CC BY
38
ТЕЗИСЫ КОНФЕРЕНЦИИ
по прямой и обратной последовательностям согласно рекомендациям производителя. Сопоставление сегментов, выравнивание и сравнение последовательностей нуклеотидов и аминокислот проводили с использованием компьютерной программы MEGA, версия 3.1.
Результаты и обсуждение. Праймеры, фланкирующие участки кДНК, соответствующие кодирующим последовательностям исследуемых генов, содержащих горячие точки прогностически значимых мутаций, разработаны с использованием депонированных в GenBank нуклеотидных последовательностей (см. таблицу).
Праймеры, использованные для амплификации и секвенирования
Hазвание
Последовательность
FLT-ITD-F З' TGT TCA GAC AAG TCT CCC AAC TGC 3'
FLT-ITD-R З' CAT CTT GAG TTC TGA CAT GAG TGC C 3'
FLT-TK-F З' AAG ATC TTC TTT GCT TTG CAT ATC A 3'
FLT-TK-R З' GGA ATG CCA GGG TAA GGA TT 3'
KITl-F З' CCG AAG GAG GCA CTT ACA C 3'
KITl-R З' GCA GGC TCC AAG TAG ATT CA 3'
KIT2-F З' CAA CCA AGG CCG ACA A 3'
KIT2-R З' ACT TAG AAT CGA CCG GCA TT 3'
KITl-SF З' TCA ATG CTG CCA TAG 3'
KIT2-SF З' TGA CTC CCG CCA TCA 3'
KN-F З' GCGTCCCCTTGCCTGGAAAGATACC 3'
KN-R З' TGAGGGACCTTCCGCGGCATCTAT 3'
KN-SF З' ACAGGGTCGGAGGGGGCTCT 3'
KN-SR З' GCATCTATGCGGGCATGGTT 3'
NPMl-F З' AGGAAGCTGAAGAAAAAGCG 3'
NPMl-R З' GGACAGCCAGATATCAACTG 3'
NPMl-Sl З' GGACAAGAATCCTTCAAGAA 3'
NRAS-F З' GTT CAT GGC GGT TCC 3'
NRAS-R З' GGC GTA TTT CTC TTA CCA GT 3'
NRAS-S З' CGG CTG TGG TCC TAA ATC TG 3'
P53-F З' AGT CAG ATC CTA GCG TCG AG 3'
P53-R З' TGG CGG GAG GTA GAC TG 3'
P53-S1 З' ACA TTT TCA GAC CTA TGG AA 3'
P53-S2 З' GCG CCA TGG CCA TCT ACA AG 3'
P53-S3 З' ACC CTT TTT GGA CTT CAG GT 3'
TET-F З' AAC AAA CTG AAA ACG CAA GC 3'
TET-R З' GCC CAC GTC ATG AGA ACT AT 3'
TET-SlR З' CAG ATC CAT CGG CTG AGA 3'
TET-S2F З' CAG AAT ACC CAA TAT CCA 3'
TET-S3F З' TCC AAG GAG GCT TAC ACA 3'
WTl-F З' ACC CAG GCT GCA ATA AGA 3'
WTl-R З' AGG AGG AGT GGA GAG TCA GA 3'
WTl-S З' TAA GCT GTC CCA CTT ACA GA 3'
Частота мутаций (в том числе синонимичных замен) исследуемых генов, определяемых с использованием разработанной тест-системы, оказалась следующей: CDKN2A/ARF - 0%, FLT3 - 23,6%, KIT - 33,3%, NPMl - 1З,2%, NRAS - 11%, TET2 - 20%, TP53 - 11%, WT1 - 4,З%. Шиболее частыми типами мутаций во всех
исследуемых генах, за исключением NPM1, были одно-нуклеотидные замены. При этом наибольшая частота синонимичных, т. е. не приводящих к изменению аминокислотного остатка в кодируемом белке, замен отмечалась в кодирующих последовательностях генов FLT3 и KIT. Помимо них, в гене FLT3 со значимой частотой определялись тандемные дупликации, а в NPM1 преобладающим типом аномалий были тетрануклеотидные инсерции экзона 12. Кроме того, в 80,5% проб, обследованных на мутации экзонов 4—11 ТР53, выявлялась несинонимичная замена C215G, являющаяся полиморфным аллельным вариантом гена.
Заключение. Таким образом, разработанная тест-система позволяет эффективно определять мутации генов FLT3, KIT, NPM1, NRAS, TET2, TP53 и WT1 при ге-нотипировании ОМЛ методом прямого автоматического секвенирования.
Н.Л. Волова, Т.Р. Алексеева
КЛИНИКО-РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ ОПУХОЛЕЙ СРЕДОСТЕНИЯ
ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН, г. Москва, Россия
Нейроэндокринные опухоли (НЭО) - это гетерогенная в морфологическом и биологическом отношении группа совершенно разных новообразований, развивающихся из клеток диффузной нейроэндокринной системы. Частота встречаемости НЭО средостения составляет от 2 до 5 случаев на 100 000 населения.
Целью работы является повышение эффективности диагностики нейроэндокринных опухолей средостения.
Материал и методы. Материалом для исследования послужил анализ клинико-рентгенологических данных обследования 19 больных с НЭО средостения. Диагностический алгоритм включал клиническое, лабораторное, эндоскопическое, рентгенологическое исследования, МСКТ в стандартном режиме и с внутривенным контрастированием. При морфологическом изучении опухолей проводились гистологическое, электронно-микроскопическое и иммуногистохимическое исследования.
Результаты и обсуждение. Среди 19 изученных больных мужчин было 15 (79%), женщин 4 (21%). Наибольшее число составляют пациенты в возрасте до 50 лет — 73,7%. Выявляется 2 пика заболеваемости: 1-й (31,6%) в диапазоне возрастов до 30 лет, 2-й (31,6%) - в 41—50 лет. Отмечено что, при локализации НЭО в средостении клиническая симптоматика в 52,6% наблюдений сопровождалась развитием нейроэндокрин-ных нарушений, из них в виде карциноидного синдрома в 15,8% случаев и АКТГ-эктопированного синдрома в 36,8%.
Проведено сопоставление рентгенологических признаков НЭО средостения (размер, структура, характер контуров и поверхность) с результатами ИГХ-исследований. При этом было установлено, что, несмотря на большие размеры опухолевого узла (до 11,5 см), он сохранял четкие контуры, ровную поверхность и однородную структуру - индекс пролиферативной активности < 2 (G1). В то время как независимо от размеров первичной опухо-
BS
РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 4, 2013
ли, если выявляются лучевые признаки злокачественности: нечеткие контуры, мелкобугристая поверхность и неоднородная структура - при приведении ИГХ индекс пролиферативной активности устанавливался > 20 ^3). Только в одном наблюдении индекс пролиферативной активности первичной опухоли не удалось уточнить — Gх.
Метастазы были обнаружены в 75% наблюдений, из них как первое проявление заболевания в 8,3% (при G3), в момент установления диагноза в 50% (при G1, G2, G3) и через 2 года и 8 лет в 16,7% случаев (при G2 и Gх). Следует отметить, что рецидивы опухолей диагностированы в 25% случаев. При G2 прогрессирование опухолевого процесса обнаружено через 1 год после радикальной операции; при G1 через 2 и 3 года. В редких случаях при G2, несмотря на большие размеры опухолевого узла (более 13 см), признаков прогрессирования опухолевого заболевания в виде рецидивов и метастазов не выявлялось в течение двухлетнего периода наблюдения.
Таким образом, при НЭО средостения независимо от результатов морфологического исследования необходимо проведение ежегодного контрольного рентгенологического исследования для своевременного выявления прогрессирования заболевания.
М.В.Горячева, Л.А.Чурилова, Г.И.Шумахер, Т.Ю. Травникова, Н.А.Сенчева, М.П. Кузнецова, К.В. Горячева
ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЦИТОКИНЫ У БОЛЬНЫХ С ВЕРТЕБРОГЕННЫМИ ПОЯСНИЧНО-КРЕСТЦОВЫМИ РАДИКУЛОПАТИЯМИ В СТАДИИ ОБОСТРЕНИЯ
ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», НУЗ «Отделенческая клиническая больница ст. г. Барнаула»; КГБУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер», Алтайский филиал ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН, г. Барнаул, Россия
Формирование острых радикулопатий вертеброген-ного происхождения сопровождается явлениями локальной ишемии в области поврежденного позвоночно-двигательного сегмента (ПДС), что рассматривается в последнее время как один из ведущих патогенетических механизмов заболевания. Дисциркуляторные явления проявляются в зоне пораженных ПДС и в сопряженных сегментах снижением локального кровотока в системе эпидуральных венозных сплетений, что приводит к развитию явлений венозного стаза и локального эпидурита. Эти явления сопровождаются проявлением системного воспалительного процесса в периферическом сосудистом русле и эндотелиальной дисфункцией. Воспалительный процесс и дисфункция эндотелия периферических сосудов сопровождаются увеличением концентрации в сыворотке крови таких биохимических маркеров повреждения периферических сосудов, как СРБ, эндотелин-1, молекулы адгезии сосудистого эндотелия 1 ^УСАМ-1) и молекулы межклеточной адгезии-1(8ТСАМ-1).
Цель настоящего исследования — определить концентрацию в сыворотке периферической крови таких провоспалительных цитокинов, как интерлейкин-1р и
интерлейкин-2, у больных с пояснично-крестцовыми радикулопатиями (ПКР) и другими неврологическими синдромами поясничного остеохондроза в стадии обострения.
Исследование проведено на базе неврологического отделения Отделенческой клинической больницы станции г. Барнаул. Для проведения исследования было получено разрешение локального этического комитета. Обследовано 146 больных с различными неврологическими синдромами поясничного остеохондроза (ПОХ), из них мужчин 94 (64%), женщин 52 (36%) в возрасте от 20 до 54 лет (средний возраст 41,1 ± 9, 7 года). Всем больным проводилось стандартное неврологическое и вертеброневрологическое обследование по методикам Я.Ю. Попелянского и Ф.А. Хабирова. Из дополнительных методов обследования применялись: классическая рентгенография пояснично-крестцового отдела позвоночника, КТ/МРТ поясничного отдела позвоночника.
В соответствии с целью исследования больные с неврологическими синдромами ПОХ были разделены на 3 сопоставимые по возрасту, полу и однородности клинической симптоматики группы. 1-ю группу составили 77 (52%) больных с ПКР. Среди них компрессия корешка LIV определялась у 3 (4%) больных, LV — у 13 (17%) больных, SI - у 27 (35%) больных, бирадикулярный синдром (LV, SI) выявлялся у 34 (44%) больных. 2-ю группу составили 34 (23%) больных с синдромом люмбалгии, 3-ю группу — 35 (24%) с синдромом люмбоишиалгии.
Контролем служили показатели 32 человек (4-я группа) без неврологических проявлений ПОХ, сопоставимых по возрасту и полу с пациентами основных групп.
Критериями исключения для отбора в контрольную и основные группы были заболевания: ИБС, гипертоническая болезнь, гиперлипидемия различного генеза, синдром ускоренного СОЭ, заболевания сосудов нижних конечностей, хронические инфекционно-вирусные и аутоиммунные заболевания, заболевания ЖКТ и ЛОР-органов в стадии обострения, для чего всем пациентам проводили клинико-биохимическое обследование: общий анализ крови и мочи, биохимический анализ крови с определением фибриногена и протромбинового индекса, липидного спектра крови, ЭКГ, дуплексное сканирование сосудов нижних конечностей, консультацию терапевта.
Концентрацию интерлейкина-^ и интерлейкина-2 в сыворотке крови определяли твердофазным имму-ноферментным методом с помощью коммерческих наборов («Bender MedSystem», Австрия (BMS224, BMS 221)), предназначенных только для исследовательских целей.
Статистическую обработку полученных данных проводили с применением непараметрических методов анализа (после проверки распределения установленных величин на нормальность). Различия средних величин количественных параметров между группами больных определяли по ^-критерию Манна—Уитни. Критерием статистической достоверности получаемых результатов мы считали общепринятую в медицине величину p < 0,05. Результаты представлены графически в виде гистограмм или в таблице в форме соответствующего значения медианы (М) для каждой группы обследованных, с указанием доверительного интервала для каждого случая. Статистический анализ проводили с применением пакета программ Statistica, версия 6,1.
В результате исследования установлено, что у больных с ПКР достоверно увеличивается по сравнению с контрольной группой (p < 0,05) концентрация
