CC BY
13Мир вирусных гепатитов 2 (2009}
TTV обнаруживали у 7.5% (29/388) пациентов с IICV. Устойчивый вирусологический otsct (УВО) наблюдали у 76 8% (146/190) больных с моноинфекцией HCV и у 73.5% (50/68) - пациентов с коинфекцией HCV и GBV-C или TTV. Также оценивали в.гияние антивирусной терапии на реплик ацпю GBV-C и TTV. До начала герапии РНК GBV-C и ДНК 1TV выявляли у 18.9% и 12.5% пациентов; во время терапии IF!M-a - у 4% и 3 1%; по окончании терапии - у 18 6% и 6.4% соответственно. V 11 из 44 пациентов с коинфекци-ей HCV/GBV-C, ответивших на терапию ХГС, ГНК CBV-C снижалась до не выявляемого уровня на 12 неделе, однако репликация. GBV-C восстанавливалась по окончании тергпии IFN-a. Заключение. Частота выявления коинфекции HCV/GBV-C среди пациентов с ХГС составила 16.8%, HCY/TTV - 7.5%. Было отмечено снижение вирусной нагрузки GBV-C до неопределяемого уровня во время терапии IFN-a с последующей реактивацией репликации данного LHpvca по ее завершении. Частота достижения УВО была сходной среди пациентов с моноилфекциех! i ICY и пациентов с коинфекци-ей HCV и GBV-C или TTV
28. Конфирматорный тест для подтверждения специфичности выявления антител класса IgM к вирусу гепатита А методом иммуноферментного анализа
В.Г. Гудков, A.C. Вкринскчя Научно-исследовательской институт эпидемиологии и микробиологии, г. Muricn, иелорусь
Как известно, определение IgM анти-ВГА методом МФА считается «золотым стандартом» диагностики вирусного гепатита А (ГА) и широко используется с этой целью во всем мире. Известно также, что некоторые образцы исследуемых сывсроток крози дают неспецифические положт-тс:гыгые результаты исследований при выявлении IgM-имму ноглобулинов, в том числе против ГА. Это отчасти касается сывороток кроьи беременных женщин и, особенно проб, содержащих так называемый ревматоидный фактор ÍRF). Считается, что он представляет собой антитела к некоторым антигенным участкам IgG человека v. определяется у 70-80% больных ревматоидным артоитсм, с раз^шчной частотой встречается при других аутоиммунных заболеваниях и у 1-3% здоровых людей.
Тест-система ГЕПА-АТ-М. Ранее в Белорусском НИИЭМ нами была разработана иммуноферментная тест-система для определения антител класса IgM к вирусу гепатита А (ГЕПА-АТ-М). В тест-системе используются афинно очищенные антитела против тяжелых цепей иммуноглобулинов М человека, инак-гивированныи культуральныи антиген вируса, противовирусный копъюгат, а также метод захвата IgM-антитсл из исследуемых образцов сывороток крови или слоны. Независимые приемочные испытания с wciiojгьзованием зашифрованных проб показали, что по своей диагностической эффективности этот Арепарат полностью соответствовал аналогичной тест-системе «An enzyme-lirked immunosorbent assay for the detection of IgM antibody to hepatitis A virus in serum and plasma (IIAV IgM)» производства SANOFI Pasteur (Франция) и значительно превосходил аналогичный препарат «Тест-система имму^офермент-ная для выявления антител класса IgM к вирусу гепатита А на основе синтетических пептидов» ( ИФА-АНТИ-ВГА-М-СП) производства НПО «Диагностические системы» (РФ). Тест-система ГЕПА-АТ-М получила положительные отзывы в процессе практ.гческого использсаания в Беларуси, в том числе при выявлении больных ГА среди контактных лиц в очагах этой инфекции. Однако, в процессе многолетнего использования этого препарата было отмечено некоторое количество случаев расхождетшй результатов лабораторных исследований с клиническим диагнозом - выявление IgM анти-ВГА у нескольких беременных женщин и пациентов с RF не подтверждалось клиническим диагнозом текущего или перенесенного ГА в 7лобои форме. Вместе с тем, правильная постановка диагноза имеет большое значение для таких пациентов. Это послужило основаттием дл? разработки конфкрматорного теста, предназначенного для подтверждения специфичности положительных результатов определения IgM анти-ВГА методом ИФА.
Конфирматорный тест разрабатывался нами для использования его вместе с тест-системой ГЕПА-АТ-М с учетом ее конструктивных особенностей. Принцип геста заюпочается в создании специфической конкуренции с антивирусным кочъюгатом и олокирозании антигена вируса гепатита А так называемым конфирматорпым реагентом (КфР), содержащем гетерологичные противовирусные антитела в высоком титре. Контрольный реагент (KP) представляет собой сыворотку крови того же вида животных, что и КфР, но без антител к вирусу гепатит? А. Суть действия конфирматорного теста состоит в спедующем. Взаимодействие внесенного в конъюгат КфР с антигеном вируса гепатита А приводит к иммуноспеци-фическому блокированию этого антигена для энти-ВГА коньюгата, что проявляется в снижении оптической плотности (ОЦ) проб, содержащих TgM анти-ВГА, в 2 раза и Солее по сравнению с KP, который не конкурирует с противоьирусным конъюгатом и не блокирует вирусныи антиген. Снижение ОП в 2 раза 26
Мир вирусных гепатитов 2 (2009)
или более не происходит также в пробах с добавлением КфР при отсутствии в этих пробах IgM-антител к вирусу гепатита А.
Результаты исследований. Г 1иже приводятся типичные результаты проведения копфирматорного теста с первично положительными (прямая реакция) на выявление IgM энти-ВГА пробами сывороток крови, взятых от больного ГА (Nal) и ревматоидным артритом í№2). Так, в прямой реакции проба Nal имела показатель ОП - 2031 o.e., a Na2 - 1744 o.e. При этом OK тест-системы имел значение 0,022 o.e., a ITK -2481о.е. Значение С at-off составляло U,200 o.e. Таким образом, сбе пробы были че^ко положительными в грямои реакции. Результаты копфирматорного теста выглядели следующим образом. Б лунках с KP значения Oil составляли: 1957 o.e. и 1652 o.e., в лунках с КфР - 0,С38 o.e. и 1616 o.e., кратность ОП KP к ОП КфР - 51,5 раза и 1,02 раза для проб Nal и Ne2 соответственно. Таким образом, по результатам постановки копфирматорного теста с первично положительными пробами Nsl и №2 специфичность положительного результата подтверждена для пробы Nal. Результат определения IgM анти-BI А в пробе Na2 считается отрицательным. Результаты этих исследований полно пью соответствовали к. паническим данным.
Заключение, тест-пабор конфирматорный для подтверждения специфичности выявления антител класса IgM к вирусу гепа~ита А методом иммуноферментного анализа (К0НФГЕ1Ъ4-А Г-М) по Ту BY 100558032.144-2006 производится в Республике Беларусь и имеет позитивные отзывычютребителеи. Использованный Ч1ри разработке этого набора подход, по нашему мнению, может быть также успешно применентфи выявлении IgM с другой антигенной специфичностью.
29 Современное состояние и проблемы эпидемиологии гелатитэ С
в Украине
А-Л. Гурггль, В.Ф. Мариевский.Т.А. Сергееза, В.Р. Шагинян ГУ «Институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л.В Грсмашевского АМН Украины», г. Киев, Украина
Официальная регистрация заболеваемости 1епатигом С (ГС), преимущественно клинически выражен ными желтушными формами острого инфекционного процесса, в Украине осуществляется с 2003 года. Согласно официальным статистическим данным, за 5 лет заболеваемость ГС в неуклонно снижается - от 2,8 случаев на 1СС тыс. населен-.1Я в 2003 г. до 1,9 в 2007 г. (средний темп снижения - 6,73%). При этом в материалах оф; тиалъной статистики, как правило, не отражены случаи безжелтушных, субклинических форм острого ГС, а также больные пре:тмущественно латентными формами хронического гепатита (ХГ), а тем более «вирусоносительства», цирроза, рака печени и многочисленных внепеченочных поражений, этиологически связанных с вирусом ГС (HCV). Это создает обманчивое впечатление о видимом благополучии в отношении ГС в Украине, искажает впидемичеокую ситуацию, поскольку показатели заболеваемости острыми формами ГС (а есть все основания полагать, что даже их чисто, по крайней мере, в 5-6 раз выше) отражает лишь незначитечьную ее часть. Основу же истинного эпидемического процесса составляет скрытый компонент, формирующийся, главным образом, за счет значительного массива больных ХГС, количество которых многократно превышает число чйц с острой инфекцией', поскольку хронизация наблюдается в 50-80% случаев, и именно ХГС является основной клиническои формог"1 этой болезни. Хронические вирусные гепатиты в Украине до сих пор не регистрируются, однако в материалах статистики учитываются случаи ХГ неустановленной этиологии, показатели заболеваемости ко горыми оастут из года в год. Так, за пятилетний период (2003-2007 гг.) первичная заболеваемость неве-рифицированными ХГ выросла с 58,5 до 7С,3 случаев на 100 тыс. населения, а их распространенность увеличилась с 570,8 до 709.2 случаев. Пс современным представлениям, около 80% ХГ неустановленной этиологии обусловлены вирусами парентеральных гепатитов и, в свою очередь, 6U-64 % из них связаны с HC.V. Если экстраполировать материалы официальной регистрации ХГ в Украине в 2С07 г. с учетом указанных пропорции, то получится, что примерно 158-169 тыс. граждан хронически инфицированы HCV (интенсивный показатеш 340-360 на 100 тыс.), а первичная забочеваемость ХГС в 2U07 г. была на уровне 33-36 стучаев на 1UC гыс. населения. Представленные данные свидетельствуют о широком распростри неге-ги хронических форм инфекционного пропесса ГС, которые в бо;1ьшинстве случаев остаются нераспознанными.
Для изучения ис! инной интенсивности эпидемического процесса ГС было проведено сероэпидемиоло гическое обследование различных групп населения на маркеры иьфипирования HCV - антитела к вирусу (анти-HCVY Анализ результатов обследования доноров крови и беременных, которых обычно считают группами, отражающими взрослое здоровое население, свидетельствует о том, что среди них на протяжении последних 5 отчетных лет (2003-2007 т.) частота определения анти-lICV в динамике прак-
