CC BY
71
Обмен опытом
Д.С. Бушменков1, А.Н. Миронов1, А.А. Романова1, А.А. Цаан1, И.В. Фельдблюм2
1 НПО «Микроген», Москва
2 Пермская государственная медицинская академия им. Е.А. Вагнера
Клиническое исследование реактогенности, безопасности и иммуногенности живой моновалентной гриппозной вакцины (штамм А/17/ Калифорния/2009/38 — H1N1) у детей
Контактная информация:
Бушменков Дмитрий Сергеевич, начальник отдела доклинических исследований Управления регистрации и медицинских исследований НПО «Микроген»
Адрес: 115088, Москва, ул. 1-я Дубровская, д. 15, тел.: (495) 790-77-73, e-mail: d.s.bushmenkov@microgen.ru Статья поступила: 05.07.2010 г., принята к печати: 16.08.2010 г.
101
Результаты проведенных доклинических, а также клинических исследований на добровольцах в возрасте 18-60 лет позволили зарегистрировать в Российской Федерации разработанную НПО «Микроген» вакцину «ИНФЛЮВИР» — живую моновалентную вакцину для профилактики гриппа А/H1N1, штамм А/17/Калифорния/2009/38 (H1N1), и своевременно провести прививочную кампанию. Это способствовало снижению уровня заболеваемости гриппом А/H1N1 в России и предотвращению развития его осложнений. Для расширения показаний к применению вакцины «ИНФЛЮВИР» были проведены клинические исследования в разных возрастных группах детей. По результатам исследования сделан вывод о хорошей переносимости, низкой реактогенности, безопасности и выраженных имму-ногенных свойствах вакцины «ИНФЛЮВИР», что позволит внести изменения в действующую нормативную документацию и применять вакцину «ИНФЛЮВИР» у детей разного возраста для профилактики гриппа типа A/H1N1.
Ключевые слова: дети, грипп, вирус А/И1Ы1, живая гриппозная вакцина, переносимость, безопасность, иммуногенность.
В настоящее время в России приоритетным средством специфической профилактики гриппа являются вакцины. К настоящему времени накоплен большой опыт применения как живых, так и инактивированных гриппозных вакцин. Эффективность вакцинопрофилактики
зависит от многих факторов. Среди них особенно значимы такие показатели, как уровень популяционного иммунитета и степень иммунного ответа на вакцинацию, процент охвата прививками в отдельных коллективах и населения в целом [1, 2].
D.S. Bushmenkov1, A.N. Mironov1, A.A. Romanova1, A.A. Tsaan1, I.V. Feldblyum2
1 NPO «Microgen», Moscow
2 Ye.A. Vagner Perm State Medical Academy
Clinical studies of reactogenicity, safety
and immunogenicity of live monovalent influenza vaccine
(strain А/17/California/2009/38 — H1N1) in children
Results of performed pre-clinical and clinical studies with volunteers 18-60 years old allowed registration of vaccine «INFLUVIR» (live monovalent vaccine for the prophylaxis of influenza A/H1N1, strain A/17/California/2009/38 (H1N1), developed by NPO«Microgen» in Russian Federation so timely vaccination campaign was performed. As a result, the level of morbidity with influenza A/H1N1 in Russia was decreased, and development of complication was prevented. Clinical studies in different groups of children were performed for the purpose of widening indications for vaccine «INFLUVIR» administration. According to the results of studies vaccine «INFLUVIR» has good tolerability and safety, low reactogenicity, and significant immunogenicity. This fact will allow changing of present normative documentation and administration of«INFLUVIR»in children of different age for prophylaxis of influenza A/H1N1.
Key words: children, influenza, virus A/H1N1, live influenza vaccine, tolerability, safety, immunogenicity.
Обмен опытом
102
Живые гриппозные вакцины изготавливаются из аттенуированных (ослабленных) штаммов вируса гриппа и вводятся перорально или интраназально. В последнем случае требуется меньше времени от момента вакцинации до развития иммунного ответа за счет формирования местного секреторного иммунного ответа. При этом спектр воздействия живых вакцин значительно шире, чем у инактивированных, так как происходит индукция других звеньев (помимо местного) иммунного ответа — клеточного и гуморального. Живая гриппозная вакцина обладает уникальным свойством формировать «коллективный иммунитет», что позволяет защитить от гриппа непривитую часть населения [2, 3].
Объявление ВОЗ о пандемии гриппа (от 11.06.2009 г.) в очередной раз подчеркнуло необходимость проведения экстренной и широкомасштабной вакцинации, которая, как известно, является эффективным способом противостояния распространению заболевания, сводя к минимуму риск развития осложнений. Эксперты ВОЗ считают, что живая гриппозная вакцина — оптимальный путь вакцинопрофилактики в период пандемии гриппа [4, 5]. Технологией производства таких вакцин владеют только 2 страны в мире — США и Россия.
В филиале НПО «Микроген» «Иркутское предприятие по производству бактерийных препаратов» на основе технологии производства сезонной (А/Н^1, A/Н3N2 и В) и препандемической ^N2) живых гриппозных вакцин была разработана живая моновалентная гриппозная вакцина «ИНФЛЮВИР» для профилактики пандемического гриппа А/Н^1. Проведенные доклинические исследования показали, что применение вакцины «ИНФЛЮВИР» у лабораторных животных не влияет на их внешний вид, общее состояние и поведение, на морфологию форменных элементов и биохимические параметры крови, основные физиологические функции их организма, не вызывает патоморфологических изменений. Все это свидетельствует о хорошей переносимости и безвредности препарата. Двукратная иммунизация не вызывала гибели животных, индуцировала развитие стойкого иммунного ответа и защищала 100% лабораторных животных от инфицирования диким вирулентным штаммом вируса гриппа А/Калифорния/7/2009 (Н^1) [6]. Для изучения реактогенности, безопасности и иммуноген-ности пандемической вакцины проведено исследование на здоровых добровольцах в возрасте от 18 до 60 лет. Клиническое исследование проводили в 2 исследовательских центрах: НИИ гриппа СЗО РАМН (Санкт-Петербург) и филиале ФГУ «48 ЦНИИ Министерства обороны Российской Федерации» — «Вирусологический центр» (Сергиев Посад). В исследовании участвовали 120 здоровых добровольцев в возрасте 18-60 лет, по 60 человек в каждом центре [6-8].
В ходе исследования вакцины «ИНФЛЮВИР» отмечены хорошая переносимость, низкая реактогенность, высокая иммуногенность, а также безопасность как для самих прививаемых, так и для окружающих. Полученные данные позволили зарегистрировать вакцину «ИНФЛЮВИР» и рекомендовать ее для применения на территории Российской Федерации с целью специфической профилактики здоровых людей в возрасте от 18 до 60 лет [6-8]. И хотя люди к вирусам гриппа восприимчивы в любом возрасте, на протяжении многих лет группой риска остаются дети и подростки.
Ниже представлены результаты вакцинации детей в возрасте от 6 до 18 лет вакциной «ИНФЛЮВИР» с оценкой ее реактогенности, безопасности и иммуногенности. Исследование проводили на базе педиатрических клиник ПГМА им. Е. А. Вагнера (Пермь). В исследование были включены 33 ребенка в возрасте 6-12 лет (перед 2-й вакцинацией 17 родителей без объяснения причины отозвали информированное согласие) и 30 детей в возрасте от 12 до 17 лет (перед 2-й вакцинацией четверо родителей отозвали информированное согласие без объяснения причины). Длительность исследования составила 31 сут.
Перед началом вакцинации родители и дети были проинформированы о целях исследования и возможных рисках. После подписания информированного согласия ребенком и его родителем каждый ребенок был осмотрен врачом-исследователем, неврологом и ЛОР-врачом. У всех включенных в исследование детей был собран анамнез, проведена термометрия, измерены артериальное давление, ЧСС, взяты пробы крови (из вены) и мочи для клинических, биохимических и иммунологических исследований. У девушек фертильного возраста проводили тест на беременность. В исследование не включали:
• детей, родители которых не дали письменное информированное согласие на участие в клиническом исследовании;
• детей и их родителей, не способных выполнять требования протокола (т. е. заполнять Дневник самонаблюдения, приходить на контрольные визиты);
• детей с аллергическими реакциями на куриный белок;
• детей с аллергическими реакциями на предшествующую вакцинацию любой гриппозной вакциной;
• детей с признаками острых инфекционных, и/или неинфекционных, и/или обострения хронических заболеваний на момент включения в исследование.
Все включенные в исследование дети были привиты вакциной «ИНФЛЮВИР» интраназально двукратно с интервалом 10 сут. Схема вакцинации была определена по результатам исследования «Оценка реактогенности, безопасности и иммуногенности вакцины гриппозной живой моновалентной, штамм А/17/Калифорния/2009/38 (Н^1) на добровольцах в возрасте 18-60 лет»*.
Оценку реактогенности и безопасности вакцины проводили по критериям выраженности и связи:
• с вакцинацией наблюдаемых местных и системных реакций в течение 7 дней после 1-го и 2-го введения (день вакцинации и 6 последующих сут);
• вакцинацией зафиксированных родителями/детьми местных и системных реакций (по данным Дневников самонаблюдения).
Безопасность определяли лабораторно-инструментальными методами по показателям гематологического (уровень гемоглобина, цветовой показатель, СОЭ, форменные элементы крови, лейкоцитарная формула) и биохимического (сывороточное содержание АЛТ, АСТ, щелочной фосфатазы, билирубина, общего белка, мочевины, креатинина, С-реак-тивного белка, глюкозы) анализов крови, клинического анализа мочи, уровню общего в сыворотке крови. Определение иммуногенности вакцины «ИНФЛЮВИР» включало оценку состояния местного, клеточного и гуморального иммунных ответов на 10-е и 31-е сут исследования. Местный иммунный ответ оценивали по уровню секреторного 1§А в носовых смывах методом иммуноферментного анализа (ИФА), состояние клеточно-
Неопубликованные данные.
го иммунитета — методом проточной цитофлуориметрии по уровню Т хелперов ^3+, CD4+) и цитотоксических Т лимфоцитов ^3+, CD8+), гуморальный — по фактору сероконверсии, среднему геометрическому титру антител, уровням сероконверсии и серопротекции в сыворотке крови привитых в реакциях торможения гемаг-глютинации (РТГА) и микронейтрализации (РМН). РТГА выполняли с куриными эритроцитами в соответствии с МУ 3.3.2.1758-03 и международными требованиями. Сыворотку крови добровольцев перед постановкой РТГА обрабатывали RDE. РМН проводилась с вирусом гриппа А/Калифорния/04/2009вш в культуре клеток MDCK. Титры нейтрализующих антител выражали как величину, обратную наибольшему разведению образца, дающего нейтрализацию 50% тканевых цитопатических инфекционных доз вируса.
Все привитые добровольцы чувствовали себя хорошо как после 1-й, так и после 2-й вакцинации. Изучение реакто-генности показало следующее:
• в группе детей в возрасте 6-12 лет местные реакции развились у 2 (6,1%) добровольцев в виде отечности слизистой оболочки носа и небных дужек, насморка и катаральных явлений в носоглотке;
• в группе 12-18-летних у 8 (26,7%) добровольцев отмечены местные реакции: катаральные явления в носоглотке, насморк, першение в горле и сухость в носу; у 4 (13,3%) — системные реакции: головная боль, головокружение и повышенная утомляемость.
Все местные и системные реакции были выражены в слабой степени, не вызывали ухудшения самочувствия
привитых, проходили самостоятельно, без применения лекарственных препаратов. У 1 ребенка в возрастной группе 6-12 лет местные реакции в виде отечности слизистой носа и насморка были средней степени выраженности.
Изменений показателей клинического и биохимического анализов крови, связанных с вакцинацией, в динамике наблюдения не отмечено (табл. 1-4).
В динамике наблюдения у части детей (у 13 — в возрасте 12-17 лет и у 11 — в возрасте 6-12 лет) до вакцинации отмечали высокий уровень ^Е (> 130 МЕ/мл). Возможно, это связано с предрасположенностью к аллергическим заболеваниям и нерациональным питанием. К концу наблюдения у них происходило снижение сыворочного уровня ^Е, что свидетельствует об отсутствии аллергизи-рующих свойств вакцины «ИНФЛЮВИР» (табл. 5). Иммуногенность вакцины изучали путем оценки состояния местного, клеточного и гуморального иммунитета. При исследовании местного иммунного ответа отмечали постепенное увеличение уровня ^ в носоглоточных смывах как у детей в возрасте 12-17 лет, так и в возрасте 6-12 лет, соответственно, с 10,1 ± 5,5 и 11,8 ± 15,4 МЕ/мл (до вакцинации) до 38,5 ± 8,8 и 16,7 ± 17,4 МЕ/мл (на 10-е сут) и до 42,1 ± 5,5 и 23,6 ± 20,4 МЕ/мл (после двукратной иммунизации, на 31-е сут).
Результаты оценки клеточного иммунитета подтверждают влияние вакцины на клеточное звено иммунного ответа. К 10-м сут поствакцинального периода отмечали рост числа как CD4+, так и CD8+ лимфоцитов. К 31-м сут исследования наблюдалось снижение уровня обе-
ФГУП "НПО "МИКРОГЕН"
ЛИДЕР ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
Разработчик и производитель высокоэффективных вакцин, в том числе входящих в Национальный календарь профилактических прививок
гриппозные (живая, инактивированная и субъединичная), паротитная, коревая, паротитно-коревая, БЦЖ, БЦЖ-М, АКДС, АКДС-Геп В, краснушная, антирабическая, бруцеллезная, сыпнотифозная, гонококковая, против гепатита В, клещевого энцефалита (ЭнцеВир®), АДС, АДС-М, АД и АС анатоксины
Современная научно-исследовательская база и производственные мощности
13 филиалов
3 академика, 13 профессоров, 26 докторов наук и 166 кандидатов наук более 15 оригинальных препаратов в стадии выхода на рынок
Единственный в России разработчик и производитель вакцин против гриппа птиц
Лидер рынка по объему производства среди российских фармацевтических компаний
Производитель более 400 наименований иммунобиологических препаратов и готовых лекарственных средств
Вакцины и анатоксины Сыворотки
Пробиотики и бактериофаги Препараты крови, иммуноглобулины Питательные среды Аллергены и аллергоиды Тест-системы и диагностикумы Готовые лекарственные средства
ФГУП «НПО «Микроген» М3 РФ г. Москва, 115114, ул. Летниковская д.10 стр.4.
тел.: (495)790-77-73 факс: (495)783-88-04 www.microgen.ru
Лицензия № 99-04-000097
Обмен опытом
104
Показатель (норма) До вакцинации 10-е сут 31-е сут
Гемоглобин, г/л (120-175) 139 ± 6,3 141 ± 6,4 141 ± 6,4
Цветовой показатель 29,4 ± 8,2 29,6 ± 8,3 29,7 ± 8,3
Эритроциты, Х1012/л (3,0-5,6) 4,8 ± 3,9 4,6 ± 3,8 4,8 ± 3,9
Лейкоциты, Х109/л (4,0-9,0) 6,4 ± 4,5 6,1 ± 4,4 6,4 ± 4,5
• палочкоядерные, % (0-6) 2,3 ± 2,7 2,6 ± 2,9 2,3 ± 2,7
• сегментоядерные, % (41-72) 55,5 ± 9,1 62,1 ± 8,9 67,3 ± 8,6
Эозинофилы, % (0-6) 1,4 ± 2,1 1,2 ± 2,0 1,0 ± 1,8
Лимфоциты, % (18-40) 34,0 ± 8,6 30,2 ± 8,4 25,6 ± 8,0
Моноциты, % (2-11) 6,6 ± 4,5 3,9 ± 3,5 4,2 ± 3,7
СОЭ, мм/ч (0-20) 5,3 ± 4,1 2,4 ± 2,8 7,7 ± 4,9
Примечание.
Здесь и в табл. 2-4 показатели представлены в виде среднего арифметического показателя ± стандартное отклонение.
Таблица 2. Показатели клинического анализа крови у детей в возрасте 6-12 лет
Показатель (норма) До вакцинации 10-е сут 31-е сут
Гемоглобин, г/л (120-175) 100 ± 5 106 ± 5 104 ± 5
Цветовой показатель 22,2 ± 1,1 23,7 ± 1,2 24,6 ± 1,3
Эритроциты, Х1012/л (3,0-5,6) 3,6 ± 0,2 3,7 ± 0,2 3,6 ± 0,2
Лейкоциты, Х109/л (4,0-9,0) 5,1 ± 0,3 5,3 ± 0,3 8,0 ± 1,1
• палочкоядерные, % (0-6) 1,5 ± 0,2 1,5 ± 0,2 1,4 ± 0,1
• сегментоядерные, % (41-72) 34,5 ± 3,0 43,4 ± 2,2 42,7 ± 2,2
Эозинофилы, % (0-6) 1,8 ± 0,2 3,0 ± 0,5 2,1 ± 0,4
Лимфоциты, % (18-40) 28,4 ± 1,7 31,1 ± 1,7 36,0 ± 2,0
Моноциты, % (2-11) 5,3 ± 0,6 4,4 ± 0,3 3,6 ± 0,2
СОЭ, мм/ч (0-20) 4,1 ± 0,7 5,1 ± 0,5 5,4 ± 0,5
Таблица 3. Биохимические показатели крови у детей в возрасте 12-17 лет
Показатель (норма) До вакцинации 10-е сут 31-е сут
Глюкоза, ммоль/л (3,5-5,5) 4,4 ± 3,7 4,3 ± 3,6 4,4 ± 3,7
АЛТ, Ед/л (< 40) 39,7 ± 8,9 29,4 ± 8,3 29,1 ± 8,3
АСТ, Ед/л (< 40) 36,4 ± 8,8 28,9 ± 8,2 33,6 ± 8,6
Билирубин общий, мкмоль/л (< 20) 9,7 ± 5,4 12,5 ± 6,1 15,4 ± 6,6
Мочевина, ммоль/л (2,2-7,2) 4,2 ± 3,6 4,3 ± 3,7 4,1 ± 3,6
Общий белок, г/л (65-85) 72,6 ± 8,1 78,8 ± 7,5 80,7 ± 7,2
С-реактивный белок, мг/л (< 0,5) 0 0 0
Таблица 4. Биохимические показатели крови у детей в возрасте 6-12 лет
Показатель (норма) До вакцинации 10-е сут 31-е сут
Глюкоза, ммоль/л (3,5-5,5) 4,4 ± 3,7 4,3 ± 3,6 4,4 ± 3,7
АЛТ, Ед/л (< 40) 23,0 ± 1,8 26,3 ± 1,3 24,8 ± 1,3
АСТ, Ед/л (< 40) 22,9 ± 1,3 35,1 ± 2,6 23,8 ± 1,3
Билирубин общий, мкмоль/л (< 20) 9,4 ± 0,5 10,6 ± 0,5 10,4 ± 0,6
Мочевина, ммоль/л (2,2-7,2) 3,4 ± 0,2 3,2 ± 0,2 2,8 ± 0,1
Общий белок, г/л (65-85) 60,7 ± 2,8 63,3 ± 2,6 58,4 ± 2,6
С-реактивный белок, мг/л (< 0,5) 0 0 0
Возрастная группа Сроки определения, абс. (%)
до вакцинации, n = ЗО/ЗО 10 сут, n = 30/30 31 сут, n = 13/26
б-12 лет 20 (б7) 17 (57) 17 (б5)
12-17 лет 17 (57) 17 (57) 8 (б2)
Рис. 1. Динамика содержания CD4+ и CD8+ Т лимфоцитов у детей разного возраста при использовании вакцины «ИНФЛЮВИР»
Рис. 2. Динамика показателей гуморального иммунитета у детей разного возраста при использовании вакцины «ИНФЛЮВИР»
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
S3 ,
26,6
3,1
6,7 6
1,7 £^^-0
20,5
15,7
ш
,9 46, 1
10 cут 31 cут 10 cут 31 cут 10 cут 31 cут ут о 31 S' 0 S' 0
Уровень Уровень Фактор Среднее
еероконвереии, ееропротекции, еероконвереии геoметpичеcкoе
значение титра антител
□ 12-18 лет
6-12 лет
59
41
10
105
%
%
их фракций Т лимфоцитов, что связано с вакцинацией и обусловлено реакцией клеточного звена иммунитета на введение вакцинного препарата (формированием клеточной памяти) (рис. 1).
Полученные при изучении гуморального иммунитета в РТГА данные показали, что после однократной число лиц с защитным уровнем антител (серопротекция — титр > 1:40 [9]) составил от 45 до 55%, после 2-й вакцинации уровень серопротекции увеличился до 83% (рис. 2). Величина сероконверсии после 1-й иммунизации достигала 41%, проведение повторной
позволило индуцировать развитие гуморального ответа у 59% добровольцев. При этом кратность прироста титров антител (фактор сероконверсии) после 1-й иммунизации составляла 3,1; после 2-й иммунизации — 6,7.
Таким образом, полученные результаты доказывают иммуногенность, хорошую переносимость и низкую реак-тогенность вакцины «ИНФЛЮВИР», что позволяет рекомендовать вакцину к применению у здоровых детей в возрасте от 6 до 18 лет для специфической профилактики гриппа типа А/Н^1.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Медицинская вирусология / под ред. Д. К. Львова. — М.: Медицинское информационное агентство, 2008: 372-375.
2. Медуницын Н. В. Вакцинология. — М.: Триада-Х, 1999: 272.
3. Руководство по инфекционным болезням / под ред. Ю. В. Лобзина. — СПб: Фолиант, 2000.
4. Pandemic influenza preparedness and response: a WHO
guidance document. URL: http://www.who.int/csr/disease/
influenza/PIPGuidance09.pdf
5. Garten R. J., Davis C. T., Russell C. A. et al. Antigenic and genetic characteristics of swine-origin 2009 A (H1N1) influenza viruses circulating in humans // Science. — 2009; 325: 197-201.
6. Федеральный закон о лекарственных средствах № 86-ФЗ от 22.06.1998 // Российская газета. — 1998 (№ 118).
7. Национальный стандарт Российской Федерации «Надлежащая клиническая практика» № 232-ст. от 27 сентября 2005 г. — М.: Стандартинформ, 2005.
8. Приказ МЗ РФ № 266 от 19.06.2003 г. «Правила клинической практики в Российской Федерации» // Российская газета. — 2003 (№ 135).
9. CPMP/EWP/1045/01. Concept paper on the revision of the CPMP/BWP Note for Guidance on Harmonization of Requirements for Influenza Vaccines CPMP/BWP/214/96.
ВОПРОСЫ СОВРЕМЕННОЙ ПЕДИАТРИИ /2010/ ТОМ 9/ № 4
11156760
11156760
