КОМПЛЕКСНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ БЕЛКА ЛИЧИНКИ HERMETIA ILLUCENS Текст научной статьи по специальности «Животноводство и молочное дело»

Для корреспонденции

Тышко Надежда Валерьевна - доктор медицинских наук,

заведующий лабораторией оценки безопасности

биотехнологий и новых источников пищи

ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»

Адрес: 109240, Российская Федерация, г. Москва,

Устьинский проезд, д.2/14

Тел: 8 (495) 698-53-64

E-mail: [email protected]

https://orcid.org/0000-0002-8532-5327

Тышко Н.В., Жминченко В.М. , Никитин Н.С., Требух М.Д., Шестакова С.И., Пашорина В.А., Садыкова Э.О.

Комплексные исследования биологической ценности белка личинки Hermetia illucens

The comprehensive studies of Hermetia illucens larvae protein's biological value

Tyshko N.V., Zhminchenko V.M

Nikitin N.S., Trebukh M.D., Shestakova S.I., Pashorina V.A., Sadykova E.O.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи, 109240, г. Москва, Российская Федерация

Federal Research Centre of Nutrition, Biotechnology and Food Safety, 109240, Moscow, Russian Federation

Высокое содержание белка в биомассе насекомых позволяет отнести данный продукт к весьма перспективным источникам белка, сопоставимым по пищевой и биологической ценности с продуктами животного происхождения. Несмотря на длительную историю безопасного использования, в ряде стран насекомые относятся к пищевой продукции нового вида, безопасность которой должна быть доказана до выхода на продовольственный рынок. Многолетний российский опыт в области исследований новой продукции позволяет выделить критически значимые этапы, среди которых наряду с токсикологическими и аллер-гологическими тестами важное место занимает определение биологической ценности белка, входящего в состав пищевой продукции нового вида. Заключение о биологической ценности белка формируется на основании комплексного использования химического и биологического методов, суть которых сводится к изучению азотистого баланса в растущем организме (биологический метод) и расчету аминокислотного скора (химический метод).

Цель исследования - комплексная оценка биологической ценности белка биомассы личинок черной львинки (ИвттвИа Шпсвпз) биологическим и химическим методами.

Материал и методы. Биологические исследования, основанные на измерении степени ретенции азота пищи и оценке эффективности его утилизации для поддержания азотистого баланса, проведены на 28 растущих (в период

Финансирование. Научно-исследовательская работа по подготовке рукописи проведена при финансировании Российского научного фонда (проект № 20-16-00083).

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Для цитирования: Тышко Н.В., Жминченко В.М., Никитин Н.С., Требух М.Д., Шестакова С.И., Пашорина В.А., Садыкова Э.О. Комплексные исследования биологической ценности белка личинки Hermetia illucens // Вопросы питания. 2021. Т. 90, № 5. С. 49-58. DOI: https://doi. org/10.33029/0042-8833-2021-90-5-49-58

Статья поступила в редакцию 10.12.2020. Принята в печать 01.09.2021.

Funding. The research was funded by the Russian Science Foundation (project № 20-16-00083). Conflict of interest. The authors have no conflict of interest to declare.

For citation: Tyshko N.V., Zhminchenko V.M., Nikitin N.S., Trebukh M.D., Shestakova S.I., Pashorina V.A., Sadykova E.O. The comprehensive studies of Hermetia illucens larvae protein's biological value. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2021; 90 (5): 49-58. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2021-90-5-49-58 (in Russian) Received 10.12.2021. Accepted 01.09.2021.

25-50-го дней жизни) крысах-самцах стока Вистар, с исходной массой тела ~65,5±1,2 г. Крысы контрольной группы (n=14) получали полусинтетический казеиновый рацион, содержание белка в котором составляло ~12% по калорийности, опытная группа (n=14) - рацион с включением эквивалентного количества белка H. illucens. Замену ингредиентов рациона проводили с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности и изоазотистости (по массовой доле общего азота). Биомасса H. illucens и казеин в группах «опыт» и «контроль», соответственно, являлись основными значимыми источниками белка в рационе животных. В ходе эксперимента проводили измерение массы тела, оценку поедаемости корма, экскреции азота с калом и мочой. О биологической ценности и усвояемости белка судили по коэффициентам эффективности белка и чистой эффективности белка, истинной усвояемости белка, истинной величине биологической ценности белка, истинной чистой утилизации белка. Химические исследования включали изучение аминокислотного состава белка биомассы H. illucens и расчет аминокислотного скора с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот (DIAAS).

Результаты. Общее состояние животных обеих групп в течение всего эксперимента было удовлетворительным, еженедельный прирост массы тела крыс соответствовал уровню прироста, характерному для крыс стока Вистар, межгрупповые различия не выявлены. Несмотря на то что по ряду показателей животные опытной группы отличались от контрольных [отмечено снижение коэффициента чистой эффективности белка (на 5%, p>0,05), истинной усвояемости белка (на 11%, p<0,05), истинной чистой утилизации белка (на 13%, p<0,05), вызванное увеличением экскреции азота с мочой (на 8%, p>0,05) и калом (на 186%, p<0,05), при равном количестве потребленного азота], скорость роста крыс и степень ретенции азота в организме свидетельствует о сравнительно высокой биологической ценности белка насекомых. Согласно результатам оценки аминокислотного скора с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот, белок H. illucens характеризуется высоким содержанием гистидина, треонина, валина, изолейцина и лейцина (DIAAS=100 и более), а также является источником серосодержащих аминокислот - метионин и цистеин (DIAAS=86) и лизина (DIAAS=97).

Заключение. Комплексные исследования биологической ценности белка личинки черной львинки продемонстрировали высокое содержание белка в биомассе личинки, его сбалансированный аминокислотный состав и высокую биологическую ценность, что позволяет рассматривать Hermetia illucens в качестве потенциального источника полноценного пищевого белка.

Ключевые слова: пищевая продукция нового вида, альтернативные источники пищевого белка, биомасса насекомых, биологическая ценность белка, черная львинка, Hermetia illucens

A high protein content in the insect biomass allows to classify this product as a very promising source of protein, comparable in nutritional and biological value with proteins of animal origin. Despite a long history of safe use, in some countries insects are considered a new type of food which safety must be proven before entering the food market. The long-term Russian experience in novel food's research allows to identify the crucial stages, among which, along with toxicological and allergological tests, the protein's biological value determination takes an important place. The conclusion about the biological value of protein is formed on the basis of integrated use of chemical and biological methods, which gist comes down to the study of the nitrogen balance in the growing organism (biological method) and the calculation of the amino acid score (chemical method).

The aim of the research was the comprehensive assessment of Black soldier fly (Hermetia illucens) larvae protein's biological value using chemical and biological methods.

Material and methods. Biological studies based on measuring of net protein ratio/net protein utilization were performed on 28 growing (between 25-50 days of life) male Wistar rats, with an initial body weight of ~65.5±1.2 g. Rats in the control group (n=14) received a semi-synthetic casein diet with a protein content of ~12% in calories, the test group (n=14) received a diet including an equivalent amount of H. illucens protein. The diet's ingredients were replaced with the consideration of the proteins, fats, and carbohydrates content in the included product following the principle of isocaloricity and isonitrogenicity (by mass fraction of total nitrogen). H. illucens biomass and casein in the test and control groups, respectively, were the main significant sources of nitrogen in the diet. Body weight, feed intake, and fecal and urine nitrogen losses were measured during the experiment. The biological value and digestibility of protein were judged by coefficients of protein efficiency ratio, net protein ratio, true protein digestibility, true protein biological value, true net protein utilization. Chemical studies included studies of the amino acid composition of H. illucens biomass protein and calculation of the digestible indispensable amino acid score (DIAAS).

Results. The general condition of animals of the both groups during the whole experiment was satisfactory, the weekly body weight increase corresponded to the level of growth typical for Wistar rats, intergroup differences were not detected. Despite the fact that in a number of indicators the test group animals differed from the control [there were noted a decrease of the net protein ratio (by 5%, p>0.05), true protein digestibility (by 11%, p<0.05), netprotein utilization (by 13%, p<0.05), caused by increased excretion of nitrogen with urine (by 8%, p>0.05) and feces (by 186%, p<0.05), with the same amount of nitrogen intake], the test rats' growth rate and the nitrogen's retention degree indicate a relatively high biological value of insect protein. According to the DIAAS, H. illucens protein is characterized by high content of histidine, threonine, valine, isoleucine and leucine (DIAAS=100 and more), and is also a source of sulfur-containing amino acids - methionine and cysteine (DIAAS=86) and lysine (DIAAS=97).

Conclusion. The comprehensive studies of Hermetia illucens larvae protein's biological value demonstrated a high protein content, its balanced amino acid composition and high biological value, which allows to consider Hermetia illucens as a potential source of complete dietary protein.

Keywords: novel food, alternative sources of protein, insect biomass, biological value of protein, Black soldier fly, Hermetia illucens

Высокое содержание белка в биомассе насекомых, составляющее, по разным оценкам, 13-80% в расчете на сухое вещество, позволяет их отнести к весьма перспективным источникам белка, сопоставимым

по пищевой и биологической ценности с продуктами животного происхождения [1-4]. По данным Продовольственной и сельскохозяйственной организации (Food and Agriculture Organization, FAO) и Всемирной орга-

низации здравоохранения (World Health Organization, WHO), самыми востребованными в питании являются съедобные насекомые отряда жесткокрылых (31%), чешуекрылых (18%), перепончатокрылых (14%), прямокрылых (13%) и т.д. [5]. Несмотря на длительную историю безопасного использования, в целом ряде стран, в том числе в России, насекомые относятся к пищевой продукции нового вида, безопасность которой должна быть доказана до выхода на продовольственный рынок [6-9]. Многолетний российский опыт в области исследований новой продукции позволяет выделить критически значимые этапы, среди которых наряду с токсикологическими и аллергологическими тестами важное место занимает определение биологической ценности и усвояемости белка, входящего в состав пищевой продукции нового вида. Заключение о биологической ценности источника белка формируется на основании комплексного использования химического и биологического методов, суть которых сводится к изучению азотистого баланса в растущем организме (биологический метод) и расчету аминокислотного скора (химический метод).

Биологический метод основан на измерении степени ретенции азота и оценке эффективности его утилизации для поддержания азотистого баланса - в эксперименте in vivo. Традиционный дизайн эксперимента включает, во-первых, использование пищевого белка животного происхождения (белок куриного яйца, казеин и др.) в качестве стандарта; во-вторых, применение сравнительно низкого уровня белка в рационах, не превышаю-

щего 12% по калорийности, для наиболее однозначного проявления анаболических качеств изучаемого белка [10, 11].

Химический метод основан на изучении аминокислотного состава, необходимого для оценки способности белка удовлетворять потребности организма в незаменимых аминокислотах. Показателем качества белка, широко используемым в мировой практике, является аминокислотный скор, величина которого определяется количеством незаменимых аминокислот, их соотношением и биологической доступностью. Методика определения аминокислотного скора и его интерпретация за последнее время претерпели целый ряд существенных изменений: широкое распространение получили рекомендованные экспертами FAO/WHO [12] аминокислотный скор с поправкой на усвояемость белка (Protein digestibility corrected amino acid score, PDCAAS) и аминокислотный скор с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот (Digestible indispensable amino acid score, DIAAS). В отличие от PDCAAS, основанном на усвояемости сырого протеина в пищеварительном тракте, DIAAS более точный, поскольку базируется на истинной илеальной (от лат. Ileum - подвздошная кишка) усвояемости каждой из незаменимых аминокислот, являющейся в высшей степени достоверным критерием их биодоступности [12].

В данной статье представлены результаты комплексных исследований биологической ценности белка биомассы личинок Hermetia illucens.

Таблица 1. Состав, содержание пищевых веществ и энергетическая ценность базового полусинтетического казеинового рациона (контрольная группа)

Table 1. Composition, nutrient content and energy value of basic semi-synthetic casein diet (control group)

Ингредиент Ingredient Количество,г Amount, g Содержание I Nutrient content Энергетическая ценность (калорийность) Energy value (calories)

белок, г protein, g жиры, г fats, g усвояемые углеводы, г available carbohydrates, g

ккал / kcal %

Казеин / Casein 12,3 10,3 0,18 - 43,0 11,8

Крахмал маисовый Maize starch 7G 0,70 - 60,6 245 67,4

Масло подсолнечное нерафинированное Unrefined sunflower oil 5,4 - 5,4 - 48,9 13,4

Лярд/Lard 2,4 - 2,4 - 21,7 6,0

Микрокристаллическая целлюлоза Microcrystalline cellulose 5,0 - - - - -

Солевая смесь1 / Salt mixture1 3,5 - - - - -

Смесь водорастворимых витаминов1 Water-soluble vitamin mixture1 1,0 - - 1,0 4,0 1,1

Смесь жирорастворимых витаминов1 Fat-soluble vitamin mixture1 0,10 - 0,10 - 0,90 0,25

L-цистеин / L-cysteine 0,20 - - - - -

Холин / Choline 0,25 - - - - -

Трет-бутилгидрохинон Tert-butylhydroquinone 0,001 - - - - -

Итого / Total 1GG 11,0 8,1 61,6 364 100

П р и м е ч а н и е. Здесь и в табл. 2:1 - составы солевой и витаминных смесей приведены в статье [13]. N o t e. Here and in table 2:1 - compositions of salt and vitamin mixtures are given in the article [13].

Таблица 2. Состав, содержание пищевых веществ и энергетическая ценность полусинтетического рациона с включением сухой биомассы личинок Hermetia illucens (опытная группа)

Table 2. Composition, nutrient content and energy value of semi-synthetic diet including Hermetia illucens larvae dry biomass (test group)

Ингредиент Ingredient Количество, г Amount, g Содержание / Nutrient content Энергетическая ценность (калорийность) Energy value (calories)

белок, г protein, g жиры, г fats, g усвояемые углеводы, г available carbohydrates, g

ккал / kcal %

Сухая биомасса личинок Hermetia illucens (частично обезжиренная) Hermetia illucens larvae dry biomass (low fat) 18,0 10,2 2,0 1,7 65,2 18,2

Крахмал маисовый / Maize starch 67,0 0,67 - 58,0 235 65,5

Жир личинок Hermetia illucens Hermetia illucens larvae fat 5,9 - 5,9 - 53,4 14,9

Микрокристаллическая целлюлоза Microcrystalline cellulose 4,0 - - - - -

Солевая смесь1 / Salt mixture1 3,5 - - - - -

Смесь водорастворимых витаминов1 Water-soluble vitamin mixture1 1,0 - - 1,0 4,0 1,1

Смесь жирорастворимых витаминов1 Fat-soluble vitamin mixture1 0,10 - 0,10 - 0,90 0,25

L-цистеин / L-cysteine 0,20 - - - - -

Холин / Choline 0,25 - - - - -

Трет-бутилгидрохинон / Tert-butylhydroquinone 0,001 - - - - -

Итого / Total 100 10,8 8,0 60,7 358 100

Материал и методы

Материалом для исследований являлась сухая измельченная частично обезжиренная биомасса личинок черной львинки (Hermetia illucens), полученная и переработанная в экспериментальных условиях (далее - биомасса личинок H. illucens). Пищевая ценность биомассы личинок характеризовалась содержанием 57% белка, 11% жира, 10% усвояемых углеводов, 5% пищевых волокон.

Для оценки биологической ценности и усвояемости белка биомассы личинок H. illucens был проведен 25-дневный эксперимент на растущих (в период 25-50-го дней жизни) крысах-самцах стока Вистар поколения F1, выведенных от животных, получавших в течение жизни полусинтетический казеиновый рацион (F0, контрольная группа) или рацион с включением биомассы личинок H. illucens (F0, опытная группа). Последние 5 дней эксперимента включали анализ степени ретенции азота в организме (обменный период).

Крысы контрольной группы (n=14) получали полусинтетический казеиновый рацион, содержание белка в котором составляло ~12% по калорийности, опытная группа (n=14) - рацион с включением эквивалентного количества белка H. illucens. Замену ингредиентов рациона проводили с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности и изоазо-тистости (по массовой доле общего азота). Биомасса H. illucens и казеин в группах «опыт» и «контроль»,

соответственно, являлись основными значимыми источниками белка в рационе животных, также было учтено содержание белка в крахмале. Состав рационов крыс контрольной и опытной групп представлен в табл. 1 и 2.

Животных содержали индивидуально в обменных клетках со свободным доступом к корму и воде. Приготовление корма осуществляли ежедневно. Измерение массы тела (на протяжении всего эксперимента) и поедаемости корма (с 1-го по 21-й день эксперимента) проводили еженедельно, в обменный период (с 22-го по 25-й день эксперимента) поедаемость регистрировали отдельно. Экскрецию азота с калом и мочой за обменный период учитывали суммарно с расчетом среднего показателя в сутки. Дальнейшую оценку скорости роста и степени ретенции азота в организме крыс осуществляли расчетным методом (табл. 3).

О биологической ценности и усвояемости белка H. illucens по сравнению с казеином судили по коэффициентам эффективности белка и чистой эффективности белка, истинной усвояемости белка, истинной величине биологической ценности белка, истинной чистой утилизации белка.

Работу с животными проводили в соответствии с приказами Минздрава России № 199н от 01.04.2016 «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики» и № 464н от 18.05.2021 «Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований».

Содержание белка/азота в корме, моче и кале определяли по ГОСТ 26889-86 «Продукты пищевые и вкусовые. Общие указания по определению содержания

В качестве «поправки на усвояемость» при расчете содержания незаменимой аминокислоты в 1 г исследуемого белка использовали показатель стандартизированной илеальной усвояемости каждой из незаменимых аминокислот [15-17].

Содержание аминокислоты в 1 г референсного белка соответствовало ее значению по эталонной шкале потребности в незаменимых аминокислотах различных возрастных групп населения, предложенной FAO/ WHO [12]. Для получения сопоставимых результатов в расчетах использовали шкалу потребности для детей от 6 мес до 3 лет [12], а для оценки степени удовлетворения потребности в незаменимых аминокислотах потенциальных потребителей H. illucens использовали шкалу для детей старшего возраста, подростков и взрослых.

Полученные результаты интерпретировали в соответствии с рекомендациями FAO/WHO [12]: значение показателя DIAAS в диапазоне 100 и более характеризовало содержание определенной аминокислоты как высокое, значение DIAAS в диапазоне 75-99% позволяло отнести белок к «источнику» определенной аминокислоты.

Ввод и анализ данных биологической ценности и усвояемости белка был автоматизирован, разработка и использование программного комплекса позволили унифицировать процесс оценки качества белка, сократить затраты времени и исключить вероятность ошибки оператора при обработке большого массива исходных данных, выполнении рутинных вычислений.

Статистическую обработку данных выполняли с использованием программы McExcel. Данные представлены в виде М±т, где М - выборочное среднее изме-

Таблица 3. Расчетные показатели, использованные для анализа биологической ценности белка Table 3. Estimated parameters used for the analysis of protein biological value

Показатель / Indicator Формула / Formula

Коэффициент эффективности белка / Protein efficiency ratio wt - w0 hw IP IP

Коэффициент чистой эффективности белка / Net protein ratio _ AW-(-AWk) _ AW+AWk Ip lp

Истинная усвояемость белка, % / True protein digestibility, % In-(F- Fk) = ——Ц--xioo 'N

Истинная величина биологической ценности белка, % / True protein biological value, % IN-(U- Uk) - (F - Fk) = JL-L;—J „„-¿xioo /„ - (F - Fk)

Истинная чистая утилизация белка, % / True net protein utilization, % IN-(U- Uk) - (F - Fk) = -—--f-—i-- X 100 'w

П р и м е ч а н и е. AW - прирост массы тела (г) крысы за период эксперимента, определяемый по разнице значений конечной массы (Wt) и исходной массы (W0); IP - суммарное количество белка (г), потребленного крысой с кормом за период эксперимента; IN - суммарное количество азота (г), потребленного крысой с кормом за период эксперимента; AWk - потеря массы тела крысы, получавшей безбелковую диету за период эксперимента (использованы данные, полученные в эксперименте на растущих крысах [14]); F - количество азота (г), экскретированного крысой с калом в течение обменного периода эксперимента; Fk - количество азота (г), экскретированного с калом крысой, получавшей безбелковую диету, в течение обменного периода эксперимента [14]; U - количество азота (г), экскретированного крысой с мочой в течение обменного периода эксперимента; Uk - количество азота (г), экскретированного с мочой крысой, получавшей безбелковую диету, в течение обменного периода эксперимента [14]. N o t e. AW -body weight gain (g) for the observation period, based on difference between the final (Wt) and initial (W0) weight; IP - total amount of protein (g), consumed by the rat with diet for the observation period; IN - total amount of nitrogen (g), consumed by the rat with diet for the observation period; AWk - body weight loss of the rat received a protein-free diet for the observation period (the data obtained in the experiment on growing rats were used [14]); F - fecal nitrogen loss (g) - nitrogen excreted with feces by the rat for the metabolic period; Fk - fecal nitrogen loss on a protein-free diet (g) - nitrogen excreted with feces by the rat fed protein-free diet for the metabolic period [14]; U - urine nitrogen loss (g) - nitrogen excreted with urine by the rat for the metabolic period; Uk - urine nitrogen loss on a protein-free diet (g) - nitrogen excreted with urine by the rat fed protein-free diet for the metabolic period [14].

азота методом Кьельдаля» (коэффициент пересчета для казеина - 6,38; для H. illucens и крахмала - 6,25). Аминокислотный состав белка H. illucens оценивали по ГОСТ 32195-2013 (ISO 13903:2005) «Корма, комбикорма. Метод определения содержания аминокислот» и ГОСТ 13496.21-2015 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и триптофана».

При оценке качества белка H. illucens химическим способом в качестве объекта сравнения использовали казеин; аминокислотный скор с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот (DIAAS) рассчитывали для каждой незаменимой аминокислоты по формуле [12]:

Аминокислотный скор с поправкой на усвояемость _ незаменимых аминокислот, DIAAS (%)

Содержание незаменимой аминокислоты с поправкой

на усвояемость (мг) в 1 г исследуемого белка 0

Содержание (мг) данной аминокислоты в 1 г референсного белка (по FAO/WHO [12])

Digestible indispensable amino acid score, DIAAS (%) _

mg of digestible dietary indispensable amino acid in 1 g

of the analyzed protein

-----x100.

mg of the same dietary indispensable amino acid in 1 g

of the reference protein (by FAO/WHO [12])

Таблица 4. Динамика массы тела крыс Table 4. Dynamics of rat body weight

ряемых величин, т - стандартная ошибка. Характер распределения количественных признаков определяли с помощью х2-критерия, равенство дисперсий - с помощью критерия Левена. Оценку статистической значимости различий средних величин, удовлетворяющих условиям нормального распределения и равенству дисперсий, проводили методом однофакторного дисперсионного анализа (АЫОУА). Для сравнения количественных признаков, не удовлетворяющих условиям нормального распределения и равенству дисперсий, использовали непараметрический аналог для независимых выборок - У-критерий Манна-Уитни. Во всех процедурах статистического анализа критический уровень значимости нулевой статистической гипотезы (р) принимали равным 0,05.

Результаты и обсуждение

Общее состояние животных обеих групп в течение всего эксперимента было удовлетворительным, по внешнему виду, качеству шерстного покрова и поведению крысы опытной группы не отличались от контрольных животных, гибели крыс не отмечено. Еженедельный прирост массы тела крыс (табл. 4) соответствовал уровню прироста, характерному для крыс стока Вистар [18-20], межгрупповые различия не выявлены.

Несмотря на то что по ряду показателей животные опытной группы отличались от контрольных (отмечено достоверное снижение истинной усвояемости белка и истинной чистой утилизации белка - за счет увеличения экскреции азота с мочой и калом, при равном количестве потребленного азота), скорость роста крыс (табл. 5) и степень ретенции азота в организме (табл. 6) свидетельствует о сравнительно высокой биологической ценности белка насекомых.

Согласно результатам оценки аминокислотного скора с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот DIAAS (табл. 7), белок H. illucens характеризуется относительно высоким содержанием гистидина, треонина, валина, изолейцина и лейцина (DIAAS=100 и более), является источником серосодержащих аминокислот -метионина и цистеина (DIAAS=86), а также лизина (DIAAS=97).

Обсуждение

Несмотря на активное коммерческое использование H. illucens, обусловленное высоким содержанием белка и доказанной пищевой ценностью биомассы личинок [21-24], в научной литературе крайне ограниченно освещены вопросы комплексной оценки биологической ценности белка этих насекомых. Вместе с тем полная объективная информация о качестве белка наряду с данными о безопасности необходима для формирования доказательной базы и обоснования возможности пищевого использования продукции нового вида, полученной с использованием насекомых.

В данной статье представлены сведения, полученные в рамках предварительных исследований по формированию подходов и выявлению критических контрольных точек для оценки белка съедобных насекомых.

Анализ результатов эксперимента in vivo (см. табл. 5, 6) продемонстрировал более низкую биологическую ценность белка насекомых по сравнению с казеином: отмечено снижение коэффициента чистой эффективности белка (на 5%, p>0,05), истинной усвояемости белка (на 11%, p<0,05), истинной чистой утилизации белка (на 13%, p<0,05). Отмеченные различия, по всей вероятности, обусловлены увеличением экскреции азота крысами опытной группы с мочой (на 8%, p>0,05) и калом (на 186%, p<0,05).

Смещение показателей азотистого баланса на фоне потребления белка H. illucens в сторону увеличения экскреции азота может быть обусловлено хитином экзоске-лета личинок, представляющего собой азотсодержащий полисахарид, содержание которого в биомассе личинок составляло ~5%. Принимая во внимание, что расчет содержания белка в рационах основывался на определении количества азота в казеине и H. illucens методом Кьельдаля, без учета массовой доли небелкового азота (по разным оценкам, содержание небелкового азота в личинках составляет 16-26% [25]), первой выявленной

Таблица 5. Параметры биологической ценности белка за весь период эксперимента Table 5. Parameters of the biological value of the protein for the whole period of the experiment

Показатель Indicator Группа / Group

контроль / control опыт / test

Поедаемость корма, г/сут (Со) / Feed intake, g/day (Co) 12,6±0,2 12,9±0,3

Количество потребленного белка, г/сут (Ip) / Protein intake, g/day (Ip) 1,49±0,02 1,45±0,03

Коэффициент эффективности белка / Protein Efficiency Ratio 2,50±0,05 2,38±0,05

Коэффициент чистой эффективности белка / Net Protein Ratio 3,04±0,05 2,94±0,04

День эксперимента Day of the experiment Возраст, дни Age, days Группа / Group

контроль / control (n=14) опыт / test (n=14)

1 26 65,4±1,2 65,6±1,2

7 33 74,3±2,0 77,7±1,3

14 40 102,9±2,1 99,3±2,3

21 54 125,9±2,0 121,9±4,1

25 58 158,7±1,8 152,3±3,5

Таблица 6. Параметры биологической ценности белка за обменный период эксперимента Table 6. Parameters of the biological value of the protein for the metabolic period of the experiment

Показатель / Indicator Группа / Group

контроль / control опыт / test

Прирост массы тела (AW), г/сут / Weight gain (AW), g/day 8,21±0,32 7,59±0,37

Поедаемость корма, г/сут (Со) / Feed intake, g/day (Co) 18,4±0,3 18,8±0,2

Количество потребленного белка (IP), г/сут / Protein intake (IP), g/day 2,17±0,03 2,12±0,02

Количество потребленного азота (IN), г /сут / Nitrogen intake (IN), g/day 0,340±0,005 0,340±0,003

Количество экскретированного азота с мочой (U), г/сут / Urine nitrogen loss (U), g/day 0,052±0,003 0,056±0,003

Количество экскретированного азота с калом (F), г/сут / Fecal nitrogen loss (F), g/day 0,019±0,001 0,055±0,001*

Истинная усвояемость белка, % / True protein digestibility, % 98,9±0,2 88,4±0,2*

Истинная величина биологической ценности белка, % / True protein biological value, % 92,3±0,9 89,8±1,0

Истинная чистая утилизация белка, % / True net protein utilization, % 91,3±0,9 79,4±0,9*

П р и м е ч а н и е. * - статистически значимое отличие (p<0,05). N o t e. * - differences are significant (p<0.05).

нами критической контрольной точкой является использование адекватного метода определения белка, позволяющего дифференцировать содержание белкового и небелкового азота в продукте (например, метод Барнштейна, по ГОСТР 57221-2016). Второй критической контрольной точкой является формирование экспериментальных рационов с учетом возможного биологического действия хитина в желудочно-кишечном тракте, свойственного пищевым волокнам. Так, показано, что потребление крысами пищевых волокон (пектина, лигнина, гуаровой камеди и пшеничных отрубей) в количестве от 3 до 20% в рационах с 10% содержанием казеина вызывало дозозависимое снижение коэффициента чистой эффективности белка, истинной усвояемости белка и увеличение эндогенного азота кала [26, 27]. Влияние хитина на величину усвояемости белка и ретенции азота, наряду с влиянием других пищевых волокон, было доказано в исследованиях [10, 28]. Потребление крысами высоких доз хитозана и каррагинана приводило к статистически значимому увеличению экскреции азота и снижению показателей усвояемости и биологической ценности белка [29]. Установленная химическим и биологическим методами истинная биологическая ценность хитинсодержащих мицеллярных белков была в 1,5 раза ниже таковой казеина [10].

Принимая во внимание вышеизложенное, исследования биологической ценности белка, полученного из насекомых, должны проводиться с учетом выявленных в данном эксперименте критических контрольных точек, которые относятся к особенностям оценки химического состава исследуемого продукта. Во-первых, помимо определения общего азота, следует определить содержание небелкового азота в составе продукта, что позволит сформировать изобелковые экспериментальные рационы; во-вторых, необходимо установить содержание хитина в изучаемом продукте, скорректировав уровень пищевых волокон за счет внесения/ удаления микрокристаллической целлюлозы в рацион контрольной группы.

Аналогичный подход следует использовать при оценке пищевой ценности продукции, полученной

с использованием насекомых, с целью представления достоверной информации о содержании белков, усвояемых углеводов и пищевых волокон и выполнения требований ТР ТС 022/2011 «Пищевая продукция в части ее маркировки».

На основании изучения аминокислотного состава и расчета аминокислотного скора с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот (табл. 7) установлено, что белок Н. illucens характеризуется относительно высоким содержанием гистидина, треонина, валина, изолейцина и лейцина (0!АА8>100), а также является источником серосодержащих аминокислот -метионина и цистеина (0!АА8=86) и лизина (0!АА8=97). В соответствии с рекомендуемой РАО^НО [12] градацией значение показателя 0!АА8 в диапазоне >100 характеризует содержание определенной аминокислоты как высокое, значение 0!АА8 в диапазоне 75-99% позволяет отнести белок к «источнику» определенной аминокислоты.

Для сравнения, усредненное значение 0!АА8>100 характерно для незаменимых аминокислот свинины, белка куриного яйца и картофеля, 0!АА8>75 - для белков сои, 0!АА8<75 - для желатина, рапса, люпина, кукурузы, овса, гороха и риса [30].

Таким образом, сравнительный анализ аминокислотного состава белка личинки черной львинки и традиционных пищевых продуктов, в том числе относящихся к источникам полноценного белка, свидетельствует о высокой биологической ценности белка насекомых.

Заключение

Комплексные исследования биологической ценности белка личинки черной львинки продемонстрировали высокое содержание белка в биомассе личинки, его сбалансированный аминокислотный состав и высокую биологическую ценность, что позволяет рассматривать Нвгтв^а illucens в качестве потенциального источника полноценного пищевого белка.

Таблица 7. Аминокислотный скор с поправкой на усвояемость незаменимых аминокислот (DIAAS) белка Hermetia illucens в сравнении с казеином Table 7. Digestible Indispensable Amino Acid Score (DIAAS) of Hermetia illucens protein compared to casein

Показатель Indicator Содержание аминокислот, мг/г белка Amino acid content, mg/g of protein Шкала потребности в незаменимых аминокислотах различных возрастных групп населения, согласно рекомендациям FAO/ WHO, мг/г белка [12] Recommended FAO/WHO amino acid scoring patterns for infants, children and older children, adolescents and adults, mg/g of protein [12] DIAAS с учетом потребностей возрастной группы DIAAS with regard to requirements of the age group

ю В 1—1 i ? а ca СЧ io n QJ c .0 3C дети (6 мес - 3 года) 1 age group - children (6 months - 3 years) 1 дети старшего возраста, подростки и взрослые2 age group - older children, adolescents, adults2 дети (6 мес -3 года) children (6 months -3 years) дети старшего возраста, подростки и взрослые older children, adolescents, adults

казе-ин3 casein3 H. illu- cens3 казе-ин3 casein3 H. illu- cens3

Изолейцин/ Isoleucine 52 47 32 30 156 131 166 140

Лейцин / Leucine 97 81 66 61 146 111 157 120

Лизин / Lysine 80 62 57 48 138 97 163 115

Серосодержащие аминокислоты/ Sulphur amino acids 34 29 27 23 120 86 141 101

Треонин / Threonine 43 44 31 25 133 122 165 151

Триптофан / Tryptophan 13 16 8,5 6,6 150 148 193 190

Валин / Valine 67 66 43 40 150 135 161 145

Гистидин / Histidine 31 37 20 16 153 148 192 185

П р и м е ч а н и е. 1 - шкалу потребности возрастной группы - дети (6 мес - 3 года) рекомендуется использовать в качестве референсной для оценки качества белка [12]; 2 - шкала потребности возрастной группы - дети старшего возраста, подростки и взрослые - представлена для демонстрации степени удовлетворения потребностей основной целевой группы - потенциальных потребителей H. Illucens; 3 - в расчетах использована стандартизированная илеальная усвояемость аминокислот [15-17].

N o t e. 1 - reference scale for the age group - children (6 months - 3 years) Is recommended to be used as a reference for assessing the protein quality [12];2 - reference scale for the age group - older children, adolescents, adults demonstrates the level of satisfaction of the main target group requirements - potential H. illucens consumers [12]; 3 - standardized ileal digestibility of amino acid is used in calculations [15-17].

Сведения об авторах

ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация):

Тышко Надежда Валерьевна (Nadezhda V. Tyshko) - доктор медицинских наук, заведующий лабораторией оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected]

https://orcid.org/0000-0002-8532-5327_

| Жминченко Валентин Михайлович (Valentin M. Zhminchenko) \ - кандидат медицинских наук, главный специалист лаборатории оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-2033-6535

Никитин Николай Сергеевич (Nikolay S. Nikitin) - младший научный сотрудник лаборатории оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-5091-0991

Требух Марина Дмитриевна (Marina D. Trebukh) - младший научный сотрудник лаборатории оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4077-1593

Шестакова Светлана Игоревна (Svetlana I. Shestakova) - научный сотрудник лаборатории оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0279-4134

Пашорина Валентина Алексеевна (Valentina A. Pashorina) - инженер-исследователь 2-й категории лаборатории оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-6909-3514

Садыкова Эльвира Олеговна (Elvira O. Sadykova) - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории оценки безопасности биотехнологий и новых источников пищи E-mail: [email protected]

https://orcid.org/0000-0001-5446-5653

Литература

1. Bukkens S.G.F. The nutritional value of edible insects // Ecol. Food Nutr. 1997. Vol. 36. P. 287-319.

2. Finke M.D. Complete nutrient content of four species of feeder insects // Zoo Biol. 2013. Vol. 32. P. 27-36. DOI: https://doi. org/10.1002/zoo.21012

3. Finke M.D. Complete nutrient content of three species of wild caught insects, pallid-winged grasshopper, rhinoceros beetles and white-lined sphinx moth // J. Insects Food Feed. 2015. Vol. 1. P. 281-292. DOI: https://doi.org/10.3920/JIFF2015.0033

4. Oonincx D.G.A.B., Finke M.D. Nutritional value of insects and ways to manipulate their composition // J. Insects Food Feed. 2020. Vol. 7, N 5. P. 1-22. DOI: https://doi.org/10.3920/JIFF2020. 0050

5. Van Huis A., van Itterbeeck J., Klunder H., Mertens E., Halloran A., Muir G. et al. Edible insects. Future prospects for food and feed security. Rome : Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO), 2013. 187 p.

6. EU legislation. International Platform of Insects for Food and Feed (IPIFF). IPIFF. URL: https://ipiff.org/insects-novel-food-eu-legislation (date of access October 05, 2020)

7. Edible insects: the science of novel food evaluations. URL: https:// www.efsa.europa.eu/en/news/edible-insects-science-novel-food-evaluations (date of access October 05, 2020)

8. Insects - farming and use as feed and food in Denmark and the EU - what's allowed and what is not? Ministry of Environment and Food Danish Veterinary and Food Administration. URL: https:// www.foedevarestyrelsen.dk/Leksikon/Sider/Risikovurdering-og-godkendelse-af-foedevarer.aspx (date of access October 05, 2020)

9. Looking at edible insects from a food safety perspective. Challenges and opportunities for the sector. Rome : FAO, 2021. DOI: https:// doi.org/10.4060/cb4094en

10. Мамаева Е.М. Биологическая ценность некоторых белковых продуктов микробиологического синтеза : автореф. дис. ... канд. биол. наук. Москва, 1983. 169 с.

11. Сидорова Ю.С., Байгарин Е.К., Зорин С.Н., Василевская Л.С., Кочеткова А.А., Смирнова Е.А. и др. Оценка биологической ценности белково-пептидного ингредиента функциональных напитков в опытах на растущих крысах // Вопросы питания. 2012. Т. 81, № 5. С. 41-44.

12. Dietary protein quality evaluation in human nutrition: report of an FAO Expert Consultation. Rome : FAO, 2013. 66 p. URL: http:// www.fao.org/3/a-i3124e.pdf

13. Тышко Н.В., Жминченко В.М., Пашорина В.А., Селяс-кин К.Е. и др. Сравнительная характеристика влияния экспериментальных рационов на рост и развитие крыс // Вопросы питания. 2011. Т. 80, № 5. С. 30-38.

14. Высоцкий В.Г., Мамаева Е.М. К оценке эндогенных потерь азота у белых крыс различного возраста // Вопросы питания. 1979. № 3. С. 48-52.

15. CVB feed table 2016: chemical composition and nutritional values of feedstuff's. URL: https://images.engormix.com/externalFiles/6_ cvb-feed-table-2016 -version-1 .pdf

16. Crosbie M., Zhu C., Shoveller A. K., Huber L.-A. Standardized ileal digestible amino acids and net energy contents in full fat and defatted black soldier fly larvae meals (Hermetia illucens) fed to growing pigs // Transl. Anim. Sci. 2020. Vol. 4, N 3. DOI: https:// doi.org/10.1093/tas/txaa104

17. Huang Ch., Feng W., Xiong J., Wang T., Wang W., Wang C. et al. Impact of drying method on the nutritional value of the edible insect protein from black soldier fly (Hermetia illucens L.) larvae: amino acid composition, nutritional value evaluation, in vitro digestibility, and thermal properties // Eur. Food Res. Technol. 2019. Vol. 245. P. 11-21. DOI: https://doi.org/10.1007/s00217-018-3136-y

18. Hood R.D. Developmental and reproductive toxicology: a practical approach. 2nd ed. USA : CRC Press, 2006. 1168 p.

19. Okamura T., Suzuki S., Ogawa T. et al. Background data for general toxicology parameters in RccHanTM:WIST rats at 8, 10, 19 and 32 weeks of age // J. Toxicol. Pathol. 2011. Vol. 24. Р. 195-205.

20. Pullen A.H. A parametric analysis of the growing CFHB (Wistar) rat // J. Anat. 1976. Vol. 121. P. 371-383.

21. Садыкова Э.О., Шумакова А.А., Шестакова СИ., Тышко Н.В. Пищевая и биологическая ценность биомассы личинок Hermetia illucens // Вопросы питания. 2021. Т 90, № 2. С. 73-82. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2021-90-2-73-82

22. Mlcek J., Rop O., Borkovcova M., Bednarova M. A Comprehensive look at the possibilities of edible insects as Food in Europe - a review // Pol. J. Food Nutr. Sci. 2014. Vol. 64, N 3. P. 147-157. DOI: https://doi.org/10.2478/v10222-012-0099-8

23. Gonzalez C.M., Garzon R., Rosell C. Insects as ingredients for bakery goods. A comparison study of H. illucens, A. domestica and T. molitor flours // Innov. Food Sci. Emerg. Technol. 2018. Vol. 51. P. 205-210. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ifset.2018. 03.021

24. Delicato C., Schouteten J., Dewettinck K., Gellynck X., Tzompa Sosa D. A. Consumers' perception of bakery products with insect fat as partial butter replacement // Food Qual. Prefer. 2020. Vol. 79. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodqual.2019.103755

25. Janssen R.H., Vincken J.P., van den Broek L.A., Fogliano V., Lakemond C.M. Nitrogen to protein conversion factors for three edible insects: Tenebrio molitor, Alphitobius diaperinus, and Hermetia illucens // J. Agric. Food Chem. 2017. Vol. 65. P. 22752278.

26. Shah N., Atallah M.T., Mahoney R.R., Pellett P.L. Effect of dietary fiber components on fecal nitrogen excretion and protein utilization in growing rats // J. Nutr. 1982. Vol. 112. P. 658666.

27. Eggum B.O. The influence of dietary fibre on protein digestion and utilization in monogastrics // Arch. Tierernahr. 1995. Vol. 48, N 1-2. P. 89-95. DOI: https://doi.org/10.1080/17450399509381831

28. Traksele L., Speiciene V., Smicius R., Alencikiene G., Salasevi-ciene A., Garmiene G. et al. Investigation of in vitro and in vivo digestibility of black soldier fly (Hermetia illucens L.)

larvae protein // J. Funct. Foods. 2021. Vol. 79. DOI: https://doi. org/104402.10.1016/j.jff.2021.104402 29. Тутельян В.А., Байгарин Е.К., Погожева A.B. Пищевые волокна: гигиеническая характеристика и оценка эффективности. Москва : СвР-АРГУС, 2012. 244 с.

30. Herreman L., Nommensen P., Pennings B., Laus M.C. Comprehensive overview of the quality of plant- And animal-sourced proteins based on the digestible indispensable amino acid score // Food Sci. Nutr. 2020. Vol. 8. P. 5379-5391. DOI: https://doi. org/10.1002/fsn3.1809

References

1. Bukkens S.G.F. The nutritional value of edible insects. Ecol Food Nutr. 1997; 36: 287-319.

2. Finke M.D. Complete nutrient content of four species of feeder insects. Zoo Biol. 2013; 32: 27-36. DOI: https://doi.org/10.1002/ zoo.21012

3. Finke M.D. Complete nutrient content of three species of wild caught insects, pallid-winged grasshopper, rhinoceros beetles and white-lined sphinx moth. J Insects Food Feed. 2015; 1: 281-92. DOI: https://doi.org/10.3920/JIFF2015.0033

4. Oonincx D.G.A.B., Finke M.D. Nutritional value of insects and ways to manipulate their composition. J Insects Food Feed. 2020; 7 (5): 1-22. DOI: https://doi.org/10.3920/JIFF2020.0050

5. Van Huis A., van Itterbeeck J., Klunder H., Mertens E., Halloran A., Muir G., et al. Edible insects. Future prospects for food and feed security. Rome: Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO), 2013: 187 p.

6. EU legislation. International Platform of Insects for Food and Feed (IPIFF). IPIFF. URL: https://ipiff.org/insects-novel-food-eu-legislation (date of access October 05, 2020)

7. Edible insects: the science of novel food evaluations. URL: https:// www.efsa.europa.eu/en/news/edible-insects-science-novel-food-evaluations (date of access October 05, 2020)

8. Insects - farming and use as feed and food in Denmark and the EU - what's allowed and what is not? Ministry of Environment and Food Danish Veterinary and Food Administration. URL: https://www.foedevarestyrelsen.dk/Leksikon/Sider/Risikovurder-ing-og-godkendelse-af-foedevarer.aspx (date of access October 05, 2020)

9. Looking at edible insects from a food safety perspective. Challenges and opportunities for the sector. Rome: FAO, 2021. DOI: https:// doi.org/10.4060/cb4094en

10. Mamaeva E.M. Biological value of some microbiological synthesis protein products: Diss. Moscow, 1983: 169 p. (in Russian)

11. Sidorova Yu.S., Baygarin E.K., Zorin S.N., Vasilevskaya L.S., Kochetkova A.A., Smirnova E.A., et al. Rats of biological value of protein-peptide ingredient of functional drink. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2012; 81 (5): 41-4. (in Russian)

12. Dietary protein quality evaluation in human nutrition: report of an FAO Expert Consultation. Rome: FAO, 2013: 66 p. URL: http:// www.fao.org/3/a-i3124e.pdf

13. Tyshko N.V., Zhminchenko V.M., Pashorina V.A., Selyaskin K.E., et al. A comparative assessment of the diet influence on growth and development of rats. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2011; 80 (5): 30-8. (in Russian)

14. Vysotsky V.G., Mamaeva E.M. To evaluation of endogenous nitrogen losses in different ages white rats. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 1979; (5): 48-52. (in Russian)

15. CVB feed table 2016: chemical composition and nutritional values of feedstuff's. URL: https://images.engormix.com/externalFiles/6_ cvb-feed-table-2016 -version-1 .pdf

16. Crosbie M., Zhu C., Shoveller A. K., Huber L.-A. Standardized ileal digestible amino acids and net energy contents in full fat and defatted black soldier fly larvae meals (Hermetia illucens) fed

to growing pigs. Transl Anim Sci. 2020; 4 (3). DOI: https://doi. org/10.1093/tas/txaa104

17. Huang Ch., Feng W., Xiong J., Wang T., Wang W., Wang C., et al. Impact of drying method on the nutritional value of the edible insect protein from black soldier fly (Hermetia illucens L.) larvae: amino acid composition, nutritional value evaluation, in vitro digestibility, and thermal properties. Eur Food Res Technol. 2019; 245: 11-21. DOI: https://doi.org/10.1007/s00217-018-3136-y

18. Hood R.D. Developmental and reproductive toxicology: a practical approach. 2nd ed. USA: CRC Press, 2006: 1168 p.

19. Okamura T., Suzuki S., Ogawa T., et al. Background data for general toxicology parameters in RccHanTM:WIST rats at 8, 10, 19 and 32 weeks of age. J Toxicol Pathol. 2011; 24: 195-205.

20. Pullen A.H. A parametric analysis of the growing CFHB (Wistar) rat. J Anat. 1976; 121: 371-83.

21. Sadykova E.O., Shumakova A.A., Shestakova S.I., Tyshko N.V. Nutritional and biological value of Hermetia illucens larvae biomass. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2021; 90 (2): 73-82. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2021-90-2-73-82 (in Russian)

22. Mlcek J., Rop O., Borkovcova M., Bednarova M. A Comprehensive look at the possibilities of edible insects as Food in Europe - a review. Pol J Food Nutr Sci. 2014; 64 (3): 147-57. DOI: https://doi. org/10.2478/v10222-012-0099-8

23. Gonzalez C.M., Garzon R., Rosell C. Insects as ingredients for bakery goods. A comparison study of H. illucens, A. domestica and T. molitor flours. Innov Food Sci Emerg Technol. 2018; 51: 205-10. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ifset.2018.03.021

24. Delicato C., Schouteten J., Dewettinck K., Gellynck X., Tzompa Sosa D. A. Consumers' perception of bakery products with insect fat as partial butter replacement. Food Qual Prefer. 2020; 79. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodqual.2019.103755

25. Janssen R.H., Vincken J.P., van den Broek L.A., Fogliano V., Lakemond C.M. Nitrogen to protein conversion factors for three edible insects: Tenebrio molitor, Alphitobius diaperinus, and Hermetia illucens. J Agric Food Chem. 2017; 65: 2275-8.

26. Shah N., Atallah M.T., Mahoney R.R., Pellett P.L. Effect of dietary fiber components on fecal nitrogen excretion and protein utilization in growing rats. J Nutr. 1982; 112: 658-66.

27. Eggum B.O. The influence of dietary fibre on protein digestion and utilization in monogastrics. Arch Tierernahr. 1995; 48 (1-2): 89-95. DOI: https://doi.org/10.1080/17450399509381831

28. Traksele L., Speiciene V., Smicius R., Alencikiene G., Salase-viciene A., Garmiene G., et al. Investigation of in vitro and in vivo digestibility of black soldier fly (Hermetia illucens L.) larvae protein. J Funct Foods. 2021; 79. DOI: https://doi.org/104402.10.1016/j. jff.2021.104402

29. Tutelyan V.A., Baygarin E.K., Pogozheva A.B. Nutritional fibers: hygienic characteristics and efficiency assessment. Moscow: SvR-ARGUS, 2012: 244 p. (in Russian)

30. Herreman L., Nommensen P., Pennings B., Laus M.C. Comprehensive overview of the quality of plant- And animal-sourced proteins based on the digestible indispensable amino acid score. Food Sci Nutr. 2020; 8: 5379-91. DOI: https://doi.org/10.1002/fsn3.1809