CC BY
91
Сибирский медицинский журнал. 2010, № 8
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ
© ХОБРАКОВА В.Б., ШОБОЛОВА А.Б., ОЛЕННИКОВ Д.Н. - 2010
ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА СУХОГО ЭКСТРАКТА СОФОРЫ ЖЕЛТОВАТОЙ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИММУНОДЕПРЕССИИ
В.Б. Хобракова, А.Б. Шоболова, Д.Н. Оленников (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. В опытах на мышах линии СВА и F; (CBAxC57Bl/6) установлена иммуномодулирующая активность сухого экстракта софоры желтоватой. Показано, что испытуемое средство в экспериментально-терапевтической дозе 40 мг/кг способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на антителогенез и клеточно-опосредованную иммунную реакцию гиперчувствительности замедленного типа, что выражается в повышении иммунологических показателей. Исследуемый экстракт не изменяет показатели иммунитета у интактных мышей.
Ключевые слова: сухой экстракт софоры желтоватой, иммунитет, иммуномодулятор, иммунодефицит, азатиоприн, анти-телообразование, гиперчувствительность замедленного типа.
IMMUNOMODULATING PROPERTIES OF THE DRY EXTRACT FROM SOPHORA FLAVESCENS SOLAND IN EXPERIMENTAL IMMUNODEPRESSION
V.B. Khobrakova, A.B. Shobolova, D.N. Olennikov (Institute of General and Experimental Biology, Siberian Department, Russian Academy of Sciences, Ulan-Ude)
Summary. The immunomodulating activity of the dry extract from Sophora flavescens Soland has been established in experiments on the СВА and F; (CBAxC57Bl/6) mice. The extract in experimental-therapeutic dose of 40 mg/kg is capable to decrease suppressive effect of cytostatic azatioprin on antibody genesis, cellular indirect immune reaction - hypersensitivity of slow type, that is expressed by increasing of immune indices. The extract doesn’t change indices of the cellular and humoral immunity of intact mice.
Key words: dry extract from Sophora flavescens Soland, immunity, immunomodulator, immunodeficiency, azatioprin, antibody genesis, hypersensitivity of slow type.
В настоящее время актуальность проблемы профилактики расстройств иммунной системы с помощью иммунокорригирующих средств несомненна. Перспективным направлением иммунофармакологии представляется поиск иммуномодуляторов среди средств растительного происхождения, поскольку они имеют ряд преимуществ перед синтетическими: мягкое иммуномодулирующее действие, низкую токсичность, активацию функций не только иммунной, но и нервной и эндокринной систем благодаря наличию комплекса биологически активных веществ [1,5,12]. Объектом настоящего исследования явился сухой экстракт софоры желтоватой (Зоркога Аагг$сгж 8о1апф. На территории России произрастает в Забайкалье (Читинская область), Приангарье (Иркутская область), Приморье и в бассейне Верхнего и Среднего Амура. За рубежом встречается в Китае, Японии и на Корейском полуострове. Софора желтоватая является ценным лекарственным растением, широко применяемым в традиционной и народной медицине [11].
Целью настоящего исследования явилось определение иммуномодулирующих свойств сухого экстракта софоры желтоватой в отношении клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на мышах самцах линии СВА и Б1 (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.1977 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом.
Действие исследуемого средства было изучено на интакт-ных животных, а также животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [4].
Сухой экстракт софоры желтоватой вводили 1-ой опытной группе на фоне азатиоприна и 2-ой опытной группе интактных мышей в экспериментально-терапевтической дозе 40 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней.
Интактная группа животных получала воду, очищенную по аналогичной схеме.
Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham (1965) [15]. Мышей иммунизировали внутрибрюшинно ЭБ в дозе 2х108 клеток/мышь. Величину иммунного ответа оценивали по числу АОК на селезенку и на 106 клеток с ядрами на 5-е сутки после иммунизации.
Состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ [10]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением
0,1% взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4-е сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена - 50 мкл 50% взвеси ЭБ. В контралатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 часа по разнице массы опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок.
Значимость различий между сравниваемыми группами оценивали по критерию Манна-Уитни с применением пакета программ Biostat 6.0. Различия считали значимыми при вероятности 95% (р<0,05) [6,7].
Результаты и обсуждение
При исследовании влияния сухого экстракта софоры желтоватой на процессы антителообразования установлено, что данное средство восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 106 сплено-цитов на 45% и 30% соответственно, по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 1).
При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали значимое увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спле-ноцитов; при этом первый показатель превышал уровень азатиоприновой супрессии в 2,2 раза, а второй - в 3 раза.
При введении экстракта интактным животным не отмечали существенного изменения абсолютного и относительного числа АОК по сравнению с данными в интактной группе.
Сибирский медицинский журнал, 2010, № 8
Таблица 1
Влияние сухого экстракта софоры желтоватой на антителообразование
Группы животных Абсолютное число АОК на селезенку Число АОК на 106 спленоцитов
Интактная (n=10) 59267±3434 226±18,8
Контрольная (азатиоприн) (n=10) 32333±2195 159±14,4
1 опытная (азатиоприн + ЭСЖ) (n=10) 71533±4996* 472±34,9*
2 опытная (ЭСЖ) (n=10) 60234±3875 279±16,7
Примечание: здесь и далее п - количество животных в группе, * - означает, что разница существенна (р<0,05) по сравнению с контролем, ЭСЖ - экстракт софоры желтоватой.
При исследовании влияния сухого экстракта софоры желтоватой на клеточно-опосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство восстанавливает индекс данной реакции (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению ИР ГЗТ на 35% по сравнению с тем же показателем в интакт-ной группе (табл. 2).
Таблица 2
Влияние сухого экстракта софоры желтоватой на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)
Группы животных ИР ГЗТ, %
Интактная (n=10) 41,73±3,99
Контрольная (азатиоприн) (n=10) 27,26±1,35
1 опытная (азатиоприн+ЭСЖ) (n=10) 43,49±2,74*
2 опытная (ЭСЖ) (n=10) 40,16±2,18
При введении испытуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 1,3 раза по сравне-
нию с контролем, тогда как у интактных животных при использовании экстракта не отмечали существенного изменения данного показателя по сравнению с данными в интактной группе.
Сухой экстракт софоры желтоватой способен ослаблять супрессивное действие азатиоприна на показатели гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа. Исследуемое средство не изменяет показатели иммунитета ин-тактных животных. Это свойство присуще лишь истинным иммуномодуляторам, обладающим активностью только в условиях повреждения иммунитета.
Эффективность сухого экстракта софоры желтоватой, по-видимому, можно объяснить совокупным действием комплекса биологически активных веществ, преимущественно, полифенольными соединениями и полисахаридами, обладающими выраженными иммуномодулирующими свойствами [5,8,13,14,16]. Кроме того, из данных литературы известно, что флавоноиды и полисахариды, выделенные из софоры желтоватой, стимулируют гуморальное звено иммунного ответа [3,9]. Наши данные согласуются с данными Л.А. Горбачевой и соавт. (1992), из которых известно, что плоды софоры японской стимулируют В-звено иммунитета, при этом, суммарное извлечение из зрелых плодов значимо стимулирует гуморальный иммунный ответ в 3,9 раза и недозрелых - в 6 раз [2].
Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что сухой экстракт софоры желтоватой является эффективным иммунокорригирующим средством, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения с целью создания новых растительных иммуномодулирующих препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бакуридзе А.Д., Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы растительного происхождения // Хим.-фармац. журн. - 1993. - №8. - С.43-47.
2. Горбачева Л.А, Дрозд Г.А., Ермакова А.Е., Писарев В.М. Иммунофармакогностическое исследование плодов софоры японской // Тез. докл. III Украинской конференции по медицинской ботанике. - Ч.1. - Киев, 1992. - С.40-41.
3. Кичигина Е.Л., Ракова Е.Б., Будникова З.И. и др. Растения Восточной Сибири - перспективные иммуномодуляторы // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке. - Ч. 1. - Томск, 1991. - С.66-67.
4. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета.
- М.,1985. - 256 с.
5. Лазарева Д.Н., Плечев В.В., Моругова Т.В., Самигуллина Л.И. Растения, стимулирующие иммунитет. - Уфа, 2005. -96 с.
6. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М., 1990. - 352 с.
7. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2008. - Т. 76. №1. - С.5-8.
8. Мельникова Т.И., Николаев В.О. Сравнительная им-мунофармакологическая оценка растительных экстрактов с полифенольными и полисахаридными комплексами // «Фармация в 21 в.: инновации и традиции»: Тез. докл. между-нар. науч. конф. - СПб., 1999. - С.179.
9. Москаленко С.А. Первичный скрининг иммуномодулирующих свойств дальневосточных растений, ис-
пользуемых в этномедицине // Тез. докл. рабоч. совещания “Иммуномодуляторы природного происхождения”. -Владивосток, 1990. - С.25-26.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. РУ Хабриева. - М., 2005. - 80 с.
11. Санданов Д.В. Перспективы изучения софоры желтоватой (Sophora flavescens Soland., Fabaceae) // Мат-лы Междунар. науч.-практ. конф. «Флора, растительность и растительные ресурсы Забайкалья». - Новосибирск, 2000. - Т.1.
- С.152-155.
12. Токешова Л.Е. Лекарственные растения и их препараты, используемые в качестве иммуномодуляторов // Materials of the II International Conference “Natural Products: Chemistry, Technology and Medicinal Perspectives”. - Алматы, 2007. -С.161.
13. Толкачев О.Н., Шипулина Л.Д., Шейченко О.П. Новые растительные полифенолы - активные противовирусные агенты и иммуномодуляторы // Int. J. Immunorehabil. - 1999.
- №14. - С.9.
14. Томшич С.В., Командрова Н.А., Калмыкова Е.Н. и др. Биологически активные полисахариды из лекарственных растений Дальнего Востока // Химия природ. соед. - 1997. -№2. - С.197-201.
15. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. - 1965. - Vol. 207. №5001. - P1106-1107.
16. Kraus J., Franz G. Immunomodulating effects of polysaccharides from medicinal plants // Chem. Pharm. Bull. -1992. - Vol. 40. № 2. - P314-317.
Информация об авторах: 670047, г.Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН; тел: (3012) 43-47-43, факс: (3012) 43-30-34, e-mail: [email protected], Хобракова Валентина Бимбаевна - к.б.н., с.н.с.; Шоболова Александра Базаржаповна - аспирант; Оленников Даниил Николаевич - к.фарм.н., с.н.с.
