CC BY
18
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
(Bio-Rad USA). Статистическая обработка результатов проводилась с помощью пакета программ STATISTICA 6.0, применялись непараметрические методы описательной статистики (метод Манна—Уитни). Контрольную группу составили 11 здоровых добровольцев.
Результаты. Анализ полученных результатов показал достоверное увеличение уровня IL-4 и IL-17A у пациентов ЯК как в обострении, так и в период ремиссии заболевания. Так, в период обострения ЯК уровень ключевого цитокина 1Ь2-лимфоцитов IL-4 достигал 3,23 пг/мл [2,18; 5,02], а в ремиссии — 3,42 пг/мл [2,8; 4,18], в то время как в контрольной группе указанные показатели не превышали 1,87 пг/мл [1,4; 3,2] (р = 0,002; 0,009 соответственно). Повышение уровня данного цитокина указывает на наличие повышенной функциональной активности Th-2 лимфоцитов у больных ЯК, что в целом соответствует данным и других авторов. Уровень IL-17A, основного цитокина секретируемого 1Ъ17-лимфоцитами, также был увеличен в период обострения ЯК, и его значения достигали 15 пг/мл [12,11; 23,38], а в ремиссии заболевания — 14,68 пг/мл [11,29; 17,19], в то время как в контрольной группе указанные показатели соответствовали 7,36 пг/мл [5,18;8,06], (р = 0,00007; 0,00029 соответственно). Повышение уровня IL-17A может свидетельствовать о роли Th17-лимфоцитов в формировании аутоиммунного воспаления при ЯК. В свою очередь IL-10, секретируемый регулятор-ными Т-лимфоцитами (Treg), обладает известным имму-носупрессивным эффектом. В нашем исследовании было выявлено, что только в период ремиссии ЯК уровень IL-10 был достоверно повышен до 27,99 пг/мл [17,53; 33,55], значения которого в контрольной группе составляли не более 4,36 пг/мл [3,26; 15,25], (р = 0,0046). В период же обострения заболевания уровень IL-10 достоверно не отличался от группы контроля и соответствовал 21,93 пг/мл [3,61; 35,35], (р = 0,065). Следовательно, зафиксированное повышение уровня IL-10, указывает на возможную ингиби-рующую роль Treg, в развитии аутоиммунного воспаления при ЯК особенно в период ремиссии заболевания.
Заключение. На основании полученных результатов сделаны следующие выводы: 1) увеличение уровней цитокинов IL-4, IL-17A у больных ЯК указывает на повышение функциональной активности Th2-, Th17-субпопуляций лимфоцитов и их участии в патогенезе хронического аутоиммунного воспаления как при обострении, так и в ремиссии заболевания; 2) повышение уровня IL-10 в период ремиссии заболевания может отражать значимость регуляторных Т-лимфоцитов в инги-бировании аутоиммунного воспаления при ЯК.
ЭФФЕКТЫ IL-6 НА ПОКАЗАТЕЛИ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА У БОЛЬНЫХ АБДОМИНАЛЬНЫМ ОЖИРЕНИЕМ С РАЗЛИЧНЫМ СОСТОЯНИЕМ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА
Василенко М.А.1, Кириенкова Е.В.1, Скуратовская Д.А.1, Затолокин П.А.1, 2, Литвинова Л.С.1
1 Балтийский федеральный университет им. И. Канта, Калининград, Россия
2 Областная клиническая больница Калининградской области, Калининград, Россия
Введение. Ожирение сопровождается субклиническим хроническим воспалением жировой ткани (ЖТ), что оказывает влияние на метаболическую и секреторную функцию
ЖТ способствуя формированию инсулинорезистенгносш (ИР) и сахарного диабета (СД) 2 типа (Mathis D., 2013). Ключевыми молекулами с выраженными провоспалитель-ными свойствами являются — фактор некроза опухолей a (TNFa) и IL-6, концентрация которых в висцеральном жире более чем в 100 раз превышает их сывороточный уровень (Fernandez-Real J.M. et al., 2003). IL-6 интересен тем, что оказывает противоположно направленные эффекты на разные ткани. Установлено, что в мышечной ткани высокая концентрация этого цитокина повышает чувствительность к инсулину путем ингибирования синтеза ряда провоспа-лительных молекул, в том числе TNFa. Напротив, в печени и жировой ткани IL-6 вызывает формирование ИР за счет нарушения инсулинового сигналинга.
В связи с вышесказанным целью нашего исследования явилось определение тканеспецифических особенностей синтеза IL-6 различными депо жировой ткани с оценкой взаимосвязей продукции IL-6 с показателями углеводного обмена (УО) у больных ожирением без и с СД 2 типа.
Материалы и методы. Материалом для исследования служили биоптаты ЖТ разной локализации (висцеральная — большой сальник [БС], брыжейка тонкой кишки [БР] и подкожная [ПЖТ]) от 155 пациентов больных абдоминальным ожирением (АО). Участники исследования были разделены на группы, в зависимости от степени (ст.) ожирения (по индексу массы тела, ИМТ) и состоянию УО (наличие/отсутствие СД 2 типа). Уровни экспрессии мРНК генов IL-6 определяли методом количественной полимеразной реакции в режиме реального времени (ПЦР), сывороточное содержание IL-6 — методом иммуноферментного анализа.
Результаты. У всех больных АО (независимо от состояния УО), уровень экспрессии мРНК гена IL-6 в биопта-тах ЖТ БР и БС превышал таковой в ПЖТ. Независимо от состояния УО у больных ожирением с ИМТ < 40 кг/м2 сывороточная концентрация IL-6 связана с его экспрессией в ЖТ БР, тогда как при морбидном ожирении (ИМТ > 40 кг/м2) вклад в сывороточный уровень исследуемого цито-кина вносят оба депо висцеральной жировой ткани: БР и БС. У всех пациентов с ИМТ > 35 кг/м2, независимо от состояния УО, регистрировалось достоверное повышение сывороточного содержания IL-6 относительно контроля.
Выявлено более высокое (в среднем, в 2 раза) плазменное содержание IL-6 у больных ожирением с СД 2 типа по сравнению с результатами, полученными у больных АО без СД 2 типа (р < 0,05). У больных ожирением (ИМТ > 35 кг/м2) без СД 2 типа обнаружены позитивные корреляции сывороточного уровня IL-6 с инсулином (r = 0,69) и отрицательная с глюкозой сыворотки (r = -0,38, r = -0,41 — II и III ст.), тогда так у больных СД 2 типа с аналогичным ИМТ содержание IL-6 в сыворотке крови имело корреляции с С-пептидом (r = 0,83), инсулином (r = 0,69) и гликированным гемоглобином (r = 0,91). Уровень экспрессии гена IL-6 у больных с СД 2 типа в ЖТБР положительно коррелировал с глюкозой (r = 0,90), а в ЖТБС с индексом HOMA-IR (r = 0,66) и гликированным гемоглобином (r = 0,43, р < 0,05 во всех случаях).
Заключение. В результате проведенного исследования показано, что независимо от состояния УО уровень экспрессии мРНК IL-6 в висцеральной ЖТ (БР и БС) превышал таковой в ПЖТ.
Установлено, что у всех больных ожирением независимо от состояния УО на выявлены положительные корреляционные взаимосвязи между сывороточным уровнем IL-6 и инсулином, что косвенно подтверждает влиянии
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
IL-6 на компенсаторную гиперпродукцию инсулина в патогенезе инсулинорезистентности.
Тем не менее, выявленные нами отрицательные ассоциации IL-6 с глюкозой в сыворотке крови у больных без СД 2 типа и, напротив, положительные между содержанием IL-6 и гликированным гемоглобином, а также между уровнем его экспрессии в висцеральной ЖТ с глюкозой и индексом HOMA-IR у больных с СД 2 типа могут свидетельствовать о разнонаправленных эффектах IL-6 на показатели углеводного обмена.
Работа выполнена в рамках программы повышения конкурентоспособности («дорожной карты») и субсидии «Организация проведения научных исследований 20.4986.2017/ВУ» Балтийского федерального университета им. Иммануила Канта.
ВЛИЯНИЕ ЛИПОПОЛИСАХАРИДА НА ПРОДУКЦИЮ КОЛЛАГЕНА IV ТИПА ДЕРМАЛЬНЫМИ ФИБРОБЛАСТАМИ ДЕТЕЙ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КИШЕЧНИКА
Васильева Е.А., Федулова Э.Н., Мухина И.В.
ФГБУ«Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр» Министерства здравоохранения РФ, Нижний Новгород, Россия
Введение. Фибробласты кожи участвуют в репарации ткани, продуцируя компоненты внеклеточного матрик-са и базальной мембраны. Коллаген IV типа — главный компонент базальной мембраны кожи, участвует в клеточной адгезии и миграции. Для хронического течения болезни Крона и язвенного колита характерно развитие воспаления на системном уровне, появление в кровотоке медиаторов воспаления, в том числе липополисахарида (LPS), которые, в свою очередь, могут влиять на функцию фибробластов, в том числе дермальных, и изменять секрецию фибробластами компонентов внеклеточного матрикса и базальной мембраны.
Цель. Оценить уровень секреции коллагена IV типа дермальными фибробластами при их культивировании in vitro в ответ на стимуляцию липополисахаридом.
Материалы и методы. В исследовании использованы дермальные фибробласты, выделенные от пяти детей с болезнью Крона, пяти детей с язвенным колитом и пяти условно здоровых детей (контрольная группа) в возрасте 13-17 лет. От всех участников и их родителей получено письменное информированное согласие, исследование одобрено этическим комитетом и ученым советом института. Критериями включения пациентов стали возраст, отсутствие других аутоиммунных заболеваний и педиатрический индекс активности болезни Крона и язвенного колита (PCDAI/PUCAI = 10-20 баллов). Первичные культуры дермальных фибробластов получали из биоптатов кожи предплечья путем ферментативной обработки по стандартной методике. Клетки культивировали в среде DMEM (ПанЭко, Россия) c добавлением 10% ЭТС (ПанЭко, Россия), 0,33 мг/мл L-глутамина (ПанЭко, Россия), 55 Ед/мл пенициллина и 55 мкг/мл стрептомицина (ПанЭко, Россия) при 37 °С в атмосфере 5% СО2. Замену среды проводили каждые 3-4 дня. Клетки после третьего пассажа засевали в 24-луночный планшет (Thermo scientific, Германия) и культивировали до достижения культурой монослоя. Для стимуляции секреторной активности дермальных фибро-бластов культуральную среду в соответствующих лунках меняли на питательную среду, содержащую индуктор вос-
паления LPS. Контролями служили лунки с дермальными фибробластами, в которые добавляли питательную среду без индуктора. В качестве стимулятора активности дермальных фибробластов использовали индуктор воспаления Lipopolysaccharides из Escherichia coli, серотип O55:B5 (Sigma, Германия) в концентрации 10 мкг/мл. Стимуляцию дермальных фибробластов проводили в течение 24 часов. Супернатанты отбирали, пропускали через фильтр с диаметром пор 0,22 цм (GE Osmonics, США), и при необходимости аликвоты хранили при -80 °С. Оценку уровня коллагена IV типа в культуральной среде проводили методом ELISA тест-системой EKF diagnostics (Япония) согласно инструкции производителя.
Результаты. Спонтанная продукция коллагена IV типа дермальными фибробластами детей с язвенным колитом статистически значимо снижена по сравнению с ее уровнем в группе условно здоровых детей и детей с болезнью Крона. Средние значения концентраций коллагена IV типа в супернатанте дермальных фибробластов условно здоровых детей и детей с болезнью Крона, язвенным колитом составили соответственно: 5,34±0,93 мкг/мл, 4,27±1,51 мкг/мл; 3,72±1,98 (р = 0,015 против контроля; р = 0,021 против болезни Крона). В ходе исследования установлено, что в ответ на добавление LPS E. coli O55:B5 дермальные фибробласты детей с болезнью Крона и язвенным колитом снижают секрецию коллагена IV типа. Концентрация в супернатанте коллагена IV типа уменьшалась на 50,2%, с 4,27±1,51 мкг/мл до 2,13±0,55 мкг/мл (p = 0,021) у детей с болезнью Крона; на 38,7% с 3,72±1,98 мкг/мл до 2,28±0,83 мкг/мл (p = 0,027) у детей с язвенным колитом; на 3,4% в группе условно здоровых детей.
Заключение. Уровень спонтанной секреции дермаль-ными фибробластами коллагена IV типа снижен в группах детей с болезнью Крона и язвенным колитом по сравнению со значением в группе условно здоровых детей. Индуктор воспаления липополисахарид LPS E. coli O55:B5 снижает его секрецию дермальными фибробластами по сравнению с его уже сниженным базовым уровнем в результате хронического воспаления в кишечнике. Таким образом, механизмом нарушения целостности и защитных функций кожи у детей с воспалительными заболеваниями кишечника может быть снижение продукции дермальными фибробластами коллагена IV типа, потенцируемое липополисахаридом.
КЛЕТКИ-СУПРЕССОРЫ МИЕЛОИДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ У ДЕТЕЙ С ПСОРИАЗОМ
Герасимова Д.Г.1, Закиров Р.Ш.2, Радыгина Т.В.2, Курбатова О.В.3, Самохина И.В.2, Мурашкин Н.Н.2, Петричук С.В.2
1ФГБОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет» им. Н.Н. Пирогова, Москва, Россия
2 ФГБНУ «Научный центр здоровья детей», Москва, Россия
3 ФГБНУ «Научный центр акушерства, гинекологии
и перинатологии» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Псориаз является распространенным иммуноопосре-дованным, хроническим воспалительным заболеванием кожи. Важную роль в развитии псориаза играют дендритные клетки и активированные Т-лимфоциты (act-Th),
