CC BY
28
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
IL-6 на компенсаторную гиперпродукцию инсулина в патогенезе инсулинорезистентности.
Тем не менее, выявленные нами отрицательные ассоциации IL-6 с глюкозой в сыворотке крови у больных без СД 2 типа и, напротив, положительные между содержанием IL-6 и гликированным гемоглобином, а также между уровнем его экспрессии в висцеральной ЖТ с глюкозой и индексом HOMA-IR у больных с СД 2 типа могут свидетельствовать о разнонаправленных эффектах IL-6 на показатели углеводного обмена.
Работа выполнена в рамках программы повышения конкурентоспособности («дорожной карты») и субсидии «Организация проведения научных исследований 20.4986.2017/ВУ» Балтийского федерального университета им. Иммануила Канта.
ВЛИЯНИЕ ЛИПОПОЛИСАХАРИДА НА ПРОДУКЦИЮ КОЛЛАГЕНА IV ТИПА ДЕРМАЛЬНЫМИ ФИБРОБЛАСТАМИ ДЕТЕЙ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КИШЕЧНИКА
Васильева Е.А., Федулова Э.Н., Мухина И.В.
ФГБУ«Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр» Министерства здравоохранения РФ, Нижний Новгород, Россия
Введение. Фибробласты кожи участвуют в репарации ткани, продуцируя компоненты внеклеточного матрик-са и базальной мембраны. Коллаген IV типа — главный компонент базальной мембраны кожи, участвует в клеточной адгезии и миграции. Для хронического течения болезни Крона и язвенного колита характерно развитие воспаления на системном уровне, появление в кровотоке медиаторов воспаления, в том числе липополисахарида (LPS), которые, в свою очередь, могут влиять на функцию фибробластов, в том числе дермальных, и изменять секрецию фибробластами компонентов внеклеточного матрикса и базальной мембраны.
Цель. Оценить уровень секреции коллагена IV типа дермальными фибробластами при их культивировании in vitro в ответ на стимуляцию липополисахаридом.
Материалы и методы. В исследовании использованы дермальные фибробласты, выделенные от пяти детей с болезнью Крона, пяти детей с язвенным колитом и пяти условно здоровых детей (контрольная группа) в возрасте 13-17 лет. От всех участников и их родителей получено письменное информированное согласие, исследование одобрено этическим комитетом и ученым советом института. Критериями включения пациентов стали возраст, отсутствие других аутоиммунных заболеваний и педиатрический индекс активности болезни Крона и язвенного колита (PCDAI/PUCAI = 10-20 баллов). Первичные культуры дермальных фибробластов получали из биоптатов кожи предплечья путем ферментативной обработки по стандартной методике. Клетки культивировали в среде DMEM (ПанЭко, Россия) c добавлением 10% ЭТС (ПанЭко, Россия), 0,33 мг/мл L-глутамина (ПанЭко, Россия), 55 Ед/мл пенициллина и 55 мкг/мл стрептомицина (ПанЭко, Россия) при 37 °С в атмосфере 5% СО2. Замену среды проводили каждые 3-4 дня. Клетки после третьего пассажа засевали в 24-луночный планшет (Thermo scientific, Германия) и культивировали до достижения культурой монослоя. Для стимуляции секреторной активности дермальных фибро-бластов культуральную среду в соответствующих лунках меняли на питательную среду, содержащую индуктор вос-
паления LPS. Контролями служили лунки с дермальными фибробластами, в которые добавляли питательную среду без индуктора. В качестве стимулятора активности дермальных фибробластов использовали индуктор воспаления Lipopolysaccharides из Escherichia coli, серотип O55:B5 (Sigma, Германия) в концентрации 10 мкг/мл. Стимуляцию дермальных фибробластов проводили в течение 24 часов. Супернатанты отбирали, пропускали через фильтр с диаметром пор 0,22 цм (GE Osmonics, США), и при необходимости аликвоты хранили при -80 °С. Оценку уровня коллагена IV типа в культуральной среде проводили методом ELISA тест-системой EKF diagnostics (Япония) согласно инструкции производителя.
Результаты. Спонтанная продукция коллагена IV типа дермальными фибробластами детей с язвенным колитом статистически значимо снижена по сравнению с ее уровнем в группе условно здоровых детей и детей с болезнью Крона. Средние значения концентраций коллагена IV типа в супернатанте дермальных фибробластов условно здоровых детей и детей с болезнью Крона, язвенным колитом составили соответственно: 5,34±0,93 мкг/мл, 4,27±1,51 мкг/мл; 3,72±1,98 (р = 0,015 против контроля; р = 0,021 против болезни Крона). В ходе исследования установлено, что в ответ на добавление LPS E. coli O55:B5 дермальные фибробласты детей с болезнью Крона и язвенным колитом снижают секрецию коллагена IV типа. Концентрация в супернатанте коллагена IV типа уменьшалась на 50,2%, с 4,27±1,51 мкг/мл до 2,13±0,55 мкг/мл (p = 0,021) у детей с болезнью Крона; на 38,7% с 3,72±1,98 мкг/мл до 2,28±0,83 мкг/мл (p = 0,027) у детей с язвенным колитом; на 3,4% в группе условно здоровых детей.
Заключение. Уровень спонтанной секреции дермаль-ными фибробластами коллагена IV типа снижен в группах детей с болезнью Крона и язвенным колитом по сравнению со значением в группе условно здоровых детей. Индуктор воспаления липополисахарид LPS E. coli O55:B5 снижает его секрецию дермальными фибробластами по сравнению с его уже сниженным базовым уровнем в результате хронического воспаления в кишечнике. Таким образом, механизмом нарушения целостности и защитных функций кожи у детей с воспалительными заболеваниями кишечника может быть снижение продукции дермальными фибробластами коллагена IV типа, потенцируемое липополисахаридом.
КЛЕТКИ-СУПРЕССОРЫ МИЕЛОИДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ У ДЕТЕЙ С ПСОРИАЗОМ
Герасимова Д.Г.1, Закиров Р.Ш.2, Радыгина Т.В.2, Курбатова О.В.3, Самохина И.В.2, Мурашкин Н.Н.2, Петричук С.В.2
1ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет» им. Н.Н. Пирогова, Москва, Россия
2 ФГБНУ «Научный центр здоровья детей», Москва, Россия
3 ФГБНУ «Научный центр акушерства, гинекологии
и перинатологии» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Псориаз является распространенным иммуноопосре-дованным, хроническим воспалительным заболеванием кожи. Важную роль в развитии псориаза играют дендритные клетки и активированные Т-лимфоциты (act-Th),
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
взаимодействие которых запускает ряд механизмов, приводящих в конечном итоге к развитию воспалительного процесса и формированию псориатических поражений кожи. Особое внимание уделяется участию в патогенезе псориаза клеткам-супрессорам миелоидного происхождения (MDSCs) и регуляторным Т-клеткам (Teg). MDSCs относятся к гемопоэтической линии и представляют собой гетерогенную популяцию ранних миелоид-ных клеток-предшественников. Результаты исследования MDSCs у взрослых, больных псориазом, и здоровых пациентов показали, что MDSCs значительно увеличиваются в крови пациентов с псориазом по сравнению со здоровыми лицами. MDSCs участвуют в привлечении и поддержке Treg.
Цель. Оценить количество MDSCs, Treg, act-Th и ТЫ7-лимфоцитов (ТЫ7-лф) периферической крови у детей с псориазом в зависимости от возраста и длительности заболевания.
Материалы и методы. Обследовано 54 пациента с тяжелым течением псориаза. Степень тяжести псориаза оценивали с помощью индекса PASI(> 12 баллов). Группа сравнения (гр. ср.) составила 32 человека. Возраст пациентов составил 2-17 лет. Всем детям провели количественную оценку популяций MDSCs (CD11b+CD33+HLA-DR-), ТЫ7-лф. (CD3+CD4+CD161+CD45+), Treg (CD3+CD4+ CD127low+CD45+), act-Th (CD3+CD4+CD127h+CD45+) на проточном цитометре BD FACSCanto™ (США) и CYTOMICS FC500 (Beckman Coulter, США). Статистическая обработка полученных результатов была выполнена с помощью пакета Statistica 6.0, критерий Манна—Уитни, данные представлены в виде медиана [верх.; ниж. квартиль].
Результаты. Количество MDSCs у детей с псориазом находилось в диапазоне от 18 до 211 кл/мкл и было достоверно больше, чем в группе сравнения (пациенты с псориазом — 65 [92; 43] кл/мкл; гр. ср. - 50 [61; 35] кл/мкл; р = 0,013), что согласуется с данными у взрослых пациентов с псориазом. Проведенный анализ не выявил зависимости количества MDSCs от возраста пациентов как в группе детей с псориазом, так и в группе сравнения. Получено, что количество MDSCs зависит от длительности заболевания. Максимальное количество MDSCs наблюдалось у детей, болеющих менее 3-х лет, и составляло 75 [121; 43] кл/мкл. При длительности заболевания более 6 лет, количество MDSCs уменьшалось на 40%. Корреляционный анализ выявил обратную зависимость между количеством MDSCs и содержанием ТЫ7-лф и act-Th (% CD4), при этом зависимости между MDSCs и Treg-лф обнаружено не было. Анализ абсолютного количества супрессорных клеток (MDSCs + Treg) показал, что с увеличением длительности заболевания количество этих клеток уменьшается (r = -0.39). Динамическое наблюдение детей с псориазом, не отвечающих на терапию, показало увеличение количества MDSCs.
Выводы. Таким образом, анализ количества клеток-су-прессоров у детей с тяжелым течением псориаза показал, что в первые годы заболевания иммунная система активно отвечает на патологический процесс увеличением количества MDSCs в циркуляции. Длительное течение заболевания приводит к снижению ответной реакции, что выражается в уменьшении количества MDSCs на фоне повышения содержания аутоагрессивных ТЫ7-лф и активированных Т-хелперов, что сопровождается утяжелением состояния пациентов. Дальнейшее изучение клеток-супрессоров мие-лоидного происхождения должно быть направлено на оценку их функциональной и метаболической активности.
ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА ЖЕНЩИН СТАРШЕЙ ВОЗРАСТНОЙ ГРУППЫ С ОСТЕОАРТРОЗОМ, СОПРОВОЖДАЮЩИМСЯ ОСТЕОПЕНИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ
Гладкова Е.В., Карякина Е.В., Бабушкина И.В., Белова С.В., Царева Е.Е., Персова Е.А.
НИИТОН ФГБОУВО «Саратовский МУ им В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения РФ, Саратов, Россия
Введение. Остеоартроз (ОА) крупных суставов — распространенная группа полиэтиологических заболеваний с широкой распространенностью (до 20% населения) и высокой степенью инвалидизации пациентов, что формирует существенную медико-экономическую нагрузку на общество. Значительная доля пациентов — женщины старшей возрастной группы, у которых течение ОА сопровождается выраженными нарушениями ремоделиро-вания костной ткани, что в значительной степени усугубляет течение основного заболевания, поражающего все суставные структуры, усложняет лечение и ухудшает прогноз. Особенности патофизиологических механизмов прогрессирования поражения суставов обусловлены как местными, так и системными клеточными реакциями, действием гуморальных факторов в условиях выраженных воспалительно-дегенеративных изменений, что требует дополнительного изучения.
Цель. Изучение особенностей иммунных реакций у женщин с остеоартрозом, сопровождающимся остеопе-ническим синдромом.
Материалы и методы. В исследовании принимали участие 32 пациентки с остеоартрозом (ОА) в возрасте 6472 лет (с интерквартальной широтой — 69 лет), осложненным постменопаузальным остеопорозом (ОП) — опытная группа и 20 добровольцев — доноров без заболеваний опорно-двигательного аппарата (группа контроля). Всем участникам исследования в сыворотке крови проведено определение содержания цитокинов (TNFa, IL-1, IL-4, IL-6, IL-10), иммуноглобулинов основных классов (А, М, G) и показателей состояния костного метаболизма (уровня 25-гидроксивитамина D [25 (ОН) D], основного неколлагенового белка матрикса кости — остеокальцина и SerumCross Laps — фрагментов коллагена I типа) методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием спектрофотометра многофункционального Epochtm. Определение компонентов комплемента С3 и С4 проводили турбидиметрическим методом с использованием наборов CORMAY COMPLEMENT С 3 и CORMAY COMPLEMENT C4 и автоматического биохимического анализатора Sapphire 400. Статистическая обработка полученных результатов осуществлена с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0.
Результаты. У пациенток опытной группы отмечено повышение (р < 0,05) уровня SerumCross Laps (0,56±0,04 нг/мл) по сравнению с показателями контрольной группы (0,39±0,03 нг/мл), снижение уровня остеокальцина (22,25±1,32 нг/мл) и (14,48±1,65 нг/мл) и сывороточного D [25 (ОН) D] — 25,6±7,3 и 52,7±9,2 нг/мл соответственно. Несмотря на выраженные воспалительные и дегенеративные процессы в пораженных суставах, определяющих аутоиммунный компонент, у пациенток с ОА выявляли лишь незначительное повышение С3, не достигавшее существенных отличий от аналогичных значений в контрольной группе, а также разнонаправленные колебания уровня С4, не
