CC BY
114
К ВОПРОСУ РАЗРАБОТКИ СТАНДАРТОВ КАЧЕСТВА НА ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА - ПРОБИОТИКИ
И.Г. Осипова, В.Ф. Евлашкина, И.В. Сакаева, Е.И. Саканян
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации», Москва
Osipova@expmed.ru
Резюме. Рост потребности в современных безопасных и эффективных лекарственных средствах отечественного производства является основанием к расширению ассортимента лекарственных препаратов природного, в том числе микробного происхождения. Кэтой категории лекарственных средств относятся пробиотики, которые на протяжении многих десятилетий успешно применяются для профилактики и лечения различных заболеваний, связанных с нарушением нормальной микрофлоры кишечника и, как следствие этого процесса, иммунитета. В отечественной фармакопее общие и частные фармакопейные статьи на данную группу препаратов отсутствуют. В зарубежных фармакопеях монографии на пробиотики также не представлены. Таким образом, разработка нормативных документов, регламентирующих требования к качеству пробиотиков и методам их испытаний — одна из актуальнейших задач отечественного фармакопейного анализа. Для включения в ГФ РФ XII издания подготовлен проект ОФС «Пробиотики для медицинского применения». В данном проекте ОФС изложены общие требования к качеству пробиотиков и методам их испытаний.
Ключевые слова: иммунобиологические лекарственные средства (ИЛС), общая фармакопейная статья (ОФС), фармакопейная статья предприятия (ФСП), пробиотики для медицинского применения, стандарты качества.
ON THE QUESTION OF DEVELOPING QUALITY STANDARDS FOR IMMUNOBIOLOGICAL PREPARATIONS - PROBIOTICS I.G. Osipova, V.F. Yevlashkina, I.V. Sakaeva, E.I. Sakanyan
Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow Abstract: The increasing demand for modern, safe and effective medicines of domestic origin is the basis for expanding the range of natural medicines, including medicines of microbial origin. This category of drugs includes probiotics, which have been successfully used over the years for prevention and treatment of various diseases associated with alterations in normal intestinal microflora resulted in immune system disorders. Neither the Russian State Pharmacopoeia nor the foreign pharmacopoeias contain general or individual monographs for the mentioned group of preparations. Therefore one of the most important challenges of the national pharmacopoeia analysis is developing the regulations governing the requirements to probiotics quality and testing methods. Draft general pharmacopoeia monograph «Probiotics for medical use» has been prepared for inclusion in the Russian State Pharmacopoeia Volume XII. The draft general pharmacopoeia monograph sets out general requirements to probiotics quality and testing methods.
Key words: immunobiological preparations, general monograph, manufacturer’s monograph, probiotics for medical use, quality standards.
К иммунобиологическим лекарственным средствам (ИЛС) относится такая многочисленная группа лекарственных препаратов, как пробиотики. Впервые термин «пробиотик», как антоним антибиотику, предназначенный для обозначения микробных метаболитов, обладающих способностью стимулировать рост каких-либо микроорганизмов, был предложен в 1965 г. учеными Lilly D.M. и Stilwell R.H. [1].
В соответствие с определением ВОЗ: «Пробиотики — апатогенные для человека бактерии, обладающие антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий и обеспечивающие восстановление нормальной микрофлоры» [2]. В настоящее время под термином «пробиотик» понимают «препарат на основе живых и убитых ми-
кроорганизмов и веществ микробного происхождения, оказывающий позитивные эффекты на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма хозяина через стабилизацию и оптимизацию функции его нормальной микрофлоры» [3].
В таблице 1 представлен перечень микроорганизмов, составляющих основу препаратов пробиотиков, зарегистрированных в странах Европы.
Согласно общепринятой классификации пробиотики подразделяются на следующие группы:
1 группа — пробиотики для медицинского применения;
2 группа — пробиотики, относящиеся к группе ветеринарных средств;
3 группа — биологически активные добавки (БАД);
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
4 группа — продукты функционального питания, содержащие пробиотические микроорганизмы и продукты их метаболизма.
Пробиотики 3 и 4 групп содержат представителей нормальной микрофлоры (бифидобактерии, лактобактерии, энтерококки в количествах: в БАД — 108 КОЕ и в пищевых продуктах — 106 КОЕ в 1 г или мл). Данные пробиотики компенсируют дефицит нормальной микрофлоры, оказывают благоприятное воздействие на организм человека, могут применяться в восстановительном периоде после перенесенного заболевания или в качестве вспомогательного средства при традиционном курсе лечения.
Пробиотики для медицинского применения содержат живые и инактивированные апатогенные микроорганизмы и/или продукты их метаболизма вместе с частично разрушенными микробными клетками, обладающими антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий и
обеспечивающими восстановление нормальной микрофлоры. Живые микроорганизмы и продукты их метаболизма, входящие в состав пробиотиков, оказывают положительные эффекты на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма человека, благодаря стабилизации и оптимизации функций его нормальной микрофлоры. Пробиотики для медицинского применения предназначены для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний (особенно при одновременном применении антибиотиков), в том числе, инфекционной природы, желудочно-кишечного тракта, полости рта, вагины, сопровождающихся нарушениями нормальной микрофлоры у детей и взрослых, для коррекции дисбиозов различной этиологии [2—5].
В России, наряду с термином «пробиотики», широко используют в качестве его синонима термин «эу-биотики» [3]. Чаще всего этим термином обозначают фармакопейные бактерийные препараты, получен-
Таблица 1
ПЕРЕЧЕНЬ МИКРООРГАНИЗМОВ, СОСТАВЛЯЮЩИХ ОСНОВУ ПРЕПАРАТОВ ПРОБИОТИКОВ, ЗАРЕГИСТРИРОВАННЫХ В СТРАНАХ ЕВРОПЫ
№ Наименования Страна-производитель
п/п микроорганизмов 1 2 3 1 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9~ 10 11 12 13
1. Streptococcus faecium + + + + + + + + + + + +
2. S. termophilus
З. Lactobacillus bulgaricus + + + +
4. L. acidophilus
5. L. casei + + + + + +
6.
7. L. lactis +
В. L. brevis
9. L. fermentum + + +
10. L. bifidus
11. L. helveticus + +
12.
1З. B. adolescentis +
14. B. longum
15. B.breve +
16. Bacillus subtilis
17. B. Toyoi + + + + + + + + +
18. B. licheniformis
19. B.cereus + + +
20. Aspergillus oryzae
21. Saccharomyces cerevisiae + + + + + +
22. Escherichia coli
2З. Kluyveromyces fragilis +
24. Pediococcus
Примечание: 1 — Бельгия; 2 — Германия; 3 — Дания; 4 — Греция; 5 — Испания; 6 — Франция; 7 — Ирландия; 8 — Италия; 9 — Люксембург; 10 — Нидерланды; 11 — Португалия; 12 — Великобритания; 13 — Россия
ные из живых микроорганизмов и предназначенные для коррекции микрофлоры хозяина. В соответствие с тем, что данные препараты (пробиотики) относятся к фармгруппе лекарственных средств «Эубиотики», последние следует рассматривать как частную разновидность пробиотиков.
Пробиотики для медицинского применения по составу подразделяются (табл. 2):
■ монокомпонентные — пробиотики, полученные на основе одного штамма;
■ поликомпонентные — пробиотики, в состав которых входят микроорганизмы нескольких штаммов, принадлежащих к одному или нескольким видам или разным родам, дополняющие или потенцирующие друг друга по ферментативным свойствам, антагонистической активности, продукции биологически активных веществ, механизму действия или другим характеристикам;
■ сорбированные — пробиотики, полученные на основе одного или нескольких штаммов микроорганизмов, сорбированных на частицах активированного угля, кремния диоксида коллоидного и других сорбентах;
■ комбинированные — пробиотики, в состав которых, помимо одного или нескольких видов микроорганизмов, входят действующие вещества иной природы (например, лизоцим, инулин, действующие вещества лекарственных растений, витамины, микроэлементы, гормоны и др.), оказывающие терапевтическое воздействие на организм человека. Пробиотики для медицинского применения по
таксономическим группам микроорганизмов (табл. 2), входящих в их состав, можно подразделить на:
а) бифидосодержащие пробиотики — содержат один или несколько видов живых бактерий рода Bifidobacterium, обладающих антагонистической активностью
Таблица 2
РАЗДЕЛЕНИЕ ПРОБИОТИКОВ, ЗАРЕГИСТРИРОВАННЫХ В РФ ПО СОСТАВУ И ТАКСОНОМИЧЕСКИМ
ГРУППАМ МИКРООРГАНИЗМОВ
Пробиотики Пробиотики по составу
№ по таксономи- Монокомпонентные Поликомпонентные Сорбированные Комбинированные
п/п ческим 1'рушшм микроорганизмов Торговое наименование пробиотика
1. Бифидосодержа- щие Бифидумбактерин Бифинорм Бифидин БифоВир Лайфпак Пробиотикс Лиобифидум Бифиформ Бифиформ Кидс Бификол Линекс Бифидумбактерин форте Пробифор Прокальцидум Стомафлор Флорин форте Бифилиз Флорин форте Гепафор Мультитабс Иммуно Плюс Мультитабс Иммуно Кидс Бифэйнол Линекс Гастро Линекс Иммуно Хилак форте
2. Лакто- содержащие Лактобактерин Биобактон Вагифлор Лактив Гино Лактожиналь Ацилакт, Аципол Линекс Лактобактерин- БИЛС Лактонорм Фермалак ЭкоВаг Флорин форте Экофемин Гастрофарм Гинофлор Э Линекс Гастро Линекс Иммуно Гепафор Микростим жидкий Мультитабс Иммуно Кидс Мультитабс Иммуно Плюс Хилак форте
З. Колисодержащие Колибактерин Окарин Бификол Биофлор Диа-Биофлор Про-Симбиофлор Хилак форте
4. Споровые пробиотики Споробактерин, Бактисубтил Флонивин БС Биоспорин
5. Пробиотики других таксономических групп Энтерол Бактерин-А Окарин Линекс Фермалак Линекс Иммуно Линекс Гастро Про-Симбио-флор Хилак форте
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
по отношению к широкому спектру патогенных и условно-патогенных бактерий, за счет продукции антибиотикоподобных веществ (бактериоцинов, микро-цинов) и продуктов метаболизма (молочной, уксусной и других органических кислот);
б) лактосодержащие пробиотики — содержат живые бактерии рода Lactobacillus одного или нескольких видов, обладающих антагонистическим действием против широкого спектра патогенных и условнопатогенных бактерий за счет продукции водорода пероксида, лизоцима, антибиотических веществ и продуктов метаболизма (кислот, спиртов);
в) колисодержащие пробиотики — получены на основе одного или нескольких штаммов живых бактерий рода Escherichia coli, обладающих антагонистической активностью по отношению к широкому спектру патогенных и условно-патогенных бактерий, обусловленной как продукцией колицинов, так и выраженными иммуномодулирующими и адъювантными свойствами, стимулирующими местные факторы защиты, тем самым нормализуя микрофлору кишечника;
г) споровые пробиотики — получены на основе одного или нескольких видов живых непатогенных представителей рода Bacillus, обладающих выраженными антагонистическими свойствами по отношению к широкому спектру патогенных и условно -патогенных бактерий (в том числе энтерококкам, стафилококкам, грибам рода Candida), за счет продукции широкого спектра ферментативных и антибиотических веществ;
д) пробиотики других таксономических групп — получены на основе живых апатогенных бактерий, принадлежащих к родам Leuconostoc, Pediococcus, Propi-onibacterium, Aerococcus, Enterococcus, дрожжевых грибов — Saccharomyces cerevisiae и S.boulardii.
В настоящее время в Российской Федерации зарегистрировано более 50 препаратов пробиотиков в различных лекарственных формах (лиофилизаты, таблетки жевательные и для приема внутрь, порошки, капсулы, суспензии, капли, суппозитории для вагинального и ректального применения, мази).
Увеличение номенклатуры пробиотиков и широкое их применение в клинической практике потребовало гармонизации требований к отбору производственных штаммов [6], производственному процессу (включая контроль производственных штаммов, питательных сред, критических стадий производства и промежуточных продуктов), контролю качества готового лекарственного средства.
Первоочередной задачей стала разработка государственного стандарта качества лекарственного препарата-пробиотика, основанного на современных научных достижениях и с учетом требований отечественных и зарубежных регламентирующих документов. В качестве государственного стандарта в соответствии с требованиями РД 42-502-99 «Построение, содержание и изложение фармакопейных статей на
медицинские иммунобиологические препараты» от 02.02.1999 г., ОСТ 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения», ГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств» подготовлен проект ОФС «Пробиотики для медицинского применения» [7—9].
Данный проект включает: определение; общие требования к производственным штаммам, условиям производства, его валидации, контролю технологического процесса (включая контрольные точки, контроль промежуточных и готового продуктов на отдельных этапах технологического процесса); перечень показателей качества лекарственных препаратов данной группы. Для оценки показателей качества пробиотиков предложены биологические и микробиологические методы, которые характеризуются более высокой степенью вариабельности по сравнению с физико-химическими. При этом показатели качества лекарственных препаратов пробиотиков в виде лекарственных форм, таких как таблетки, суппозитории и порошки следует оценивать в соответствии с требованиями ОФС на лекарственные формы «Таблетки», «Суппозитории», «Порошки». Основные положения и требования к рассматриваемым лекарственным препаратам изложены в подготовленных для включения в ГФ РФ XII издания проектах ОФС: «Иммунобиологические лекарственные средства», «Безопасность пробиотиков для медицинского применения», «Микробиологическая чистота», «Специфическая активность пробиотиков для медицинского применения» и «Производственные штаммы и штаммы для контроля».
При оценке качества лекарственных препаратов — пробиотиков обязательным является проведение анализа по таким показателям, как «Подлинность», «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов», «Специфическая безвредность», «Специфическая активность».
Подлинность лекарственного препарата — пробиотика рекомендуется подтверждать микробиологическими методами (микроскопическим и/или бактериологическим), с описанием фенотипических свойств бактерий.
Определение специфической безвредности рекомендуется проводить в соответствии с проектом ОФС «Безопасность пробиотиков для медицинского применения». Целью проведения теста на безвредность является выявление отрицательного воздействия испытуемого препарата на организм животного, появляющегося при образовании токсических примесей, источниками которых могут быть нарушения производственного регламента, условий хранения и т.д. Испытание безвредности анализируемого препарата осуществляют при пероральном введении беспородным белым мышам одной человеческой дозы этого препарата.
Отсутствие контаминации посторонними микроорганизмами и грибами в препарате — пробиотике рекомендуется определять в соответствии с проектом ОФС «Микробиологическая чистота», в котором впервые выделены категории микробной чистоты данной группы препаратов:
■ категория 5.3.А — предназначена для пробиотиков, используемых для приема внутрь, интравагиналь-но, наружно (лиофилизаты, суспензии, порошки). Определены следующие нормативные требования — «отсутствие в единице препарата/мл посторонних микроорганизмов и грибов; отсутствие в единице колисодержащих препаратов/мл КОЕ бактериофага, если нет других указаний в частных фармакопейных статьях»;
■ категория 5.3.Б — предназначена для пробиотиков, используемых для приема внутрь, интравагиналь-но, ректально (таблетки, капсулы, суппозитории). Определены следующие нормативные требования — «общее число аэробных бактерий — не более 102 КОЕ в единице препарата/г; отсутствие дрожжевых и плесневых грибов в единице препарата/г; отсутствие энтеробактерий, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus; отсутствие бактерий рода Proteus; отсутствие в единице колисодержащих препаратов/г КОЕ бактериофага». Специфическую активность следует определять
количеством жизнеспособных бактерий в одной дозе лекарственного средства, обладающих активностью к кислотообразованию или антагонистической активностью по отношению к тест-штаммам. Определение предлагается проводить в соответствии с проектом
ЛИТЕРАТУРА
1. Lilly D. M., Stillwell R. H. Probiotics: Growth promoting factors produced by microorganisms. Science. 1965. V147. P. 747-748.
2. FAO/WAO. Health and nutritional properties of probiotics in food including powder milk with live lactic acid bacteria. Argentina, 2001. Available from: http://www.fao.org/es/esn/Probio/report.pdf.
3. Бондаренко В.М., Грачева Н.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов // Фарматека. 2003. № 7. С. 56-63.
4. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т. 1. Микрофлора человека и животных и ее функции.
М.: ГРАНТЪ, 1998. 288 с.
5. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т.3. Пробиотики и функциональное питание. М.: ГРАНТЪ, 2001. 286 с.
ОФС «Специфическая активность пробиотиков для медицинского применения».
Определение количества живых особей в дозе проводят методом серийных разведений, при необходимости, с последующим высевом на твердые питательные среды. При проведении контроля поликом-понентных или комбинированных пробиотиков необходимо учитывать количество и соотношение всех штаммов, входящих в состав препарата.
Определение специфической активности пробиотиков дополнено определением активности кислотообразования или антагонистической активности. Антагонистическая активность лекарствен -ного средства в отношении штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов определяется методом отсроченного антагонизма на плотной среде по зонам задержки роста тест-штаммов. Определение активности кислотообразования препарата следует проводить титриметрическим методом. Установленную кислотность выражают в градусах Тернера (°Т).
Таким образом, к настоящему времени разработан государственный стандарт качества лекарственного средства — проект общей фармакопейной статьи «Пробиотики для медицинского применения», предлагаемый для включения в ГФ РФ XII, который предусматривает комплексный подход к вопросам стандартизации и последующей оценки качества лекарственных препаратов пробиотиков, основанный на национальных требованиях, сформированных с учетом системы обеспечения качества лекарственных средств в Российской Федерации.
6. МУК 4.2.2602-10. Методы контроля. Биологические
и микробиологические факторы. Система предрегистрационного доклинического изучения безопасности препаратов. Отбор, проверка и хранение производственных штаммов, используемых при производстве пробиотиков. Методические указания. М. 2010. 61 с.
7. РД 42-502-99. Построение, содержание и изложение фармакопейных статей на медицинские иммунобиологические препараты»
от 02.02.1999 г.
8. ОСТ 91500.05.001.00. «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Утв. Приказом Министерства здравоохранения России от 01.11.2001 № 388
9. ГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств». Утв. Приказом Ростехрегулирования от 20.05.2009 № 159-ст
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
