CC BY
37
РЕПРОДУКТИВНЫЕ БИОТЕХНОЛОГИИ
Известия ТСХА, выпуск 1, 2007 год
УДК 575
КЛОНАЛЬНАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ СТВОЛОВОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ G1
Т.Т. ГЛАЗКО, А.П. ЯЦИШИНА*, О.В. ПИДПАЛА®, Е.А. ЕВСТАФЬЕВА, Л.Л. ЛУКАШ*
Выполнен сравнительный анализ кариотипической изменчивости популяций эмбриональной стволовой клеточной линии G1 и полученной из нее сублинии ОА, селектируемой по признаку злокачественной трансформации (независимости роста от сывороточных факторов). Впервые описан новый механизм кариотипической изменчивости, связанный с повышенной ломкостью хромосом в околоцен-тромерных районах, что приводит к образованию мелких хромосом с перицентро-мерными гетерохроматиновыми блоками и лишенных центромер больших хромосомных фрагментов. Представлены данные, свидетельствующие о том, что единичная клетка (клетки), потомством которой является сублиния ОА с трансформированным фенотипом, по хромосомному составу ближе к нормальному поли-плоидизированному кариотипу мыши, чем доминирующие клоны линии G1. Обсуждаются возможные механизмы гетерогенности клеток по хромосомному составу.
Плюрипотентные эмбриональные
стволовые клеточные линии (ЭСК) в последние годы широко исследуются в связи с возможностями их использования при разработке методов клеточной терапии, а также при получении трансгенных млекопитающих. В то же время обнаруживается сходство ЭСК с опухолевыми клетками по таким характеристикам, как неограниченность клеточных делений, способность к ци-тодифференцировке в различных направлениях, широкая фенотипическая изменчивость [10, 11]. При определении трансформированного (опухолевого) фенотипа клеток рассматривают такие признаки, как зависимость роста клеток от субстрата, от ростовых сывороточных факторов, чувствительность клеток к контактному торможению [7, 15]. По некоторым наблюдениям при культивировании ЭСК возможно
появление сублиний, несущих такие признаки [2,3].
Предполагается, что в основе злокачественной трансформации клеток может лежать накопление кариотипи-ческих изменений [4, ^ 12]. Однако до сих пор такие изменения и механизмы их появления остаются недостаточно исследованными. Традиционно в качестве характеристик кариотипической изменчивости в клеточных популяциях рассматривают частоты анеуплоид-ных и полиплоидных клеток, внутри-и межхромосомных перестроек. Причем анализ полученных данных осложняется тем, что сами эти характеристики являются сложными признаками, и изменчивость каждой из них может зависеть от целого ряда причин. Так, например, полиплоидия может быть не только следствием отклонения от нормального хода митоза, но и результа-
* Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев, Украина.
том слияния клеток [6]; анеуплоидия возникает в результате как утраты или нерасхождения хромосом, так и многополюсных митозов [9].
Для того чтобы оценить возможные пути дестабилизации кариотипа ЭСК, связанные с появлением клеток с признаками опухолевой трансформации, в настоящей работе выполнен сравнительный кариотипический анализ исходной ЭСК линии G1 (15-й пассаж), выделенной из нее на 35-м пассаже сублинии ОА, проявившей способность к независимому росту от сывороточных факторов, и миелом линий РЗ-X63-Ag 8.653, NSO, SP2/0. ,
Материалы и методы
Линия G1 была получена из полового бугорка 12,5 дневного эмбриона мыши линии BALB/c [2]. Сублиния ОА выделена из линии G1 на 35-м пассаже путем высева клеток на среду, обедненную сывороточными факторами (менее 1%) [2, 3]. Для сравнения с ЭС клетками выполнен также карио-типический анализ 3 постоянных клеточных линий миелом, происходящих от той же лабораторной линии мышей BALB/c, миеломы P3-X63-Ag 8.653, NSO и SP2/0 (предоставлены для исследований Н.Л.Галахарь, Институт цитологии и генетики СО РАН). Методика получения метафазных пластинок детально описана в работе [1]. Клетки суспендировали и инкубировали 30 мин в растворе КС1 (0,56%) при 37 3С. Хромосомы фиксировали смесью метилового спирта и ледяной уксусной кислоты (3:1), трижды меняя фиксирующий раствор. Препараты раскапывали на холодные мокрые стекла, высушивали и окрашивали красителем Гимза («Merck», Германия). Окрашенные цитогенетические препараты анализировали с помощью бинокулярного микроскопа Carl Zeiss при увеличении в 1000 раз. Метафазные пластинки фотографировали при помощи цифрового фотоаппарата Canon (PowerShot G6, Great Britain). Индивидуальное типи-
рование хромосом проводили в соответствии с данными Cowell J'.K. [о]. Для отдельных метафазных пластинок с наименьшим количеством хромосомных наложений составляли кариограммы. Количество хромосом и их качественный состав анализировали на фотографиях метафазных пластинок.
Изменчивость клеточных популяций по числу хромосом (Хр) характеризовали по следующим показателям: пределам варьирования, доле клеток с модальным числом Хр и ширине модального класса. В связи с выраженным разнообразием ЭС клеток по количеству Хр (условно модальное число) учитывали количество клеток (в сН от общего количества рассмотренных клеток) с близкими числами Хр, которые встречались чаще, чем другие. Для того чтобы более подробно оценить сходства и отличия клеточных популяций по количеству Хр, было рассмотрено распределение клеток с количеством Хр гипер ди-, три-, тет-ра-, пента-, и гексаплоидных.
Результаты и их обсуждение
Результаты выполненного анализа изменчивости исследованных клеточных популяций по числу Хр представлены в табл. 1 и 2. Видно, что наиболее гетерогенной по всем характеристикам оказалась исходная популяция ЭС клеток, линия G1, 15-й пассаж. Постоянные клеточные линии миелом почти совпадали друг с другом по таким характеристикам, как пределы варьирования, модальное число Хр.. долям клеток с модальным числом Хр. Сходными с типичными для миелом были пределы варьирования у клеток сублинии ОА на 14-м и 26-м пассажах, однако условные модальные числа Хр были почти в 2 раза больше. Близкими пределы варьирования были и у клеток сублинии ОА на 40-м пассаже, однако условные модальные числа Хр этих клеток сдвигались в сторону уменьшения количества Хр, еближе-
Таблица 1
Гетерогенность клеток по количеству хромосом в исследованных клеточных популяциях
Линия или сублиния Число исследованных клеток Число хромосом в клетке Доля клеток с модальным числом хромосом, %
пределы варьирования модальное
Миелома РЗ-ХбЗ-Ад 8.653 92 45-133 60-65 46
Миелома N8-0 100 48-126 58-60 47
Миелома ЗР2/0 90 49-115 61-64 40
Линия 01, пассаж 15 50 40-173 40; 108; 117; 126-127 6; 8; 6; 18
Сублиния ОА линии 01
Пассаж 14 74 58-126 110-112; 114-117; 123-126 14; 35; 12
Пассаж 26 43 50-125 110-111; 113-115 21; 26
Пассаж 40 70 55-134 71-79; 90-95 23; 19
Таблица 2
Частота встречаемости клеток с около ди-, три-, тетра-, пента-, и гексаплоидными наборами хромосом в исследованных клеточных популяциях
Линия или сублиния Гипердиплои-ды (40-50 хромосом, %) / гипотрип-лоиды (51-59 хромосом, %) Гипертриплоиды (60-70 хромосом, %) / гипотет-раплоиды (71-79 хромосом, %) Гипертетра- плоиды (80-90 хромосом, %) / гипопента- плоиды (91-99 хромосом, %) Гиперпентаплоиды (100-110 хромосом, %) / гипогекса-плоиды (111-119 хромосом, %) Гипергекса-плоиды (120-130 хромосом, %/более 130 хромосом)
Миелома РЗ-ХбЗ-Ад 8.653 12/28 55/2 0/1 0/2 0/0
Миелома ЫБ-О 4/51 36/0 0/1 0/5 3/0
Миелома ЭР2/0 1/36 54/1 3/2 3/1 0/0
Линия 01, пассаж 15 8/2 12/4 4/4 16/12 26/0
Сублиния ОА линии 01
Пассаж 14 0/3 0/5 5/5 22/42 18/0
Пассаж 26 0/2 0/0 5/2 14/65 7/0
Пассаж 40 .0/3 16/23 19/17 16/4 0/3
нию их с типичными для исследованных миелом.
Во всех трех постоянных линиях миелом преобладали гипо- и гиперт-риплоиды (51-70 хромосом; 83, 87 и 90% клеток). В линии ЭСК G1 на 15-м пассаже наиболее часто встречались 3 группы клеток: гипертриплоиды (12%), гиперпентаплоиды (16%), гипо- и гипер- гексаплоиды (38%).
В последовательных пассажах сублинии ОА наблюдались изменения структуры клеточных популяций по сравнению с исходным 15-м пассажем линии G1: от 14-го до 40-го пассажа исчезают гипергексаплоидные клетки; на пассажах 14 и 26 преобладают ги-перпентаплоидные и гипогексаплоид-
ные, а на пассаже 40 — уже гипотет-раплоидные, гипопентаплоидные клетки. То есть обнаруживается сдвиг структуры клеточных популяций в сторону увеличения представленности клеток с меньшим числом Хр (меньшим геномом), что, по-видимому, может быть связано с селективными преимуществами клеток с относительно менее продолжительным клеточным циклом.
Полученные данные свидетельствуют о том, что при сходных пределах варьирования клеток по числу Хр клеточные популяции сублинии ОА, селектируемой по признаку трансформированного фенотипа (независимость роста от сывороточных факторов), от-
личаются от постоянных опухолевых линий большей гетерогенностью клеток по количеству Хр и наличием изменений клеточного состава в сторону накопления гипотетраплоидных и ги-попентаплоидных клеток, а также уменьшения пента- и гексаплоидных вариантов.
Во всех клеточных популяциях обнаруживается высокая частота центрических слияний (робертсоновских транслокаций — РБ). В постоянных клеточных линиях P3-X63-Ag 8.653, NS-O, SP2/0 они встречались с частотой 1,6±0,2; 1,7±0,3; 2,4±0,3 соответственно, причем среди них регулярно присутствовали изохромосомы РБ (9; 9), (15; 15), (19; 19).
В исходной линии ЭС G1 на 15-м пассаже они встречались с примерно такой же частотой (2,1±0,3). Не уменьшалась частота их встречаемости и у сублинии ОА на 14, 26, 40-м пассажах (2,2±0,3; 2,2±0,2; 1,9±0,2 соответственно). В то же время в клетках ЭС, в отличие от миеломных линий, не
\ I % 1 /
встречались изохромосомы; центрические слияния (РБ) наблюдали между гетерологичными Хр.
В метафазных пластинках постоянных опухолевых линий примерно 3050% Хр представлены перестроенными хромосомами, в которые входили РБ, крупные перестроенные и нети-пируемые мелкие Хр, причем, как правило, мелких нетипируемых Хр было примерно в 2 раза меньше, чем крупных перестроенных. В миеломных линиях отсутсвовали неперестроенные Хр 6, 12 и X. Примеры типичных перестроенных Хр для миеломной линии P3-X63-Ag 8.653 опубликованы нами ранее [1], хромосомный состав миелом NS-O, SP2/0 был к нему близок.
Клетки ЭС существенно отличались от миеломных линий присутствием неперестроенных копий Хр 6, 12 и X, меньшим количеством перестроенных Хр и преимущественной представленностью среди них мелких нетипируе-мых Хр (например, линия G1, 15-й пассаж, рис. 1; 6 крупных перестро-
б
* %
*
10
14 15
Рис. 1. Кариограмма метафазной пластинки линии G1 на 15-м пассаже.
Арабскими цифрами (1-19, X) обозначены неперестроенные хромосомы. Римскими цифрами (I - XXVIII) обозначены перестроенные хромосо-
I . $ ; , Р Ц щ | ц ' мы. I - III — робертсонов-
18 19
ские транслокации. Все-X го 118 хромосом, 121 плечо с учетом плеч ро-^ ч бертсоновсих транслока-
£ 4 ций. Обнаруживается
# Ц дефицит (1-4 копии)
крупных хромосом (хромосомы 1, 2, 3, X) по
11 " ^ 1 - сравнению с мелкими
# * (5-6 копий)
енных Хр и 22 мелких). Примеры ка-риограмм метафаз сублинии АО на 14, 26, 40-м пассажах представлены на рис. 2 и 3.
Таким образом, клетки ЭС качественно отличались от постоянных опухолевых линий большим количеством мелких Хр, несущих типичные для перицентромерных районов акроцент-рических Хр мыши большие гетерохроматиновые блоки, а также относительно малым количеством крупных перестроенных Хр, при сходной частоте встречаемости РБ в клетках в обеих группах клеточных популяций.
Для выявления гетерохроматиновых блоков перицентромерных районов Хр мыши выполнено С-окрашивание [13] клеток сублинии ОА на 14-м и 26-м пассажах. Обнаружено, что одним из путей формирования наблюдаемых нами в больших количествах в мета-фазных пластинках ЭС мелких нети-пируемых хромосом может быть отрыв перицентромерных гетерохроматиновых блоков от основного тела Хр. Примеры таких событий представлены на рис. 4. То есть наблюдаемое нами увеличение количества клеток с меньшим числом Хр в пассажах сублинии ОА по сравнению с исходной линией G1 может осуществляться за счет такого специфического разрушения Хр, с последующей утратой мелких Хр, несущих центромерные районы, и крупных фрагментов, лишенных центромер.
Стрелками указаны перицентромер-ные гетерохроматиновые блоки, автономно лежащие рядом с основным телом аутосом. А — робертсоновское слияние между аутосомой и мелкой хромосомой — между двумя перицен-тромерными гетерохроматиновыми блоками обеих хромосом. Б — двумя стрелками указаны перицентромерные гетерохроматиновые блоки, оторвавшиеся от основного тела аутосомы
Как отмечалось нами ранее [1], клетки постоянных миеломных линий представляют смесь клеточных клонов, несущих разные маркерные Хр. В то
же время в этой смеси, несмотря на постоянно возникающие новые перестройки, межклеточные слияния, поддерживается определенный баланс клеток как по числу Хр в них так и по представленности клонов с разным хромосомным составом. В этом отношении клетки сублинии ОА, селектируемые на независимость роста от сывороточных факторов, отличаются от миеломных линий тем, что в них, на пассажах 14, 26 и 40 идет отбор клеток, по-видимому, преимущественно в сторону уменьшения количества Хр, а не накопления вариантов хромосомных транслокаций (см. табл. 1, 2).
Судя по выделенным условно модальным классам Хр на пассажах 14 и 26 сублинии ОА , предковые клетки этой сублинии должны были содержать не менее чем гексаплоидный набор Хр. Причем, если по количеству Хр такая предковая клетка (или несколько клеток) совпадала с основным модальным числом Хр у исходной клеточной линии G1 на 15-м пассаже (126127 Хр), то по хромосомному составу она (они) существенно отличалась от типичного для исходной линии по 2 обстоятельствам. Во первых, в клетках сублинии ОА на 14-м и 26-м пассажах присутствовала Хр Y (см. рис. 2) с частотой 20% и 10% соответственно, не выявленная ни в одной мета-фазной пластинке линии G1 на 15-м пассаже. Следовательно, в линии G1 сохранялись одиночные клетки, содержащие Хр Y и по этому признаку близкие к первичной клеточной популяции эмбриона с нормальным карио-типом самца мыши. Во-вторых, для многохромосомных метафаз линии G1 на 15-м пассаже был типичен определенный дефицит копий крупных Хр (Хр 1~7, X) по сравнению с хромосомами среднего и мелкого размера (см. рис. 1), что, в частности, по Хр 1 и 2 не было характерным для клеток сублинии ОА (см. рис. 2, 3). То есть по отсутствию дефицита отдельных крупных неперестроенных Хр, наличию Хр Y клетки
л ^
ъ^Ы^* ь т% 11151 м*
^ " " • п^ «гл т
" /• *'•■•.," нмзп >** ни
ч • у"
К <"Л
/У
''-:' , л' -V
. 5 > . „ " ¡>
.л/
/ г.
Е\Ч
\*
.Л' ^
» / - *» ' 4 '
.'ГгГ.С
»»11)1. и*,.'1* и»»»«'
..... • ' «
Л
I И 1)1 IV V V! \'ПМ111\ \ XI М1 Х01
и'.'^ .•.;4
1 . ^ - г
Г' '
И* I
I II п: [■'. \ VIMI\in IX X XI ХП ХШ XIV XV XVI XVII XVIII XIX XX
Рис. 2. Кариограммы метафазных пластинок сублинии ОА, пассаж 14.
А, Б, В, Г — примеры кариограмм, свидетельствующие о гетерогенности клеток по хромосомному составу. Арабскими цифрами (1-19) обозначены неперестроенные хромосомы; римскими цифрами (I - XXVIII) — перестроенные хромосомы. X и Y — половые хромосомы
Пассаж 26
>14* ¡Ш »мим»
*т от ¿Ж*
а; « 1С Ж» 4*3.»: ЖМ^'"
......... ........... Е
г 1
; С
? "
1 > \ Г
Л
- ¿с
Пассаж 40
д
Ч1Р
г«"
Г.'П
V VI \HVTITIY V VI УТТ УТЛ XIV X
1Ь 10; 16, Ш - КЫ 1И, 1V - КЬ '!
V VI VII МП IX X ХП ХП ХОТ XIV XV XVI XVI! х\тп нх
\Д XXI и XXIV XXV XXVI XXVII ХХМП XXIX 2; 7,11-111.-6; V. Ш- К1» -3: 16, IV - КЬ - Ы; V, V - КЬ - 9; 19, VI - КЬ -
Рис. 3. Кариограммы метафазных пластинок сублинии ОА, пассажи 26 (А, Б, В) и 40 (Г и Д). Представлены разные кариограммы, свидетельствующие о гетерогенности клеток по хромосомному составу.
Арабскими цифрами (1-19) обозначены неперестроенные хромосомы; римскими цифрами (I - XXVIII) — перестроенные хромосомы
111
1
1
1
1 1%
*'»
Рис. 4. Повышенная ломкость перицентромерных районов в клетках сублинии ОА (пассажи 14 и 26, С-окрашивание для выявления гетерохроматиновых перицентромер-ных блоков)
сублинии ОА на 14-м и 26-м пассажах оказывались более близки к полиплои-дизированным нормальным клеткам мыши, чем исходная линия G1.
Полученные данные свидетельствуют о том, что сублиния ОА, несущая классический признак опухолевого фенотипа — независимость роста от сывороточных факторов — сформировалась из одиночной клетки (клеток), хромосомный состав которой был ближе к нормальному полиплоидизирован-ному хромосомному набору мыши и нетипичен для преобладающих клонов клеток в исходной линии G1.
В общем, это соответствует представлениям о селекции клеточных клонов в процессе злокачественной трансформации [4]. Важно подчеркнуть, что в данной модели наиболее перспективной для формирования сублинии с трансформированным фенотипом оказалась клетка, по составу хромосом наиболее близкая к полиплоидизированной норме, присутствие которой не удается уловить в преобладающих клонах клеток линии G1. Из этого следует, что практически невозможно исключить в ЭСК линиях присутствие единичных клеток, способных к опухолевому росту.
Механизмы же дестабилизации хромосомного аппарата, приводящие к генетической гетерогенности клеток при их культивировании, а также при опухолевом росте, остаются неизвестны-
ми до сих пор. И если в данном исследовании удалось наблюдать один из механизмов утраты Хр (уменьшения их числа) за счет отрыва перицентромер-ных гетерохроматиновых блоков у ак-роцентрических Хр мыши, то пути увеличения количества Хр могут оказаться еще более сложными.
В последние годы в литературе интенсивно накапливаются экспериментальные данные о существенной роли межклеточных слияний в процессах цитодифференцировки, злокачественной трансформации клеток [8, 14, 16]. Судя по разнообразию клеток по одновременному присутствию/отсутствию различных цитогенетических маркеров у постоянных опухолевых линий и ЭСК популяций, такой путь полиплоидиза-ции может вносить существенный вклад и в генетическую гетерогенность рассмотренных нами клеточных популяций. Межклеточные слияния с последующей утратой Хр могли бы объяснить пути формирования групп клеток с модальными классами, близкими к кратным нечетным наборам Хр — три, пента-, а также гексаплоидам (см. табл. 2, линия G1 пассаж 15). Этот процесс мог бы реализоваться путем формирования исходных тетраплоидов, последующим уменьшением в них количества хромосом до околотриплоидного и далее — слиянием последних с диплоидными, с образованием пентаплоидных вариантов
или друг с другом, с формированием окологексаплоидных клеток. Такой вариант событий мог бы объяснить относительно редкую частоту встречаемости тетраплоидных клеток и отсутствие метафаз с 8 наборами хромосом. В то же время очевидно, что такой путь формирования генетической изменчивости преимущественно реализуется в клеточных популяциях исходной линии G1 на 15-м пассаже или ранее, но не в популяциях сублинии ОА.
Полученные данные позволяют сделать следующее заключение. Сублиния ОА с признаками неопластического фенотипа является потомком клетки (клеток) с кариотипом, существенно отличающимся от типичного для преобладающих клеточных клонов исходной эмбриональной клеточной линии G1. Структура клеточных популяций сублинии ОА при пассировании претерпевает дальнейшие изменения, направленные в сторону увеличения доли клеток с уменьшенным числом Хр. Одним из механизмов такого изменения может быть повышенная ломкость Хр в пери-центромерных районах с образованием мелких Хр с центромерами и лишенных центромер больших фрагментов. Можно ожидать, что недифференцированная исходная ЭСК линия GI и дифференцирующаяся в сторону опухолевого фенотипа сублиния ОА отличаются друг от друга по механизмам формирования генетической изменчивости клеток: в случае клеток G1, по-видимому, преобладают процессы полиплоидиза-ции за счет межклеточных слияний, для клеток ОА типичны различные пути утраты отдельных Хр.
ЛИТЕРАТУРА
1. Глазко Т.Т. Кариотипические особенности ряда клональных линий межвидовой гибридомы мышь-норка// Цитология, 1988. Т. 30. № 5. С. 597-605. — 2. Лукаш Л.Л., Яцишина А.П., Шдпала О.В и др. Одержання нових лшш стовбуро-вих кл1тин мипп i вивчення впливу мжрооточення на 1хню карттишчну мшлив1сть in vitro // Физиология и биохимия культурных растений, 2006. Т. 38. № 2. С. 140 —148. — 3. Яцишина А.П., Шдпала О.В., Кочубей Т.П., Лукаш Л.Л. Спонтанна карютитчна еволющя кл!тин in vitro // Фактори експериментально! еволюцп' оргаШзм1в.-Кшв:КВ1Ц, 2004. С. 88-92. — 4. Cahill D.P., Kinzler K.W., Vogelstein В., Lengauer С. // Trends in Biology Science, Millenium Issue, 2000. P. M57-M60. — 5. Cowell J.K. // Chro-mosoma, 1984. Vol. 89. № 4. P.294-320. — 6. Fortuna M.B., Dewey M.J., Fur-manski P. // Int. J. Cancer, 1989. Vol. 44. P. 731-737. — 7. Fry D.G.,Hurtin P.J.,Ma-ker V.M:, McCormick J.J. // Mutat. Res, 1988. Vol. 199. P. 341-351. — 8. Garbade J, Schubert A, Rastan AJ. et al. //Eur J Car-diothorac Surg., 2005. Vol. 28. № 5. P. 685691. — 9. Gilvarry U., Farrell D., Lynch V. et al. j I Cancer Res, 1990. Vol. 50. P. 33903393. — 10. Iwasa Y, Nowak MA, Michor F. Ц Genetics, 2006. Apr;172(4):2557-66. — 11. Michor F, Nowak MA, Iwasa Y. // Curr Pharm Des. 2006; 12(3):261-71. — 12. Ni-colson G.K. // Cancer Res, 1987. Vol. 47. P. 1473-1487. — 13. Ozkindy C„ Mitel-man F. //Hereditas, 1979. Vol. 90. N 1. P. 1~4. — 14. Rizvi A.Z., Swain J.R., Da-vies P.S. II Proc Natl Acad Sci USA, 2006. Vol. 103. № 16. P. 6321-6325. — 15. Straus D.S., Jonasson J., Harris H. // J. Cell Sci., 1977. Vol. 25. P. 73-78. — 16. Vassilopoulos G., Russell D.W. // Curr Opin Genet Dev., 2003. Vol. 13. № 5. P..480-485.
SUMMARY
The comparative analysis of karyotype variability of stem embryonic cell line Gl and obtaining from it the subline OA, which was selected on the trait of the cell neoplastic transformation (independent grow of serum factors), was carried out. The new mechanism of karyotype variability, related with the high fragile in pericentromere region, leading to the appearing of little size chromosomes with centromere heterochromatin blocks and large chromosomes without them was firstly described. It was obtained data, that ancestor cell (cells) for subline AO with neoplastic transformed phenotype was (were) more close to normal polyploid karyotype of mice, than dominated clones of embryonic cell line Gl. The possible mechanisms of cell heterogeneity in chromosome composition were discussed.
