Научная статья на тему 'Кластогенная и антикластогенная активность плазмы крови у детей, больных бронхмальной астмой'

Кластогенная и антикластогенная активность плазмы крови у детей, больных бронхмальной астмой Текст научной статьи по специальности «Кровообращение»

129
13
Поделиться
Ключевые слова
ПЛАЗМА / АСТМА БРОНХИАЛЬНАЯ / ПЕДИАТРИЯ / СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ / ХРОМОСОМНЫЕ АБЕРРАЦИИ / ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ МЕТОДЫ / ДЕТИ / ДОШКОЛЬНИКИ / ШКОЛЬНИКИ

Аннотация научной статьи по биологии, автор научной работы — Семенов А. В., Кошпаева Е. С., Пигалов А. П., Курмаева Е. А.

The comparative study of clastogenic and anticlastogenic activity of blood plasma in healthy children and children with bronchial asthma is performed. Clastogenic activity of whole blood plasma and 50% plasma of healthy children and children with bronchial asthma is reliably different from spontaneous mutations level as opposed to the level of aberrations induced by 25% blood plasma of healthy children and children with bronchial asthma. The analysis of genoprotective activity showed that blood plasma of children with bronchial asthma has lower ability to reduce the level of abberations induced by ethylmethanesulphate, than blood plasma of healthy children. Anticlastogenic activity of blood plasma of children with bronchial asthma being lower than in healthy children indicates the decrease of activity of antimutagenic blood system in remission period in the presence of normal level of total IgE.

CLASTOGENIC AND ANTICLASTOGENIC ACTIVITY OF BLOOD PLASMA IN CHILDREN WITH BRONCHIAL ASTHMA

The comparative study of clastogenic and anticlastogenic activity of blood plasma in healthy children and children with bronchial asthma is performed. Clastogenic activity of whole blood plasma and 50% plasma of healthy children and children with bronchial asthma is reliably different from spontaneous mutations level as opposed to the level of aberrations induced by 25% blood plasma of healthy children and children with bronchial asthma. The analysis of genoprotective activity showed that blood plasma of children with bronchial asthma has lower ability to reduce the level of abberations induced by ethylmethanesulphate, than blood plasma of healthy children. Anticlastogenic activity of blood plasma of children with bronchial asthma being lower than in healthy children indicates the decrease of activity of antimutagenic blood system in remission period in the presence of normal level of total IgE.

Текст научной работы на тему «Кластогенная и антикластогенная активность плазмы крови у детей, больных бронхмальной астмой»

MECHANISMS OF GLUCOCORTICOID-INDUCED LYMPHOCYTE APOPTOSIS IN ATOPIC BRONCHIAL ASTHMA

S.V. Boichuk, I.C. Mustafin, R.S. Fassakhov S u m m a r y

The mechanisms of spontaneous and dexa-methasone-iniduced apoptosis of lymphocytes of patients with atopic form of bronchial asthma are studied. Lymphocytes of peripheric blood in donors are resistant to program celullar destruction process manifesting itself in the delayed fragmentation of desoxyribonucleic acid as compared with control. At the same time lymphocytes of patients with atopic

form of bronchial asthma are sensitive to dexamethasone-induced apoptosis. The mechanism of dexamethasone-induced apoptosis is mitochondial-depended manifesting in the decrease of value of transmembrane potential of lymphocyte mitochondria and protein expression BcL-2. The decrease of value of transmembrane potential of lymphocyte mitochondria is the earliest feature of spontaneous and dexamethasone-induced apoptosis and phosphadyl-serine expression on the lymphocyte surface is reverse-dependent on the value of transmembrane potential of lymphocyte mitochondia. At the same time the apoptogenic effect of dexamethasone is not connected with its influence on the level of Fas-antigen expression.

УДК 616.248 - 053. 2 : 616. 15 : 542. 978 : 575. 24/. 25

КЛАСТОГЕННАЯ И АНТИКЛАСТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ПЛАЗМЫ КРОВИ У ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

A.B. Семенов, Е.С. Кошпаева, А.П. Пигалов, Е.А. Курмаева

Кафедра поликлинической педиатрии (зав. — проф. А.П. Пигалов), кафедра медицинской биологии и генетики (зав. — проф. Г.И. Полетаев) Казанского государственного медицинского университета

Проведено сравнительное изучение кластогенной и антикластогенной активности плазмы крови у детей, здоровых и больных бронхиальной астмой (БА).

Была обследована плазма крови у 9 здоровых детей и 13 детей в возрасте от 7 до 14 лет, больных БА средней тяжести в периоде ремиссии. Для индукции мутаций использовался этилметансуль-фонат (ЭМС) в концентрации 0,002 мг/мл. Кластогенную и антикластогенную активности плазмы крови изучали in vitro модифицированным нами методом учета хромосомных и хроматидных аберраций в тест-системе Crepis capillaris. Параллельно определяли уровень общего IgE сыворотки крови методом иммуно-ферментного анализа. Результаты исследований показали, что кластогенная активность цельной плазмы крови и 50%-ной плазмы у здоровых и больных БА достоверно отличалась от спонтанного уровня мутирования в отличие от уровня аберраций, индуцированных 25%-ной плазмой крови здоровых (1,65 0,39) и больных (1,37 0,35).

Анализ генопротекторной активности показал, что плазма крови детей, больных БА, обладает более низкой способностью снижать уровень аберраций, индуцированных ЭМС (2,22 0,44; Р<0,01), чем плазма крови здоровых детей (1,96 0,42; Р>0,05). Уровень общего IgE у всех больных не превышал допустимых значений.

Таким образом, снижение антикластогенной активности плазмы крови больных детей по сравнению с таковой у здоровых детей свидетельствует об уменьшении активности антимутагенной системы крови в периоде ремиссии на фоне нормального уровня общего ^Е.

В патогенезе многих хронических заболеваний, в том числе БА, ключевая роль принадлежит процессам свободно-радикального окисления (СРО), приводящим к нарушению баланса между интенсивностью действия прооксидант-ных факторов и мощностью антиокси-дантной системы клетки и в конечном результате к чрезмерной активации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) - окислительному стрессу [5]. Продукты СРО, накапливаясь и циркулируя в крови, проявляют мутагенный эффект [ 1 ] и могут явиться причиной возникновения хромосомных аберраций в клетках. Кроме того, показано повышение уровня хромосомных аберраций и сестринских хроматидных обменов в лимфоцитах у больных Б А [2]. В связи с этим были изучены кластогенная и ан-тикластогенная активности плазмы крови у здоровых и у больных БА.

При выборе методов регистрации кластогенной активности мы столкнулись с определенными трудностями. Так, мы не могли использовать в наших исследованиях традиционные методы на дрозофилах, лимфоцитах человека,

мыши, у которых развивается иммунологическая реакция на введение крови. Неприемлемы для нас были также методы на прокариотах, поскольку в процессе экспозиции микроорганизмы могли использовать в качестве источников энергии белки исследуемой плазмы крови, а это могло существенно повлиять на результаты исследования. Кроме того, при длительных процессах культивирования, предусмотренных в экспериментах на данных тест-объектах, могут произойти необратимые химические изменения высокомолекулярных и других компонентов крови. Поэтому мы модифицировали метод учета хромосомных аберраций в тест-системе Crépis capillaris [3].

Кластогенные и антикластогенные свойства плазмы крови были изучены у 22 мальчиков и девочек в возрасте от 7 до 14 лет — у 9 клинически здоровых детей и у 13 детей с атопической Б А средней тяжести в периоде клинической ремиссии. У здоровых детей использовалась венозная кровь, взятая для общеклинических анализов при профилактическом осмотре. Плазму крови получали путем осаждения форменных элементов крови методом центрифугирования g = 1500 в течение 15 минут. Исследовали уровень общего IgE сыворотки крови методом иммуноферментного анализа на базе РЦПБ СПИД МЗ РТ. В качестве модельного мутагена использовали ЭМС в концентрации 0,002 мг/м. Обработку семян скерды плазмой крови осуществляли в профилактическом режиме за 2 часа до введения мутагена.

Полученные результаты (рис. 1) показали, что цельная плазма крови у здоровых доноров и больных БА достоверно повышает уровень хромосомных аберраций (3,99 0,61% и 4,01 0,59% соответственно) в клетках семян скерды по сравнению со спонтанным уровнем мутирования (0,97 0,43). При разведении цельной плазмы крови в 2 раза (50%) кластогенная активность биожидкости в обеих группах (соответственно 2,54 0,65% и 2,57 0,63%) снижалась в среднем в 1,6 раза, однако оставалась выше спонтанного уровня мутирования (Р<0,001). Уровень хромосомных аберраций, индуцированных плазмой крови 25% концентрации, у здоровых детей и больных БА составлял соответственно 1,19 0,48% и 1,21 0,35% и достоверно не отличался от спонтанного уровня мутирования. Кластогенный эффект цельной и 50%-ной плазмы крови у здо-

Рис. 1. Кластогенный эффект плазмы крови у здоровых и детей с БА.

Вариант опыта

Рис 2. Антикластогенный эффект 25%-ной плазмы крови у здоровых и детей с БА. ПК-З — плазма крови здоровых детей, ПК-БА — плазма крови детей с БА.

ровых и больных детей по-видимому, обусловлен присутствием в ней веществ, способных индуцировать хромосомные аберрации в семенах Crépis capillaris.

Антикластогенная активность плазмы крови у здоровых и больных детей различалась при обработке семян скерды мутагеном - ЭМС (рис. 2). У здоровых детей частота перестроек хромосом, индуцированных мутагеном (4,00 0,58%), достоверно снижалась при обработке клеток Crépis capillaris плазмой крови (1,96 0,42%) и не отличалась от уровня спонтанного мутагенеза (1,14 0,31%). При исследовании антикластогенной активности плазмы крови у детей, больных БА, наблюдалось достоверное снижение уровня хромосомных аберраций (2,22 0,44%), индуцированных ЭМС (5,37 0,69%), однако частота аберраций не достигала уровня спонтанного мутагенеза (0,76 0,27%; Р<0,01). Снижение антикластогенной активности плазмы крови у больных БА происходило в периоде ремиссии и отсутствия увеличения уровня общего IgE выше допустимых значений. Мы склонны предположить, что феномен снижения антиклас-тогенного эффекта плазмы крови у детей, больных БА, обусловен уменьше-

нием активности антиоксидантной системы [4] на фоне повышенного уровня активных форм кислорода.

ВЫВОДЫ

1. Обнаружен дозозависимый клас-тогенный эффект плазмы крови у здоровых и детей с БА.

2. Значительное снижение антиклас-тогенной активности плазмы крови у больных БА по сравнению с таковой плазмы крови у здоровых детей свидетельствует об уменьшении активности антимутагенной системы крови больных.

3. Сниженная антикластогенная активность плазмы крови больных БА наблюдалась в периоде клинической ремиссии на фоне нормального уровня общего IgE, что свидетельствует об отсутствии прямой корреляции между восстановлением генетического аппарата и иммунной системы.

4. Представленный нами метод учета хромосомных аберраций в тест-системе Crépis capillaris позволяет оценить активность генетического гомеостаза у детей с БА в периоде клинической ремиссии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Дурнев А.Д., Середенин С.Б. Мутагены (скрининг и фармакологическая профилактика воздействия).— М.— 1998.

2. Семенов A.B., Пигалов А.П., Дурнев А.Д. Хромосомные аберрации в лимфоцитах периферической крови детей, больных бронхиальной астмой,

и возможность их коррекции димефосфоном. / Тез. конф. педиатров России "Фармакотерапия и фармакогенетика в педиатрии".— Москва, 2000. -

С. 143.

3. Семенов В.В., Кошпаева Е.С., Семенов А.В. Оценка антимутагенной активности веществ на семенах Crepis capillaris в скрининговых исследованиях./ Метод. реком.— Казань, 2000.

4. Фрелих М.П., Шабров А.В. и др. Материалы VII Национального конгресса по болезням органов дыхания. — М., 1997.

5. Greene L.S. // J. Am. Coll. Nutr. — 1995.— Vol. 14. — P. 317—324.

Поступила 14.01.01.

CLASTOGENIC AND ANTICLASTOGENIC

ACTIVITY OF BLOOD PLASMA IN CHILDREN WITH BRONCHIAL ASTHMA

A.V. Semenov, E.S. Koshpaeva, A.P. Pigalov, E.A. Kurmaeva

S u m m a r у

The comparative study of clastogenic and anticlastogenic activity of blood plasma in healthy children and children with bronchial asthma is performed. Clastogenic activity of whole blood plasma and 50% plasma of healthy children and children with bronchial asthma is reliably different from spontaneous mutations level as opposed to the level of aberrations induced by 25% blood plasma of healthy children and children with bronchial asthma. The analysis of genoprotective activity showed that blood plasma of children with bronchial asthma has lower ability to reduce the level of abberations induced by ethylmethanesulphate, than blood plasma of healthy children. Anticlastogenic activity of blood plasma of children with bronchial asthma being lower than in healthy children indicates the decrease of activity of antimutagenic blood system in remission period in the presence of normal level of total IgE.

УДК 616. 248 - 085. 281

ДОКСИЦИКЛИНОВАЯ ЭРАДИКАЦИЯ CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE И MYCOPLASMA PNEUMONIAE ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ

Р.Ф. Хамитов, В.Г. Новоженов, И.Г. Мустафин, Р.М. Харрасова, A.A. Масленникова, Т.П. Кузьменко, О.Н. Шувалова

Кафедра факультетской терапии (зав.— проф. A.C. Галявич) Казанского государственного медицинского университета, кафедра военно-полевой терапии (зав. — проф. Н.Г. Новоженов) ГИУВ МО РФ, Республиканский центр по профилактике и борьбе со СПИДом (главврач — О.М. Романенко) МЗ РТ, ЦГСЭН (главврач - Н.В. Пигалова), г. Казань

В настоящее время обсуждаются взаимосвязи между бронхиальной астмой (БА) и хронической инфекцией, вызванной некоторыми внутриклеточными патогенами (Chlamydophila pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae) [6, 9]. Имеются сообщения о позитивном влиянии на состояние больных антибактериальных курсов, направленных на эрадикацию указанных возбудителей [5, 7].

Целью настоящей работы являлось изучение эффективности антимикроб-

ной терапии больных БА в фазе клинической ремиссии в зависимости от ин-фицированности Chlamydophila pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae.

Объектом обследования были 25 пациентов с БА (8 мужчин и 17 женщин) в возрасте от 29 до 64 лет. В соответствии с международными данными [5] был намечен 6-недельный курс перорального доксициклина в дозе 100 мг/сут.

При каждом посещении врача (до начала и после антибактериального лечения, а также