CC BY
20
УДК 619:614.31:636.085
Х1мич М.С., к.вет.н. ([email protected]) ©
Одеський державный аграрный утверситет, м. Одеса, Украгна
КОНТРОЛЬ БЕЗПЕЧНОСТ1 РИБИ З ВИКОРИСТАННЯМ М1КРОБ1ОЛОГ1ЧНОГО ЕКСПРЕС-МЕТОДУ
В свт ¡снуе багато методик надточного анал1зу безпечност1 харчовог продукцп: атомно-адсорбцтний, фотометричний, спектрометричний, ргдинног хроматографа, тонкошаровог хроматографа, обернено-фазовог ВЕРХ та ¡нш1. Але сьогодт в Украгт, вкрай обмежена кглькгсть державних лабораторт ветеринарног медицини може забезпечити такий високояюсний аналгз.
Також, неможна забувати, що найсучастш1 х1м1ко-аналтичт методи здатт визначати яшсний i ктьтсний вм1ст окремих токсикант1в в дослгджуваному об 'ектi, проте неспроможш в повтй мiрi дати вiдповiдь щодо реакцп оргатзму тварини чи людини на дт до^джуваного об'екту. Це пов'язано з тим, що в продуктi можуть мютитись токсичш речовини, наявтсть яких при до^джет не передбачалась, мало вивчеш речовини або з результатом комбтованог дп юлькох токсичних речовин (речовини нетоксичт за iзольованог дп можуть викликати значний токсичний ефект у разi сумюного впливу).
Тому i сьогодт, одним з перспективних способiв виршення проблеми безпечностi продукцп тваринництва е використання бютестування. Найпростшим i найдоступшшим тест-об'ектом для бютестування, за рахунокряду властивостей, е iнфузорiя Colpoda steinii.
До^дженнями встановлено, що мiкробiологiчний експрес-метод визначення токсичностi риби з використанням тфузорп C. steinii за достовiрнiстю результатiв до^джень iдентичний класичному методу на лабораторних тваринах i мiкробiологiчному методу з використанням тфузорп T. piriformis, але скорочуе час отримання результатiв до 3-180 хв.
Ключовi слова: харчова продукщя, риба, яюсть, безпека, безпечтсть, токсичтсть, бютестування, експрес-метод, тест-об'ект, тфузорп, Colpoda steinii..
УДК 619:614.31:636.085
Химич М.С., к. вет. н., ([email protected])
Одесский государственный аграрный университет, г. Одесса, Украина
КОНТРОЛЬ БЕЗОПАСНОСТИ РЫБЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПРЕСС-МЕТОДА
В мире существует много методик сверхточного анализа безопасности пищевой продукции: атомно-адсорбционный, фотометрический, спектрометрический, жидкостной хроматографии, тонкослойной хроматографии, обратно-фазовой ВЭЖХ и другие. Но сегодня в Украине,
© XiMH4 М.С., 2014
418
крайне ограниченное количество государственных лабораторий ветеринарной медицины могут обеспечить такой высококачественный анализ.
Также, нельзя забывать, что современные химико-аналитические методы способны определять качественное и количественное содержание отдельных токсикантов в исследуемом объекте, однако не когут, в полной мере, дать ответ о реакции организма животного или человека на действие исследуемого объекта. Это связано с тем, что в продукте могут содержаться токсичные вещества, наличие которых при исследовании не предусматривали, мало изученные вещества, или с результатом комбинированного действия нескольких токсичных веществ (вещества нетоксичны по изолированного действия могут вызвать значительный токсический эффект в случае совместного воздействия).
В связи с этим, и сегодня одним из перспективных способов решения проблемы безопасности продукции животноводства является использование биотестирования. Самым простым и доступным тест-объектом для биотестирования, за счет ряда свойств, является инфузория Colpoda steinii.
Исследованиями установлено, что микробиологический экспресс-метод определения токсичности рыбы с использованием инфузории C. steinii за достоверностью результатов исследований идентичен классическому методу на лабораторных животных и микробиологическому методу с использованием инфузории T. piriformis, но сокращает время получения результатов в 3-180 мин.
Ключевые слова: пищевая продукция, рыба, качество, безопасность, токсичность, биотестирование, экспресс-метод, тест-объект, инфузории, Colpoda steinii.
UDC 619:614.31:636.085
Khimich M.S., candidate of veterinary sciences, ([email protected])
Odessa state agrarian university, Odessa, Ukraine
CONTROL OF SAFETY OF FISH WITH THE USE OF MICROBIOLOGICAL EXPRESS-METHOD.
In the world there are many methods ultraprecise analysis of food safety: atomic absorption, photometric, spectrometric, liquid chromatography, thin layer chromatography, reversed-phase HPLC, and others. But today in Ukraine, it is a limited number of state veterinary medicine laboratories can provide a high-quality analysis.
Also, one should not forget that the most advanced analytical methods are able to determine the qualitative and quantitative content of certain toxins in the test object, but can not fully answer for reaction of an animal or human effect on the studied object. This is due to the fact that the product may contain toxic substances whose presence in research is not predicted, poorly understood substance or the result of the combined action of several toxic substances (substances toxic for isolated actions may cause significant toxic effect in the case of joint influence).
One promising way to solve the problem of safety of animal products is the use of bioassay. The easiest and most affordable test object for bioassay, by number of properties are ciliates Colpoda steinii.
419
Research has established that rapid microbiological method for determining the toxicity of fish using infusoria C. steinii the reliability of research results is identical to the classical method in laboratory animals and the microbiological method using ciliates Tetrachimena piriformis, but reduces the time to obtain results for 3-180 min.
Key words: food products, fish, quality, safety, toxicity, bioassay, express (rapid) method, test object, ciliates, Colpoda steini
Вступ. Найактуальшшим завданням ветеринарно! медицини завжди було i лишаеться забезпечення якост i безпечност продукпв харчування. В сучасних умовах, коли з одного боку, в кра!ш кнуе велика кшькють малих приватних тдприемств, що виготовляють харчову продукцш тваринного походження, а з шшого боку, кра!на крокуе до европейсько! ствдружност i виробники мають змогу активно завойовувати европейський ринок, де контроль якостi продукци вщбуваеться згiдно системи НАССП, це завдання постае особливо гостро.
I за кордоном, i в нашш кра!ш iснуе багато методик надточного аналiзу безпечностi харчово! продукци: атомно-адсорбцiйний, фотометричний, спектрометричний, рщинно! хроматографа, тонкошарово! хроматографа, обернено-фазово! ВЕРХ та шшг Але зважаючи на недосконалкть нормативно1 бази i сучасний економiчний стан в кра!ш, вкрай обмежена кшьккть державних лабораторiй ветеринарно! медицини в змозi забезпечити високояккний аналiз [1,2].
Крiм того, необхщно пам'ятати - найсучаснiшi хiмiко-аналiтичнi методи здатш визначати якiсний i кшькюний вмiст окремих токсикантiв в дослщжуваному об'ектi, проте неспроможнi в повнш мiрi дати вiдповiдь щодо реакци органiзму тварини чи людини на дш дослiджуваного об'екту. Це пов'язано з тим, що в продукт можуть мктитись токсичнi речовини, наявшсть яких при дослiдженi не передбачалась, мало вивченi речовини або з результатом комбшовано! ди кiлькох токсичних речовин (речовини нетоксичш за iзольовано! ди можуть викликати значний токсичний ефект у разi сумiсного впливу) [3-5].
Беручи до уваги згадаш аспекти, i сьогоднi, не можна списувати з рахунюв бiотестування. Адже саме бютестування хоча i не дае нам шформаци щодо природи конкретного токсиканту, але з великою достовiрнiстю дозволяе визначити стутнь загально! токсичностi дослщжуваного об'екту [6].
До цього часу розроблено чисельну кшьккть рiзноманiтних методiв бiотестування, але зважаючи на межi чутливостi до токсикантiв, швидкiсть реагування та бюетичш норми найпростiшим i найдоступнiшим для бiотестування тест-об'ектом стають шфузори [7].
Використання iнфузорiй для визначення токсичност об'ектiв зовнiшнього середовища, зерна, комбiкормiв i продуктiв тваринного походження вщомо давно [8-11].
Враховуючи вищевикладене метою наших дослiджень було встановити можливкть i ефективнiсть використання шфузори Colpoda steinii для визначення токсичност риби та рибопродуктiв.
420
Матер1ал i методи. Дослщженню пщлягали зразки риби парног Дослщження токсичностi проводились паралельно трьома методами - метод лабораторних тварин (бш мишi ) i мжробюлопчш методи з використанням в якост тест-органiзму iнфузорiй Tetrachimena piriformis i Colpoda steinii.
Дослщження на бших мишах та iнфузорiï Tetrachimena piriformis проводили вщповщно до дшчих методик [12, 13].
При дослщжеш з використанням iнфузорiï Colpoda steinii, за основу було взято методичш рекомендаци (мiкробiологiчний експрес-метод) визначення токсичност продуктiв тваринництва i кормiв [14, 15].
Пщготовка культури Colpoda steinii. У флакони iз культурою Colpoda steinii, заливали по 2мл поживного середовища за 24год до проведення аналiзу. Флакони закривали ватно-марлевими пробками та витримували в термостатi за температурi +(26-28)°С. Пiсля цього флакони витримували в добре осв^леному примщеш протягом 10хв. Безпосередньо перед використанням проводили контроль активност культури.
Пщготовка зразюв риби. Вiдiбраний зразок масою 20 грамiв, гомогенiзували, екстрагували водою яку додавали в кшькосп 100 мл, струшували протягом 20 хв. i фшьтрували екстракт крiзь паперовий фшьтр.
Проведення аналiзу. Зразок фшьтрату та воду з колби, в об'eмi 2мл, вносимо до флакошв з активною культурою Colpoda steinii. Закриваемо флакони ватно-марлевими пробками i вмщуемо в термостат при температурi +(26+28)°С, де витримували протягом всього дослщу.
Через 3 хв. флакони виймали i дослiджували активнiсть колоди. У разi загибелi iнфузорiй у дослщному флаконi дослiд припиняли. Якщо бiльшiсть iнфузорiй були живi продовжували спостереження протягом 3 год.
Ощнку ступеня токсичностi дослiдних зразкiв проводили вщповщно до запропонованоï шкали (табл. 1)
Таблиця 1.
Стутнь токсичносп Показники
Сильно токсично Загибель 100 % колпод настае протягом 3хв
Токсично Загибель 100 % колпод настае протягом 10хв
Слаботоксично Протягом 3 год. загинуло менше 80% колпод
Нетоксично Протягом 3 год. ва колподи залишаються рухливими та штенсившсть росту бшьше 90%
В якост позитивного контролю використовували мiкотоксин Т-2, який вводили в зразок риби з розрахунку 1мг/кг. В якост негативного контролю використовували зразок в який додавали аналопчну кiлькiсть дистильовано! води.
Результати дослщження. Проведенi дослiдження встановили, що токсичшсть риби парно! визначена запропонованим мжробюлопчним експрес-методом, з використанням в якост тест-об'екту шфузори С. steinii, iдентична токсичностi визначено! класичним методом i мiкробiологiчним методом з використанням шфузори Т. piriformis( табл.2).
421
Встановлено, що за сильно! токсичност риби парно! результати дослщження при застосуванш шфузори C. steinii отримуемо вже за 3хв.,
токсичностi - за10хв., слабш токсичностi - за 1-3 год.
Таблиця 2
_Токсичшсть риби парно! залежно вiд методу дослщжень (n-5)_
Зразки Тест-об'екти
Бш миш1 Tetrachimena piriformis Colpoda steinii
3 хв. 10 хв. 1 год. 3 год.
Позитивний контроль +++++ +++++ +++++
Негативний контроль
Досладт зразки
—+ —+ —+ —++
—+
—++ —+ —++ +++++
—++
-++++
Примггка: «+» пад1ж мишей, л1з1с шфузорш;
«-» вщсутшсть падежу мишей i л1з1су шфузорш. Висновки.
1. Визначення токсичностi риби та рибопродукпв мiкробiологiчним методом з використанням шфузори C. steinii в якост тест-об'екту, дае результат щентичний результату отриманому при дослщжеш класичним методом на лабораторних тваринах i мiкробiологiчним з використанням iнфузорi! T. piriformis.
2. Застосування мжробюлопчного метода з використанням шфузори C. steinii в якост тест-об'екту, скорочуе тривалють дослщження на токсичшсть до 3-180 хв.
Перспективи подальших дослiджень. Виходячи з отриманих результат дослiджень, можна стверджувати щодо перспективи подальших дослдав в цьому напрямку. Зокрема нами проводяться подальшi дослiди щодо можливост застосування методу з використанням шфузори C. steinii при визначеш токсичност бiльш широкого спектру дослiджуваних продукив та щодо визначення спектру i кiлькостi токсикантiв на якi шфузори C. steinii реагуватиме.
Л^ература
1. Ковбасенко В. М. Про удосконалення ветеринарно-санггарного контролю якостi i безпеки кормiв для непродуктивних тварин / В. М. Ковбасенко, М. С. Хiмич // Аграрний вкник Причорномор'я : зб. наук. праць Одеського ДАУ. - Одеса, 2004. - Вип. 25. - С. 32-36. - (Ветеринарш науки).
2. Виноходов В О , Виноходов Д О , Поляков Н JI Новый экспресс-метод определения токсичности м'ясопродукив / В. О. Виноходов, Д. О. Виноходов, Н. Л. Поляков // Практик - 2006. - №2 - С. 26-31.
3. Конюхов А. Ф. Определение пестицидов в комбикормах / А. Ф. Конюхов //Ветеринария. - 1974. - № 6. - С. 101-102.
422
4. Маненко А. К. Сравнительная характеристика методов математической оценки характера комбинированного действия двух и более повреждающих химических факторов при одновременном и последовательном введении в острых опытах / А. К. Маненко, О. П. Иванова //Гигиена и санитария. - 1988. -№ 11.-С. 55-58.
5. Пинигин М. А. О понятии "характер комбинированного действия" как основе гигиенической оценки / М. А. Пинигин // Гигиена и санитария. -1986. - №1.-С. 45-48.
6. Хоружая Т. А. Методы оценки экологической опасности / Т. А. Хоруджая. - М.:"Экспертное бюро-М", 1998. - 224 с.
7. Этлин С. Н. Вопросы теории и практики применения простейших организмов в эколого-токсикологических исследованиях / С. Н. Этлин, Г. М. Лахонина, А. Г. Мадоян, А. Ю. Месронян //Экология морских и пресноводных простейших: Тезисы докладов II-го всесоюзного симпозиума протозоологов (Ярославль, 12-15 сентября 1989 г.) - Ярославль, 1989. - С. 79.
8. Виноходов Д. О. Научные основы биотестирования с использованием инфузорий : автореф. дис. на соискание уч. степени док. биолог. наук : спец. 03.00.23 «Биотехнология» / Д. О. Виноходов. - СПб., 2007. - 30 с.
9. Пат.2039825, Российская Федерация, МКИ6 С 12 О 1/02, G 01 N 33/18 Способ определения токсичности объектов внешней среды / Виноходов Д. О., Виноходов В. О. - М НПО "Поиск" Роспатента, 1995. - 6 с.
10. Пат. 32482, Украша, МПК7 G 01 N 33/02, C 12 Q 1/02 Споаб визначення токсичносп кормiв для непродуктивних тварин / Ковбасенко В. М., Розум е. Ю., Хiмич М. С., Стрига А. М., Онщенко О. В. - № u 2008 03 013 ; заявл. 11.03.08; опубл. 12.05.08, Бюл. №9.
11. Хiмич М. С. Контроль безпеки кормiв тваринного походження для непродуктивних тварин з використанням мжробюлопчного експрес-метода / М. С. Хiмич // Аграрний вкник Причорномор'я : зб. наук. праць Одеського ДАУ. -Одеса, 2005. - Вип. 30. - С. 124-128. - (Ветеринарш науки).
12. Методичш рекомендаци токсико-бiологiчноï оцшки харчових продукив. - Кшв, 1987. - 20с.
13. Шаблий В.Я. и др. Методические рекомендации по использованию инфузории Тетрахимена пириформис для токсико-биологической оценки пищевых продуктов. - Киев, 1983. - 14с.
14. Зерно фуражне, продукти його переробки, комбжорми. Методи визначення токсичности Державний стандарт Украши: ДСТУ 3570-97 - Кшв: Держстандарт Украши, 1999. - 15 с.
15. Методичш рекомендаци (мжробюлопчний експрес-метод) визначення продукив тваринництва i кормiв. Пщ редакщею проф. Ковбасенко В.М. Одеса, 2003 - 18с.
Рецензент - к.вет.н., доцент Ынкевич В.Я.
423
