CC BY
6
пластинки. Затем пластинку помещали в хроматографическую камеру и производили разгонку в указанной выше подвижной системе. После того как подвижный растворитель достигал линии на расстоянии 1—2 см от верхнего края, пластинку вынимали, подсушивали, а затем опрыскивали сначала 15% раствором КОН в 60% этаноле, а затем — 0,05% раствором прочного красного ГГ в 50% этаноле. Севин и 1-нафтол проявлялись в виде четко очерченных ярко окрашенных синих пятен. Проявляющие реактивы следует готовить заново для каждого дня работы.
При внесении в пробы почвы, зеленых растений и корнеклубнеплодов растворов севина на ацетоне в количестве от 0,1 до 2 мкг наименьший уровень открываемое™ составил 0,2 мкг. При навеске пробы в 10 г относительная чувствительность определения составила 0,02 мг/кг. Степень определения находилась в пределах 80—95%.
Необходимо отметить, что описанный метод позволяет одновременно определять и ряд метаболитов. Так, при анализе проб растений, обработанных севином, удавалось выделить севин, 1-нафтол и 2 неидентифицирован-ных метаболита с 0,1 и 0,25.
При определении севина в корнеклубнеплодах можно использовать упрощенную очистку экстрактов. Для этого склянки с пробами, залитыми бензолом после выдерживания в течение 14—16 ч, помещали в морозильную камеру холодильника на 1 ч. Затем бензольный экстракт отфильтровывали через ватный фильтр в фарфоровую выпаривательную чашку. Склянку с пробой промывали 5—7 мл холодного бензола, который фильтровали через тот же фильтр в фарфоровую чашку. Бензольный экстракт упаривали досуха в токе воздуха. Сухой остаток растворяли в метаноле так же, как и в первом варианте, и наносили на старт хроматографической пластинки. Количественное определение севина и 1-нафтола производили путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен проб и стандартных растворов.
Предложенный метод определения севина и 1-нафтола в почве и кормовых культурах с использованием хроматографии в тонком слое прост и доступен для широкого практического применения.
ЛИТЕРАТУРА. Малинин О. А. — Ветеринария, 1974, № 2, с. 104—105.
Поступила 19/'УИ 1977 г.
УДК 613.63:661.1851-07
Кандидаты мед. наук Э. А. Кордыш и М. М. Ратпан, А. А. Деканоидзе
К МЕТОДИКЕ ИЗУЧЕНИЯ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ
ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С ВЫРАЖЕННЫМИ ЩЕЛОЧНЫМИ И КИСЛОТНЫМИ СВОЙСТВАМИ
Львовский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
В связи с выраженностью у некоторых анионоактивных препаратов щелочных свойств, а у катионоактивных кислотных свойств при определении верхних параметров токсичности соединений учитывали рекомендации Г. Н. Красовского. В острых опытах для устранения искажения информации об истинно токсической опасности подобных химических агентов за счет их облигатных свойств он считает целесообразным вводить такие соединения в 1—2% растворе крахмала, масле или в нейтрализованном состоянии. Последнее условие проведения эксперимента является правомерным при испытании поверхностно-активных веществ (ПАВ), многие из которых устойчивы в растворах кислот и щелочей.
Среднесмертельные дозы иоиогенных ПАВ при внутрижелудочном введении с различными
растворителями (М±ш)
Оввтная концентрация Растворитель рН опытной среды Белые крысы Белые мыши
LD„. иг/кг
Анионные вещества
Сульфирол-8, 50% Молантин Р, 3%
Днспергатор НФ, 50%
Выравниватель А, 50% Алкамон ОС-2, 40%
Вода 12,5 6 152^:191 2 9152:217
Крахмал 12,9 6 2002:210 2 8962:235
Масло 6,1 4 1002:280 1 5502:182
0,4% НС1 7,0 5 9202:242 2 8802:252
Вода 9,6 2952:33 3152:37
Крахмал 10,0 2782:31 3202:44
Вода 11,2 10 2502:625 10 2502:790
Крахмал 11,5 11 000—745 9 9702:602
Масло 6,5 7 200— 664 7 0002:786
0,25% НС1 7,3 10 3302:815 10 1002:915
Катионные вещества
Вода Крахмал Масло 0,3% NaOH Вода Крахмал Масло 0,3% NaOH
2,2 1,7
5.5
7.0 2,0
1.6 5,6
7.1
5 900—835
5 870—640 3 7002:480
6 050=£530
3 75ft±:303
4 1502:345
2 0802:293
3 850^305
Среди апробированных нами ПАВ наибольший интерес в рассматриваемом аспекте представили анионогенные сульфирол-8, диспергатор НФ, молантин Р и катионогенные — выравниватель А, алкамон ОС-2. В опытах по изучению характера и степени токсического действия перечисленных препаратов использовано 615 беспородных белых мышей массой 18—20 г и 740 белых крыс массой 150—170 г. Анионные ПАВ вводили в желудок натощак в растительном масле, водных растворах, 2% растворах крахмала, 0,25—4% растворе NaCl, катионные — в 0,3% растворе NaOH. С учетом уровня острой токсичности концентрация в опытных средах сульфирола-8, диспергатора НФ и выравнивателя А составляла 50%, алкамона ОС-2 — 40%, молантина Р — 3%. Объем масла ни в одной из проб не превышал 1% от массы тела животных, при необходимости соответствующие разведения готовили с добавлением воды. Активную реакцию испытуемых жидкостей измеряли с помощью прибора «рН-340». Среднесмертельные дозы рассчитывали методом пробит-анализа по Миллеру и Тейнтеру (М. Л. Беленький).
Результаты острых опытов, приведенные в таблице, позволяют отнести молантин Р к умеренно токсичным соединениям по укрупненной классификации, утвержденной пленумом секции ПДК (И. В. Саноцкий и И. П. Уланова), а все остальные—к малотоксичным. Чувствительность животных обоих видов к молантину Р и диспергатору НФ совпадала, к 3 другим ПАВ мыши оказались несколько чувствительнее. Сравнивая установленные среднесмертельные дозы веществ в зависимости от растворителя, мы выявили следующее.
Введение в желудок подопытных животных ПАВ в 2% растворе крахмала не изменяло уровня острой токсичности яда, зарегистрированного при испытании его в водных растворах.
Замена воды в испытуемых пробах маслом приводила к достоверному снижению верхних параметров токсического действия препаратов. Как видно из таблицы, в этих экспериментах с сульфиролом-8 определяемый показатель для мышей снизился почти вдвое. Клиническая картина отрав-
ления животных не отличалась от таковой в опытах с водными и крахмальными растворами соответствующих соединений. На аутопсии мышей, затравленных сульфиролом-8, установлены более глубокие повреждения слизистой оболочки 'желудочно-кишечного тракта, чем при введении препаратов в воде и растворе крахмала. Молантин Р в масле не испытывали в связи с тем, что в кислой среде этого растворителя вещество подвергалось химическому превращению. По этой же причине не проводили его нейтрализацию.
При внутрижелудочном поступлении препаратов в нейтрализованном состоянии среднесмертельные дозы их соответствовали установленным в экспериментах на крысах и мышах, получавших ПАВ, разведенные водой. Характер клинического симптомокомплекса и макроскопических постмор-тальных изменений был сходен у животных обеих групп.
Полученные данные позволили'констатировать ряд факторов и высказать некоторые соображения в отношении их интерпретации. Проводя испытания ПАВ с 2% раствором крахмала, мы обратили внимание на явление, описание которого в литературе не нашли. При внесении указанного растворителя в опытную среду щелочной реакции зарегистрированы более высокие водородные показатели, чем в одноименных водных растворах равнозначных концентраций (см. таблицу). При аналогичном сравнении апробированных растворов катионоактивных препаратов в присутствии крахмала обнаружен сдвиг активной реакции в кислую сторону. В условиях затравки животных:ПАВ в крахмальных растворах не выявлено предполагаемого обволакивающего эффекта (по уровню среднесмертельных доз, клинической картине отравления и данным аутопсии). Возможно, это обусловлено изменением свойств крахмала—растворением и декстринизацией при контакте с высокоионизированными соединениями. Добавление масла в испытуемое количество ПАВ, как видно из таблицы, сопровождалось значительным отклонением рН жидкостей: щелочная среда становилась слабокислой, а кислая несколько подщелачивалась. Степень острой токсичности масляных эмульсий препаратов по сравнению с водными растворами их возрастала. Таким образом, в этих условиях не отмечено косвенных признаков (по величине Ьб50) уменьшения резорбции исследуемых ксенобиотиков. Снижение верхних параметров токсического действия веществ нельзя объяснить улучшением всасываемости их из желудочно-кишечного тракта за счет нейтрализующих свойств масла, так как результаты опытов с прямой химической нейтрализацией, не выявивших сдвигов в уровне и характере воздействия на организм щелочных и кислотных ПАВ, полностью опровергают это предположение. Данные патологоанатомического вскрытия также свидетельствуют об отсутствии смягчающего влияния масла на местнораздражающую активность соединений (в некоторых случаях поражение слизистых оболочек было даже более глубоким, чем при контакте с водными растворами). Возрастание токсической опасности препаратов в масле, возможно, следует связывать с меньшей растворимостью изученных веществ в этой среде. Как сообщают А. А. Голубев и соавт.,' такая зависимость в отношении некоторых химических факторов зарегистрирована. Не должно исключаться и то обстоятельство, что, способствуя усилению проникновения масла в кровь (общеизвестное свойство ПАВ), препараты в подобных условиях могли оказывать более агрессивное действие на организм. Кроме того, не последнюю роль в механизме рассматриваемого явления мог сыграть процесс омыления жиров, происходящий в щелочной и кислой средах.
На основании проведенных исследований и их анализа можно заключить, что положение о способности резорбироваться из желудочно-кишечного тракта веществ кислой природы лишь при рН не более 3,0, а соединений основного характера — не менее 8,0 (И. Д. Гадаскина и Э. Н. Левина), на наш взгляд, неприменимо к ионогенным ПАВ, так как низкий потенциал всасывания, обусловленный резкой кислотностью, компенсирует-
ся изменяющей проницаемость мембраногенной активностью соединений. По этой причине нейтрализация вводимых препаратов не отражается на верхних уровнях их токсичности, в связи с чем подобный искусственный сдвиг рН опытной среды для приближения ее показателей к таковым при проведении подострого и хронического экспериментов нецелесообразен. Применение крахмальных растворов и масла является не только неэффективным, но и неправомерным вмешательством, так как в присутствии ка-тионных и анионных комплексов крахмал изменяет свои свойства (за счет процессов растворения и декстринизации), углубляет сдвиг активной реакции раствора, а масло может подвергаться омылению, нарушать строение неустойчивых в кислой среде препаратов и искажать информационную значимость основного показателя токсической опасности ПАВ. Учитывая, что химические превращения растворителя и вводимых веществ индуцируются высокой степенью диссоциации электролитов в исследуемых жидких фазах, использование крахмала и масла не следует рекомендовать для изучения острой токсичности любых соединений, обладающих выраженными кислотными и щелочными свойствами. На наш взгляд, к применению масла в качестве растворителя и других химических факторов следует относиться с осторожностью из-за возможности возрастания активности вещества в среде, где его растворимость уменьшается.
Выводы
1. Уровень и характер острой токсичности ионогенных ПАВ, резор-бирующихся из желудочно-кишечного тракта за счет специфического нарушения ими проницаемости мембран, практически не зависят от степени диссоциации электролитов в растворе. В связи с этим при установлении верхних параметров токсического действия прямая химическая нейтрализация подобных соединений для устранения местного эффекта не рекомендуется.
2. Применение крахмальных растворов и масла для ослабления раздражающей активности ПАВ в острых опытах нецелесообразно из-за изменения в этих условиях структуры и свойств как самих растворителей, так и испытуемых соединений. Поскольку такие химические превращения обусловлены выраженной ионизацией исследуемых веществ, масло и крахмал не должны применяться для получения объективной информации об опасности любых кислот и щелочей на высоком уровне воздействия.
ЛИТЕРАТУРА. Беленький]!' М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л., 1963. — Гадаскина И. Д., Левина Э. Н. — В кн.: Основы обшей промышленной токсикологии. Л., 1976, с. 142—143. — Голубев А. А., Люблина Е. И., Толоконцев Н. А. и др. Количественная токсикология. Л., 1973. — Красовский Г. Н. — В кн.: Промышленные загрязнения водоемов. М., 1969, вып. 9, с. 247—264. —Методические указания по разработке и научному обоснованию предельно допустимых концентраций вредных веществ в воде водоемов. М., 1976. — Саноцкий И. В., Уланова И. П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. М., 1975.
Поступила IО/У111 1977 г.
