CC BY
42
Разработка и клиническое изучение отечественной живой гриппозной вакцины против потенциально пандемических вирусов гриппа
Л.Г. Руденко1, И.Н. Исакова-Сивак1 (isakova.sivak@gmail.com), А.Н. Найхин1, Ю.А. Дешева1, Н.В. Ларионова1, И.В. Киселева1, М.А. Стукова2, М.К. Ерофеева2, А.Н. Никифорова3, А.Н. Миронов3
1ФГБУ «НИИ экспериментальной медицины» Северо-Западного отделения РАМН, Санкт-Петербург
2ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, Санкт-Петербург 3ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России, Москва
Резюме
Настоящий обзор обобщает результаты разработки и изучения в доклинических и клинических исследованиях отечественной живой аттенуированной гриппозной вакцины (ЖГВ) против потенциально пандемических вирусов гриппа. Показаны безвредность, иммуногенность и защитная эффективность вакцин против гриппа А подтипов H5N2, H7N3, H1N1, H2N2 на моделях животных. Клиническое изучение ЖГВ на волонтерах показало ее безвредность и иммуногенность, при этом показатели иммуногенности отечественной вакцины во многом превосходят таковые американского аналога - вакцины FluMist®. Также в обзоре обсуждаются критерии оценки иммуногенности и эффективности ЖГВ против потенциально пандемических вирусов гриппа при их регистрации.
Ключевые слова: живая гриппозная вакцина, пандемические вирусы гриппа, иммуногенность, клинические испытания, критерии оценки иммуногенности
Development and Clinical Studies of Russian Live Attenuated Influenza Vaccine against Potentially Pandemic Influenza Viruses
L.G. Rudenko1, I.N. Isakova-Sivak1 (isakova.sivak@gmail.com), A.N. Naykhin1, Yu.A. Desheva1, N.V. Larionova1, I.V. Kiseleva1, M.A. Stukova2, M.K. Erofeeva2, A.N. Nikiforova3, A.N. Mironov3
1 The Federal State Budgetary Institution «Institute of Experimental Medicine» of the North-West Branch of of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint Petersburg
2 The Federal State Budgetary Institution «Research Influenza Institute» of the Ministry of Healthcare of Russia, Saint Petersburg
3 Federal State Unitary Company «Microgen Scientific Industrial Company for Immunobiological Medicines» of the Ministry of Healthcare of Russia, Moscow
Abstract
This review summarizes the results of development and preclinical and clinical trials of live attenuated influenza vaccine (LAIV) against pandemic and potentially pandemic influenza viruses. LAIV H5N2, H7N3, H1N1, H2N2 strains were safe, immunogenic and protective in animal models. Clinical trials of Russian pandemic LAIVs demonstrated their safety and immunogenicity for healthy adult volunteers, with better immunogenic potential than it was demonstrated for other pandemic LAIV FluMist®. In addition, here we discuss criteria for the assessment of pandemic LAIV immunogenicity and efficacy necessary for their licensure. Key words: live influenza vaccine, pandemic influenza, immunogenicity, clinical trials, licensure criteria
Грипп - острая вирусная инфекция с воздушно-капельным путем передачи, характеризующаяся острым началом, лихорадкой, общей интоксикацией и поражением респираторного тракта. Эпидемии гриппа происходят ежегодно, поражая до 15% населения земного шара. Кроме ежегодных эпидемий вирус гриппа типа А может вызывать и пандемии. Они возникали в результате появления высококонтагиозного вируса гриппа, к которому большая часть населения не имела иммунитета, и, как следствие, в результате практически гло-
бальной восприимчивости людей к инфекции. В настоящее время активно дискутируется вопрос о возможности распространения пандемии птичьего гриппа. Опасность представляет не только широкое распространение гриппа А подтипа H5N1 в популяции птиц, но и, главным образом, его способность приводить к высокой летальности у людей [51]. В качестве меры для предупреждения угрозы здоровью и жизни людей вакцинация является основным инструментом в борьбе с инфекциями, и, как показал мировой опыт, наиболее эффективны
живые вакцины, благодаря которым искоренена оспа, элиминирован полиомиелит и в перспективе - корь.
В настоящем обзоре обобщаются данные по разработке и внедрению отечественной живой холодоадаптированной реассортантной пандемической гриппозной вакцины (ЖГВ) и критериям оценки ее качества.
ЖГВ, разработанная в отделе вирусологии им. А.А. Смородинцева НИИ экспериментальной медицины (НИИЭМ), используется для профилактики гриппа у взрослых и детей с 1987 года. Вакцинные штаммы для ЖГВ готовятся в соответствии с ежегодными Рекомендациями и Глобальным планом ВОЗ по подготовке к пандемии [48, 50]. За истекший период в производство было передано более 40-ка вакцинных штаммов, на основе которых выпущено более 100 млн доз ЖГВ.
Многочисленные исследования показали, что инактивированные гриппозные вакцины (ИГВ), вводимые парентерально, могут эффективно стимулировать гуморальные нейтрализующие антитела, которые, однако, специфичны только антигенно близкородственным вирусам [9, 13, 25]. В отличие от ИГВ живые аттенуированные гриппозные вакцины вводятся интраназально, имитируя естественную инфекцию, и в связи с этим они способны индуцировать более широкий спектр иммунного ответа, как это показано на животных и в клинических исследованиях [3, 6, 17, 19, 23, 25, 32, 34, 36, 39, 45]. Помимо индукции гуморальных антител ЖГВ стимулируют мукозальный иммунитет, который препятствует проникновению и размножению вирусных частиц в респираторном тракте привитых лиц. Кроме того, ЖГВ вызывают образование вирусспе-цифических цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов, тем самым обеспечивая гетеросубтипическую защиту организма [2, 10, 18, 29 - 31, 35, 45]. Показано, что ЖГВ могут обеспечивать защиту в ранние
сроки после иммунизации (в первые семь дней) за счет стимуляции такого неспецифического фактора иммунитета, как интерферон [5, 36]. В эпидемиологических испытаниях, проходивших в г. Новгороде, показана высокая способность ЖГВ создавать коллективный иммунитет, защищая таким образом и невакцинированных лиц, находящихся в коллективе [36]. Важная особенность ЖГВ - это защита привитых против дрейфовых вариантов вируса гриппа [1]. Еще одно преимущество живых вакцин перед инактивированными - более легкий и безболезненный путь введения (распылением в нос), а также возможность быстро и дешево произвести большие объемы вакцинного материала. По данным ВОЗ, современные производственные мощности не обеспечивают потребностей в гриппозных вакцинах даже для групп риска (дети, пожилые люди, медработники и др.), но эта проблема решаема с помощью ЖГВ, что существенно в экстренной пандемической ситуации.
Все вышеперечисленные характеристики ЖГВ привели к их включению в Глобальный план ВОЗ по гриппозным вакцинам [49], а также в Программу ВОЗ по подготовке к пандемии гриппа [50]. Данная Программа включает в себя прежде всего создание международных и государственных коллекций потенциально пандемических вакцинных штаммов с целью скорейшего начала производства вакцин и иммунизации населения в случае возникновения пандемии. На Международном совещании по пандемическим гриппозным вакцинам (г. Бетезда, США, 2003 г.) был подготовлен план клинических испытаний пандемических вакцин и предложена классификация приоритетности кандидатов в пандемические вакцины. Наиболее высокая вероятность стать возбудителями будущей пандемии гриппа признана за штаммами подтипов Н1, Н2, Н3; за ними по актуальности следуют штаммы подтипов Н5, Н6, Н7 и Н9 [15].
Таблица 1.
Перечень живых гриппозных вакцин против пандемических и потенциально пандемических вирусов гриппа, подготовленных в НИИ экспериментальной медицины
название вакцинного штамма Подтип Эпидемический родительский вирус Стадия изучения
A/17/утка/Потсдам/86/92 H5N2 A/утка/Потсдам/1402-6/86 ^N2)* Завершены I и II фазы клинических испытаний. Вакцина зарегистрирована в РФ
А/17/Калифорния/2009/38 H1N1 A/Калифорния/07/2009 (ЖШ)** Завершены I и II фазы клинических испытаний. Вакцина зарегистрирована в РФ
А/17/кряква/Нидерланды/00/95 H7N3 А/кряква/Нидерланды/12/2000 ^N3)** Завершена I фаза клинических испытаний
А/17/индюк/Турция/05/133 H5N2 A/индюк/Турция/1/2005 ^N1)*, клайд 2.2 Завершена I фаза клинических испытаний
А/17/Калифорния/66/395 H2N2 А/Калифорния/1/66 ^N2)** Готовится I фаза клинических испытаний
Примечание: *Вакцинный штамм содержит только ген гемагглютинина от «дикого» родительского штамма, а остальные семь генов - от донора аттенуации (т.е. формула генома - 7:1);
** Вакцинный штамм содержит оба поверхностных антигена (гемагглютинин и нейраминидазу) от «дикого» родительского штамма, а шесть внутренних генов - от донора аттенуации (т.е. формула генома - 6:2).
По названной выше Программе ВОЗ в отделе вирусологии НИИЭМ был разработан ряд живых гриппозных вакцин против пандемических и потенциально пандемических штаммов вируса гриппа (табл. 1).
В первой из созданных и зарегистрированных живых вакцин против потенциально пандемических вирусов гриппа использовался штамм A/17/утка/Потсдам/86/92(H5N2), который представляет собой реассортант 7:1, унаследовавший ген гемагглютинина от низкопатогенного вируса гриппа птиц A/утка/Потсдам/1402-6/86(H5N2), а остальные семь генов - от донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2) [33]. В доклинических исследованиях была показана его полная аттенуация для кур и в опытах на мышах, хорьках и обезьянах - защита не только от гомологичного вируса, но и от гетерологичных высокопатогенных штаммов A(H5N1) [14] (табл. 2). В I и II фазах клинических испытаний вакцина показала себя безопасной, низкореактогенной. Вакцинный вирус не передавался непривитым лицам группы плацебо. После ревакцинации в РТГА сероконверсия к прото-типному вирусу была выявлена в 47,1 - 54,8% сывороток крови привитых лиц, а также определены аналогичный уровень вируснейтрализующих антител в реакции микронейтрализации и высокий уровень локального иммунного ответа (секреторные ^А-антитела в верхних дыхательных путях) (табл. 3). Вакцина стимулировала у волонтеров также продукцию Т-клеточных факторов ^4+, CD8+) [4, 11]. Доказательством широты спектра иммунного ответа на ЖГВ H5N2 является кросс-реактивность около 30% сывороток крови привитых с антигенно удаленным вирусом H5N1 А/Индонезия/05/2005 (клайд 2.1) [33]. По результатам проведенных исследований первая в мире потенциально панде-
мическая ЖГВ А/17/утка/Потсдам/86/92 ^N2) была зарегистрирована как моновакцина Уль-трагривак для профилактики птичьего гриппа, ЛСР-002340/09 от 25 марта 2009 года.
В 2009 году, после объявления пандемии «калифорнийского» гриппа А(Н^1), в отделе вирусологии НИИЭМ в кратчайшие сроки был подготовлен реассортантный вакцинный штамм А/17/Калифорния/2009/38 (Н^1) [37]. Проведенные доклинические исследования на моделях мышей, хорьков и морских свинок продемонстрировали аттенуированный фенотип, безвредность и иммуногенность этого вакцинного штамма. Так, однократная вакцинация вызывала образование высоких титров сывороточных антител у хорьков на 28-й день после прививки и животные были полностью защищены от последующего заражения патогенным вирусом А/Калифорния/7/2009 (Н^1) [40] (см. табл. 2). Результаты I - II фазы клинического изучения продемонстрировали безопасность вакцины А/17/Калифорния/2009/38 (Н^1) для детей и взрослых, отсутствие трансмиссивно-сти вакцинного вируса непривитым лицам из группы плацебо. Вакцина эффективно формировала специфический противогриппозный иммунный ответ к пандемическому гриппу А(Н^1). Серокон-версии сывороточных антител в результате ревакцинации составили 34%, локальные секреторные ^А-антитела в верхних дыхательных путях выявлялись у 63,8% привитых, прирост числа Т-клеток памяти CD4+ и CD8+ достиг 68,8% (см. табл. 3). Суммарная оценка сывороточного, секреторного и клеточного иммунного ответа привела к заключению, что однократная вакцинация пандемической ЖГВ А(Н^1) достаточна для удовлетворительного защитного эффекта [37]. Вакцинный штамм А/17/Калифорния/2009/38 (Н^1) был зареги-
Таблица 2.
Иммуногенность и защитная эффективность живых гриппозных вакцин против пандемических и потенциальноп андемических вирусов гриппа на модели хорьков
Вакцинный штамм Группа Среднегеометрические титры сывороточных антител в РТГА с гомологичным антигеном Титр вируса после экспериментального заражения (челленджа) патогенным вирусом, !од10БОЕ (ТЦИД)/г(мл)
Легкие Носовые ходы Носовые смывы
день 14 день 21 - 28 день 35 - 42 день 3 день 5
H1N11 Вакцина н.д. 533 н.д. < 1,3 н.д. < 0,5 н.д.
Плацебо н.д. 5 н.д. 5,3 н.д. 3,2 н.д.
H7N32 Вакцина н.д. 23 173 < 0,5 н.д. < 0,5 < 0,5
Плацебо н.д. 5 5 1,80 н.д. 3,56 < 0,5
H5N2-23 Вакцина н.д. 14 127 < 0,5 1,45 2,23 < 0,5
Плацебо н.д. 5 5 4,82 4,96 5,80 4,53
H2N24 Вакцина 1918 1613 н.д. н.д. 3,03 2,44 2,57
Плацебо 5 5 н.д. н.д. 6,80 2,87 5,26
Примечание:1Вакцинный штамм А/17/Калифорния/2009/38 (Н^1); 2Вакцинный штамм А/17/кряква/Нидерланды/00/95 (H7N3); Вакцинный штамм А/17/индюк/Турция/05/133 (H5N2); "Вакцинный штамм А/17/Калифорния/66/395 (Н2N2); н.д. - не делали.
Таблица 3.
Сводные данные по иммуногенности живых гриппозных вакцин против пандемических и потенциально пандемических вирусов гриппа в клинических испытаниях на волонтерах
Вакцина Группа Доза Сывороточные антитела в рТГА нейтрализующие антитела в рмн Локальные IgA-антитела в ифа Сывороточные IgG-антитела в ИфА Вирусспецифические Т-клетки памяти, % лиц с достоверным увеличением
% серо-конверсий прирост СГТ % серо-конверсий прирост СГТ % серо-конверсий % серо-конверсий CD4+ CD8+
С\| Z ю I Вакцина2 1 5,9 1,3 20 1,9 30,0 н.д. 10,0 20,0
2 47,1 2,8 50 2,9 65,0 н.д. 30,0 40,0
Вакцина3 1 31,0 2,0 21,4 1,7 н.д. н.д. н.д. н.д.
2 54,8 2,9 33,3 2,1 н.д. н.д. н.д. н.д.
Плацебо 1 0 1,2 0 1,2 0 н.д. 0 0
2 0 1,2 0 1,2 0 н.д. 0 0
Z 1 Вакцина 1 23,4 1,6 н.д. н.д. 38,3 25,5 75,0 37,5
2 34,4 2,0 н.д. н.д. 63,8 44,7 68,8 68,8
Плацебо 1 0 1,3 н.д. н.д. 0 0 0 0
2 0 1,4 н.д. н.д. 0 0 0 0
сЬ Z I Вакцина 1 24,1 1,8 17,2 1,5 41,4 10,3 17,2 3,5
2 44,8 2,3 41,4 3,0 41,4 27,6 27,6 27,6
Плацебо 1 0 1,0 0 1,0 10,0 0 0 0
2 0 1,1 0 1,1 10,0 0 0 0
см С\| Z ю I Вакцина 1 13,8 1,4 10,3 1,3 17,2 0 17,2 20,7
2 37,9 1,9 48,3 2,3 55,2 3,4 37,9 27,6
Плацебо 1 0 1,0 0 1,0 0 0 0 0
2 0 1,1 0 1,1 0 0 0 0
Примечание: 'Вакцинный штамм А/17/утка/Потсдам/86/92 (H5N2); Доза вакцины 6,9 log10 ЭИДя/0,5 мл;3Доза вакцины 8,3 log10 ЭИДя/0,5 мл;4Вакцинный штамм А/17/Калифорния/2009/38 (H1N1); 5Вакцинный штамм А/17/кряква/Нидерланды/00/95 (HH7N3); 6Вак-цинный штамм А/17/индюк/Турция/05/133 (H5N2); Н.д. - не делали; РМН - реакция микронейтрализации; СГТ - среднее геометрическое титров.
стрирован как вакцина моновалентная пандемическая типа А(Н^1) Инфлювир, ЛСР-007988/09 от 13 октября 2009 года.
Как упомянуто выше, вирусы гриппа птиц подтипа Н7 признаются потенциально пандемическими [15], поэтому обеспечение населения России собственной живой гриппозной вакциной против потенциально опасного вируса гриппа подтипа Н7 имеет важное стратегическое значение. В этой связи в отделе вирусологии НИИЭМ методом классической реассортации в развивающихся куриных эмбрионах был подготовлен вакцинный штамм для ЖГВ А/17/кряква/Нидерланды/00/95 ^N3). Для реассортации использовались два родительских вируса - апатогенный вирус гриппа птиц А/кряк-ва/Нидерланды/12/2000 ^N3) и стандартный донор аттенуации для подготовки штаммов отечественной ЖГВ - вирус А/Ленинград/134/17/57 ^N2). Вакцинный штамм унаследовал два гена, кодирующих поверхностные негликозилирован-
ные белки (гемагглютинин и нейраминидазу), от вируса гриппа A(H7N3) и шесть внутренних генов (РВ2, РВ1, РА, NR М, NS) - от донора аттенуа-ции. Результаты доклинических исследований ЖГВ H7N3 на моделях мышей, морских свинок, кур и хорьков показали безвредность, иммуногенность и защитную эффективность препарата (см. табл. 2). В первой фазе клинического исследования были продемонстрированы безвредность и иммуногенность вакцины для взрослых волонтеров, отсутствие трансмиссивности вакцинного вируса непривитым лицам из группы плацебо. До 45% привитых отвечали сероконверсиями сывороточных антител на двукратную иммунизацию, локальные секреторные антитела выявлялись у 41% привитых, и до 41% обследованных отвечали приростом числа Т-клеток памяти CD4+ и/или CD8+ (см. табл. 3). Таким образом, 86,2% привитых волонтеров ответили на вакцинацию в одном или нескольких иммунологических тестах. В дополнение к оценке
иммунного ответа на гомологичный штамм H7N3 были получены важные данные, свидетельствующие о том, что в результате иммунизации людей ЖГВ H7N3 формируются также антитела, дающие перекрестную защиту против нового птичьего вируса гриппа A(H7N9), вызвавшего тяжелую вспышку заболевания и высокую смертность в Китае весной 2013 года [46].
Вакцина Ультрагривак из штамма А/17/утка/ Потсдам/86/92 ^N2) была сконструирована на основе штамма, циркулировавшего в природе более 20 лет назад, и антигенно устарела. Поэтому возникла насущная необходимость подготовки резервных вакцинных штаммов против современных клайдов вирусов птичьего гриппа H5N1, продолжающих циркулировать в природе и вызывающих у человека тяжелые формы заболевания, нередко заканчивающиеся летальным исходом [51]. В связи с этим в НИИЭМ был подготовлен новый реассортантный вакцинный штамм А/17/индюк/ Турция/05/133 ^N2) к высокопатогенному вирусу гриппа птиц А/индюк/Турция/1/2005 ^N1), клайд 2.2 [22]. При создании штамма ЖГВ H5N2 был использован сконструированный для инактиви-рованной вакцины штамм NIBRG-23 ^N1), содержащий внутренние гены от донора высокой урожайности А/РГ/8/34 (Н^1), а гены НА и NA - от вируса А/индюк/Турция/1/2005 ^N1). Вакцинный штамм А/17/индюк/Турция/05/133 ^N2) унаследовал один ген, кодирующий поверхностный гликозили-рованный белок (гемагглютинин), от вируса гриппа NIBRG-23 ^N1) и семь генов от донора аттенуации - ген, кодирующий нейраминидазу ^А), и шесть внутренних генов (РВ2, РВ1, РА, NR М, NS). Таким образом, для гарантированного обеспечения безопасности живой гриппозной вакцины против высокопатогенного штамма вируса гриппа птиц A(H5N1) при подготовке вакцинного штамма было использовано два дополнительных фактора:
1. В состав генома вакцинного штамма включен модифицированный гемагглютинин высокопатогенного вируса гриппа птиц А/индюк/Турция/1/2005 ^N1), полностью сохранивший антигенный профиль «дикого» вируса, но утративший его вирулентные потенции за счет удаления полиосновной последовательности в кли-ведж-сайте.
2. Вакцинный штамм имеет формулу генома 7:1, то есть содержит еще один ген от донора аттенуации - NA, что является дополнительной гарантией его аттенуации.
Аттенуированный фенотип вакцинного штамма А/17/индюк/Турция/05/133 ^N2) был подтвержден в экспериментах на лабораторных животных - мышах, морских свинках, курах и хорьках. Изучение иммуногенности и защитной эффективности вакцинного штамма H5N2 на модели хорьков показало, что вакцина вызывала образование высоких титров специфических сывороточных анти-
тел, а также защищала животных от челленджа высокопатогенным вирусом А/индюк/Турция/1/2005 ^N1) (см. табл. 2). I фаза клинических испытаний, проведенная на 40 добровольцах, подтвердила безопасность и низкую реактогенность вакцины, отсутствие трансмиссивности вакцинного вируса непривитым лицам из группы плацебо. Оценка системного иммунного ответа выявила в РТГА и в реакции микронейтрализации сероконверсии у 38 и 48% волонтеров соответственно (см. табл. 3). Оценка локального иммунного ответа показала приросты секреторных ^А у 55% привитых, кроме того, у вакцинированных лиц было выявлено достоверное увеличение популяций CD4+ и CD8+ Т-клеточной иммунологической памяти (38 и 28% соответственно) (см. табл. 3). Суммарно иммунный ответ, оцениваемый по результатам формирования гуморальных и/или секреторных антител, а также клеточных факторов, достигал 96,6%.
Последняя пандемия (2009 г.) потребовала пересмотра концепции определения потенциально пандемических вирусов гриппа. В частности, особо пристального внимания заслуживают не только вирусы гриппа птиц, но и вирусы гриппа, ранее циркулировавшие в человеческой популяции, но исчезнувшие на длительное время, в результате чего значительная часть населения не имеет к ним иммунитета. Наиболее ярким примером такой ситуации служат вирусы гриппа подтипа A(H2N2).
Вирусы гриппа A(H2N2), близкие по своим антигенным свойствам к пандемическому штамму А/Сингапур/1/57 ^N2), с 1968 года не циркулировали в человеческой популяции, однако продолжают обращаться в популяции домашних и диких птиц, что подтверждается рутинным мониторингом вирусов гриппа птиц [16, 26, 38]. Таким образом, ввиду отсутствия коллективного иммунитета к вирусам гриппа A(H2N2) у значительной прослойки населения (лица моложе 45 лет), а также продолжающейся циркуляции вирусов данного подтипа у животных возникает реальная угроза его возвращения в человеческую популяцию, что непременно вызовет новую пандемию гриппа [27, 41].
В качестве вакцинного штамма А(H2N2) может быть использован отечественный донор аттенуации для живой гриппозной вакцины типа А -А/Ленинград/134/17/57 ^N2). Этот вирус уже использовался в 1960-х годах в качестве вакцинного штамма для иммунизации населения. Однако за период циркуляции штаммов А(H2N2) (1957 -1968 гг.) вирус претерпел серьезные эволюционные изменения, и иммунный ответ на измененный вирус может быть неэффективным [24]. В связи с этим в отделе вирусологии НИИЭМ методом классической реассортации в развивающихся куриных эмбрионах был подготовлен новый вакцинный штамм живой гриппозной вакцины А/17/Кали-форния/66/395 ^N2), содержащий поверхностные антигены НА и NA от эпидемического вируса А/Калифорния/1/66 ^N2).
Аттенуированный фенотип вакцинного штамма А/17/Калифорния/66/395 (H2N2) был подтвержден молекулярно-генетическими (полногеномное секвенирование), вирусологическими (определение диапазона температурочувствительности и холодоа-даптированности при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах) методами и в экспериментах на лабораторных животных (мыши, морские свинки, хорьки). Результаты доклинических исследований ЖГВ А/17/Калифорния/66/395 ^N2) на лабораторных животных показали ее безвредность, иммуногенность и защитную эффективность. Так однократное интраназальное введение вакцины хорькам вызывало у них существенные приросты сывороточных антител уже через две недели после вакцинации (см. табл. 2). Экспериментальное заражение вакцинированных животных эпидемическим вирусом А/Калифорния/1/66 ^N2) выявило защитный эффект вакцинации, который выражался в снижении титров вируса, выделенного из носовых смывов и мазков из зева, по сравнению с группой, получившей плацебо (см. табл. 2). По результатам доклинических исследований ЖГВ H2N2 было принято решение рекомендовать ее для проведения I фазы клинических испытаний на волонтерах.
Основные критерии оценки качества вакцины - ее безвредность, иммуногенность и эпидемиологическая эффективность. Существующими нормативными документами предусмотрено, что единственным критерием оценки иммуногенности ЖГВ является индукция сывороточных антител, определяемая в реакции торможения гемагглютинации [7]. Этот подход основан на данных конца 1960-х - начала 1970-х годов об антигриппозном иммунном ответе. На то время циркулирующие в крови антитела были единственным исследуемым фактором, который связан с защитным ответом на гриппозную инфекцию. С тех пор знания о противогриппозном иммунитете преумножились многократно, особенно в отношении понимания развития поствакцинального иммунного ответа. Было показано, что живая и инактивированная вакцины против гриппа приводят к развитию разных типов иммунного ответа. На введение ЖГВ развивается как гуморальный (локальный и сывороточный), так и клеточный иммунный ответ, тогда как ИГВ преимущественно индуцирует антитела, циркулирующие в крови [8, 19, 23, 45]. Развитие новых методов исследований в последние три десятилетия привело к возможности оценки таких факторов противогриппозного иммунитета, как цитотоксические клетки, различные популяции Т-хелперов, местные антитела и вирус-специфические клетки иммунологической памяти. В последние годы много внимания уделялось исследованиям поствакцинальной индукции вирус-специфических клеток памяти, которые обеспечивают долговременную противогриппозную защиту.
Необходимо принять во внимание также тот факт, что действующие нормативные требования для оценки иммуногенности ЖГВ были разработа-
ны на основе испытаний сезонных вакцин. В случаях с сезонными вакцинами популяция всегда в какой-то степени имеет предсуществующий иммунитет, тогда как при пандемии население имму-нологически наивно и, следовательно, иммунитет, обусловленный В-клетками иммунологической памяти, у него отсутствует. Поэтому иммуногенность пандемической и потенциально пандемической вакцины первоначально ниже, чем иммуногенность сезонных вакцин, ведь эти последние являются по существу бустерными. Титры сывороточных антигемагглютинирующих антител, определяемые в РТГА, не дают полной характеристики иммуногенности вакцины. Исходя из изложенного, следует признать, что существующие нормативные требования оценки иммуногенности ЖГВ, основанные только на оценке величины титров сывороточных антигемагглютинирующих антител, не являются объективными. В Рекомендациях ВОЗ по испытаниям и производству ЖГВ предлагается оценивать иммунный ответ на живую гриппозную вакцину по комплексу критериев, в который входят результаты выявления антигемагглютинирующих антител в РТГА, определение нейтрализующих антител, локальных секреторных антител в верхних дыхательных путях, а также оценку клеточного иммунитета, особенно вирусспецифических Т- и В-клеток памяти. Регистрируемая степень прироста только сывороточных антител не дает полного представления о степени иммунной защиты привитых лиц [12, 28].
В последние годы в США проводится активное изучение штаммов потенциально пандемической производимой там живой гриппозной вакцины FluMist. Получены данные по вакцинации волонтеров ЖГВ из штаммов H5N1 [21], H7N3 [42], H9N2 [20], H6N1 [44] и H2N2 [43]. Показано, что российская ЖГВ была более высокорепродуктивной по сравнению с вакциной FluMist, а также активно стимулировала изученные в более широком спектре иммунных реакций гуморальный, секреторный и клеточный иммунитет. По-видимому, эти различия обусловлены, во-первых, более высокой биологической активностью отечественных штаммов (> 7 ^10ЭИД50), а во-вторых - гиператтенуированным фенотипом американской вакцины [47]. Тем не менее в исследованиях американских авторов показано, что волонтеры, иммунизированные ЖГВ и не проявившие значимого иммунного ответа, активно отвечали на повторную иммунизацию инактивированной вакциной подтипов H5N1 и H7N7 спустя 52, 54 или 56 месяцев после первичной вакцинации (данные представлены на Первом заседании ВОЗ по разработке и клиническим испытаниям современных высокоэффективных гриппозных вакцин, Гонконг, 24 - 26 января 2013 г.). Предшествующее применение ЖГВ стимулировало выработку более высоких титров антител к субоптимальным дозам инак-тивированной субъединичной вакцины, частота сероконверсий значительно возрастала, при этом
скорость появления иммунного ответа составляла всего семь дней. Представлены очевидные доказательства долговременной активации В-клеток памяти, выработанных в ответ на иммунизацию ЖГВ и на повторную встречу с антигеном. Авторы делают вывод: быстрый иммунный ответ на введение инактивированной вакцины доказывает, что лица, однократно получившие ЖГВ, будут защищены как минимум от тяжелых проявлений заболевания при естественной встрече с возбудителем.
Таким образом, в отделе вирусологии НИИЭМ создана коллекция пандемических и потенциально пандемических штаммов ЖГВ из вирусов H5N2, H5N1, Н^1, H7N3 и H2N2. Продолжается работа
по изучению нового вакцинного штамма ЖГВ против появившегося недавно в циркуляции высокопатогенного вируса гриппа птиц H7N9. Полученные результаты исследований показали безвредность и эффективность пандемической ЖГВ, а также обеспечили возможность быстрой ее наработки в случае возникновения пандемии.
Все клинические испытания проведены по согласованию с Министерством здравоохранения Российской Федерации. ■
Исследования проведены при финансовой поддержке PATH (Program for Appropriate Technology in Health) - Gates Foundation (USA).
Литература
1. Григорьева Е.П., Дриневский В.П., Дорошенко Е.М. и др. Эффективность живой гриппозной реассортантной вакцины при циркуляции дрейфовых вариантов вируса гриппа // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2009. № 1. С. 45 - 53.
2. Найхин А.Н., Кореньков Д.А., Петухова Г.Д. и др. Оценка Т-клеточной иммунологической памяти по экспрессии молекул CD45 у людей, привитых живой реассортантной гриппозной вакциной // Медицинская иммунология. 2008. Т. 10. № 6. С. 535 - 542.
3. Найхин А.Н., Рекстин А.Р, Баранцева И.Б. и др. Иммунный ответ на живую гриппозную вакцину // Вестник РАМН. 2002. № 12. С. 24 - 28.
4. Найхин А.Н., Чиркова Т.В., Петухова Г.Д. и др. Стимуляция гомо- и гетерологичной Т-клеточной иммунологической памяти у волонтеров, привитых живой реассортантной гриппозной вакциной типа A(H5N2) // Вопросы вирусологии. 2012. Т. 57. № 1. С. 38 - 42.
5. Рекстин А.Р, Лу К., Кац Д., Руденко Л.Г. Особенности продукции ранних цитокинов in vivo после инфицирования вирусом гриппа А/Ленинград/134/57 (H2N2) и его холодоадаптированными аттенуированными вариантами // Вопросы вирусологии. 2006. Т. 51. № 2. С. 27 - 30.
6. Руденко Л.Г., Шварцман Я.С., Исполатова А.В. Сравнительная оценка безвредности, иммуногенной активности и профилактической эффективности взрослого и детского вариантов живой гриппозной вакцины у школьников 7 - 14 лет при стандартных схемах введения // Вопросы вирусологии. 1989. № 1. С. 29-34.
7. Фармакопейная статья предприятия ФСП 42-0504-4097-04 на вакцину гриппозную аллантоисную интраназальную живую сухую.
8. Ярилин А.А. Основы иммунологии. - М.: Медицина, 1999. - 608 с.
9. Belshe R., Lee M.S., Walker R.E. et al. Safety, immunogenicity and efficacy of intranasal, live attenuated influenza vaccine // Expert. Rev. Vaccines. 2004. V. 3 (6). P. 643 - 654.
10. Cheng X., Eisenbraun M., Xu Q. et al. H5N1 vaccine-specific B cell responses in ferrets primed with live attenuated seasonal influenza vaccines // PLoS One. 2009. V. 4. P. e4436.
11. Chirkova T.V., Naykhin A.N., Petukhova G.D. et al. Memory T-cell immune response in healthy young adults vaccinated with live attenuated influenza A (H5N2) vaccine // Clin. Vaccine Immunol. 2011. V. 18. P. 1710 - 1718.
12. Conference Report. Report of the 7th meeting on Evaluation of Pandemic Influenza Vaccines in Clinical Trials, World Health Organization, Geneva, 17 -18 February 2011 // Vaccine. 2011. V. 29. P. 7579 - 7586.
13. Cox R.J., Brokstad K.A., Ogra P. Influenza virus: immunity and vaccination strategies. Comparison of the immune response to inactivated and live, attenuated influenza vaccines // Scand. J. Immunol. 2004. V. 59. P 1 - 15.
14. Desheva J.A., Lu X., Rekstin A.R. et al. Characterization of an influenza A(H5N2) reassortant as a candidate for live-attenuated and inactivated vaccines against highly pathogenic H5N1 viruses with pandemic potential // Vaccine. 2006. V. 24. P. 6855 - 6866.
15. Development of a clinical trial plan for pandemic influenza vaccines. Department of Health and Human Services. National Institute of Allergy and Infection Diseases. September 22 - 23, 2003, Bethesda, Maryland. Meeting summary.
16. Glaser L., Zamarin D., Acland H.M. et al. Sequence analysis and receptor specificity of the hemagglutinin of a recent influenza H2N2 virus isolated from chicken in North America // Glycoconj. J. 2006. V. 23. P. 93 - 99.
17. Gustin K.M., Maines T.R., Belser J.A. et al. Comparative immunogenicity and cross-clade protective efficacy of mammalian cell-grown inactivated and live attenuated H5N1 reassortant vaccines in ferrets // J. Infect. Dis. 2011. V. 204. P 1491 - 1499.
18. He X.S., Holmes T.H., Zhang C. et al. Cellular immune responses in children and adults receiving inactivated or live attenuated influenza vaccines // J. Virol. 2006. V. 80. P. 11756 - 11766.
19. Jang Y.H., Byun Y.H., Lee Y.J. et al. Cold-adapted pandemic 2009 H1N1 influenza virus live vaccine elicits cross-reactive immune responses against seasonal and H5 influenza A viruses // J. Virol. 2012. V. 86. P. 5953 - 5958.
20. Karron R.A., Callahan K., Luke C. et al. A live attenuated H9N2 influenza vaccine is well tolerated and immunogenic in healthy adults // J. Infect. Dis. 2009. V. 199. P. 711 - 716.
21. Karron R.A., Talaat K., Luke C. et al. Evaluation of two live attenuated cold-adapted H5N1 influenza virus vaccines in healthy adults // Vaccine. 2009. V. 27. P. 4953 - 4960.
22. Larionova N., Kiseleva I., Dubrovina I. et al. Peculiarities of reassortment of cold-adapted influenza A master donor virus with viruses possessed avian origin HA and NA H5N1 // Influenza and Other Respiratory Viruses. 2011. V. 5 (Suppl. 1). P 346 - 349.
23. Lau Y.F., Wright A.R., Subbarao K. The contribution of systemic and pulmonary immune effectors to vaccine-induced protection from H5N1 influenza virus infection // J. Virol. 2012. V. 86. P. 5089 - 5098.
24. Lindstrom S.E., Cox N.J., Klimov A.I. Genetic analysis of human H2N2 and early H3N2 influenza viruses, 1957 - 1972: evidence for genetic divergence and multiple reassortment events // Virol. 2004. V. 328. P 101 - 119.
25. Lu X., Edwards L.E., Desheva J.A. et al. Cross-protective immunity in mice induced by live-attenuated or inactivated vaccines against highly pathogenic influenza A (H5N1) viruses // Vaccine. 2006. V. 24. P 6588 - 6593.
26. Makarova N.V., Kaverin N.V., Krauss S. et al. Transmission of Eurasian avian H2 influenza virus to shorebirds in North America // J. of General Virol.- 1999. V. 80. P. 3167 - 3171.
27. Nabel G.J., Wei C.-J., Ladgenvood J.E. Vaccinate for the next H2N2 pandemic now // Nature. 2011. V. 471. P 157 - 158.
28. Petukhova G., Chirkova T., Donina S. et al. Comparative studies of local antibody and cellular immune response to influenza infection and vaccination with live attenuated reassortant influenza vaccine (LAIV) // Vaccine. 2009. V. 27. P. 2580 - 2587.
29. Petukhova G., Korenkov D., Chirkova T. et al. B- and T-cell memory elicited by a seasonal live attenuated reassortant influenza vaccine: assessment of local antibody avidity and virus-specific memory T-cells using trogocytosis-based method // Influenza and Other Respiratory Viruses. 2012. V. 6. P. 119 - 126.
30. Powell T.J., Strutt T., Reome J. et al. Priming with cold-adapted influenza A does not prevent infection but elicits long-lived protection against supralethal challenge with heterosubtypic virus // J. Immunol. 2007. V. 178. P. 1030 - 1038.
31. Quan F.S., Compans R.W., Nguyen H.H. et al. Induction of heterosubtypic immunity to influenza virus by intranasal immunization // J. Virol. 2008. V. 82. P. 1350 - 1359.
32. Rudenko L.G., Arden N.H., Grigorieva E.P. et al. Immunogenicity and efficacy of Russian live attenuated influenza vaccines used alone and in combination in nursing home residents // Vaccine. 2001. V. 19. P 308 - 318.
33. Rudenko L., Desheva J., Korovkin S. et al. Safety and immunogenicity of live attenuated influenza reassortant H5 vaccine (phase I - II clinical trials) // IRV. 2008. V. 2. P. 203 - 209.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
Rudenko L.G., Grigorieva E., Naychin A. et al. Immunogenicity and efficacy of Russian live attenuated and US inactivsted influenza vaccines used alone and in combination in nursing home residents // Vaccine. 2000. V. 19. R 308 - 318.
Rudenko L.G., Lonskaya N.I., Klimov A.I. et al. Clinical and epidemiological evaluation of a live, cold-adapted influenza vaccine for 3 - 14-year-olds // Bull. World Health Organ. 1996. V. 74. R. 77 - 84.
Rudenko L.G., Slepushkin A.N., Monto A.S. et al. Efficacy of live attenuated and inactivated influenza vaccines in schoolchildren and their unvaccinated contacts in Novgorod, Russia // J. Infect. Dis. 1993. V. 168. R. 881 - 887.
Rudenko L., Van den Bosch H., Kiseleva I. et al. Live attenuated pandemic influenza vaccine: clinical studies on A/17/California/2009/38 (H1N1) and licensing of the Russian-developed technology to WHO for pandemic influenza preparedness in developing countries // Vaccine. 2011. V. 29 (Suppl. 1). R. A40 - A44.
Schafer J.R., Kawaoka Y., Bean W.J. et al. Origin of the pandemic 1957 H2 influenza A virus and the persistence of its possible progenitors in the avian reservoir // Virology. 1993. V. 194. R. 781 - 788.
Slepushkin A.N., Obrosova-Serova N.R, Burtseva E.I. et al. Comparison of live attenuated and inactivated influenza vaccines in schoolchildren in Russia: safety and efficacy in two Moscow schools, 1987/88 // Vaccine. 1993. V. 11. R. 323 - 328.
Stittelaar K.J., Veldhuis Kroeze E.J., Rudenko L. et al. Efficacy of live attenuated vaccines against 2009 pandemic H1N1 influenza in ferrets // Vaccine. 2011. V. 29. R. 9265 - 9270.
Stohr K. Vaccinate before the next pandemic? // Nature. 2010. V. 465. R. 161.
Talaat K.R., Karron R.A., Callahan K.A. et al. A live attenuated H7N3 influenza virus vaccine is well tolerated and immunogenic in a phase I trial in healthy adults // Vaccine. 2009. V. 27. R 3744 - 3753.
Talaat K.R., Karron R.A., Liang R.H. et al. An open-label phase I trial of a live attenuated H2N2 influenza virus vaccine in healthy adults // Influenza and Other Respiratory Viruses. 2013. V. 7. R. 66 - 73.
Talaat K.R., Karron R.A., Luke C.J. et al. An open label phase I trial of a live attenuated H6N1 influenza virus vaccine in healthy adults // Vaccine. 2011. V. 29. R. 3144 - 3148.
Tamura S., Tanimoto T., Kurata T. Mechanisms of broad cross-protection provided by influenza virus infection and their application to vaccines // Jpn. J. Infect. Dis. 2005. V. 58. R. 195 - 207.
Uyeki T., Cox N. Global concerns regarding novel influenza A(H7N9) virus infections // N. Engl. J. Med. 2013. V. 368. R. 1862 - 1864.
Wareing M.D., Watson J.M., Brooks M.J. et al. Immunogenic and isotype-specific responses to Russian and US cold-adapted influenza A vaccine donor strains
A/Leningrad/134/17/57, A/Leningrad/134/47/57, and A/Ann Arbor/6/60 (H2N2) in mice // J. Med. Virol. 2001. V. 65. R. 171 - 177.
WHO global alert and response (GAR). Recommended composition of influenza virus vaccines. http://www.who.int/csr/disease/influenza/en/.
WHO global action plan to increase vaccine supply for influenza vaccines. 2006, Geneva, Belgium. WHO/IVB/06.13. WHO/ODS/ERR/GIR/2006.1.
WHO global influenza preparedness plan. 2005. WHO/CDS/CSR/GIR/2005.5. http://www.who.int/csr/resources/publications/influenza/en/WHO_CDS_
CSR_GIR_2005_5.pdf.
Yin J., Liu S., Zhu Y. An overview of the highly pathogenic H5N1 influenza virus //Virol. Sin. 2013. V. 28. P. 3 - 15.
АдаергеН
ТОРГОВЫЙ дом
SHUYRNG
ИММУНОГЛОБУЛИН ПРОТИВОСТОЛБНЯЧНЫЙ ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Зарегистрирован и разрешен к применению в РФ. Per. уд. Минздравсоцразвития ЛСР-010493/08-241208
В пункте 6.5 Санитарно-эпидемиологических правил «Профилактика столбняка. СП 3.1.1381 -03», утвержденных Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 6 июня 2003 г. сказано, что при экстренной профилактике столбняка «Противостолбнячную сыворотку (ПСС) применяют только в том случае, если отсутствует более эффективный противостолбнячный человеческий иммуноглобулин (ПСЧИ)».
• Наличие гомологичных антител исключает развитие аллергических реакций и сывороточной болезни.
• Нет необходимости подогревать препарат перед использованием.
• Препарата требуется в 2 раза меньше (100 МЕ/мл флакон 2,5 мл против 50 МЕ/мл ампула 5 мл).
• Антитела пассивного иммунитета присутствуют в крови в 2 раза дольше (4 недели/2 недели).
• Стабилизатор глицин - не токсичен, безопасен.
ОАОК «Торговый дом Аллерген» 142190, г. Москва г. Троицк, Сиреневый бульвар, д. 15 Тел./факс: (495) 851-06-45, 851-09-34, 850-21-62, моб. тел.: 8-916-806-96-57, 8-916-573-56-67,
e-mail: ¡nfo@allergen.ru, www.allergen.ru
