CC BY
27УДК: 618.19 - 006.55 - 074
КОМПЛЕКСНОЕ МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ УЗЛОВЫХ ОБРАЗОВАНИЙ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ С ОЦЕНКОЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИИ В ЕЁ ТКАНИ
Т. Э. Усманова1, А. С. Филатов1, Ф. Н. Ильченко1, Т. Г. Филоненко2, Т. А. Бойко3
'Кафедра хирургии № 2,
2Кафедра патологической анатомии с секционным курсом,
3Кафедра гистологии и эмбриологии, Медицинская академия имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского»
Адрес переписки: бул.Ленина 5/7, г.Симферополь, 295006, Республика Крым, Российская Федерация e-mail: tamila.asp.doc@ma\\.ru.
complex morphological and immunohistochemical investigation of benign brest tumors with the assessment of the inflammatory reaction in her tissue
T. E. Usmanova, A. S. Filatov, F. N. Ilchenko, T. G. Filonenko, T. A. Boyko
SUMMARY
The analysis of the histological examination of intraoperative material in 64 patients operated on for benign breast tumors. By the presence of proliferative changes in the tissues of the benign breast tumors allocated two groups: benign breast tumors with proliferative changes in the tissues (n=23); benign breast tumors without proliferation (n=15). The preparations with the proliferation of ductal epithelium revealed a high \eve\ of expression of the common leukocyte antigen CD45 + (44,26 ± 0,2) % of lymphoid ce\\s.
РЕЗЮМЕ
По заключению гистологического исследования интраоперационного материала 64 больных, оперированных по поводу доброкачественных узловых образований молочной железы, относительно пролиферативных изменений в её тканях выделено 2 клинические группы: доброкачественные узловые образования молочной железы с наличием пролиферативных изменений в её тканях (n=23); доброкачественные узловые образования молочной железы, непролиферативный вариант (n=15). В препаратах с пролиферацией протокового эпителия выявлен высокий уровень экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD45+ (44,26±0,2) % клеток лимфоидного ряда.
Ключевые слова: доброкачественные узловые образования молочной железы, гистологическое исследование, иммуногистохимия, воспаление.
На сегодняшний день, несмотря на достижения изучение пролиферативных изменений в ткани
диагностики и лечения новообразований молоч- МЖ при гистологическом исследовании и уров-
ной железы (МЖ), вопросы дифференциальной ня экспрессии общего лейкоцитарного антигена,
диагностики, грамотного наблюдения, комбиниро- определяемого ИГХ методом, позволит оценить
ванного и комплексного лечения данной патологии роль воспалительных изменений в патогенезе про-
занимают важное место. Более 80% выявленных лиферативных изменений и повышении риска воз-
узловых образований МЖ являются доброкаче- можной малигнизации ДУОМЖ. ственными новообразованиями [1]. В научной Цель исследования - изучить морфологические
и практической литературе достаточно широко особенности ДУОМЖ у женщин репродуктивного
представлены материалы, посвященные изуче- возраста в зависимости от оценки воспалительной
нию роли нарушений гормонального равновесия реакции в её ткани. в организме женщины в формировании дисгормо-
нальной патологии МЖ [3]. Однако, в патогенезе МАТЕриАЛЫ и МЕ"ГО,ЦЫ
доброкачественных узловых образований молоч- Для исследования использован интраопераци-
ной железы (ДУОМЖ) могут иметь немаловажное онный материал, взятый при проведении опера-
значение и локальные воспалительные процессы тивного вмешательства (традиционная сектораль-
[7]. В настоящее время принято считать, что вос- ная резекция, экономная секторальная резекция,
паление, ассоциированное с опухолевым ростом, энуклеация фиброаденомы) 64 женщин репродук-
является важным фактором промоции и прогрес- тивного возраста с узловыми образованиями МЖ.
сии патологии [5]. При длительном характере вос- Операции проводились на 8-9 день менструально-
палительных изменений может меняться степень го цикла.
генетической стабильности клеток, что будет при- Ткань МЖ размерами 1,0 см х 1,0 см х 0,5 см
водить к риску активации онкогенов, выраженным фиксировали в 10% забуференном нейтральном
пролиферативным изменениям [6]. Параллельное формалине. Минимальный срок фиксации со-
сталял 10 дней, в течение которых фиксирующая жидкость сменялась дважды. Фиксатор отмывали в проточной водопроводной воде 24 часа. Ткань обезвоживали в батарее спиртов восходящей концентрации (50%, 60%, 70%, 80%, 96% - 1, 96% - 2 и абсолютный спирт), просветляли в ксилоле, выдерживали в насыщенном при +370°С растворе парафина в ксилоле, помещали в парафин при +560°С, с последующей заливкой в смесь парафина и пчелиного воска и изготовлением парафиновых блоков. Из парафиновых блоков готовили серийные срезы толщиной 4-5 мкм. С целью обзорной окраски, гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином.
Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование ткани проводили по стандартизованной методике [4] с использованием серийных парафиновых срезов толщиной 4-5 мкм, помещенных на адгезивные стекла, покрытые полизином («MenzelGlaser», Германия) на автостейнере DAKO. ИГХ исследование осуществлялось с помощью системы визуализации EnVision™ FLEX +, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus), Code K8024, предназначенной для работы на автостейнере (Dako Autostainer Instruments). Демаскировка антигенов проводилась в камере Паскаля в течение 3 минут с нарастающей температурой до 115°С и последующим постепенным снижением температуры. С целью идентификации клеток лимфоидного ряда проводили ИГХ исследование с использованием мышиного моноклонального антитела к рецепторам общего лейкоцитарного антигена CD45 (Clone 2B11 + PD7/26) согласно протоколу исследования фирмы Dako. Результаты ИГХ исследования оценивали с учетом распределения трансмембранной экспрессии CD45+ иммунокомпетентных клеток в строме МЖ. В качестве позитивного контроля использовали ткань миндалин, в качестве негативного контроля - ткань мозга.
Количественный анализ результатов ИГХ реакций проводили в 10 полях зрения при увеличении х 200 в очагах с преобладающими диагностическими проявлениями. Морфометрическое исследование включало подсчет клеток с помощью программы Software DP-SOFT и последующей статистической обработкой. Полученные результаты были подвержены статистической обработке для параметрических и непараметрических критериев с использованием программы «MedStat» (серийный №MS0011) ДНПП ООО «Альфа», г.Донецк. При анализе проверки распределения на нормальность использовали Хи-квадрат и критерий W Шапиро-Уилка, сравнение центральных тенденций двух независимых
выборок с использованием Ш-критерия Вилкоксо-на и сравнение средних двух независимых выборок по критерию Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Морфологическую оценку ткани МЖ при ДУ-ОМЖ проводили, учитывая соотношение структурных компонентов, таких как дольки, протоки, фиброзная и жировая ткани. Также обращали внимание на наличие воспалительной реакции, пролиферативной активности эпителия протоков. По результату гистологического исследования 64 больных были выявлены: пери-, интра- и интра-периканаликулярные фиброаденомы, ювениль-ная фиброаденома, узловая фиброзно-кистозная мастопатия, внутрипротоковая папиллома, киста. При этом пролиферативные формы ДУОМЖ были характерны для 44 (68,75%) больных, средний возраст которых составил (25,7±1,34) года, тогда как непролиферативные формы выявлены в 20 (31,25 %) случаях у больных со средним возрастом (25,6±1,04) лет. В группе больных с ДУОМЖ с пролиферативными изменениями в тканях (п=44), наиболее часто обнаруживали интра- и перика-наликулярные ФА с пролиферацией долькового и протокового эпителия. При этом наблюдалось разрастание плотной, нередко гиалинизирован-ной соединительной ткани, в которой располагались атрофичные дольки и кистозно-расширенные протоки. Протоки имели удлинённую форму с выступающими в просвет массивными сосочками из рыхлой отёчной или миксоматозной соединительной ткани, расположенными на широком основании. Вследствие чередования фиброзных сосочков и расширенных протоков рисунок строения ин-траканаликулярной ФА имел характерный вид. В препаратах нередко обнаруживали кистозные образования, которые чаще были множественными. Большинство кист имели округлую форму, некоторые — складчатые контуры. В просвете кист часто обнаруживали эозинофильный мелкозернистый или гомогенный секрет, иногда с очагами каль-цификации. Некоторые кисты были заполнены макрофагами с хорошо выраженной «пенистой» цитоплазмой и нейтрофилами. Кисты выстилал эпителий, обычно кубический со слабо выраженной цитоплазмой и округлым ядром. В значительной части кист эпителиальная выстилка располагалась в два слоя, при этом нижний слой составляли миоэпителиальные клетки. В случаях выраженной пролиферации количество рядов эпителиальных клеток увеличивалось (рис. 1).
Рис. 1. ДУОМЖ с пролиферативными изменениями в тканях. Кисты с многорядным эпителием.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 400
При ДУОМЖ без пролиферативных изменений (п=20) в тканях наблюдали большее развитие фиброзной ткани при интраканаликулярной форме ФА (рис. 2). При этом при периканаликулярной форме ФА чаще определялись кистозно-расширен-ные протоки, отсутствовала пролиферация эпителия кистозно-расширенных протоков и долькового эпителия. В некоторых кистах эпителий был светлым низким цилиндрическим с наличием обильной эозинофильной цитоплазмы и типичной закругленной апикальной частью, что характерно для апокринового типа секреции. Иногда соединительнотканная перегородка между кистами разрывалась и они соединялись между собой.
Рис. 2. ДУОМЖ без пролиферативных изменений в тканях. Интраканаликулярная фиброаденома.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 400
Следует отметить, что в ткани МЖ при ДУ-ОМЖ с признаками пролиферации эпителия отмечалась ярко выраженная лимфо-гистиоцитарная и лейкоцитарная инфильтрация, которая располагалась преимущественно в очагах дольковой гиперплазии, вокруг кист, в их просвете или в очагах
фиброза. Этот факт позволил предположить: развитие пролиферативных форм сопровождается формированием хронического воспалительного процесса в тканях ДУОМЖ. Причем следует отметить, что по данным гистологического исследования сложно судить не только о степени выраженности хронического воспаления и его активности, но и зависимости выраженности гиперпластических изменений в ткани МЖ от хронического воспалительного процесса.
В связи с этим в интраоперационном материале 38 больных с ДУОМЖ нами было проведено ИГХ исследование для оценки экспрессии общего лейкоцитарного антигена СЭ45+ с целью определения степени активности и выраженности воспаления в зависимости от уровня пролиферативной активности, определяемой при проведении гистологического исследования. Для этого по заключению гистологического исследования было выделено 2 группы: ДУОМЖ с наличием пролиферативных изменений в тканях МЖ (п=23); ДУОМЖ, непро-лиферативный вариант (п=15). Для контроля использован аутопсийный материал, взятый у женщин репродуктивного возраста, умерших от другой патологии (п=10).
Результаты показали: в препаратах с пролиферацией протокового эпителия выявляются клетки с выраженной экспрессией общего лейкоцитарного антигена СЭ45. Следует отметить, что воспалительный инфильтрат в большей степени располагался вокруг железистых структур и в стро-ме (рис. 3). Экспрессия общего лейкоцитарного антигена СЭ45 была определена в (134,4± 12,75) % клеток лимфоидного ряда в исследуемых полях зрения. В случаях, где пролиферация протоково-го эпителия и эпителия в кистозно-расширен-ных протоках была минимальной, обнаруживали
Рис. 3. Периканаликулярная фиброаденома с пролиферацией. Выраженная экспрессия CD45+ в строме. ИГХ. Система визуализации EnVision™ FLEX+ Ув. х 100.
единичные клетки воспалительного ряда, что составило (9,5±1,5) % СБ45+ позитивных клеток (табл. 1).
Таблица 1
Уровень экспрессии CD45+ в тканях ДУОМЖ
Группа пациентов CD45 (%), (n±m)
ДУОМЖ с пролиферацией протокового эпителия (п=23) 134,4±12,75*
ДУОМЖ без пролиферации протокового эпителия (п=15) 9,5±1,5**
Контроль 2,0±0,3
Примечание. * достоверность различий по отношению к контролю, ** - между группами (р < 0,05).
Выше изложенные результаты позволяют предположить, что воспалительный процесс в ткани МЖ при её доброкачественной узловой патологии является одним из местных патогенетических механизмов формирования патологии, а также фактором, усиливающим пролиферацию эпителия. Прогрессирование пролиферативных изменений в тканях МЖ приводит к повышению риска возможной малигнизации ДУОМЖ и прогрессирова-ния патологии. Следовательно, одним из важных направлений в лечебно-диагностических программах у больных с ДУОМЖ является диагностика воспалительных изменений в тканях и разработка направленной на местные патогенетические факторы формирования патологии консервативной терапии, которая будет неотъемлемой частью хирургического лечения больных с пролиферативны-ми формами узловых образований МЖ доброкачественной природы.
ВЫВОДЫ
1. В препаратах ДУОМЖ при наличии про-лиферативных изменений присутствует лимфо-гистиоцитарная и лейкоцитарная инфильтрация и определен высокий уровень экспрессии общего лейкоцитарного антигена CD45+ (134,4±12,75) %, что в 14,15 раза превышает уровень данного маркера воспаления при непролиферативных вариантах.
2. Взаимосвязь выраженности пролифератив-ных изменений и воспалительной реакции в тканях МЖ носит прямо пропорциональный характер.
ЛИТЕРАТУРА
1. Зорин Е. А. Малоинвазивные вмешательства при доброкачественных узловых образованиях молочной железы : дис. ... канд. мед. наук : 14.00.27 / Зорин Евгений Александрович ; Российский университет дружбы народов. - М., 2008. - 110 с.
2. Радзинский В. Е. Частота и структура доброкачественных заболеваний молочных желез после хирургического лечения гинекологических заболеваний / В. Е. Радзинский, Л. Х. Хасханова, И. М. Ордиянц // Фарматека. - 2010. - № 1. - С. 58-61.
3. Dabbs D. J. Diagnostic immunohistochemistry / D. J. Dabbs. - London : Churchill Livingstone, 2006. - 828 p.
4. Cancer-related inflammation / A. Mantovani, Р. Allavena, А. Sica [et al.] // Nature. - 2008. - Vol. 454.
- Р. 436-444.
5. Grivennikov S. I. Inflammation and oncogenesis: a vicious connection / S. I. Grivennikov, M. Karin // Curr. Opin. Genet. Dev. - 2010. - Vol. 20, № 1. - P. 65.
6. Yu H. Crosstalk between cancer and immune cells: role of STAT 3 in the tumor microenvironment / H. Yu, M. Kortylewski, D. Pardoll // Nat. Rev. Immunol.
- 2007. - Vol. 7. - Р. 41-51.
