CC BY
159
Лечение и профилактика
УДК 619:615.9
ОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ РОНТАНОКСА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИГЕЛЬМИНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
А.В. БУРЯКИНА1 соискатель
Ф.С. МИХАЙЛИЦЫН2 доктор фармацевтических наук Д.П. СЕВБО1 доктор химических наук А.Ю. МАЛАХОВА1 соискатель С.Н. ТРУСОВ1 кандидат фармацевтических наук
1 Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия,
e-mail: bastet64@,mail. ru
2 ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского ММА им. И. М, Сеченова
Установлена острая токсичность ронтанокса экспресс-методом Прозоровского и пробит-анализом Литчфильда-Уилкоксона. ЛД50 ронтанокса в крахмальной слизи при внутрибрюшинном введении белым мышам составила 178 мг/кг, в оливковом масле 132 мг/кг. При введении в желудок ЛД50 составила 5010 и 2500 мг/кг соответственно при растворении ронтанокса в крахмальной слизи и оливковом масле.
Ключевые слова: ронтанокс, мыши, ЛД50, растворитель, перорально, внутрибрюшинно.
Ронтанокс - производное 3,5-дибромсалициланилида, содержащего хлор и метильную группу в бензольном ядре. Ранее проведенные испытания по дегельминтизации продуктивных сельскохозяйственных животных ронтанок-сом дали положительный результат [5]. Более того, в отличие от других уже известных салициланилидов, ронтанокс оказался активен в отношении возбудителей нематодироза у овец и фасциолеза у крупного рогатого скота [1, 4, 5].
В связи с выявленной эффективностью ронтанокса нами проведены исследования его общетоксических свойств с целью определения токсического потенциала в остром опыте.
Материалы и методы
Определение острой токсичности (расчет однократной полулетальной дозы - ЛД50) проводили на мышах по экспресс-методу Прозоровского [3] и по унифицированному методу Литчфильда-Уилкоксона, используя пробит-анализ [2].
В эксперименте было использовано 160 беспородных белых мышей сам-цовмассой тела 19-22 г в возрасте 10-12 недель к моменту введения ронтанокса. Мышей выдерживали на карантине в течение 14 сут до постановки эксперимента.
В опытные группы отбирали по 3-6 мышей без отклонений во внешнем виде и с отклонениями по массе не более чем на 10 % от среднего значения.
Каждому животному был присвоен индивидуальный номер (метка пикриновой кислотой).
Ронтанокс в 1%-ном крахмальном растворе или в оливковом масле вводили в первой половине дня однократно перорально (внутрижелудочно) при помощи стального зонда с оливой на конце или однократно внутрибрюшинно.
Острую токсичность определяли при введении ронтанокса в широком диапазоне доз: при пероральном введении диапазон доз составлял от 500 до 5010 мг/кг; при внутрибрюшинном - от 100 до 631 мг/кг. При выборе доз ориентировались на растворимость вещества и максимальный объем жидкости, допустимый при пероральном и внутрибрюшинном введении мышам. Состояние мышей оценивали в течение первого часа, а также через 1, 3, 7 и 14 сут после введения. У животных регистрировали особенности поведения, дыхание, состояние слизистых покровов, изменение массы тела, потребление пищи и воды, характер фекалий.
Критериями оценки острой токсичности служили: число павших животных, сроки их гибели, ЛД50 через 24-72 ч, картина интоксикации, изменения поведенческих реакций, результаты аутопсии павших и выживших животных. Учет гибели и общего состояния животных проводили один раз в день ежедневно на протяжении всего опыта.
Результаты и обсуждение
Результаты опытов по определению острой токсичности ронтанокса в разных растворителях и при разных путях введения приведены в таблицах 1 и 2. При пероральном введении суспензии ронтанокса в 1%-ном растворе крахмала в дозах от 501 до 5010 мг/кг гибели и симптомов отравления среди животных не отмечали. При введении ронтанокса, растворенного в оливковом масле, в дозах от 2500 до 5010 мг/кг мыши проявляли следующие симптомы интоксикации: гиподинамию, взъерошивание шерсти, птоз. В каждой из этих групп регистрировали гибель одного животного из 3. При осмотре погибших животных было обнаружено переполнение желудка с истончением его стенки, в остальных внутренних органах изменений не выявлено. По-видимому, гибель мышей была вызвана не токсическим действием исследуемого вещества, а большим объемом введенной взвеси. В последующие дни, вплоть до окончания эксперимента, не погибло ни одно из животных, получивших масляный раствор ронтанокса (табл. 1).
1. Соотношение погибших (выживших) мышей в группах после однократного
Препарат Доза активного вещества, мг/кг
501 1000 1580 2000 2500 3160 3980 5010
Ронтанокс в 1% 0 (3) 0 (3) 0 (3) 0 (3) 0 (3) 0 (3) 0 (3) 0 (3)
растворе крахмала
Ронтанокс в мас- 0 (3) 0 (3) 0 (3) 0 (3) 1 (2) 1 (2) 1 (2) 1 (2)
ляном растворе
Примечание. Курсивом отмечены дозы, которые вводили в 2 приема с интервалом в 2 ч.
2. Соотношение погибших (выживших) мышей в группах после однократного
Препарат Доза активного вещества, мг/кг
100 126 158 200 250 316 398 501 631
Ронтанокс в 1% 0 (3) 0 (3) 0 (3) 3 (0) 2 (1) 3 (0) 2 (1) 3 (0) 3 (0)
растворе крахмала
Ронтанокс в мас- 0 (3) 1 (2) 3 (0) 3 (0) 2 (1) 1 (2) 1 (2) 3 (0) 3 (0)
ляном растворе
Дозу препарата, превышающую 5010 мг/кг, животным ввести не удалось из-за ограничения растворимости ронтанокса в крахмальной слизи и оливковом масле и предельно допустимых объемов жидкости для внутрижелудоч-ного введения мышам. Последнее обстоятельство не позволило рассчитать ЛД50, которая заведомо превышает 2500 мг/кг для субстанции, растворенной в оливковом масле, и 5010 мг/кг для субстанции, растворенной в 1% слизи.
Данные, отраженные в таблице 2, не позволили вычислить ЛД50 исследуемого вещества при внутрибрюшинном введении экспресс-методом Прозоровского, так как полученные последовательности количества погибших мышей при введении ряда из 4 доз не входят в определительную таблицу, приведенную в оригинальной статье [3]. Это свидетельствует о значительной крутизне кривой доза-эффект (в данном случае гибели), что приводит к существенному увеличению ошибки при расчете ЛД50 этим методом. Поэтому для определения полулетальной дозы был применен более точный метод пробит-анализа с использованием большего количества животных в группе (n = 6). В результате проведения этого эксперимента были получены следующие данные: ЛД50 ронтанокса, растворенного в крахмальной слизи, составила 178±14 мг/кг, в масле - 132±10 мг/кг (различия показателей статически достоверны).
По данным осмотра и вскрытия выживших животных и макроскопического исследования органов различий между контрольными животными и животными, получавшими ронтанокс в разных растворителях, не установлено.
В таблице 3 приведены параметры ЛД50 для мышей некоторых анти-гельминтиков сходного химического строения с тестируемым средством. Анализ этих данных свидетельствует о том, что ронтанокс при внутрибрю-шинном введении относится к средствам с низкой токсичностью по градации Hodge и Sterner, как и наиболее изученный препарат из группы салицилани-лидов - фенасал, тогда как другие антигельминтики этой же химической группы являются средствами с умеренной токсичностью. При внутрибрю-шинном введении ронтанокс показывает большую, чем фенасал, но меньшую, чем другие средства, токсичность.
3. ЛД50 антигельминтных препаратов из группы салициланилидов _при разных способах введения мышам_
Величина ЛД50, мг/кг, при введении
Препарат пероральном внутрибрюшинном
Фенасал [2] 13500 900
Рафоксанид [2] 232 105
Клозантел[2] 331-453 56,8
Ронтанокс в 1% рас- Более 5010 178
творе крахмала
Ронтанокс в масляном Более 2500 132
растворе
Таким образом, нами определена токсичность в остром эксперименте нового препарата ронтанокс при пероральном и внутрибрюшинном введении мышам-самцам. Установлено, что в обоих случаях острая токсичность зависит от природы растворителя. Так, при введении внутрь ронтанокса в 1%-ном растворе крахмала, величина ЛД50 превышала 5000 мг/кг, что свидетельствует о низкой острой токсичности. При введении ронтанокса в масляном растворе в диапазоне доз от 2500 до 5000 мг/кг в каждой из опытных групп погибало по 1 животному из 3, а у оставшихся в живых мышей в первые сутки наблюдали симптомы интоксикации. Следовательно, ронтанокс в масляном растворе более токсичен (ЛД50 > 2500 мг/кг). Рассчитанные для суспензий ронтанокса в обоих растворителях ЛД50 при внутрибрюшинном введении мышам-самцам оказались близки, но все же этот показатель для
ронтанокса в масляном растворе был несколько ниже, чем для ронтанокса в 1%-ном крахмальном растворе - 132 мг/кг и 178 мг/кг соответственно. Различия в параметрах полулетальных доз при разных путях введения и разных растворителях свидетельствуют, во-первых, о низкой всасываемости тестируемого вещества из кишечника, во-вторых, о повышении биодоступности ронтанокса в присутствии масла. Увеличение абсорбции ронтанокса проявляется в большей токсичности ронтанокса именно в масляном растворе.
Литература
1. Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение. - М., 2009. - 406 с.
2. Беленький М.А. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Государственное изд-во медицинской литературы, 1963. -151 с.
3. Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки // Фармакол. и токси-кол. - 1978. - № 4. - С. 497-502.
4. Севбо Д.П., Трусов С.Н., Михайлицын Ф.С., Архипов И.А. и др. Анти-гельминтное средство на основе ^(3-хлор-4-метилфенил)-3,5-дибром-салициламида. Патент на изобретение №2370484, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений РФ 20.10.2009 г.
5. Трусов С.Н., Михайлицын Ф.С., Севбо Д.П. и др. Спектр антигель-минтной активности ронтанокса // Мед. паразитол. и паразит. бол. - 2007. -№ 4. - С. 50-51.
The acute toxicity of anthelmintic rontanox A.V. Burjakina, F.S. Mihajlitsyn, D.P. Sevbo, A.J. Malahova, S.N. Trusov
The acute toxicity of rontanox is established by express-method of Prozorovs-kyi and probit-analysis by Litchfild-Wilkoxon. LD50 of rontanox in starch slime at intraperitoneal introduction to white mice has made 178 mg/kg, in olive oil - 132 mg/kg. At introduction in stomach LD50 has made 5010 and 2500 mg/kg respectively at dissolution of rontanox in starch slime and olive oil.
Keywords: rontanox, mice, LD50, solvent, per os, intraperitoneal.
