CC BY
8
ЛИТЕРАТУРА. Бургасов П. Н. Холера Эль-Тор. М., 1971. — Василенко П. В., Компанцев Н. Ф., СтупницкаяВ. М. и др. Гиг. и сан., 1973, № 11, с. 19.
Поступила 12/У 1974 г.
УДК 576.858.9:576.861.48.083.1:661.185
Доктор мед. наук Г. А. Багдасарьян, канд. мед. наук Е. Л. Ловцевич, Н. К- Лепахика
КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ВИРУСОВ НА НЕКОТОРЫХ ЕСТЕСТВЕННЫХ И ИСКУССТВЕННЫХ СОРБЕНТАХ
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
Были изучены и разработаны оптимальные условия вирусов кишечной группы и бактериофагов Е. Coli на естественных сорбентах (асканите, белом и желтом гумбрине и фосфорите), а также на 11 ионообменных смолах, полученных из Научно-исследовательского института пластмасс. Часть Мз них выпускается промышленностью (АН-2ФН, АВ-17-8, АН-31, КУ-2, ДЕАЕ-целлюлоза), часть находится на стадии экспериментального производства (АВ-17-4, AB-171-I5, АВ-29-1617, АН-22Д, АН-31Г, ОП-2-50-1, КУ-23). Инфицирование осуществляли путем одновременного введения в исследуемую прсбу воды ат-тенуированного штамма (LSc, 2ab) вируса полиомиелита и одного из изучаемых фагов Е. Coli (Tl, MS2 или f2) со множественностью 10 БОЕ/мл каждого.
Инфицированную пробу воды в объеме 1 л пропускали через колонку с изучаемой ионообменной смолой (высота столбика смолы — 8—10 см) со скоростью 12 мл/мин. Для элюцин адсорбированных на ионите вирусных частиц в колонку со смолой вносили 10 мл соответствующего десорбента и после 1VS ч контакта элюат отбирали в стерильные пени-циллиновые флаконы. В опытах с естественными сорбентами к инфицированной пробе воды (1 л) добавляли раствор сорбента из расчета 150, 300 и 500 мг/л, ставили в шуттель на 30 мин, а затем давали отстояться образовавшимся хлопьям в течение 2—3 ч. Затем сливали осветленную часть пробы, а слой жидкости с хлопьями центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость сливали, осадок заливали 10 мл десорбента, в течение 2—3 мин размешивали в блендере, а затем дважды центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. Полученную надосадочную жидкость брали на исследование. Содержание вируса полиомиелита в пробах определяли по методу Дуль-бекко и Фогта (в БОЕ/мл) на культуре ткани почек обезьян, а количество бактериофагов — по методу Грация на двух штаммах кишечной палочки Е. Coli В и Н1Р.
При выборе оптимальных искусственных сорбентов для концентрирования вирусов мы руководствовались тем, что смола должна обладать большой адсорбционной способностью и высокой скоростью фильтрации; кроме того, она не должна оказывать трксичес-кого действия на изучаемые микроорганизмы и культуру ткани; учитывалась и возможность последующей элюции активного вируса со смолы. Перечисленным выше условиям отвечали 3 из 11 изученных смол — аниониты АВ-17-8, АН-22Д и АН-31Г, с которыми и были проведены дальнейшие исследования по разработке оптимальных условий концентрирования вирусов. Оценивались и сорбционные свойства изучаемых глин (асканит, гум-брин и фосфорит) в отношении к вирусу полиомиелита и фага Е. Coli. Полученные данные показали, что в отношении изученных вирусов наибольшими сорбционными способностями обладает асканит в концентрации 500 мг/л.
Как известно, концентрирование вирусов на сорбенте включает два основных процесса — адсорбцию и элюцию, каждый из которых является очень важным для отработки метода. Проведенные нами исследования с естественными и искусственными сорбентами показали, что эффективность обоих процессов зависит от ряда факторов, таких как степень загрязнения и pH исследуемой воды, вид и количество микроорганизмов, содержащихся в пробе, а также состав и pH раствора, с помощью которого осуществляется элюцня.
Полученные данные показали, что наибольшая полнота адсорбции, а следовательно, н кратность концентрирования достигались при содержании модельных организмов в воде в низких концентрациях —от 0 до 10 БОЕ/мл. Максимальная сорбция микроорганизмов на изученных сорбентах достигалась при pH 5,5—6,0. Полученные результаты показывают целесообразность подкисления исследуемой пробы воды перед концентрированием до указанного значения pH. Сильно загрязненную воду поверхностных водоемов следует предварительно профильтровать через несколько слоев марли или стеклянной ваты, а затем пропустить через две последовательно установленные колонки с анионитом. Вирусологическое исследование необходимо проводить с алюатами из обеих колонок.
Для элюции вируса с искусственных сорбентов нами были использованы фосфатный и боратный буфер с различной ионной силой и разными значениями pH. Проведенные исследования показали, что наиболее полная десорбция вирусов с изученных ионообменных смол достигается при использовании 0,5 М фосфатного буфера с pH 8,2. Перед вирусологическим исследованием элюат желательно нейтрализовать с помощью соляной кис-
лоты до рН 7—7,4 для предотвращения отрицательного воздействия щелочной среды на жизнеспособность вируса и культуры ткани.
Условия элюции вирусов с асканита изучались в опытах с водопроводной н речной водой, инфицированной фагом Т1 в концентрациях 0—10 БОЕ/мл. Фаг Т1 был выбран моделью в связи с высокой адсорбционной способностью в отношении асканита (около 100%). Высокое концентрирование фага (в 100 раз) было получено при элюции его с асканита бычьей сывороткой и (в 94 раза) бульоном Хоттингера с 10% бычьей сыворотки с рН 8,4. Поскольку использование целой бычьей сыворотки вызывает сильное ценообразование, затрудняющее дальнейшую обработку пробы, нам пришлось отказаться от этого десорбента и рекомендовать бульон с 10% сыворотки.
Экспериментально разработанные условия концентрирования вирусов и фагов в воде при помощи перечисленных выше сорбентов были успешно апробированы в натурных условиях при исследовании разовых проб речной воды в летне-осенний период года.
Поступила 13/Х1 1974 г.
УДК 612.116.014.42«
В. Ф. Русяев, Г. И. Мулындина
ВЛИЯНИЕ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ПОЛЕЙ НА СВЕРТЫВАЕМОСТЬ КРОВИ
Читинский медицинский институт
Нами сделана попытка выявить, как электромагнитные поля (ЭМП) воздействуют на коагуляционные и фибринолитические показатели крови, а также ткани сердечнососудистой системы. Эксперименты поставлены на 33 крысах весом 100—250 г. Их подвергали воздействию ЭМП УВЧ (40 мГц, 15 мин, Е=80 В/м) и статического электрического поля (15 мин, напряженность 330 В/см, направленной перпендикулярно поверхности Земли); часть животных находилась в экранированной металлической камере. Длительность экспериментов в каждой серии составляла 10 дней. После указанных процедур у животных пункцией сердца набирали кровь, стабилизировали оксалатом катрня и центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин. Плазму, бедную тромбоцитами, использовали для определения времени рекальцификации (Вег£егЬо1 и Г?ока), потребления протромбина (М. А. Котовщикова и 3. Д. Федорова), тромбинового времени (Э. Сирмаи) и фибрино-лнтической активности эуглобулинов (Ко\уаггук и Ви1ик). Эти исследования проводили с кровью интактных и экспериментальных животных, а также изучали влияние тканевых экстрактов на коагуляционные показатели плазмы. Тканевые экстракты приготовляли из передней стенки левого желудочка сердца и аорты. Для этого кусочки тканей тщательно отмывали от крови, высушивали обеззоленным фильтром, взвешивали на аналитических весах и растирали в фарфоровой ступке с физиологическим раствором. В дальнейшем субстрат разводили в 30 раз и при необходимости в 100, 1000 и 10 000 раз.
Анализ полученных результатов показывает, что все ткани обладают значительной тромбопластической активностью. Это проявляется в резком сокращении времени рекальцификации и повышении утилизации протромбина. Действие экстрактов проявляется даже при разведении в 10 000 раз. Наиболее высокий тромбопластический потенциал имеют экстракты аорты и 8 меньшей степени — вытяжки из сердца. Аналогичная закономерность наблюдается и в отношении антнгепариновой активности. Кроме того, все исследованные ткани стимулировали фибринолитическую способность плазмы, причем влияние экстрактов миокарда было более выражено.
Экспериментальные воздействия вызывали изменение коагуляцнонных показателей тканей и крови. УВЧ, электростатическое поле, а также экранирование приводили к ги-перкоагулемии. Особенно резко этот эффект проявлялся в крови животных, находившихся в электростатическом поле. Следует отметить, что в предварительных экспериментах использовалось поле напряженностью 800 В/см. Однако в этом случае гиперкоагулекия была выражена настолько, что не удавалось получить кровь из-за ее быстрого свертывания даже в присутствии антикоагулянта.
Лизирующая способность плазмы зависела от условий эксперимента. Электростатическое поле достоверно ингибировало скорость растворения сгустков, а УВЧ и экранирование практически не влияли на этот процесс.
УВЧ и электростатическое поле, а также экранирование животных подавляли тромбопластическую активность тканей аорты и сердца. Этот феномен проявлялся в удлинении времени рекальцификации и снижении утилизации протромбина. Следует заметить, что разведение экстрактов в 100, 1000 и 10 000 раз еще больше выявляет этот эффект.
Антигепариновгя активность тканей подавлялась у животных, находившихся в экране, а также в сердце крыс, облученных УВЧ. Электростатическое поле вызывало сокращение тромбинового времени под влиянием гомогенатов аорты; в остальных случаях этот показатель оставался без изменений.
Фибринолитическая способность экстрактов аорты и миокарда подавлялась при всех экспериментальных воздействиях. Характерно, что степень изменений определяется
