CC BY
122
© ХОБРАКОВА В.Б., НИКОЛАЕВ С.М.
ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ОТВАРА АСТРАГАЛА ПЕРЕПОНЧАТОГО
В.Б. Хобракова, С.М. Николаев Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов; отдел биологически активных веществ, заведующий — д.м.н., проф. С.М. Николаев, г. Улан-Удэ.
Резюме. В опытах на мышах линий СВА и F1 (СВАхС57В1/6) установлена иммуномодулирующая активность отвара астрагала перепончатого. Показано, что испытуемое средство в объеме 10 мл/кг способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на антителогенез и клеточноопосредованную иммунную реакцию, что выражается в повышении иммунологических показателей. Исследуемый экстракт не изменяет показатели иммунитета у интактных мышей.
Ключевые слова: отвар астрагала перепончатого, антителообразование, гиперчувствительность замедленного типа - ГЗТ, азатиоприн.
Хобракова Валентина Бимбаевна - к.б.н., сотрудник лаборатории Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ; e-mail: [email protected], тел. 8 (3012)606879.
Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., проф. зав. лабораторией Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ; e-mail: [email protected], 8(3012)433463.
Среди современных методов повышения иммунологического статуса организма важное значение имеет фармакологическая коррекция на основе применения иммуномодуляторов - веществ, способных направленно действовать на иммунную систему. Изыскание путей стимуляции и
супрессии иммунной системы в целом и отдельных ее клеточных звеньев рассматривается в качестве основной задачи иммунокоррекции Иммунокорригирующими могут быть как вещества белковой природы, так и средства синтетического и природного происхождения [6,10,11]. Перспективным направлением представляется разработка
иммуномодулирующих средств, созданных на основе растительного сырья, поскольку, как известно, иммуномодуляторы растительного происхождения, в отличие от синтетических, обладают мягким иммуномодулирующим действием, низкой токсичностью, благодаря наличию комплекса биологически активных веществ, оказывающих воздействие на организм в целом [1,2,4,8].
Целью настоящего исследования явилось определение иммуномодулирующих свойств растительного средства - отвара из травы астрагала перепончатого (Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge), произрастающего в Бурятии.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на мышах-самцах линий СВА и Fi (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Действие исследуемого средства на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета изучено на интактных животных, а также животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [3].
Отвар астрагала перепончатого вводили 1-ой опытной группе на фоне азатиоприна и 2-ой опытной группе интактных мышей в объеме 10 мл/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная группа животных получала воду очищенную по аналогичной схеме.
Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)
согласно стандартной методике локальной ГЗТ [7]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1 %-ой взвеси
эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4-е сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена
- 50 мкл 50%-ой взвеси ЭБ. В контралатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 часа по разнице массы опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок. Обе лапки отрезали сразу же после забоя животных по голеностопному суставу. Индекс реакции (ИР) вычисляли по формуле:
Ро - Рк
ИР =------х100%
Рк
Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по АЛ.Сипп^Иат (1965) [12]. Мышей иммунизировали
внутрибрюшинно ЭБ в дозе 2*108 клеток на мышь. Реакцию ставили на 5-е сутки после иммунизации. Готовили смесь равных объемов суспензии лимфоидных клеток (1 селезенка гомогенизирована в 5 мл среды Хенкса), ЭБ (10%) и комплемента (1:5) непосредственно перед постановкой реакции. Полученную смесь разливали в стеклянные камеры, представляющие собой два предметных стекла, соединенных между собой по краям парафином, учитывая объем входящей суспензии. Камеры инкубировали в течение 1 часа при 370С и подсчитывали с помощью лупы зоны гемолиза по всей камере. Реакцию характеризовали количеством АОК на 1 селезенку и на 106 клеток с ядрами.
Формула для определения абсолютного числа АОК на селезенку:
п * A * B * C
Число АОК на селезенку =---—----
п - число зон гемолиза;
А - доля лимфоидных клеток в смеси лимфоциты: ЭБ: комплемент
В - объем суспензии;
С - степень разведения лимфоцитов.
Формула для определения числа АОК на 106 спленоцитов:
. ^6 абсолютное число АОК на селезенку
Число АОК на 10 спленоцитов =------------------------------
количество клеток на селезенку
Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами вариационной статистики с использованием параметрического критерия Стьюдента. Для всех данных определяли среднее арифметическое значение (М), ошибку средней арифметической (±т) и достоверность различий (Р). Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р £ 0,05)
[5].
Результаты и обсуждение
При исследовании влияния отвара астрагала перепончатого (ОАП) на процессы антителообразования установлено, что данное средство восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 106 спленоцитов на 53% и 38%, соответственно, по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 1).
При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов; при этом первый показатель превышал уровень азатиоприновой супрессии в 2,1 раза, а второй — в 1,5.
Таблица 1
Влияние отвара астрагала перепончатого на антителообразование
Примечание: п - количество животных в группе, * - означает, что разница достоверна (р£0,05) по сравнению с контролем.
При введении отвара астрагала интактным животным установлено, что данное средство не изменяет показатели гуморального иммунитета у интактных животных.
При исследовании влияния отвара астрагала перепончатого на клеточноопосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство восстанавливает индекс данной реакции (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению ИР ГЗТ на 36 % по сравнению с тем же показателем в интактной группе (табл.2).
При введении испытуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 1,4 раза по сравнению с контролем, тогда как у интактных животных при использовании отвара астрагала не отмечали существенного изменения данного показателя по сравнению с данными в интактной группе.
Таблица 2
Влияние отвара астрагала перепончатого на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)
Примечание: п - количество животных в группе, * - означает, что разница достоверна (р£0,05) по сравнению с контролем.
Таким образом, отвар астрагала перепончатого способен ослаблять супрессивное действие азатиоприна на антителогенез и клеточноопосредованную иммунную реакцию. Исследуемое средство не изменяет показатели иммунитета интактных животных. Это свойство присуще лишь истинным иммуномодуляторам, обладающим активностью только в условиях повреждения иммунитета.
Эффективность исследуемого средства обусловлена совокупным действием комплекса биологически активных веществ, преимущественно, полисахаридами, флавоноидами и тритерпеновыми сапонинами, обладающими выраженными иммуномодулирующими свойствами [1,4,9,14].
Наши данные согласуются с данными Д.Н. Лазаревой и др., из которых известно, что водный экстракт из корней астрагала перепончатого оказывает протективный эффект в условиях иммуносупрессии, вызванной метотрексатом (уменьшает угнетение пролиферации спленоцитов мышей, вызванное данным цитостатиком) [4]. Кроме того, китайскими
исследователями установлено, что флавоноиды, выделенные из астрагала перепончатого, стимулируют пролиферацию лимфоцитов, увеличивают число Т-клеток [13].
Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что отвар астрагала перепончатого является эффективным иммунокорригирующим средством, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения с целью создания новых растительных иммуномодулирующих препаратов.
IMMUNOMODULATION FEATURES OF ASTRAGALUS MEMBRANACEUS BROTH V.B. Hobrakova, S.M. Nikolaev Institute of Basic and Experimental Biology Siberian branch Russian academy of medical science.
Abstract. Experiments on mice of СВА и F1 (СВАхС57В1/6) lines indicated immunomodulation activity of astragalus membranaceus broth. The extracted substance in doze of 10 ml/rg could make weaker the suppressive influence of cytostatic azathioprinum on antibody production and indirect cell immune reaction. Immune activity was expressed in the increase of immunological indicators. The examined substance did not change immunological indicators in the reference group of intact mice.
Key words: astragalus membranaceus broth, antibodies genesis, delayed-type hypersensitivity, azathioprinum.
Литература
1. Бакур
идзе А.Д., Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы
растительного происхождения // Хим.-фармац. журн. —1993. — № 8. —
С. 43-47.
2. Бочко Г.М. Использование растений для коррекции
иммунодефицитов // Матер. юбилейной конференции РОО «Фитотерапевтическое общество». - М., 2002. - С. 172-176.
3. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. - М.,1985.
- 256с.
4. Лазаре
ва Д.Н., Плечев В.В., Моругова Т.В., Самигуллина Л.И. Растения,
стимулирующие иммунитет. - Уфа, 2005. - 96 с.
5. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М., 1990. - 352 с.
6. П инегин Б.В., Латышева Т.В. Иммунодефицитные состояния: возможности применения иммуномодуляторов // Лечащий врач. - 2001.
- №3. - С.48 - 50.
7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева.
- М., 2005. - С. 81.
8. Токешова Л.Е. Лекарственные растения и их препараты, используемые в качестве иммуномодуляторов // Materials of the II International Conference “Natural Products: Chemistry, Technology and Medicinal Perspectives”. - Алматы, 2007. - С. 161.
9. Толкачев О.Н., Шипулина Л.Д., Шейченко О.П. Новые растительные полифенолы - активные противовирусные агенты и иммуномодуляторы // Int. J. Immunorehabil. - 1999. — № 14. - С. 9.
10. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Основные принципы иммуномодулирующей терапии // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 2000. - № 1. - С. 9-16.
11. Х
аитов Р.М., Пинегин Б.В. Современные иммуномодуляторы.
Классификация, механизм действия // Российский аллергологический журнал. - 2005. - № 4. - С. 30-43.
12. C unningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. — 1965. — Vol.207, № 5001. — P.1106-1107.
13. Ji ao Y., Wen J., Yu X. Influence of flavonoid of Аstragalus membranaceus stem and leaves on the function of cell mediated immunity in mice //Zhonguo Zhong Xii Yi, Jie Hl Za Zhi. - 1999. - Vol.19, № 6. - Р. 356358.
14. K raus J., Franz G. Immunomodulating effects of polysaccharides from medicinal plants // Chem. Pharm. Bull. — 1992. — Vol. 40, № 2. — P. 314 -317.
PDF created with pdfFactory Pro trial version www. pdffactory. com
