CC BY
24
те из известных в настоящее время генов V. cholerae, которые необходимы для жизнедеятельности холерных вибрионов и их персистенции в условиях внешней среды. В то же время следует отметить, что остаются не установленными те факторы вирулентности и колонизации, которые позволяют вибрионам не О1 / не О1З9 серогруппы вызывать заболевания у людей. В последних публикациях показано, что важную роль в этом может играть энтеротоксин вибрионов не О1 / не О139 серогруппы, который отличается от холерного токсина [S], а также система секреции III типа, выявленная у некоторых «водных« вибрионов, выделенных от людей [12]. Так ли это, покажут дальнейшие исследования, направленные на изучение генетических особенностей штаммов V. cholerae не О1 / не О1З9.
Работа поддержана грантом РФФИ M 05-04-4S727.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
І. Онищенко Г.Г., Ломов Ю.М., Покровский
B. И. и др. // Акт. пробл. холеры. - М., 2000. - С. 62-126. -2. Осин А.В., Ерошенко Г.А., Лозовский Ю.В., Смирнова Н.И. // Пробл. особо опасных инф. - Саратов, 2003. - Вып. S5. - С. 97-103. - З. Осин А.В., Ливанова Л.Ф., Ерошенко Г.А. и др. // Биотехнол. - 2004. - № 3. -
C. 12-1S. - 4. Осин А.В., Нефедов К.С., Ерошенко Г. А., Смирнова Н.И. // Генетика. - 2005. - Т. 4l, № 1. -
С. 1-10. - 5. Смирнова Н.И., Костромитина Е.А., Осин А.В., Кутырев В.В. // Вестник РАМН. - 2005. -№ 7. - С. 19-24. - б. Смирнова Н.И., Кутырев В.В. // Мол. генет. - 2006. - № 1. - С. 9-19. - 7. Alam M., Sultana M., Nair G.B. et al. // Appl. Environ. Microbiol. - 2006. -Vol. 72. - P. 2849-2855. - S. Begum K., Ahsan C.R., Ansa-ruzzaman M. et al. // Cell. Mol. Immunol. - 2006. - Vol. 3. -P. 115-121. - 9. Burrus V., Waldor M.K. // J. Bacteriol. -2006. - Vol. 55. - P. 173-183. - І0. Chakraborty S., Mukho-
padhyay A.K., Bhadra R.K. et al. // Appl. Environ. Microbiol. - 2000. - Vol. 66. - P. 4022-4028. - 11. Dalsgaard A., Serichantalergs O., Forslund A. et al. // J. Clin. Microbiol. -2001. - Vol. 39. - P. 4086-4092. - 12. Dziejman M., Serruto
D., Tam V.C. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2005. -Vol. 102. - P. 3465-3470. - 13. Faruque S.M., Asadulghani, Rahman M.M. et al. // Infect. Immun. - 2000. - Vol. 68. -P. 4795-4801. - 14. Faruque S.H., Kamruzzaman M., Me-raj I.M. et al. // Infect. Immun. - 2003. - Vol. 71. - P. 10201025. - 15. Faruque S.H., Biswas R., Udden S.M. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2006. - Vol. 103. - P. 6350-6355. -16. Jermyn W.S., Boyd E.F. // Microbiology. - 2005. - Vol. 151 (Pt 1). - P. 311-322. - 17. Li M., Kotetishvili M., Chen Y., Sozhamannan S. // Appl. Environ. Microbiol. - 2003. -Vol. 69. - P. 1728-1738. - 18. Matz C., McDougald D., Moreno A.M. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2006. - Vol. 102. -P. 16819-16824. - 19. O’Shea Y.A., Reen F.J., Quirke A.M., Boyd E.F. // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 10. -P. 4657-4671. - 20. Sharma C., Thungapathra M., Ghosh A. et al. // J. Clin. Microbiol. - Vol. 36. - P. 756-763. - 21. Silva
A.J., Leitch G.J., Camilli A., Benitez J.A. // Infect. Immun. - 2006. - Vol. 74. - P. 2072-2079. - 22. Waldor M.K., Mekalanos J.J. // Science. - 1996. - Vol. 272. - P. 1910-1924.
G.A.Yeroshenko, L.M.Koukleva, N.Yu.Shavina, V.V.Kutyrev
Genetic Peculiarities of Vibrio cholerae Strains Non-O1 / Non-O139 Serogroup Isolated from Patients in Astrakhan in 1976-2003
Russian Anti-Plague Research Institute "Microbe ", Saratov
V. cholerae strains serogroup non-O1 / non-O139 circulating in the territory of Astrakhan Region were shown to be deprived of the main virulence factors’ genetic determinants located on the migrating genetic elements. Of the V. cholerae genes known hitherto, they contained only those necessary for their vital activity and persistence in the environments.
Key words: cholera vibrios non O1 serogroup, virulence genes, migrating genetic elements, epidemic potential.
nocTynn^a 18.08.06.
УДК 616.932:576.851.3
Н.А.Осина, Т.В.Бугоркова, А.Н.Куличенко К ВОПРОСУ О РЕВЕРСИИ НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ФОРМ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ
Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов
Получена реверсия некультивируемых форм холерных вибрионов в 10 % случаев, если переход в некульти-вируемое состояние осуществляли в 0,9 % растворе натрия хлорида при температуре 4-6 °С в течение 18-24 дней, и в 30 % - при 18-месячной инкубации в среде, содержащей 50 мг/% аминного азота, при температуре 2022 °C. Рекультивацию осуществляли с использованием жидкой питательной среды, содержащей среду 199, солевой раствор, дрожжевой аутолизат и инактивированную эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. У ревертантов отмечено снижение агглютинабельности холерными диагностическими сыворотками, чувствительности к холерным бактериофагам ХДФ-3,4,5, утрата в 100 % случаев способности ферментировать орнитин и в 16 % - сахарозу.
Ключевые слова: Vibrio cholerae, некультивируемые формы, реверсия.
В настоящее время накоплено достаточно данных, свидетельствующих о способности неспорообразующих бактерий к длительному существованию во внешней среде в виде клеток со значительно сниженной метаболической активностью, не обнаруживаемых традиционными методами культивирования на питательных средах. Подобное со-
стояние покоя с потерей роста у грамотрицательных бактерий называют некультивируемым (НС), а сами бактерии - некультивируемыми формами (НФ). Способность к переходу в НС выявлена более чем у 30 видов патогенных бактерий, в том числе и холерных вибрионов [1, 3].
Рядом авторов показана возможность длитель-
ного сохранения НФ холерных вибрионов в объектах внешней среды. M.S.Islam et al. [19, 20] обнаружили существование в течение 15-25 мес. холерных вибрионов в некультивируемом состоянии при ассоциации с водорослями Anabaena variabilis. По данным Е.В.Четиной [14] в осенне-зимний и весен -ние сезоны на территории с регулярными эпидемическими проявлениями при ПЦР -исследовании воды открытых водоемов выявлено наличие токсиген-ных Vibrio cholerae в концентрации 1-103 -1 • 104 м.к./л, однако с помощью бактериологических методов выделить возбудитель не удалось. При переходе в некультивируемое состояние бактерии сохраняют свою вирулентность. R.R.Colwell et al. [16] установили, что введение суспензии НФ V. cholerae кроликам-сосункам вызывает у них холерогенный эффект, а Escherichia coli - энтерит. Кроме того, продемонстрирована способность к размножению в кишечнике добровольцев НФ аттенуированного штамма CVD101 V. cholerae [17].
При улучшении условий существования клетки, находящиеся в НС, могут реверсировать. Рекультивация покоящихся форм является одним из основных способов, позволяющих получить информацию о жизнеспособности клеток. Получены результаты, свидетельствующие о том, что к реверсии НФ микроорганизмов в экспериментальных системах может приводить кратковременный тепловой шок [29], облучение слабыми дозами у-излучения [25], повышение температуры до 37 °С [24], добавление в среды органических и неорганических биологически активных веществ [8, 9, 11, 21], специфическое воздействие простейших [3], сапрофитных (комменсальных) бактерий [15]. Наиболее эффективным методом реверсии НФ микроорганизмов являются пассажи через организм чувствительного животного [3, 7].
Имеются данные о том, что у ревертантов НФ Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Listeria monocytogenes, полученных разными способами, изменялись культуральные, морфологические и биохимические свойства [5, 6, 12]. Как отмечают авторы, в ряде случаев рекультивированные культуры восстанавливали исходные свойства после многократных пересевов на питательных средах [5]. Однако данных о реверсии НФ холерных вибрионов и сохранности у ревертантов свойств исходной культуры недостаточно, хотя они представляют интерес для решения вопроса о механизмах персистенции холерных вибрионов в объектах внешней среды в межэпидемический период.
Целью работы являлся сравнительный анализ свойств реверсированных и исходных культур холерных вибрионов и подбор условий, способствующих переходу НФ V. cholerae в культивируемое состояние.
Материалы и методы
Работа проведена на 10 штаммах V. cholerae (ctxA), типичных по серологическим и биохимическим свойствам. Для определения серогруппы и се-ровара исследуемых культур проводили агглютина-
цию с холерными диагностическими сыворотками О1 (диагностический титр 1/1600), RO (диагностический титр 1/400), Инаба (диагностический титр 1/400), Огава (диагностический титр 1/400), производства РосНИПЧИ «Микроб».
Биохимическую активность исходных штаммов и рекультивируемых форм изучали с помощью сред Гиса с сахарами и аминокислотами, сред, содержащих лизин, орнитин и аргинин. Чувствительность к холерным диагностическим бактериофагам оценивали по методу Грациа с набором фагов: С
(ДРТ 10-2), Эльтор (ДРТ 10-2), ХДФ-3,4,5 (ДРТ для каждого 10-3), производства РосНИПЧИ «Микроб». Детекцию ctxA гена осуществляли с помощью «Тест-системы для выявления ДНК V. cholerae (ctxA+) методом ПЦР», производства РосНИПЧИ «Микроб». Культуры выращивали на 1 % пептон-ной воде, бульоне и агаре Хоттингера, pH 7,6.
Результаты и обсуждение
Для инициации перехода в НС часто используют совместное воздействие пониженной температуры с одновременным переносом клеток в условия голодания [2, 8, 16, 18]. Установлено, что в большинстве случаев образование НФ у бактерий происходит при температуре плюс 4-5 °С [8, 10, 16, 23, 26]. Однако есть данные о том, что понижение температуры до плюс 5 °С не вызывает переход клеток E. coli и Salmonella typhimurium в НС в течение 1 года, а для V. vulnificus - дефицит питатель -ных веществ не является фактором индукции НС [4]. Поэтому в нашей работе для инициации перехода холерных вибрионов в НС мы использовали воздействие двух факторов: ограничение по содержанию питательных веществ (аминного азота) и изменение температуры микрокосмов.
В микрокосме I холерные вибрионы в концентрации 1-108 м.к./мл вносили в среду с полным отсутствием амминного азота (0,9 % раствор хлорида натрия) и инкубировали при 4 °С в течение 30 дней. Подобный срок наблюдения был выбран в соответствии с данными ряда авторов, показавших, что срок перехода в НФ V. vulnificus, V. parahaemoliticus и V. cholerae в морской воде составлял 14-35 дней [10, 22, 24]. В микрокосме II для получения НФ использовали питательную среду, содержащую 50 мг/% амминного азота, а инкубирование проб осуществляли при температуре 20 °С в течение 24 мес. Из первого микрокосма через каждые 3 дня в течение 1 мес. проводили высевы по 0,1 мл на 1 % пептонную воду и чашки с агаром Хоттингера, из второго - каждый месяц в течение 2 лет. Посевы выдерживали до 5 сут при температуре 37 °С, просматривая чашки в проходящем свете и под малым увеличением.
Через 18-24 дня при исследовании проб из микрокосма I и 18 мес. - из микрокосма II рост холерных вибрионов на твердых и жидких питательных средах не наблюдался. На отдельных пластинах агара под малым увеличением отмечали прозрачный легкий налет. Для определения наличия в данных высевах холерных вибрионов в НС с агаровых
Таблица 1
Сравнение аггютинабельных свойств исходных и реверсированных штаммов холерных вибрионов
Условия перехода Штамм Форма Агглютинабельность холерными диагностическими сыворотками
О | Инаба | Огава | ЯО
Микрокосм II (среда, содержащая 50 мг/% аминного азота при температуре 20-22 °С), инкубирование в течение 18 мес.
Микрокосм I (0,9 % раствор натрия хлорида при температуре 4-6 °С), инкубирование в течение 18-24 дней
V. cholerae еЫог Огава 9418 Исходный 1/1600 - 1/400 -
Ревертант 1/800 - 1/400 -
V. сИоІегае еЫог Огава 9370 Исходный 1/1600 - 1/400 -
РевертантI 1/800 1/200 1/400 1/100
Ревертант II 1/800 1/100 1/400 -
V. сИоІегае еіґог Огава 9378 Исходный 1/1600 - 1/400 -
Ревертант 1/1600 - 1/400 -
V. сИоІегае еііог Инаба В-41 Исходный 1/1600 1/400 - -
РевертантI 1/800 1/200 - 1/100
Ревертант II 1/800 1/200 - -
Примечание. Прочерк - отрицательный результат.
пластин готовили мазки и смывы, которые исследовали, соответственно, с помощью флуоресцентносерологического метода и ПЦР. При просмотре мазков с чашек, на которых под малым увеличением микроскопа зафиксирован прозрачный налет, наблюдали клетки со специфическим свечением, имеющие различную морфологию (мелкие круглые, овальные, отдельные фрагменты). При ПЦР-анализе смывов с агаровых пластин в 5 пробах из микрокосма I и 7 - из микрокосма II регистрировали образование специфичного фрагмента размером 564 п.н., что указывает на наличие в данных пробах ДНК V. cholerae (СхА+).
Таким образом, в микрокосме I (0,9 % раствор хлорида натрия при температуре 4 °С) через 24 дня перешли в НФ 5 штаммов холерных вибрионов, в микрокосме II (среда, содержащая 50 мг/% аминно-го азота, при температуре 20-22 °С) - 7 штаммов через 18 мес.
Следующим этапом нашей работы был подбор условий для реверсии полученных НФ холерных вибрионов. Для рекультивирования использовали два варианта жидких питательных сред: 1 % пеп-тонная вода с 10 % нормальной лошадиной сывороткой, среда 199, солевой раствор, дрожжевой аутолизат, инактивированная эмбриональная сыворотка крупного рогатого скота.
Посевы из микрокосмов с НФ холерных вибрионов выдерживали на жидких питательных средах при температуре 37 °С в течение 3 сут. Затем производили высевы на чашки с агаром Хоттингера рН 7,6 и инкубировали при 37 °С до 5 сут. В случае отсутствия на чашках роста типичных колоний холерных вибрионов с них проводили следующий пассаж на жидкую среду, и так до 3-5 раз.
После высева на плотную питательную среду проб из микрокосмов с НФ, трижды прошедших подращивание во втором варианте жидкой питательной среды, в 4 случаях наблюдали слабый рост мелких прозрачных и мутных колоний, что указывало на реверсию 4 культур холерных вибрионов, из которых 3 находились 18 мес. в микрокосме II, а одна - 18-24 дня в микрокосме I. Штаммы V. cholerae еЬог Огава 9370 и V. cholerae еког Инаба В-41 реверсировали с образованием двух отличных по морфологии типов
колоний, у штаммов V. cholerae eltor Огава 9418 и V. cholerae eltor Огава 9378 выявляемые колонии были однородны. У всех выросших культур изучали антигенные, биохимические свойства, отношение к холерным бактериофагам, наличие СхА гена и сравнивали со свойствами исходных штаммов.
Все ревертанты продуцировали индофеноло-ксидазу, агглютинировались холерной О сывороткой до 1/2 титра, кроме штамма V. cholerae eltor Огава 9378. Реверсированный штамм V. cholerae eltor Инаба В-41, в отличие от исходной культуры, агглютинировался серовароспецифической сывороткой Инаба до 1/2 титра, а ревертанты штаммов холерных вибрионов серовара Огава - сывороткой Огава до титра. Однако реверсированные культуры V. cholerae eltor 9370 серовара Огава агглютинировались также сывороткой Инаба до 1/2-1/4 титра и сывороткой ЯО - до 1/4 титра (табл. 1).
У штаммов V. cholerae, исходно чувствительных к холерным бактериофагам ХДФ-3,4,5, ревер-танты утрачивали способность к лизису этими фагами в ДРТ. В то же время ревертанты штамма V. cholerae eltor В-41, исходно резистентного к фагам ХДФ-3,4,5, лизировались ими ниже ДРТ (табл. 2).
По биохимическим свойствам пять ревертантов холерных вибрионов сохранили способность ферментировать сахарозу и маннозу и относились к I группе Хейберга, а один - утратил эти свойства и был отнесен к VI группе Хейберга. В отличие от исходных штаммов все ревертанты не ферментировали орнитин (табл. 3).
По данным ПЦР-анализа как исходные, так и реверсированные культуры содержали СхА ген. Изучение генома холерных вибрионов, находящихся в некультивируемом состоянии, показало, что СхАВ оперон не содержит каких-либо вставок и/или делеций в сравнении с активными клетками [13]. Результаты наших исследований указывают на сохранение в геноме ревертантов холерных вибрионов СхА гена и, следовательно, их токсигенности.
Таким образом, реверсию холерных вибрионов наблюдали в 10 % случаев, если переход в НС осуществляли в микрокосме I (0,9 % раствор натрия хлорида при температуре 4-6 °С) в течение 18-24
Характеристика чувствительности исходных и реверсированных штаммов холерных вибрионов к холерным диагностическим бактериофагам
Таблица 2
Штамм
Форма
Чувствительность к холерным диагностическим бактериофагам
Эльтор
XДФ 3
XДФ 4
XДФ 5
V. cholerae eltor Огава 9418 Исходный Цельн. 10-2 10-3 10-2 10-3
Ревертант - 10-2 10-1 - 10-2
V. cholerae eltor Огава 9370 Исходный - 10-2 10-3 10-3 10-3
РевертантI - 10-2 - - -
Ревертант II - 10-2 10-1 - -
V. cholerae eltor Огава 9378 Исходный - 10-2 10-3 10-1 10-3
Ревертант - 10-2 10-2 - -
V. cholerae eltor Инаба B-41 Исходный - 10-2 - - -
РевертантI - 10-2 10-1 - 10-2
Ревертант II - 10-2 10-1 10-1 10-2
Примечание. Прочерк - отрицательный результат.
дней, и в 30 % - при 18-месячной инкубации в микрокосме II (среда, содержащая 50 мг/% аминного азота при температуре 20-22 °С). Рекультивация отмечена через 24 дня в случае использования для пассажей жидкой питательной среды, содержащей среду 199, солевой раствор, дрожжевой аутолизат и инактивированную эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота. Преимущество жидких питательных сред, обогащенных органическими и неорганическими биологически активными веществами, при реверсировании НФ также показано 8.К^а1 et а1. [29] и А.В.Соколенко с соавт. [11].
У ревертантов отмечено снижение агглютина-бельности холерными диагностическими сыворотками, чувствительности к холерным диагностическим фагам ХДФ-3,4,5. При сохранении основных биохимических свойств реверсированные культуры в 100 % случаев утратили способность ферментировать орнитин и в 16 % - сахарозу. Полученные результаты согласуются с данными других авторов, также отмечавших изменение культуральных, морфологических и биохимических свойств у рекультивированных микроорганизмов [5, 6, 11, 27].
Таким образом, в ходе проведенной нами работы установлено, что для реверсии НФ холерных вибрионов наиболее эффективной является жидкая питательная среда, содержащая СДС (199), солевой раствор, дрожжевой аутолизат и инактивированную
эмбриональную сыворотку. У рекультивированных штаммов V. с^1ете отмечено изменение серологических, биохимических и фаголизабельных свойств. Использование ПЦР значительно сокращает сроки получения результатов и является наиболее адекватным методом обнаружения НФ холерных вибрионов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гинцбург А.Л., Романова Ю.М. // ЖМЭИ. -1997. - № 3. - С. 116-121. - 2. Г оловлев Е. Л. // Микробиология. - 1999. - Т. 68, № 5. - С. 665-669. - 3. Литвин В.Ю., Гинцбург А. Л., Пушкарева В.И. и др. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий. - М.: Фармуарус-принт, 1999. - 200 с. - 4. Литвин В.Ю., Гинцбург А. Л., Пушкарева В.И., Романова Ю.М. // Вестн. Российской академии медицинских наук. - М.: Медицина. - 2000. - № 1. - С. 713. - 5. Пушкарева В.И., Емельяненко Е.Н., Диденко Л .В. и др. // ЖМЭИ. - 1998. - № 5. - С. 9-13. - 6. Пушкарева
В.И., Емельяненко Е.Н., Литвин В.Ю. // ЖМЭИ. -1997. - № 3. - С. 3-10. - 7. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. // ЖМЭИ. - 1997. - № 4. - С. 35-41. -
8. Романова Ю.М., Чегаева Е.В., Гинцбург А. Л. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. - 1998. - № 3. - С. 3-8. -
9. Романова Ю.М., Яе188Ъго(Й Я., Гинцбург А.Л. // Матер. VIII Всерос. съезда эпидемиол., микробиол. и парази-тол. - М., 2002. - Т. 1. - С. 236-237. - 10. Соколенко А. В. Морфология, ультраструктура, метоболизм некультивируемых форм холерных вибрионов: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. -Ростов н/Д, 2000. - 18 с. - 11. Соколенко А.В., Ломов Ю.М., Асеева Л.Е. и др. Холера и патогенные для человека вибрионы: Матер. пробл. Комис. межведомств. науч. совета по
Биохимические свойства исходных н реверсированных штаммов холерных вибрионов
Таблица 3
Ферментация
Штамм Форма Индофено- локсидаза Глюкозы в среде Хью-Лейфсона Саха- Лактоза Араби- Ман- Лизиндекар- боксилаза Орнитинде- карбоксилаза Аргининди- гидролаза
Аэроб. 1 Анаэроб. роза ноза ноза
V. cholerae eltor Исходный + + б/г + б/г + + + + -
Огава 9418 Ревертант + + б/г + б/г + - - + + - -
V. cholerae eltor Исходный + + б/г + б/г + - - + + + -
Огава 9370 РевертантI + + б/г + б/г - - - - + - -
Ревертант II + + б/г + б/г + - - + + - -
V. cholerae eltor Исходный + + б/г + б/г + - - + + + -
Огава 9378 Ревертант + + б/г + б/г + - - + + - -
V. cholerae eltor Исходный + + б/г + б/г + - - + + + -
Инаба B-41 РевертантI + + б/г + б/г + - - + + - -
Ревертант II + + б/г Примечание. Прочерк - отрицательный результат. + б/г + + +
С
санитарно-эпидемиол. охране террит. РФ. - Ростов н/Д, 2002. -Вып. 15. - С. 61-63. - 12. Сучков Ю.Г., Худяков И.В., Емельяненко Е.Н. и др. // ЖМЭИ. - 1997. - № 4. - С. 4246. - 13. Четина Е.В., Грижебовский Г.М., Брюханов А.Ф. и др. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. - 1993. -№ 6. - C. 18-22. - 14. Четина Е.В. // Мол. генет., микробиол. и вирусол. - 1997. - № 1. - C. 8-14. - 15. Шелохович А.И., Мишанькин Б.Н., Кудрякова Т.А., Харабаджахян Г. Д. // Холера: Матер. VIII Российск. науч.-практич. конф. по проблеме «Холера». - Ростов н/Д, 2003. - С. 183-185. -16. Colwell R.R., Brayton P.R., Grimes D.J. et al. // Bio-technol. - 1985. - Vol. 3. - P. 817-820. - 17. Colwell R.R., Brayton P.R., Herrington D. // Wld. J. Microbiol. Biotech-nol. - 1996. - Vol. 12. - P. 28-31. - 18. Huq A., Colwell R.R. // EMMJ. - 1996. - Vol. 2, N 1. - P. 37-45. - 19. Islam M.S., Drasar B.S., Bradley D.J. // J. Trop. Med. Hyg. -1990. - Vol. 93. - P. 133-139. - 20. Islam M.S., Rahim Z., Alam M.J. et al. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. - 1999. -Vol. 93. - P. 36-40. - 21. Mizinoe Y., Wai S.N., Takade A., Yoshida S. // Arch. Microbiol. - 1999. - Vol. 172, N 1. -P. 63-67. - 22. Mizunoe Y., Wai S.N., Ishikawa T. et al. // FEMS Microbiol. Lett. - 2000. - Vol. 186, N 1. - P. 115-120. -23. Oliver J.D. Formation of viable but nonculturable cells // Starvation in Bacteria / ed. S.Kjellenberg. - Plenum Press, New York, 1993. - P. 239. - 24. Oliver J.D., Hite F., McDougald
D. et al. // Appl. Environ. Microbiol. - 1995. - Vol. 61, N 7. -P. 2622-2624. - 25. Pitonzo B.J., Amy P.S. Rudin M. // Radiat. Res. - 1999. - Vol. 152, N 1. - P. 71-75. - 26. Ravel J.,
Knight I.T., Monahan C.E. et al. // Microbiology. - 1995. -Vol. 141, N 2. - P. 377-383. - 27. Signoretto C., Lleo M.D., Tafi M.C., Canepari P. // Appl. Environ. Microbiol. - 2000. -Vol. 66, N 5. - P. 1953-1959. - 28. Wai S.N., Mizunoe Y., Takade A., Yoshida S. // Arch. Microbiol. - 2000. - Vol. 173, N 4. - P. 307-310. - 29. Wai S.N., Moriya T., Kondo K. et al. // FEMS Micobiol. Lett. - 1996. - Vol. 136, N 2. - P. 187-191.
N.A.Ossina, T.V.Bugorkova, A.N.Kulichenko
On the Problem of Reversion of Non-Culturable Vibrio cholerae Forms
Russian Anti-Plague Research Institute “Microbe ", Saratov
Ten percent non-culturable Vibrio cholerae forms were shown to undergo reversion when the transition was run in 0.9 % sodium chloride solution at 4 to 6 °C for 18-24 days, or in 30 % solution during 18 months’ incubation in the medium containing 50 mg/% amine nitrogen at 20 to 22 °C. For recultivation, fluid nutritional medium was used that contained medium 199, saline, yeast autolysate and inactivated cattle embryonic serum. The rever-tants demonstrated reduced agglutinability with cholera diagnostic sera and decreased sensitivity to cholera CDP-2,4,5 bacteriophages, the loss of ornithine and saccharose fermentation activities in 100 % and 16 % cases, respectively.
Key words: Vibrio cholerae, non-culturable forms, reversion.
nocTynu^a 05.04.06.
УДК 616.981.452
О.Н.Подладчикова, В.А.Рыкова, В.С.Иванова, С.А.Лебедева
ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИЗНАКА АУТОАГГЛЮТИНАЦИИ У РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ
Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт
Проведено сравнение различных штаммов Yersinia pestis по признаку аутоагглютинации (АА). Выявлены различия в экспрессии АА у штаммов, различающихся по способности сорбировать пигменты (признак Hms). Показано, что в основе АА Hms- штаммов лежат гидрофобные взаимодействия, поскольку АА этих штаммов, обладающих высокой гидрофобностью, зависит от концентрации соли и чувствительна к неионогенному детергенту твин-80. В основе АА Hms+ штаммов, не обладающих вышеперечисленными свойствами, лежит неизвестный в настоящее время механизм, по-видимому, связанный с рецептором пигментов. Полученные данные позволяют заключить, что за АА Hms+ и Hms- штаммов Y. pestis отвечают разные или различающиеся по структуре компоненты.
Ключевые слова: Y. pestis, аутоагглютинация.
Аутоагглютинация (АА) бактерий - это способность клеток склеиваться и образовывать агрегаты без добавления каких-либо внешних факторов. Известно, что АА грамнегативных бактерий, которая коррелирует с вирулентностью клеток для животных, обычно вызывают гидрофобные поверхностные компоненты. Признак АА характерен и для возбудителя чумы (Yersinia pestis), а также для двух других патогенных для человека видов иерсиний, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica [8]. У последних двух видов АА проявляется только при 37 °С и обусловлена экспрессией на поверхности клеток гидрофобного белка YadA, кодируемого общей для трех видов иерсиний плазмидой [14]. Y. pestis не экспрессирует этот белок в силу дефекта гена yadA [13], однако, несмотря на это, возбудитель чумы проявляет АА. В литературе нам не уда-
лось обнаружить результатов специальных исследований, посвященных изучению феномена АА у У. pestis, но некоторые предположения по этому вопросу имеются в работах разных авторов. Одни из них [10] связывают АА клеток чумного микроба с гидрофобными свойствами его липополисахарида, лишенного О-полисахаридных цепей (Я-ЛПС), другие [7] - со способностью клеток при 26 °С сорбировать нейтральные красители из среды (признак пигментсорбции, Иш8). Однако клетки чумного микроба, не продуцирующие капсульный антиген Са£1, проявляют ярко выраженную способность к АА и при 37 °С, когда Иш8 признак не экспрессируется [6]. Более того, Иш8- клетки чумного микроба при 26 °С также способны к АА. Противоречивость приведенных выше данных свидетельствует о том, что молекулярные механизмы, лежащие в основе
