CC BY
54
ИММУНОЛОГИЯ № 3, 2014
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 616.344-002-031.84-07:616.155.34
Маянская И.В.* 1, Васильева Е.А.1, Ашкинази В.И.1, Кропотов В.С.1, Толкачева Н.И.1,
Руднева Е.и.2, Федулова Э.Н.1, Широкова Н.Ю.1, Тутина о.А.1
влияние секреторных факторов фибропластов на кислородзависимый метаболизм нейтрофилов
1ФГБУ «Нижегородский научно-исследовательский институт детской гастроэнтерологии» Минздрава России, 603095, г. Нижний Новгород, ул. Семашко, 22; Нижегородская государственная медицинская академия Минздрава России, 603005, г. Нижний Новгород, пл. Минина, 10/1
Изучено влияние растворимых секреторных факторов дермальных фибропластов (Фб) в условиях многодневного культивирования на респираторный взрыв праймированных и непраймированных нейтрофилов доноров при помощи люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ). Супернатанты (СН) клеточных культур Фб не влияли на спонтанную ХЛ нейтрофилов. Воздействие на нейтрофилы, праймированные опсонизированным зимозаном (ОЗ), подавляло их реактивность, что, вероятно, связано с истощением их функционального резерва и неспособностью отвечать на дополнительный стимул. Это рассматривается как негативный эффект секреторных продуктов Фб на защитные свойства нейтрофилов. С точки зрения организма такая ситуация может способствовать расширению патологического процесса. Индуцирование СН нейтрофилов с последующим воздействием ОЗ вызывало ХЛ на уровне контроля (нейтрофилы + ОЗ). Не выявлено особенностей влияния СН Фб здоровых детей и детей с болезнью Крона на респираторный взрыв нейтрофилов. Статистически значимые различия установлены в секреции цитокинов и ряда других функционально значимых белков, продуцируемых Фб. СН больных имели значительно сниженный уровень фактора некроза опухоли а, интерлейкина (ИЛ)-6, ИЛ-10 и коллагена IV типа на фоне высоких показателей FAP и фибронектина.
Ключевые слова: фибробласты; супернатанты; секреторные компоненты; праймированные и непраймиро-ванные нейтрофилы; здоровые дети; дети с болезнью Крона.
Mayanskaya I.V.1, Vasilyeva E.A.1, Achkinazi V.I.1, Kropotov VS.1, Tolkacheva N.I.1, Rudneva E.I.2, Fedulova E.N.1, Chirokova N.U.1, Tutina O.A.1
INFLUENCE OF FIBROBLAST SECRETORY PRODUCTS ON OXYGEN-DEPENDENT NEUTROPHILE METABOLISM
1Nizhnij Novgorod Research Institute of Children's Gastroenterology of Ministry of Public Health, Russian Federation, Hi-zhnij Novgorod State Medical Academy, Russian Federation
The influence of soluble secretory factors of dermal fibroblasts of many days cultivation on the respiratory burst of primed and non-primed human neutrophiles in luminol-dependent chemiluminescence was studied. Fibroblast supernatants had no influence on spontaneous chemiluminescence of neutrophiles. Supernatants of fibroblasts inhibited the reactivity of neutrophiles primed with opsonized zymosan. It was probably bound with reserve exhaustion of neutrophiles and their inability to response to additional stimulus. This reaction can be a negative effect of secretory fibroblast products that are destroying the defending properties of neutrophiles. From the properties of whole organism this situation could lead to dilation of pathological process. Neutrophile induction with fibroblast supernatants with subsequent addition of opsonised zymosan has no significant effect on the neutrophile chemiluminescence. Their were no differences in fibroblast supernatants influences on neutrophiles respiratory burst produced by healthy children and children with Crohn's disease. Significant differences were shown in fibroblast secretion of cytokines and other biologically active factors. Supernatants had significantly reduced levels of TNF-а, IL-6, IL-10 and collagen IV against of the high levels of FAP and fibronectin.
Key word: fibroblasts; supernatants; secretory products; primed and non-primed neutrophiles; healthy children; children with Crohn's disease
Клетки фибробластического ряда являются преобладающей клеточной популяцией рыхлой волокнистой соединительной ткани и занимают одно из главных мест при ее формировании. Ключевой функцией фибропластов (Фб) является синтез компонентов внеклеточного матрикса (ВКМ) соединительной ткани: коллагена, протеогликанов, гликопротеинов, цитокинов, хемокинов, ростовых факторов, матрикс-ных металлопротеиназ (ММР). Количество Фб в участках воспаления увеличивается, они активируются, продуцируют коллаген, фибронектин и другие компоненты ВКМ, которые оказывают ауто- и паракринное действие [1-4]. Этот эффект осуществляется цитокинами, ростовыми факторами, которые секретируют Фб под влиянием различных стимуля-
Для корреспонденции: Маянская Ирина Васильевна, e-mail: immunol@mail.ru
For correspondence: Mayanskaya Irina Vasil’yevna, e-mail: immonol@mail.ru
торов [5-7]. Установлена способность дермальных Фб подавлять активацию аллогенных Т-лимфоцитов аутологичными стимуляторами, и эта супрессия опосредована растворимыми факторами Фб [8]. Показаны синтез дермальными Фб нейтрофильного хемотаксического фактора (интерлейкин (ИЛ)-8), снижение экспрессии маркеров активации (CD 25 и CD 95) мононуклеарами периферической крови под влиянием супернатантов (СН) аллогенных Фб [9]. Данные экспериментальные работы подтверждают роль секреторной активности Фб, которая может проявляться в организме под влиянием коммитирующих факторов, подготавливающих Фб к продукции ВКМ.
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), к которым относится болезнь Крона (БК), являются актуальной проблемой детской гастроэнтерологии. В последние годы в структуре ВЗК установлено отчетливое повышение ее доли с утяжелением патологического процесса, развитием осложнений, манифестацией до 3-летнего возраста [10]. Это тяжелое системное воспалительное заболевание неясной этиологии
- 130 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
с преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, внекишечными проявлениями и связанными с ними иммунными нарушениями [11, 12]. Для БК характерно развитие фиброзных стриктур и воспалительных фистул, которые связывают между собой сегменты кишечника, кишечника с кожей и другими органами [13, 14]. Остаются малоизученными секреторная активность дермальных Фб и ее значение для активации клеток крови у здоровых и больных детей.
В статье представлены результаты изучения влияния негативного и позитивного праймирования нейтрофилов СН клеточных культур дермальных Фб, полученных от здоровых детей и пациентов с БК.
Материалы и методы. Фб выделяли методом миграции из фрагментов нормальной кожи 3 здоровых детей и 3 детей с БК (после получения информированного согласия детей и их родителей, а также одобрения этического комитета института). Кожные биоптаты детей промывали фосфатносолевым буфером (PBS), помещали в 0,25% раствор трипсина (“Биолот”, Россия) и инкубировали 12 ч при 4°С. Отделяли пинцетом дерму от эпидермиса, промывали дважды в PBS, разрезали на мелкие фрагменты и помещали в культуральные флаконы, в которые вносили небольшое количество питательной среды ДМЭМ (“ПанЭко”, Россия) в присутствии антибиотиков (55 ЕД/мл пенициллина, 55 мкг/мл стрептомицина), 146 мкг L-глутамина (“ПанЭко”, Россия), 40% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) (“ПанЭко”, Россия ) в атмосфере 5% СО2 при температуре 37°С. Культивирование проводили до шести пассажей в среде ДМЭМ такого же содержания, меняя лишь концентрацию ЭТС до 10%. Замену среды осуществляли каждые 3-4 дня. Клетки смывали 0,25% раствором трипсин - ЭДТА с солями Хенкса («ПанЭко», Россия). Культуры Фб пассировали при достижении конфлюэнтного монослоя. Жизнеспособность культивируемых клеток составила 98-99%. СН каждого пассажа забирали, фильтровали с помощью фильтра (0,22 мкм) для устранения посторонних примесей и хранили при необходимости в морозильной камере при -80°С. Исследование экспрессии поверхностных кластеров дифференцировки клеток проводили на проточном цитофлюориметре BD FACS Cantu II (Becton Dickinson, США) при помощи моноклональных антител к антигенам CD90-FITC, CD105-PE, CD73-APS, CD44-PE (FITC), CD 34, CD45, CD19, 11b, HLA-DR-PE. В процессе роста и многодневного культивирования Фб сохраняли фенотип мезенхимальных стромальных клеток и не экспрессировали маркеры гемопоэтических клеток (CD34, CD45, СD19, CD11b) и были негативны по HLA-DR.
В СН (культуральная среда, в которой выращивали Фб) изучали содержание цитокинов ИЛ-6, ИЛ-10, фактора некроза опухоли а (ФНОа) (Bender Medsystems, Австрия), коллагена IV типа (Argutus Medical, Япония), фибронектина (Technoclone, Австрия), фибробластактивирующего белка (FAP) (Raybio, США) методом иммуноферментного анализа (ИФА).
После каждого пассажа исследовали влияние СН Фб здоровых и больных детей на кислородзависимый метаболизм нейтрофильных гранулоцитов: контрольные нейтрофилы (спонтанная реакция); нейтрофилы, индуцированные СН Фб; опсонизированным зимозаном (ОЗ); нейтрофилы, праймиро-ванные СН и последующим воздействием ОЗ; нейтрофилы, праймированные ОЗ, с последующим воздействием СН Фб. ОЗ готовили по методу [15]. Лейкоцитмодулирующую активность нейтрофилов изучали методом [16] люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) с использованием лейковзвеси (в растворе Хенкса без фенолового красного) здоровых доноров, так как известно, что итоговый показатель ХЛ лейкоцитов крови обусловливают нейтрофилы [17]. Клетки получали с помощью декстрана Т-500 из гепаринизированной венозной крови не менее чем от 3 доноров. Нейтрофилы взвешивали в растворе Хенкса без фенолового красного (1-106 кле-ток/мл) в объеме 100 мкл, вносили в лунки непрозрачного 96-луночного планшета (white Cliniplate 96 well, Thermo Scientific, Финляндия), приливали 100 мкл люминола (10-3 М)
Рис. 1. ХЛ нейтрофилов, непраймированных и праймированных СН Фб и ОЗ, у здоровых детей и с БК.
По оси абсцисс: 1 - спонтанная реакция; нейтрофилы, активированные СН Фб здоровых детей; нейтрофилы, активированные СН больных детей; 2 - спонтанная реакция; нейтрофилы, праймированные СН здоровых детей и ОЗ; нейтрофилы, праймированные СН больных детей и ОЗ. Здесь и на рис. 2: по оси ординат - ХЛЛ (в с. е.); * - p < 0,05 различия между праймированными и непраймированными нейтрофилами. * У
и помещали в микропланшетный люминометр (Luminoskan Ascent, Финляндия). После 5-минутной инкубации при температуре 37°С и постоянном автоматическом встряхивании к реакционной смеси добавляли 50 мкл испытуемого образца (индуцированная реакция) или 50 мкл раствора Хенкса без фенолового красного (спонтанная реакция - контрольный образец) и продолжали инкубацию в течение 30 мин. Считывание показателей каждой лунки осуществляли в течение 2 с при постоянной температуре (37°С) и автоматическом встряхивании и заканчивали после прохождения пика реакции. Проводили 30 циклов измерений, которые регистрировали с помощью люминометра. Результаты выражали в относительных световых единицах (с. е.) В работе использовали шесть культур Фб от шести пассажей. Для оценки статистической значимости уровня ХЛ праймированных и непраймирован-ных нейтрофилов от здоровых и больных детей использовали непараметрические методы Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты и обсуждение. СН Фб здоровых детей не оказывали существенного влияния на ХЛ нейтрофилов и не зависели от сроков пассажа культивирования. Различия между спонтанной и СН-индуцированными реакциями нейтрофилов не выходили за рамки одинакового распределения.
У детей с БК СН Фб стимулировали реактивность нейтрофилов, начиная со второго пассажа, однако вспышка ХЛ значимо не отличалась от уровня здоровых. ОЗ как классический стимулятор, который вызывает возбуждение клеток за счет С3Ь-фактора комплемента, значительно усиливал ХЛ нейтрофилов, которая значимо превосходила показатели при воздействия СН Фб (р = 0,001) (рис. 1). Праймирование нейтрофилов супернатантами от шести пассажей культивируемых ФБ от здоровых и больных детей при дополнительном воздействии ОЗ значительно повышало их реактивность, что выражалось усилением люминолзависимой ХЛ (см. рис. 1). Усиление регистрировали от 5,5 до 22,3 раза, оно выражалось по-разному для 1-6 пассажей как у больных, так и здоровых детей. Индексы стимуляции (^отношение показателей индуцированной и спонтанной ХЛ) колебались незначительно (от 34 до 42). ОЗ вызывал одинаковую вспышку ХЛ после предварительной обработки нейтрофилов СН так же, как и без их инкубации с СН Фб (см. рис. 1).
В предыдущих опытах [18] в СН Фб условно-здоровых детей и пациентов с БК на различных сроках культивирования мы установили спектр белков различной молекулярной
- 131 -
ИММУНОЛОГИЯ № 3, 2014
Рис. 2. ХЛ нейтрофилов, непраймированных и праймированных ОЗ и СН Фб, у здоровых детей и с БК.
По оси абсцисс: 1 - спонтанная реакция; нейтрофилы, активированные ОЗ; 2 - нейтрофилы, праймированные ОЗ и СН здоровых детей; нейтрофилы, праймированные ОЗ и СН больных детей.
массы - от 0,8 до 16,6 кД и более. Причем в СН больных детей отметили увеличение доли белковых фрагментов массой от 11 до 16, 6 кД. В СН Фб третьего пассажа обнаружили наибольшее количество протеинов мол. массой > 16, 6 кД. Следует заметить, что нейтрофилы данного пассажа после дополнительного стимула ОЗ имели самые высокие показатели (1854 с. е. против 83 с. е.). Индекс стимуляции ХЛ у данных клеток был также самым высоким (56,2 против 1,12).
Противоположные результаты получили после предварительной обработки нейтрофилов ОЗ. Это выражалось в снижении показателей ХЛ после дополнительного внесения СН Фб любого из пассажей (р=0,002) как у здоровых, так и у больных детей (рис. 2). Фб, подобно обычным клеткам, продуцируют различные антиоксиданты, которые служат им прикрытием против факторов оксидантного стресса, нарабатываемых внутри или снаружи клетки [14]. К антиоксидантным факторам принадлежат агенты, нейтрализующие реактивные формы кислорода и окиси азота, которые вызывают периоксидазную реакцию мембранных липидов, а вместе с ней высвобождение множества молекул, которые ведут к повреждению плазматической мембраны клеток, инактивации белков и клеточной ДНК [14, 19]. Инкубация мезенхимальных стромальных клеток (к которым относятся Фб) с нейтрофилами ведет к подавлению их апоптоза, респираторного взрыва, хемотаксиса по отношению к стандартным (ИЛ-8, С5а) стимулам [20].
БК характеризуется хроническим воспалением с участием постоянной миграции нейтрофилов в кишечную стриктуру, в результате чего нарушается регуляция нормального заживления поврежденной ткани. Активированные нейтрофилы выделяют активные формы кислорода, которые вызывают разрушение ткани, пищеварительных ферментов, способны разрушать белки, в частности мощный воспалительный цитокин (ФНОа), который повышает продукцию нейтрофильного хемоаттрактанта (ИЛ-8) макрофагами. Присоединяющиеся изъязвления эпителия также сопровождаются инфильтрацией нейтрофилами. В зоне крипт тонкой и толстой кишки накапливается значительное количество нейтрофилов, что приводит к абсцедированию крипт и атрофическим изменениям слизистой оболочки [10].
Результаты наших исследований показывают, что продукты, секретируемые Фб, могут по-разному влиять на реактивность нейтрофилов. Респираторный взрыв является суммой процессов, зависящих от комплекса мембранных и цитозольных протеинов, собирающихся вместе, чтобы отреагировать на действие многих факторов [21]. С точки зрения негативного эффекта секреторных продуктов Фб на праймированные ОЗ нейтрофилы угнетение ХЛ можно рассматривать как нару-
шение их защитных свойств, способствующих расширению зоны патологического процесса, ведущее к разрушению ВКМ и дальнейшему повреждению слизистой оболочки [14]. В то же время подавление активных форм кислорода нейтрофилов, многие из которых являются токсичными для клеток, может быть положительным моментом. Это подтверждает возможность нейтрофилов к регуляции своей деактивирующей и праймирующей способности к респираторному взрыву [21].
В других исследованиях в отличие от наших стимуляция нейтрофилов ОЗ не меняла их реакции на СН эмбриональных Фб [5]. Это могло быть связано с функциональными особенностями эмбриональных и дермальных ФБ, которые использовались в нашей работе. Следует отметить, что автор наблюдал снижение интенсивности респираторного взрыва нейтрофилов СН эмбриональных Фб в условиях воздействия провоспалительных факторов. Известно, что Фб секретиру-ют целый ряд биологически активных молекул, в том числе цитокинов [4, 5, 22, 23]. В наших исследованиях Фб здоровых детей продуцировали ИЛ-6, ИЛ-10, ФНОа, коллаген IV типа статистически значимо больше, чем Фб детей с БК (p=0,005). Содержание изучаемых компонентов не зависело от количества пассажей культивируемых клеток. Секреция фибронек-тина и FAP, наоборот, оказалась сниженной (р=0,01).
Отсутствие статистически значимых различий, выявленных нами при изучении влияния СН дермальных Фб здоровых и больных детей на спонтанные и индуцированные реакции НГ, свидетельствует об их идентичности, подчеркивая тем самым общие биологические свойства кожных Фб.
Таким образом, в нашей работе показано, что СН дермальных Фб здоровых и детей с БК существенно не влияли на спонтанную ХЛ полинуклеарных фагоцитов. Уровень СН-индуцированной ХЛ нейтрофилов после воздействия ОЗ значительно превышал спонтанную реакцию и не зависел от времени культивирования Фб и состояния здоровья детей. Воздействие СН на ОЗ-праймированные нейтрофилы, напротив, снижало их реактивность по сравнению с непраймированными клетками. Это может быть связано с физиологическими свойствами НГ, в частности с тем, что стимулированные нейтрофилы, исчерпав свой резерв, не в состоянии отвечать на дополнительные раздражители. Нельзя исключить и негативного воздействия секреторных компонентов Фб на функциональную активность НГ.
Статистически значимые различия между здоровыми детьми и детьми с БК установили лишь в секреции цитокинов Фб. СН больных имели значительно сниженный уровень ФНОа, ИЛ-6, ИЛ-10 и коллагена IV типа на фоне высокого содержания FAP и фибронектина.
ЛИТЕРАТУРА
1. Омельяненко Н.П., Слуцкий Л.И. Соединительная ткань (гистофизиология и биохимия). М.: Известия; 2009.
2. Базо И.Я., Деев Р.В., Пинаев ГП. «Фибробласт» - специализированная клетка или функциональное состояние клеток мезенхимального происхождения. Цитология. 2010; 52 (2): 99-109.
3. Wight T.N., Potter-Perigo S. The extracellular matrix: an active or passive player in fibrosis? Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2011; 301 (6): G950-5.
4. Зорина А., Зорин В., Черкасов В. Дермальные фибробласты: разнообразие фенотипов и физиологических функций, роль в старении кожи. Эстетическая медицина. 2012; 11(1): 15-31.
5. Бурда Ю.Е. Клинико-иммунологическое обоснование противовоспалительного действия аллогенных эмбриональных Фб при трансплантации: Дисс. ... канд. мед. наук. Курск; 2003.
6. Маянская И.В., Гоганова А.Ю., Толкачева Н.И., Ашкинази В.И., Маянский А.Н. Иммуносупрессивное действие мезенхимальных стволовых (стромальных) клеток. Иммунология. 2013; 2:122-8.
7. Есаулова И.Н. Исследование супернатанта, полученного при добавлении пептидов из тканей печени и сердца барана к культуре Фб. Сибирский медицинский журнал. 2009; 7: 118-20.
- 132
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
8. Haniffa M.A. Wang X.N., Holtick U. et al. Adult human fibroblasts are potent immunoregulatory cells and functionally equivalent to mesenchymal stem cells. J. Immunol. 2007; 179 (3): 1595-604.
9. Бурда Ю.Е., Ершов Д.В. Влияние аллогенных Фб и их супернатантов на экспрессию активационных маркеров монону-клеарами периферической крови in vitro. Фундаментальные исследования. 2005; 5: 43.
10. Федулова Э.Н. Клинико- патогенетические особенности язвенного колита и болезни Крона у детей: диагностика, прогнозирование и лечение: Дисс. Н. Новгород; 2013.
11. Мазанкова Л.Н., Халиф И.Л., Водилова О.В. Болезнь Крона у детей. Принципы диагностики и лечения. М.: Медпресс-информ; 2008.
12. Маянская И.В., Маянский А. Н. Неиммунные и иммунные механизмы, участвующие в развитии хронических воспалительных заболеваний кишечника. Вопросы диагностики в педиатрии. 2013; 5 (4): 14-23.
13. Baumgart D.C., Sandborn W. Crohn’s disease. Lancet. 2012; 380(9853): 1590-605.
14. Alzoghaibi M.A. Neutrophil expression and infiltration into Crohn- s intestine. Saudi J. Gastroenterol. 2005; 11 (2): 63-72.
15. Конышкина Т.М. Реактивная хемилюминесценция как основа для функциональной оценки C3b - рецепторов нейтрофилов человека. В кн.: Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций. Горький; 1989: 131-7.
16. Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д., Макарова О.П. Диагностическая ценность лейкоцитарных тестов. Определение биоцидности лейкоцитов: Методические рекомендации. Новосибирск; 1996.
17. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань: Магариф; 1993.
18. Кропотов В.С., Колесов С.А., Васильева Е.А., Маянская И.В., Ашкинази В.И. Спектр белков, продуцируемый дермальными фибробластами, у детей с болезнью Крона. Вопросы современной педиатрии. 2013; 12 (6): 120-2.
19. Takahashi M., Morita Т., Fukuoka T., Imura Т., Kitamoto D. J. Glycolipid biosurfactants, mannosylerythritol lipids, show antioxidant and protective effects against H (2)0(2)- induced oxidative stress in cultured human skin fibroblasts. J. Oleo. Sci. 2012; 61 (8): 457-64.
20. Raffaghello L., Bianchi G., Bertolotto M. et al. Human mesenchymal stem cells inhibit neutrophil apoptosis: a model for neutrophil preservation in the bone marrow niche. Stem Cells. 2008; 26: 151-62.
21. Маянский А.Н. НАДФН - оксидаза нейтрофилов: активация и регуляция. Цитокины и воспаление. 2007; 6 (3): 3-13.
22. Pinchuk I.V., Miffin R.C., Saada J.I., Powell D.W. Intestinal mesenchimal cells. Curr. Gastroenterol. Rep. 2010; 12: 310-8.
23. Шурыгина И.А., Шурыгин М.Г., Аюшинова Н.И., Каня О.В. Фибробласты и их роль в развитии соединительной ткани. Сибирский медицинский журнал. 2012; 3: 8-12.
Поступила 27.02.14
REFERENCES
1. Omel’yanenko N.P., Slutskiy L.I. Connective Tissue (Histophysiology and Biochemistry). [Soedinitel’naya tkan’ (gistofiziologiya i biokhimiya)]. Moscow: Izvestiya; 2009. (in Russian)
2. Bazo I.Ya., Deev R.V., Pinaev G.P. “Fibroblast” - a specialized cell or functional state of cells of mesenchymal origin. Tsitologi-ya. 2010; 52 (2): 99-109. (in Russian)
3. Wight T.N., Potter-Perigo S. The extracellular matrix: an active or passive player in fibrosis? Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2011; 301 (6): G950-5.
4. Zorina A., Zorin V, Cherkasov V Dermal fibroblasts: phenotypic diversity and physiological functions, a role in the aging skin. Esteticheskaya meditsina. 2012; 11(1): 15-31. (in Russian)
5. Burda Yu.E. Clinico-Immunological Basis of Anti-Inflammatory Action of Allogeneic Transplantation of Embryonic
Fibroblasts. [Kliniko-immunologicheskoye obosnovaniye protivovospalitel’nogo deystviya allogennykh embrional’nykh fi-broblastovpri transplantatsii]. Diss. ... kand. med. nauk. Kursk; 2003. (in Russian)
6. Mayanskaya I.V., Goganova A.Yu., Tolkacheva N.I., Ashkinazi V.I., Mayanskiy A.N. Immunosuppressive effect of mesenchymal stem (stromal) cells. Immunologiya. 2013; 2: 122-8. (in Russian)
7. Esaulova I.N. Investigation of the supernatant obtained by adding the peptides of the liver and heart tissues ram to culture fibroblasts. Sibirskiy meditsinskiy zhurnal. 2009; 7: 118-20. 8. (in Russian)
8. Haniffa M.A., Wang X.N., Holtick U. et al. Adult human fibroblasts are potent immunoregulatory cells and functionally equivalent to mesenchymal stem cells. J. Immunol. 2007; 179 (3): 1595-604.
9. Burda Yu.E., Ershov D.V Effect of allogenic fibroblasts and their supernatants on the expression of activation markers in peripheral blood mononuclear cells in vitro. Fundamental’nyye issle-dovaniya. 2005; 5: 43. (in Russian)
10. Fedulova E.N. Clinical and Pathogenetic Features of Ulcerative Colitis and Crohn’s Disease in Children: Diagnosis, Prognosis and Treatment. [Kliniko-patogeneticheskiye osobennosti yazvennogo kolita i bolezni Krona u detey: diagnostika, prognozirovaniye i lech-eniye]: Diss. ... : med. nauk. N. Novgorod; 2013. (in Russian)
11. Mazankova L.N., Khalif I.L., Vodilova O.V. Crohn’s Disease in Children. Principles of Diagnosis and Treatment. [Printsypy diagnostiki i lecheniya]. Moscow: Medpress-inform; 2008. (in Russian)
12. Mayanskaya I.V., Mayanskiy A.N. Preimmune and immune mechanisms involved in the development of chronic inflammatory bowel diseases. Voprosy diagnostiki v pediatrii. 2013; 5 (4): 14-23. (in Russian)
13. Baumgart D.C., Sandborn W. Crohn’s disease. Lancet. 2012; 380(98531): 1590-605.
14. Alzoghaibi M.A. Neutrophil expression and infiltration into Crohn, s intestine. Saudi J. Gastroenterol. 2005; 11 (2): 63-72.
15. Konyshkina T.M. Reactive chemiluminescence as a basis for functional assessment of C3b - receptors in human neutrophils. In: Modeling and Clinical Characteristics of the Phagocytic Reaction. Modelirovanive i klinicheskava kharakteristika fagotsi-tarnvkh reaktsiv], Gor’kiy; 1989: 131-7. (in Russian)
16. Mayanskiy D.N., Tsyrendorzhiev D.D., Makarova O.P. The diagnostic Value of Leukocyte Tests. Definition Biocidity Leukocytes. Methodical Recommendations. [Diagnosticheskaya tsennost’ leykotsitarnykh testov. Opredeleniye biotsidnosti leykotsitov: Metodicheskiye rekomendatsii]. Novosibirsk; 1996. (in Russian)
17. Mayanskiy A.N., Pikuza O.I. Clinical Aspects of Phagocytosis. [Klinicheskiye aspekty fagotsitoza]. Kazan’: Magarif; 1993. (in Russian)
18. Kropotov V.S., Kolesov S.A., Vasil’eva E.A., Mayanskaya I.V., Ashkinazi V.I. The protein spectrum, produced by dermal fibroblasts among children with crohn’s disease. Voprosy sovremen-noypediatrii. 2013; 12 (6): 120-2. (in Russian)
19. Takahashi M., Morita T., Fukuoka T., Imura T., Kitamoto D. J. Glycolipid biosurfactants, mannosylerythritol lipids, show antioxidant and protective effects against H (2)o(2)- induced oxidative stress in cultured human skin fibroblasts. J. Oleo. Sci. 2012; 61 (8): 457-64.
20. Raffaghello L., Bianchi G., Bertolotto M. et al. Human mesenchymal stem cells inhibit neutrophil apoptosis: a model for neutrophil preservation in the bone marrow niche. Stem Cells. 2008; 26: 151-62.
21. Mayanskiy A.N. NADPHN - oxidase neutrophils: activation and regulation. Tsitokiny i vospaleniye. 2007; 6 (3): 3-13. (in Russian)
22. Pinchuk I.V., Miffin R.C., Saada J.I., Powell D.W. Intestinal mesenchimal cells. Curr. Gastroenterol. Rep. 2010; 12: 310-8.
23. Shurygina I.A., Shurygin M.G., Ayushinova N.I., Kanya O.V. Fibroblasts and their role in the development of connective tissue. Sibirskiy meditsinskiy zhurnal. 2012; 3: 8-12. (in Russian)
Received 27.02.14
- 133 -
