CC BY
28
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro Ha^0Ha№H0ro ymBepcurery BeTepHHapHOi MegnuUHH Ta 6i0TexH0H0riH iMeHi C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7142
ISSN 2413-5550 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
yflK 619:614.31:637.07
Контроль лшофшьних токсикан^в у молощ з використанням мiкробiологiчного експрес-методу
М.С. Х1мич, О.М. Горобей, В.З. Салата* khimichms@yandex.ua, gorobey@te.net.ua, salatavolod@ukr.net
Одеський державний аграрний унгверситет, вул. Пантелеймотвська, 13, м. Одеса, 65012, Украгна; Льв1вський нацюнальний унгверситет ветеринарногмедицини та бютехнологш 1мен1 С.З. Гжицького,
вул. Пекарська, 50, м. Льв1в, 79010, Украгна
Сьогодт в свтг iснуе чисельна юльюсть методгв аналгзу безпечностг харчовог продукцп (спектрометргя, фотометргя, хроматографгя тощо). Але в нашш крагт, мережа сnецiалiзованих лабораторш як були б в змозi забезпечити високояюс-ний i об'ективний аналiз харчовог продукцп, i доа дуже обмежена.
Також важливо пам 'ятати, що iснуючi хiмiко-аналiтичнi методи нажаль неспроможн дати вiдповiдь щодо загальног реакцп оргатзму рецитента на вплив до^джуваного об'екту, що пов'язано з деякими факторами: в до^джуваному об'ектi можуть мiститися токсиканти, вмкт яких тд час до^дження не передбачали, мало вивчет речовини, i головне, не враховуеться характер комбтованог дп токсикантiв. Саме зважаючи на ц недолжи i сьогодю лишаешься актуальним визначення токсичностi методом бютестування.
Метою наших до^джень було встановити можливiсть i ефективтсть застосування мiкробiологiчного експрес-методу з використанням тфузорп Colpoda steinii для визначення токсичностi молока збираного.
До^дження токсичностi проводились паралельно трьома методами: бюпробою на лабораторних тварин (бтих мишах ) i мiкробiологiчними з використанням в якостi тест-оргашзму тфузорт Tetrachimena piriformis i Colpoda steinii.
Проведею до^дження встановили, що даш щодо токсичностi молока збираного визначеног запропонованим способом, iдентичнi даним отриманим з використанням класичних методiв.
Встановлено, що за сильног токсичностi молока збираного результати до^дження при застосуваннi тфузорп C. steinii отримуемо вже за 3хв., а слабш токсичностi або нетоксичностi - за 1 год.
K.mnoei слова: харчова продукщя, молоко, яюсть, безпека, безпечтсть, токсичшсть, бютестування, експрес-метод, тест-об 'ект, тфузорп, Colpoda steinii.
Контроль липофильных токсикантов в молоке с использованием микробиологического экспресс-метода
М.С. Химич, А.М. Горобей, В.З. Салата khimichms@yandex.ua, gorobey@te.net.ua, salatavolod@ukr.net
Одесский государственный аграрный университет, ул. Пантелеймоновская, 13, г. Одесса, 65012, Украина Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З. Гжицкого,
ул. Пекарская, 50, г. Львов, 79010, Украина
Сегодня в мире существует многочисленная количество методов анализа безопасности пищевой продукции (спектрометрия, фотометрия, хроматография и т.д.). Но в нашей стране, сеть специализированных лабораторий которые были бы в состоянии обеспечить качественный и объективный анализ пищевой продукции, и до сих пор очень ограничено.
Citation:
Khimich, M.S., Gorobey, O.M., Salata, V.Z. (2016). Control lipophilic toxins in milk using microbiological express methods. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 18, 3(71), 186-189.
Также важно помнить, что существующие химико-аналитические методы сожалению не могут дать ответ по общей реакции организма реципиента на воздействие исследуемого объекта связано с некоторыми факторами: в исследуемом объекте могут содержаться токсиканты, содержание которых во время исследования не предполагали, мало изучены вещества, и главное, не учитывается характер комбинированного действия токсикантов. Именно учитывая эти недостатки и сегодня остается актуальным определение токсичности методом биотестирования.
Целью наших исследований было установить возможность и эффективность применения микробиологического экспресс-метода с использованием инфузории Colpoda steinii для определения токсичности молока.
Исследование токсичности проводились параллельно тремя методами: биопробы на лабораторных животных (белых мышах) и микробиологическим с использованием в качестве тест-организма инфузорий Tetrachimena piriformis и Colpoda steinii.
Проведенные исследования установили, что данные по токсичности молока сгущенного определенной предложенным способом, идентичны данным полученным с использованием классических методов.
Установлено, что при сильной токсичности молока результаты исследования при применении инфузории C. steinii получаем уже за 3 мин., а слабой токсичности или нетоксичности - по 1 ч.
Ключевые слова: пищевая продукция, молоко, качество, безопасность, безопасность, токсичность, биотестирования, экспресс-метод, тест-объект, инфузории, Colpoda steinii.
Control lipophilic toxins in milk using microbiological express methods
M.S. Khimich, O.M. Gorobey, V.Z. Salata khimichms@yandex.ua, gorobey@te.net.ua, salatavolod@ukr.net
Odessa State Agrarian University, Panteleimonovska Str., 3, Odessa 65012, Ukraine;
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyi,
Pekarska Str., 50, Lviv, 79010, Ukraine
In recent years, Ukraine is constantly increasing livestock production. But at the same time, in many modern industries, veterinary and sanitary control of food is on insufficient or non-existent. In this connection the trading network can get dangerous foods for consumers.
Today in the world there are numerous number of methods of analysis of food safety (spectrometry, photometry, chromatography, etc.). But in our country, a network of specialized laboratories which would be able to provide high-quality and objective analysis of the food is still very limited.
It is also important to remember that the current chemical-analytical methods unfortunately unable to answer the general reaction of the organism to influence the recipient of the object, which is associated with several factors: the test object may contain toxicants with content during the study not predicted poorly understood substances, and importantly, is not considered character combined action of toxicants. That despite these shortcomings and remains an important method of determining the toxicity bioassay.
The aim of our research was to establish the feasibility and effectiveness of the rapid microbiological method using ciliates Col-poda steinii to determine the toxicity of skimmed milk.
Toxicity studies were carried out in parallel by three methods: bioassay in laboratory animals (white mice) and microbiological using as a test organism ciliates Tetrachimena piriformis and Colpoda steinii.
The proposed method of using as a test organism ciliates Colpoda steinii, including the preparation of test culture ciliates Col-poda steinii, sampling investigational product, extracting samples of chemically pure acetone, filtering selected extract dilution leachate solution rod-Lozinski, introducing the filtrate into a test culture ciliates, temperature control resulting mixture at a temperature of +26 ... + 28 °C and determine the toxicity of the investigational product, observing the vital functions of ciliates during incubation.
The research found that data on the toxicity of skimmed milk a certain prescribed manner identical data obtained using classical methods.
Established that the strong toxicity of skimmed milk in the application of research results ciliates C. steinii get already at 3min. And weak toxicity or netoksychnosti - 1 hour.
Key words: food products, milk, quality, safety, toxicity, bioassay, express (rapid) method, test object, ciliates, Colpoda steini
Вступ
Одним з основних завдань ветеринарно! медицини е забезпечення якосп i безпечносп продукпв харчу-вання.
В останш роки в Укра!ш постшно збшьшуеться виробництво продукцп тваринництва. Але в той же час, на багатьох сучасних виробництвах, ветеринар-но-саштарний контроль харчово! продукцп знахо-диться на недостатньому рiвнi або взагалi ввдсутнш. В зв'язку з чим до торгово! мереж можуть потрапляти харчовi продукта небезпечш для споживача (Kasyan-chuk, 2000).
Сьогодш в свт юнуе чисельна шльшсть метхдав аналiзу безпечносп харчово! продукцп. Зокрема для визначення вмюту в харчових продуктах токсичносп використовують так надточш методи як спектромет-рiя, фотометрiя, хроматографiя тощо. Але в нашш кра!ш, не зважаючи на постшне реформування струк-тури служби ветеринарно! медицини, посилення ви-мог щодо безпечносп i якосп харчових продукпв та наближення !х контролю до европейських вимог, все ще лишаються недолши i недосконалють норматив-но-правово! бази з цих питань. Економiчний стан в якому перебувае кра!на, також не сприяе розширенню мереж спецiалiзованих лабораторш яш були б в змозi
забезпечити високояшсний i об'ективний анал1з харчово! продукцй' (Kasyanchuk, 2000; Dubinina et al., 2007).
Також важливо пам'ятати, що iснуючi хiмiко-аналiтичнi методи здатнi дати об'ективний результат при визначеш яшсного i кiлькiсного вмiсту в досль джуваному об'ектi окремих токсикантiв. Натомють, вони неспроможнi дати вiдповiдь щодо реакцiï оргаш-зму людини на вплив дослвджуваного об'екту, вцшо-му. Ця особливiсть пов'язана з тим, що в дослщжува-ному об'екп можуть мiститися токсиканти, вмiст яких тд час дослвдження не передбачали, або мало вивченi речовини. Крiм того, хiмiко-аналiтичнi методи не передбачають характер комбiнованоï дiï токси-кантiв, що вiдiграе важливу роль в загальному проявi токсичного ефекту (Pinigin, 1986; Manenko and Ivanova, 1988; Dubinina et al., 2007).
Зважаючи на зазначенi аспекти, i сьогодш вчеш-експерти вважають, що не можна повною мiрою ввд-мовитись ввд бiотестування. Адже саме метод бютес-тування з великою достовiрнiстю дозволяе визначити стутнь загальноï токсичностi дослiджуваного об'екту (Vinokhodov, 2007).
Сьогоднi iснуе чисельна шльшсть методiв бютес-тування на рiзних тест-обектах, але враховуючи бюе-тичш норми, зважаючи на меж1 чутливосп та час реакцiï, оптимальним тест-об'ектом е шфузори (Vinokhodov et al., 2006; Khimich, 2014).
Враховуючи вищевикладене метою наших досль джень було встановити можливiсть i ефективнiсть використання шфузори Colpoda steinii для визначення токсичносп молока збираного.
Матерiал i методи дослщжень
Дослiдженню пiдлягали зразки молока збираного. Дослвдження токсичностi проводились паралельно трьома методами - бюпроба на лабораторних тварин (бш мишi ) i мiкробiологiчнi методи з використанням в якостi тест-органiзму шфузорш Tetrachimena piriformis i Colpoda steinii.
Дослщження на бiлих мишах та шфузори Tetrachimena piriformis проводили вщповвдно до дшчих методик.
При дослщжеш з використанням iнфузорiï Colpoda steinii, за основу було взято «Споаб визначення токсичносп риби» (Kovbasenko et al., 2014).
Пiдготовка тест-культури шфузорш. У флакони iз культурою Colpoda steinii, заливали по 2 см3 пожи-вного середовища за 24 год до проведення аналiзу. Флакони закривали ватно-марлевими пробками та витримували в термостатi за температури +26...+28 °С. Безпосередньо перед використанням флакони витримували в добре освггленому примщеш протягом 10хв. i проводили контроль активносп ку-льтури.
Шдготовка зразка для анал1зу. Вщбраний зразок об'емом 10 см3, екстрагували хiмiчно чистим ацетоном який додавали в об'емi 10 см3, струшували протягом 20 хв. i фшьтрували екстракт крiзь паперовий фшьтр. Ввдбирали 0,5см3 ацетонового екстракту i
розбавляли розчином Лозина-Лозинського в об'емi 60
3
см .
Проведення анал1зу. Отриманий розчин ацетонового екстракту в об'емi 2 см3 вносили до подготовлено!' тест-культури шфузорш.
В якосп позитивного контролю використовували мжотоксин Т-2, який вводили в зразок молока з роз-рахунку 0,1мг/мл. В якосп негативних контролiв використовували два зразки: 1 - додавали 2 см3 сум^ ацетону i розчину Лозина-Лозинського у сшввщно-шеннi 1:6; 2 - 2 см3 дистильованоï води.
Закривали флакони ватно-марлевими пробками i термостатували при температурi +26...+28°С, де витримували протягом всього дослвду.
Через 3 хв. флакони виймали i дослвджували акти-вшсть колоди. У разi загибелi шфузорш у дослвдному, або негативних контрольних флаконах дослвд припи-няли. Якщо бiльшiсть iнфузорiй були живi продовжу-вали спостереження протягом 1 год.
Оцiнку ступеня токсичностi дослiдних зразшв проводили ввдповвдно до запропонованоï шкали (табл. 1).
Таблиця 1
Критерп оцiнювання токсичносп_
Стутнь токсичноста Показники
Токсично Загибель 100% колпод настае впро-довж 3хв
Слаботоксично Впродовж 1 год. загинуло менше 80% колпод
Нетоксично Впродовж 1 год. вс колподи зали-шаються рухливими та iнтенсивнiсть росту бшьше 90%
Результати та ïx обговорення
Проведет дослвдження встановили, що дат щодо токсичностi молока збираного визначеноï за-пропонованим мiкробiологiчним експрес-методом, з використанням в якосп тест-об'екту шфузори C. steinii, щентичш даним отриманим з використанням класичного i мшробюлопчного (з використанням iнфузорiï T. Piriformis) методiв ( табл. 2).
Встановлено, що за сильноï токсичностi молока збираного результати дослвдження при застосуванш iнфузорiï C. steinii отримуемо вже за 3хв., а слабiй токсичносп або нетоксичносп - за 1 год.
Висновки
1. Визначення токсичносп молока збираного мш-робюлопчним методом з використанням шфузори C. steinii в якосп тест-об'екту, дае результат щентичний результату отриманому при дослвджеш класичним методом на лабораторних тваринах i шкробюлопч-ним методом з використанням шфузори T. piriformis.
2. Застосування мшробюлопчного метода з використанням шфузори C. steinii в якосп тест-об'екту, скорочуе тривалють дослвдження на токсичнiсть до 1 години.
Трксичмсть мoлoкa збирaнoгo залежпр в1д мeтoду дocлiджeнь (n-5)
Taблuця 2
Зpaзкн
Тecт-oб'eктн
бiлi мишi
Tetrachimena piriformis
Colpoda steinii
3 хв.
1 гoд
Прзитивний кoнтpoль
++++
++++
++++
Heгaтнвннй кoнтpoль 1
Штативит кoнтpoль 2
Дocлiднi зpaзкн
++++
++++
++++
-+++
Пpuмimкa: «+» зaгнбeль мншeй, лiзic im
^oprn; «-» вiдcyтнicть зaгнбeлi мишeй i лiзicy iифyзopiй.
^pcm^usu noдaльшux дocлiджeнь. Пpeдcтaвлe-нi дaнi e частишю наших дocлiдiв щoдo мoжливocтi зacтocyвaния мiкpoбioлoгiчнoгo мeтoдy з викopиcтaн-ням iнфyзopiï C. steinii npH визнaчeнi шиpoкoгo cneK-тpy л^ф^них тoкcикaнтiв в пpoдyктax твapиннoгo noxo^ernEa
Бiблioгрaфiчнi пocилaння
Kasyanchuk, V.V. (2000). Suchasni mijnarodni vimogi shodo bezpeki kharchovikh produktiv. Veterinarna medicina Ukraini. 5, 18-19 (in Ukrainian). Dubinina, A.A., Malyk, L.P., Selyta, G.A. (2007). Toksichni rechovini u kharchovikh produktakh ta metodi ikh viznachennya. К.: Profesional (in Ukrainian).
Pinigin, M.A. (1986). O ponyatii «kharakter kom-binirovannogo deistviya» kak osnove gigienicheskoi ocenki. Gigiena i sanitariya. 1, 45-48 (in Russian). Manenko, A.K., Ivanova, O.P. (1988). Sravnitelnaya kharakteristika metodov matematicheskoy ocenki kha-raktera kombinirovannogo deicnviya dvukh s bolee povrejdayshikh khimiceskikh faktorov pri odnov-
remennom I posledovatelnom vvedenii v ostrich opi-takh. Gigiena i sanitariya. 11, 55-58 (in Russian).
Vinokhodov, D.O. (2007). Nauchnie osnovi biotestiro-vaniya s ispolzovaniem infuzoriy : avtoref. dis. na soiskanie uch. stepeni doc. biolog. nauk : spec. 03.00.23 «Biotekhnologiya». SPb (in Russian).
Vinokhodov, V.O., Vinokhodov, D.O., Polyakova, N.L. (2006). Noviy expres-metod opredeleniya toksichnos-ti myasoproduktiv. Praktik. 2, 26-31 (in Russian).
Khimich, M.S. (2014). Kontrol bezpechnosti ribi z vikoristannyam mikrobiologichnogo expres-metodu. Naukoviy visnik Lvivskogo nacionalnogo universitetu veterinarnoi medicini ta biotekhnologiy. Lviv. 16, 3(60), 418-423 (in Ukrainian).
Kovbasenko, V.M., Khimich, M.S., Naidich, O.V., Pchelinska, L.V., Baran, M.M. (2014). Pat. 96714, Ukraina, MPK6 G 01 N 33/02, C 12 Q 1/02, C 12 R 1/90 Sposib viznachennya toksichnosti ribi /- № u 201410274 ; zayav. 19.09.2014; opubl. 10.02.2015, Byl. №3 (in Ukrainian).
Cmammn nadiümna do peda^ii 7.10.2016
