CC BY
26
VSP_2_2 0 07_co11 .qxd 10.04.2007 23:40 Page 151 q э—
Краткие сообщения
И.А. Громов, Е.Л. Семикина, Л.С. Намазова
Научный центр здоровья детей РАМН, Москва
Клинико-иммунологическое значение определения экспрессии мембранных рецепторов у детей с атопической бронхиальной астмой при проведении аллергенспецифической иммунотерапии
Бронхиальная астма (БА) остается одной из актуальных медико-социальных проблем в педиатрии. И, несмотря на разработку и внедрение новых лечебных технологий, появление новейших высокоэффективных противоастмати-ческих лекарственных средств, пациенты продолжают умирать от астмы, причём примерно в равной степени от лёгкой, средне-тяжёлой или тяжёлой, что, безусловно, говорит о неадекватности проводимой терапии. В основе заболевания лежит хроническое аллергическое воспаление бронхов, сопровождающееся их гиперреактивностью и периодически возникающими приступами затруднённого дыхания или удушья в результате бронхиальной обструкции, обусловленной бронхоконстрикцией, гиперсекрецией слизи, отёком стенки бронхов [1]. В настоящее время активно обсуждается концепция персистирующего воспаления, которая обосновывает применение при бронхиальной астме постоянной адекватной тяжести базисной терапии [3]. В то же время постоянно совершенствуются методы патогенетической терапии, позволяющие нормализовать изменённый при астме иммунный ответ организма. Важнейшая роль в регуляции иммунного ответа отводится растворимым медиаторам, называемым лимфо- и монокинами, интерлейкинами (ИЛ) или цитоки-нами. Детальное изучение цитокинов показывает, насколько разноплановую роль играют они в иммунных воспалительных реакциях.
Аллергенспецифическая иммунотерапия (АСИТ) является единственным методом патогенетической терапии аллергических заболеваний, воздействующим на все звенья аллергического процесса и обладающим длительным профилактическим эффектом. АСИТ приводит к угнетению ^Е-опосредованной аллергической реакции, уменьшает выраженность аллергического воспаления и неспецифическую тканевую гиперреактивность [2]. Однако сведения о воздействии этого способа лечения на субпопуляции лимфоцитов остаются мало изученными и требуют дальнейшего исследования, а описаний экспрессии цитокино-вых рецепторов у детей с БА, в том числе на фоне проведения АСИТ, в доступной нам литературе не встретились. Определение субпопуляций лимфоцитов периферической крови, а также экспрессии рецепторов к цитокинам (ИЛ 2, ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 8, ИЛ 10 и интерферону (ИНФ) 7) и ^Е на поверхности лимфоцитов периферической крови прово-
дили методом проточной цитофлюорометрии в реакции прямой иммунофлюоресценции. Использовано оборудование и реактивы фирмы BD Biosciences, США — лазерный анализатор FASC Calibur, программа Cell Quest [4]. Обследовано 70 детей в возрасте от 7 до 17 лет с лёгкой атопической персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии: 40 детей имели бытовую и пыльцевую сенсибилизацию и 30 детей — только пыльцевую сенсибилизацию. Кроме того, у 20 из обследованных детей были оценены субпопуляции лимфоцитов крови и экспрессия рецепторов к цитокинам и IgE на фоне проведения АСИТ. Группа сравнения включала 12 детей от 7 до 17 лет, без атопических заболеваний.
Для исследования использовалась венозная кровь, взятая в пробирку с ЭДТА (Becton Dickinson Vacutainer Systems), из которой в дальнейшем на градиенте плотности с фиколл-верографином выделялись лимфоциты (с помощью центрифугирования при 1500 об/мин в течение 30 мин при t = 4°С). Выделенные лимфоциты отмывались раствором Cell Wash центрифугированием при 1200 об/мин при t = 4°С в течение 10 мин. Затем полученные лимфоциты метились моноклональными антителами (Simultest Imk Plus, Becton Dickinson). Клетки инкубировались в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин, затем отмывались центрифугированием с 2 мл Cell Wash и ресуспензировались в 0,5 мл Cell Wash. Анализ образцов проводился на проточном цитометре. Для сбора данных использовалась программа Simulset. Исследовалось лимфоцитарное окно, согласно типичному расположению популяций лимфоцитов, выявленных по светорассеянию и флуоресцентной метке LeukoGate (CD 45/14).
У детей с атопической лёгкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии субпопуляции лимфоцитов периферической крови не отличались от нормы. При этом у детей с БА отмечалось достоверное повышение экспрессии рецептора к IgE (7,6 ± 0,6%), в то время как у здоровых детей этот показатель составил 5,6 ± 0,44% (р < 0,05). Также у детей с БА отмечалось достоверное повышение экспрессии рецептора:
• к ИЛ 2 (за счёт высокоафинной субъединицы CD 122) — 22,17 ± 0,53%, по сравнению с экспрессией у здоровых детей — 16,84 ± 1,9%, р < 0,05;
О
151
е
• к ИЛ 4 — 5,46 ± 0,37% (у здоровых детей 3,7 ± 0,32%), р < 0,005;
• к ИЛ 5 9,3 ± 0,43% (у здоровых детей 5,3 ± 0,55%), р < 0,001;
• к ИЛ 8 29,6 ± 0,66% (у здоровых детей 24,3 ± 2,17%), р < 0,05.
У детей с БА отмечалось также достоверное понижение экспрессии рецептора к ИЛ 10 (21,3 ± 0,6% по сравнению с 27,2 ± 2% у здоровых детей, р < 0,05). При этом субпопуляции Т лимфоцитов и экспрессия рецепторов к цитоки-нам и ^Е не отличались у детей, имевших пыльцевую и бытовую сенсибилизацию, по сравнению с детьми, у которых была выявлена только пыльцевая сенсибилизация.
При анализе субпопуляций лимфоцитов периферической крови у детей с бронхиальной астмой на фоне проведения АСИТ популяция цитотоксических клеток ^ 8), Т-хелпе-ров ^ 4), естественных киллеров ^ 16/56) достоверно не изменялись.
В то же время субпопуляция В клеток (CD 22) до проведения АСИТ была на нижней границе нормы (7,49 ± 0,96%), а после проведения АСИТ она достоверно увеличилась до 11,71 ± 1,27% (р < 0,05).
При анализе экспрессии рецептора к ^Е ^ 23) и ИЛ 2 (низкоафинной субъединицы рецептора CD 25 и высоко-афинной субъединицы CD 122) у детей с бронхиальной астмой на фоне проведения АСИТ отмечалось достоверное снижение экспрессии рецептора к ИЛ 2 за счёт высо-
коафинной субъединицы CD 122 с 22,31 ± 1,5% до 17,59 ± 1,36% р < 0,05, в то время как низкоафинная субъединица рецептора к ИЛ 2 ^ 25) достоверно не изменялась.
Также на фоне проведения АСИТ отмечается достоверное повышение экспрессии рецептора к ^Е (CD 23) с 7,0 ± 0,87% до 10,79 ± 1,18% (р < 0,05).
При анализе динамики экспрессии цитокиновых рецепторов на фоне АСИТ отмечалось достоверное повышение экспрессии рецептора к ИЛ 4 с 4,88 ± 0,73% до 7,12 ± 0,69% (р < 0,05), экспрессии рецептора к ИЛ 5 с 9,34 ± 0,8% до 15,6 ± 2% (р < 0,02) и экспрессии рецептора к ИЛ 10 с 23,85 ± 1,25% до 29,03 ± 1,39% (р < 0,02). Отмечалась тенденция к повышению экспрессии рецептора к ИФН 7 с 64,5 ± 2,25 до 67,2 ± 1,6%.
Таким образом, учитывая, что у детей с БА даже в периоде ремиссии сохраняется повышенная экспрессия рецепторов на поверхности лимфоцитов периферической крови к ^Е, ИЛ 2, ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 8 и снижение экспрессии рецептора к ИЛ 10, что можно трактовать, как свидетельства перманентной активации иммунной системы по аллергическому типу, необходимо назначение им длительной базисной терапии. Отмеченное в ходе исследования при проведении АСИТ повышение уровня В клеток, увеличение экспрессии рецепторов к ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 10, понижение экспрессии рецептора к ИЛ 2 у детей с БА можно использовать для оценки её эффективности.
V
3
VO
о
о
о
О)
га
а
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Балаболкин И.И., Намазова Л.С., Ковальчук О.С. и др. // Иммунология — 1994. — № 1. — С. 33-36.
2. Горячкина Л.А., Астафьева Н.Г. Специфическая иммунотерапия атопических заболеваний // Русс. мед. журн. — 2002. — Т. 10, № 16. — С. 721-724.
3. GINA. Global strategy for asthma management and prevention. Bethesda (MD): National Institutes of Health (National Heart, Lung
and Blood Institute). — 2006. http://www.ginasthma.org (no состоянию на 01.12.2006).
4. Bonifase S., Koscher V., Mamessier E. Assesment of T lymphocyte cytokine production in induced sputum from astmatics: a flow cytometry study // Clin. Exp. Allergy. — 2003. — № 33. — R 1238-1243.
152
Е.И. Ермолаева
Саратовская областная детская клиническая больница
Значение экологических и социальных факторов в развитии язвенной болезни у детей пубертатного возраста
Язвенная болезнь остается одной из наиболее распространённых нозологических форм в современной детской гастроэнтерологии. С установлением значимости Helicobacter pylori (H. pylori) в развитии данной патологии представления о механизмах формирования язвенной болезни, методах её лечения и профилактики существенно изменились. Однако закономерно встаёт вопрос, почему на фоне H. pylori пептический дефект формируется у 15-30% обследованных детей, в то время как в 70 - 80% случаев данный процесс не реализуется. В связи с изложенным такие этиологические аспекты язвенной болезни, как неблагоприятная наследственность, социально-
психологическая обстановка и экология, нарушения гигиены труда и отдыха, не утратили своей актуальности. Целью исследования явилось изучение влияния экологических и социальных факторов на вероятность развития язвенной болезни у детей пубертатного возраста. Влияние смены социально-экологической и психологической обстановки на развитие и течение язвенной болезни оценивалось у 220 детей, переехавших из сельской местности с благополучной экологической обстановкой на постоянное место жительства в город Балаково с высоким уровнем техногенной нагрузки. В городе производят продукцию крупные предприятия химии и нефтехимии, маши-
