CC BY
6
Таблица 2
Динамика титров антител к легиоиеллам при исследовании
60 парных сывороток
Число парных сывороток Титр антител в 1-й сыворотке Титр антител во 2-й сыворотке
0 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200
8 0 6 2
20 1:200 1 5 6 3 4 1
16 1:400 2 1 3 3 6 1
9 1:800 2 2 1 1 3
6 1:1600 - 1 4 1 -
1 1:3200 1 .—
• •
групп рабочих старых цехов (82 человека) антитела к легионеллам в титре 1:400 обнаружены у 18 человек, в титре 1:800 — у 7, что свидетельствует о наличии достаточно высокого иммунологического фона в отношении легионеллеза в Армавире, особенно на предприятиях, где персонал использует сырье с токсичными компонентами. Этот вывод подтвердился при выборочном обследовании персонала завода кожаных изделий и мебельного объединения: из 52 обследованных титр антител у 2 человек составил 1:400, у 2 — 1:800, у 4 — 1:1600. Эти данные согласуются с мнением об эндемичности инфекции для ряда районов нашей страны и о большем риске инфицирования лиц, подвергающихся воздействию токсичных веществ, используемых в качестве сырья на химических предприятиях [5].
Анализируя пути попадания легионелл в производственные помещения АЗРИ, можно предположить, что их распространение происходило следующим образом: с пылью из ближайшего котлована возбудитель попадал в воздухозаборные башни, затем в систему кондиционирования воздуха и по воздуховодам приточной вентиляции в производственные цеха. Экологической нишей могла служить и вода градирни, которая проникает в систему охлаждения компрессора. При подаче сжатого воздуха на рабочие места в трубах накапливается конденсат и происходит выброс мелкодисперсного аэрозоля, содержащего легионел-лы. Относительно высокая обсемененность легио-неллами производственных помещений, возможно, связана и с тем обстоятельством, что на крыше цехов воздухозаборные башни и дефлекторы, через
которые производится выброс воздуха, расположены рядом и на одном уровне. В связи с этим могла происходить рециркуляция контаминиро-ванных воздушных масс.
> Выводы. 1. У заболевших легионеллезом выявлен специфический иммунологический сдвиг. При исследовании их сывороток крови с применением иммуноферментного анализа у 58,24=3,5 % лиц обнаружены антитела к легионеллам в титрах 1:400—1:3200, отмечалась выраженная динамика титров антител в парных сыворотках.
2. Среди персонала других предприятий, использующих производственное сырье с токсичными компонентами, определяется специфический иммунологический фон в отношении легионелл.
3. Метод экспресс-анализа в непрямой реакции иммунофлюоресценции оказался эффективным при экологических исследованиях на наличие ле-гионеллезного антигена в объектах окружающей среды.
4. Предприятия химической промышленности в силу особенностей технологического процесса и рецептуры производственного сырья являются объектами повышенного риска инфицирования легионеллами.
Литература
1. Васильева В. И., Прозоровский С. В., Русакова Е. В. и др. // Журн. микробиол.— 1987.— № 4.— С. 44—47.
.2. Гасилина M. М., Тартаковский И. С. // Гиг. и сан.— 1988.— № 8.— С. 92—93.
3. Методические рекомендации по лабораторной диагностике легионеллеза (болезни легионеров).— М., 1987.
4. Прозоровский С. В., Покровский В. И., Тартаковский И. С. Болезнь легионеров.— М., 1984.
5. Прозоровский С. В. // Мед. газета.— 1987.— № 46 (4699).
6. Тартаковский И. С., Прозоровский С. В. // Экология возбудителей сапронозов.— Мм 1988.— С. 47—52.
7. Cordes L GGoldman W. D., Marr J. S. // Bull. N. Y. Acad. Med.— 1980.— Vol. 56.— P. 467—482.
8. Cordes L. G., Fraser D. II Med. Clin. N. Amer.— 1980.— Vol. 64.— P. 395—416.
9. Bartlett C. L. // Ann. intern. Med.— 1979.—Vol. 90.— P. 592—596.
10. Kirby B. D., Snyder К. M., Meyer R. D. // Medicine (Baltimore).— 1980.—Vol. 59.—P. 188—205.
11. Lawson J. H. И Scot. med. J.— 1978.— Vol. 23.— P. 121 — 124.
12. Thacker S. B. et al. 11 J. infect. Dis.— 1978.—Vol. 138.— P. 512—519.
Поступила 10.01.89
КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1991
УДК 613.636:579.66|-078
В. В. Буянов, Н. Я. Сергеюк, Ю. В. Каплунов, Н. Н. Апенова
К ВОПРОСУ ГИГИЕНИЧЕСКОГО НОРМИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
(НА ПРИМЕРЕ SERRATIA MARCESCENS ШТАММ ВКМ-851)
ВНИИ биологического приборостроения, Москва
Промышленное использование метаболической новению проблемы гигиенического нормирования деятельности микроорганизмов привело к возник- штаммов продуцентов.
Так, при производстве продигиозана в качестве продуцента используется Serratia marcescens "(S. т.), однако в нашей стране не существует гигиенического норматива, регламентирующего содержание этого вида микроорганизмов в воздухе рабочей зоны. Известно, что влиянием производственной среды обусловлено увеличение количества случаев бронхиальной астмы, экзогенного аллергического альвеолита или пневмонита, повышение доли хронических неспецифических заболеваний легких в общем числе нозологических форм [6]. Кроме того, указанный штамм широко применяется в качестве имитатора с целью оценки защитной эффективности средств индивидуальной защиты для работающих на микробиологическом производстве.
В связи с тем что проверка защитной эффективности средств индивидуальной защиты проводится с участием добровольца-испытателя, существует необходимость определения класса опас-H-Ости этого микроорганизма, а с учетом промышленного производства продуктов его метаболической деятельности — и ПДК в воздухе рабочей зоны.
Методической основой для проведения работ по гигиеническому нормированию промышленных микроорганизмов служат рекомендации, изложенные в [2], а также в [4].
В этих рекомендациях подробно описаны методы, позволяющие оценить вирулентность микроорганизмов, способность их к диссеминации, аллергизирующий эффект, влияние на иммунный статус теплокровных животных при остром и хроническом ингаляционном воздействии.
Следует отметить, что ни в одном из существующих руководств по определению ПДК как биологических, так и небиологических объектов нет рекомендаций по индикации изменений, возникающих в системе неспецифической клеточной защиты респираторного тракта. Однако, по данным ряда авторов [1, 3, 5], эти изменения являются наиболее ранними при ингаляционном воздействии неблагоприятных производственных факторов вообще и продуктов микробиологического синтеза в частности. Более того, изменения функционального состояния альвеолярных макрофагов (AM) следует рассматривать как индикатор возникновения предпатологических состояний организма при воздействии продуктов микробиологического синтеза. Поэтому, с нашей точки зрения, наряду с применяемыми при установлении ПДК производственных штаммов и готовых продуктов на их основе следует использовать также методы, позволяющие оценить состояние неспецифической защиты респираторного тракта. Наиболее информативной моделью для этой цели служат AM [7].
Материалы и методы. В исследовании использовали микроорганизм S. т. штамм ВКМ-851.
Экспериментальных животных (морские свинки-альбиносы) помещали в затравочную камеру, где
распыляли суспензию Б. т. При определении порога острого ингаляционного воздействия (итас) затравку проводили однократно 500 мл суспензии при 4-часовой экспозиции. Концентрация в разные дни исследования составляла 103, 10\ 105, 106, 107 и 108 КОЕ/м3, дисперсность Б. т. 2,9—3,1 мкм. Обследование животных осуществляли через 1 сут после окончания затравки.
При изучении хронического воздействия Б. т. на организм экспериментальных животных подвергали затравке в течение 5 дней в неделю с экспозицией 4 ч. Распыляли 500 мл суспензии, концентрация аэрозоля составляла 10'—10й КОЕ/м3, дисперсность колебалась от 2,1 до 3,1 мкм.
При определении концентрации аэрозоля использовали метод агаровых капель. Сущность метода заключается в следующем: 50—100 мл стерильного 1 % мясопептонного агара расплавляют и термостатируют в водяной бане до момента посева при 50—55 °С. Непосредственно перед посевом стерильно отбирают 0,5 мл агара и заливают в стерильную пробирку. Не давая агару застыть, другой пипеткой вносят в пробирку 0,05 мл исследуемой пробы, перемешивают и из полученного образца наносят 4—б капель (по 0,05 мл) в стерильную чашку Петри. На одну чашку помещают 15—20 капель, т. е. 4—5 различных проб, такое же количество капель может быть нанесено на крышку. Чашки с агаровыми каплями термостатируют при 27 °С. В ряде случаев наблюдается высыхание агара в чашках, лежащих непосредственно на металлических полках термостата. Это неблагоприятное явление устраняют путем размещения чашек в термостате на полках, покрытых тонкими листами пенопласта или пенистого полиуретана. Высохшие после инкубации агаровые капли легко могут быть восстановлены путем нанесения на каждую из них небольшого количества 0,5 % раствора карболового фуксина Пфей-фера.
Подсчет колоний в капле производили автоматически с помощью телевизионного микроскопа. Капли рассматривали под общим увеличением 12,5. Для того чтобы убрать тени по краям капель, мешающие анализу, под исследуемую чашку помещали матовое стекло. Колонии в отдельных агаровых каплях подсчитывали, не открывая чашки, что исключало возможное образование микробного аэрозоля. Описанный способ позволял с высокой точностью подсчитывать до 500 колоний в капле.
Несомненным преимуществом данного метода является значительная экономия питательных сред, посуды, термостатирующих объемов, а также рабочего времени и обеспеченности персоналом.
Кроме того, к положительным особенностям метода агаровых капель следует отнести возможность
микроскопировать колонии, не открывая чашки, при использовании оптики, обеспечивающей значительное увеличение (до 200). Эта особенность метода имеет существенное практическое значение
с точки зрения микробиологической техники безопасности, поскольку ограничивает образование бактериальных аэрозолей, обеспечивая защиту производственной среды от загрязнения.
Определение концентрации и дисперсности аэрозоля проводили в продолжение 4 мес.
Обследование животных осуществляли через 3 сут, 1, 2, 3 и 4 мес от начала затравки. Дальнейшие исследования проводили в период реабилитации — через 10 дней и 1 мес после окончания затравки.
Состояние неспецифической клеточной защиты респираторного тракта экспериментальных животных оценивали по следующим показателям: количеству АМ в бронхиальных смывах, проценту жизнеспособных АМ и их адгезивным свойствам [7].
Диссеминацию при хроническом поступлении определяли в те же сроки, что и состояние АМ. Исследовали сердце, легкие, печень. Эти органы тщательно измельчали в физиологическом растворе и помещали на 2 ч в термостат при температуре 28 °С, а затем 0,1 мл полученного субстрата высевали на мясопептонный агар. Учет проводили после термостатирования в течение 2 сут.
Исследование гомогената органов и рассева гомогената на питательную среду (вместо отпечатков с органов, как это предусмотрено в методических рекомендациях [2] ) позволяет проводить не только качественный, но и количественный учет диссеминации штаммов микроорганизмов по органам экспериментальных животных в динамике.
Титры антител определяли методом пассивной гемагглютинации, класс опасности — на основании классификации, предложенной в [2].
Результаты и обсуждение. Исследования пока-задда, что однократная 4-часовая затравка экспериментальных животных влечет за собой достоверное увеличение количества АМ по сравнению с тем же показателем у интактных животных (см. таблицу). При этом число жизнеспособных клеток значительно снижается. Следует отметить,
что степень увеличения числа АМ в бронхиаль-
*_ •
Результаты изучения АМ при однократном ингаляционном
воздействии
ных смывах связана с изменением концентрации Б. ш. Так, при концентрации 105 КОЕ/м3 и по-
Концент- Число АМ, • 106/мл Процент жизнеспособных клеток
рация
аэрозоля, КОЕ/м3 у интактных животных у животных после затравки у интактных животных у животных после затравки
Ю!
10
8
ю7
10'
105 104
2,08±0,9
2,08=Ь0,09
2,08±0,09 2,08±0,09 2,08±0,09 2,08±0,09
3,0+0,07 р<0,001 2,9±0,1 р<0,01 2,9±0,03 р<0,01 2,5н=0,05 рС 0,02 2,56±0,07 р<0,05 2,3± 1,01 р< 0,05
98±0,96 98±0,96 98±0,96 98±0,96 98±0,96 98±0,96
874=0,9 р<0,01 87,34=0,98 р< 0,01 87,2±0,96 р<0,01 90,014=0,7 р<0,02 92,38±0,84 р<0,02 95,7+9,9 р<0,05
стояннои дисперсности этот показатель достоверно ниже, чем при концентрации 108 КОЕ/м3.
Дальнейшее снижение концентрации аэрозоля не давало достоверных различий в показателях как общего количества АМ, так и процента жизнеспособных клеток среди них.
При хроническом ингаляционном поступлении Б. т. содержание АМ в пробе возрастает. Причем, если на 3-й сутки от начала затравки эти изменения не являются достоверными (/»0,5), то к концу затравки достоверность их по сравнению с контролем несомненна (0,02</?<0,05). Количество АМ в пробе увеличивается на протяжении 3 мес.
Установлено, что к концу 4-го месяца сохраняется большое число АМ в смывах по сравнению с контролем (р<0,01), но достоверного увеличения числа клеток по сравнению с уровнем предыдущего месяца не происходит (р:>0,5). После 10 дней реабилитации отмечается уменьшение количества АМ по сравнению с таковым в последний месяц затравки (р<0,01), а к концу 1-го месяца реабилитации этот показатель даже ниже контрольного.
Одновременно с изменением количества АМ в бронхиальных смывах происходят изменения в их функциональном состоянии. Так, начавшееся значительное усиление адгезивных свойств АМ достигает максимума к концу 1-го месяца затравки, а затем начинается их ослабление и к концу 4-го месяца этот показатель становится достоверно ниже контрольного.- В процессе реабилитации адгезивные свойства АМ восстанавливаются и практически не отличаются от исходных к концу 1-го месяца реабилитации.
Таким образом, при хроническом ингаляционном поступлении Б. т. одним из видов реакции неспецифической клеточной защиты респираторного тракта является увеличение количества АМ и повышение их функциональной активности; дальнейшие изменения свидетельствуют, по всей вероятности, о снижении интенсивности неспецифической защиты респираторного тракта. Однако этот процесс обратимый, поскольку в течение 1-го месяца после прекращения поступления Б. т. в респираторный тракт, как количественный, так и качественный показатели возвращаются к исходному уровню.
Одновременно в те же сроки, что и при изучении АМ, мы проводили исследования по определению возможности диссеминации Б. т. по органам при аэрогенном поступлении. Установлено, что на 10-е сутки после прекращения аэрогенного поступления микроорганизм не высевается из печени. Эти данные служат доказательством высказанного ранее предположения об отсутствии у штамма Б. т. способности диссеминировать.
Принимая во внимание рекомендации рассчитывать ПДК как отношение пороговой концент-
рации по лимитирующему эффекту к коэффициенту запаса (не менее 10), Э. т. штамм ВКМ-851 следует отнести к микроорганизмам, оказывающим слабое общетоксическое и аллергическое действие, т. е. к 3-му классу.
Давая оценку хроническому ингаляционному воздействию Б. т., следует также отметить, что изменений в общем состоянии и поведении животных не зафиксировано, так же как и явлений дисбактериоза.
Выводы. 1. По результатам проведенного исследования, согласно действующей классификации микроорганизмов, штамм ВКМ-851 следует отнести к 3-му классу опасности.
2. ПДК штамма в воздухе рабочей зоны составляет 2 • 104 КОЕ/м3.
3. При проведении работ по гигиеническому нормированию промышленных штаммов микроорганизмов следует оценивать степень их воздействия на неспецифическую защиту респираторного тракта.
Литература
1. Аулика Б. В., Назарова Л. В., Фетисов В. В. и др. // Современные биохимические методы в гигиене окружающей среды.—М., 1982.—С. 64—68.
2. Зельцер П. Л., Падалкин В. П., Фоломеева Н. А. Постановка исследований для обоснования ПДК производственных штаммов микроорганизмов и на их основе готовых форм препаратов в воздухе рабочей зоны: Метод, указания.— М., 1983.
3. Игнатова Г. Л., Жигалова Н. И. // Научные и практические основы снижения заболеваемости рабочих и ИТР промышленных предприятий.— Челябинск, 1979.— Т. 1.— С. 63—64.
4. К постановке исследований санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны: Метод, указания.— М., 1980.
5. Меркурьева Р. В. // Вопр. мед. химии.— 1982.— № 2.— С. 35—39.
6. Сергеюк И. П. // Современные методы диагностики и лечения заболеваний легких.— М., 1984.— С. 20—29.
7. Сидоренко Г. И., Огарков В. И., Меркурьева Р. В. Система биохимических, цитологических, электронно-микроскопических критериев оценки функционального состояния альвеолярных макрофагов человека и экспериментальных животных и человека при действии факторов окружающей среды: Метод, указания.— Уфа, 1983.
Поступила 22.02.90
Гигиена атмосферного воздуха
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1991 УДК 614.715:547.4331-07
Я. Я. Янышева, О. Н. Литвиненко, И. А. Черниненко, М. Кертес
К ВОПРОСУ О СОДЕРЖАНИИ НИТРОЗАМИНОВ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ
НЕКОТОРЫХ КРУПНЫХ ГОРОДОВ
Республиканский научный гигиенический центр, Киев; Государственный институт гигиены ВНР, Будапешт
В последнее время особую актуальность в гигиене приобретает проблема изучения канцерогенных нитрозаминов (НА) в окружающей среде. Соединения данного класса относятся к числу веществ, являющихся с высокой степенью вероятности канцерогенными для человека. Доказательством этого служит факт обнаружения высокой канцерогенной активности нитрозосоединений для всех испыты-вавшихся в опытах видов животных, включав антропоидных обезьян [2].
Хотя известно, что НА содержатся в выбросах промышленных предприятий (по производству азотных удобрений, полимерных материалов, моющих средств, красителей, резиновых изделий и др.)
[10] или синтезируются из своих предшественников [1, 6, 8], исследования в отношении возможности поступления НА в организм человека с атмосферным воздухом немногочисленны [3, 9]. Учитывая большую потенциальную опасность этих канцерогенов для человека, лаборатория по гигиеническому изучению канцерогенных факторов РНГЦ УССР совместно
с лабораторией атмосферного воздуха Государственного института гигиены ВНР провела работу по изучению содержания двух широко распространенных НА — нитрозодиметиламина (НДМА) и нитрозодиэтиламина (НДЭА) — в воздушном бассейне ряда городов УССР и ВНР. Одновременно с этими веществами исследовали оксиды азота и ряд метеорологических факторов (температура, влажность, скорость ветра, солнечная радиация и др.).
Исследования проводили в двух крупных городах с преимущественно транспортным типом загрязнения атмосферы (Киев, Будапешт), а также в трех средних городах с промышленным характером загрязнения атмосферы (Днепродзержинск, Кривой Рог, Дорог). При этом в черте обследуемых населенных пунктов выбирали места, отражающие характерное для данного города (района) состояние загрязнения атмосферы. Всего в различных функциональных зонах (жилой, промышленной, автомагистралей) было организовано 16 стационарных пунктов. В соответствии с мето-
