происхождения, не имеющих побочных эффектов и характеризующихся низкой токсичностью, что дает им значительные преимущества при разработке иммуномодулирующих средств [1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 11, 12, 13].
Целью настоящего исследования явилось определение иммуномодулирующего действия фенольных и полисахаридных соединений, выделенных из лекарственных растений, при экспериментальной аза-тиоприновой иммунодепрессии.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на мышах-самцах линий СВА и F1 (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Действие исследуемых веществ на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета было изучено на животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиопри-ном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней.
Объектами настоящего исследования явились следующие соединения:
а) Фракции, полученные из экстракта софоры желтоватой:
1. Хлороформная фракция (ХФ) - агликоны тритерпеновых кислот и флавоноиды халконового типа (кураридин), кумарины (скополетин, умбеллиферон).