CC BY
22
Рис. 2 - Распределение свинца в супернатанте и биомассе исследуемых микроорганизмов
ми особенностями, так как на этой территории отсутствуют антропогенные факторы, способствующие увеличению концентрации изучаемого ксенобиотика в почве. Анализ биотоксичности и биоаккумуляции катионов свинца выявил общие закономерности между данными показателями, при этом наиболее резистентным из всех исследуемых микроорганизмов является L. acidophilus, на долю которого в составе микробиоты приходится основной процент в общей биомассе.
Литература
1. Бокова Т.И. Экологические основы инновационного совершенствования пищевых продуктов: монография / Новосиб. госуд. аграр. ун-т, СибНИИ переработки с.-х. продукции. Новосибирск: Изд-во НГАУ, 2011. 284 с.
2. Oberlis D. Biologicheskaya ril' makro- i mikroelementov u cheloveka i zhivotnih / D. Oberlis, V. Kharland, A. Skal'nii // Biological role of the macro- and microelements in human and animals. Saint Petersburg, Nauka Publ., 2008. 544 p.
3. Nifontova, O.L. Ekologo-fiziologicheskii portret korennogo naseleniya Hanti-mansiiskogo avtonomnogo okruga-Ugri /
0.L Nifontova, V.I. Korchin, S.V. Vlasova, T.Ya. Korchin,
1.V. Korchina, N.N. Merkulova, V.A. Lobov // [Ekologo-phiziological portrait of indigenous people of Khanty-Mansi autonomous okrug-Yugra]. Khanty-Mansiysk, 2012.208 р.
4. Скальный А.В., Цыган В.Н. Патофизиология обмена макро- и микроэлементов // Патофизиология обмена веществ: учебное пособие / Под ред. В.Н. Цыгана. СПб.: СпецЛит, 2013. С. 262-333.
5. Campbell J.D. Lifestyle, minerals and health // Med. Hypotheses. 2001. Vol. 57. № 5. P. 521-531.
6. Агаджанян Н.А., Скальный А.В. Химические элементы в среде обитания и экологический портрет человека. М.: Изд-во КМК, 2001. 83 с.
7. Kachur A. N. Environmental conditions in the Rudnaya River watershed — a compilation of Soviet and post-Soviet era sampling around a lead smelter in the Russian Far East / A.N. Kachur, V.S. Arzhanova, P.V. Yelpatyevsky, M.C. von Braun, I.H. von Lindern // Science of the Total Environment. 2003. Vol. 30. № 1—2. P. 171—185.
8. Сусликов В.Л. Геохимическая экология болезней. В 4 т. Т.
2. Атомониты. М.; Гелиос АРВ, 2000. 672. 187 с.
9. Макаров А. У микроба ферроплазмы почти все белки содержат железо [Электронный ресурс]. URL: http://elementy. ru/news/430429.
10. Paules I. T. A novel family of ubiquiotous heavy metal ion transport protein / I.T. Paules, M. Saier // Journal of Membre Biology. 2004. V. 156. № 5. P. 99—103.
Результаты исследования острой и хронической токсичности противопаразитарного соединения NB
М.Х. Лутфуллин, д.в.н., профессор, Р.И. Шангараев,
аспирант, Р.Р. Галяутдинова, аспирантка, ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ; З.Х. Терентьева, д.б.н., профессор, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ
Гельминтозы животных распространены повсеместно, некоторые из них являются общими для человека и животных. У животных, заражённых гельминтами, рождается ослабленное потомство, молодняк отстаёт в росте и развитии [1—3]. Гельминты паразитируют в различных органах и тканях животных, вызывают необратимые изменения. Гельминтозы наряду с экономическим ущербом наносят вред и здоровью людей [3, 4].
Для лечения гельминтозных заболеваний у животных широко используют различные анти-гельминтные препараты [5, 6]. Многие из них характеризуются широким спектром действия против трематод, цестод и нематод. Однако все они обладают определённой токсичностью и могут оказывать негативное влияние на организм животного [5, 7]. Также многие антигельминтики оказывают иммунодепрессирующее действие. Кроме того, при длительном применении препаратов развивается резистентность возбудителей и снижается их
терапевтическая эффективность [2, 4, 8]. Одним из основных требований для антигельминтиков является селективная токсичность для паразитов и низкая токсичность для хозяев [7, 9].
Стоит отметить, что правильный выбор композиции действующих веществ и лекарственной формы антигельминтного препарата является важным критерием повышения эффективности дегельминтизации, также и критерием снижения токсичности [1, 5]. В настоящее время несмотря на синтез новых противопаразитарных соединений и пополнение рынка препаратами зарубежного производства, животноводство испытывает потребность в безопасных и высокоэффективных, экономически оправданных при применении противопаразитарных веществах [2, 10]. Таким образом, разработка и внедрение в сельскохозяйственное производство новых, высокоэффективных антигельминтных препаратов, обладающих широким спектром действия и высокой безопасностью, является актуальной задачей современной ветеринарной науки [3, 6, 8].
Материал и методы исследования. Целью исследования являлось изучение острой и хронической токсичности нового соединения КВ, обладающего противопаразитарной активностью. По внешнему
виду препарат представляет собой белый порошок. Исследуемое соединение не растворяется в воде, растворяется в органических растворителях (в растительном масле, эфире). В качестве растворителя изучаемого вещества применяли растительное масло.
Работа выполнена на лабораторных животных — белых крысах и белых мышах в виварии ФГБОУ ВО «Казанская ГАВМ». При этом руководствовались методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве [11] и рекомендациями по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [12].
На первом этапе опыта изучали острую токсичность соединения КВ на 36 самцах белых крыс и 60 самцах белых мышей одинакового возраста с массой тела 200—220 и 18—21 г соответственно. Перед постановкой на опыт животных выдерживали в течение 12 час. на голодной диете. В ходе опыта крыс и мышей разделили на шесть групп по 6 особей (крысы) и по 10 особей (мыши) в каждой группе. Соединение КВ вводили через зонд в желудок в форме масляного раствора в объёме 5,0 мл — крысам, 1,0 мл — мышам. Крысы и мыши
I гр. получали соединение КВ в дозе 400 мг/кг,
II - 800, III - 1200, IV - 1600, V - 2000. VI гр. была контрольной, животные которой получали внутрь растительное масло в дозе 5,0 мл (крысы) и 1,0 мл (мыши). Крыс и мышей кормили через 4 часа после введения изучаемого соединения, в питье воды не ограничивали. В течение 14 суток за животными вели наблюдение. Обращали внимание на внешний вид, поведение, состояние волосяного покрова и видимых слизистых оболочек, наличие пищевой возбудимости, подвижность, ритм дыхания, время возникновения и характер интоксикации, её тяжесть и обратимость.
На втором этапе опыта изучали хроническую токсичность соединения КВ на 40 белых крыс обоего пола, с массой тела 150-180 г, разделённых на четыре группы по 10 животных в каждой. Хроническую токсичность соединения КВ изучали в трёх дозах. Первая доза препарата была близка к терапевтической и составляла 20 мг/кг. Вторая и третья дозы составляли 1/20 и 1/10 части от максимально вводимой дозы в опыте по изучению острой токсичности (100 и 200 мг/кг). Соединение вводили в форме раствора на растительном масле внутрижелудочно с помощью зонда. Объём вводимого раствора составлял 3 мл. Крысам I гр. вводили соединение КВ в дозе 20 мг/кг, II - 100 мг/кг и III - 200 мг/кг. IV группа животных служила контролем, они получали внутрижелудочно растительное масло в дозе 3 мл. Данное соединение вводили один раз в день в течение 5 суток согласно руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Р.У. Хабриев, 2005).
Крыс кормили спустя 4 часа после введения соединения. За животными вели наблюдение. На 6-е сутки опыта всех крыс подвергали эвтаназии методом декапитации и брали пробы крови с яремной вены для проведения гематологических и биохимических исследований. В ходе опыта гибель животных не отмечалась. После проведения опыта проводили умерщвление и вскрытие крыс и мышей из каждой группы.
Гематологические исследования проводили с использованием геманализатора «Ока», подсчёт количества лейкоцитов — с помощью камеры Горяева. При биохимическом исследовании проб сывороток крови применяли биохимический анализатор Mindray BS-200, калибратор TruCal фирмы Dias и реагенты ДДС. Проводили вскрытие и пато-логоанатомическое исследование трупов животных. Статистическую обработку цифрового материала осуществляли на компьютере с использованием редактора электронных таблиц Microsoft Excel.
Результаты исследования. При проведении первого этапа исследования и изучении острой токсичности соединения NB получили следующие результаты. После введения изучаемого соединения у всех животных отмечалось кратковременное угнетение, которое исчезало через 2 часа. После этого крысы и мыши охотно поедали корм, адекватно реагировали на звуковые, тактильные и световые раздражители. Состояние кожного покрова и видимых слизистых оболочек было без патологических изменений.
По окончании второго этапа исследования при вскрытии у лабораторных житвотных отмечали застойную гиперемию в кишечнике, печени, почках, а также были выявлены небольшие участки зернистой дистрофии в печени. Среднесмертельная доза соединения NB не была вычислена, так как отсутствовала гибель опытных животных. Максимально вводимая доза составляла 2000 мг/кг. Результаты гематологических и биохимических исследований отражены в таблицах 1 и 2.
По таблице 1 видно, что после введения соединения NB у крыс I, II и III опытных гр. по сравнению с контролем показатели СОЭ повысились в среднем на 0,13 мм/час, содержание моноцитов — на 2,1%, содержание лейкоцитов — на 2,2 1000/мкл, базофилов — на 0,4%. В тоже время уровень гемоглобина понизился в среднем на 7,4 г/л, количество эритроцитов — на 1,15 млн/мкл, тромбоцитов — на 78,4 1000/мкл, содержание лимфоцитов — на 14,7%, эозинофилов — на 0,7%. Число базофилов у животных IV контрольной гр. не было обнаружено. Самое высокое содержание моноцитов обнаружено в крови особей III гр., по сравнению с контролем превышение составляло 47%. Заметное понижение количества лимфоцитов отмечалось в крови крыс II и III гр. — на 31 и 33% ниже, чем у аналогов контрольной гр. Это свидетельствует о том, что при длительном применении
2. Биохимические показатели сыворотки крови у крыс после введения соединения КВ (X±Sx)
1. Гематологические показатели в организме крыс после введения соединения КВ (X±Sx)
Группа СОЭ, мм/час Гемоглобин, г/л Эритроциты, млн/мкл Тромбоциты, 1000/мкл Моноциты, % Лимфоциты, % Лейкоциты, 1000/мкл Эозино- филы, % Базо- филы, %
Опытные группы
I II III 1Ук. 1,09±2,26 1,12±0,39 1,25±2,26 1,02±0,06 155,6±0,16 152,1±0,72 145,5±0,17 158,5±0,42 8,56±0,71 8,48±0,24 8,28±0,74 9,72±0,12 524,6±0,08 522,3±0,16 545,9±0,1 629,4±0,48 1,6±2,26 1,8±0,03 6,3±0,99 1,1±0,37 57,6±0,47 42,9±0,71 41,8±0,32 62,4±0,09 10,5±0,77 10,3±1,06 10,6±1,27 8,3±0,13 0,4±0,07 0,5±0,29 0,6±0,07 1,2±0,33 0,2±0,03 0,5±0,28 0,6±0,02 0
Группа Мочевина, ммоль/л Креатинин, мкмоль/л Глюкоза, ммоль/л АЛТ, ЕД/л АСТ, ЕД/л Амилаза, ЕД/л ЩФ, ЕД/л Общий белок, г/л Билирубин общий, мкмоль/л
Группа
I II III IVк. 5,09±1,1 5,12±0,85 7,29±0,58 3,1±0,76 77,2±0,31 79,4±0,67 85,6±0,19 72,5±0,28 8,93±0,89 6,81±0,48 6,56±0,19 9,02±0,51 85,5±0,22 125,7±0,79 187,4±0,13 97,1±0,68 107,1±0,21 186,4±0,12 207,6±0,43 102,8±0,28 596,3±0,03 2790,0±0,54 2827,2±0,07 493,7±0,31 1073,8±0,2 258,1±0,27 393,0±0,11 1082,4±1,09 51,5±0,21 91,6±0,35 91,9±0,23 54,2±0,85 1,22±1,01 6,54±0,93 6,73±0,42 1,42±0,35
в дозах 100 и 200 мг/кг соединение NB негативно влияет на функцию иммунной системы организма.
Введение соединения NB привело к изменениям биохимических показателей сыворотки крови животных опытных групп. По данным, представленным в таблице 2, видно, что наибольшие изменения по сравнению с контролем произошли в сыворотке крови животных III опытной гр., получавших 200 мг/кг соединения NB: примерно на 135% повысилось содержание мочевины, креати-нина - на 18%, АЛТ - на 113%, АСТ - на 102%, заметно снизилось содержание глюкозы — на 27%. Менее значительные изменения произошли в сыворотке крови животных, доза введения которым соединения NB составляла 20 мг/кг, биохимические показатели сыворотки крови у них были близки к контрольным значениям. У крыс II и III групп резко повысилось содержание общего белка — на 69 и 73% соответственно и билирубина в сыворотке крови — на 5,12 и 5,31 мкмоль/л (при норме у лабораторных крыс до 1,67 мкмоль/л).
При патологоанатомическом исследовании трупов крыс II и III гр. после 5-дневного введения соединения NB в дозах 100 и 200 мг/кг были обнаружены серьёзные нарушения в организме: застойная гиперемия и зернистая дистрофия печени, почек, очажки с дистрофическими изменениями в поджелудочной железе, но это не приводит к летальному исходу.
Выводы. Результаты исследования показали, что препарат NB в дозе 2000 мг/кг относится к 4-му классу опасности (вещества малоопасные — ГОСТ 12.1.007-76). Однако токсикологическими исследованиями установлено, что при длительном применении 1/10 и 1/20 частей от максимально вводимой дозы препарата (100 и 200 мг/кг) у животных нарушаются функции печени, поджелудочной железы и иммунной системы, о чём свидетельствуют гематологические и биохимические показатели проб крови и изменения в органах и тканях при
патологоанатомическоем вскрыти крыс. Кроме того, препарат вызывает повышение активности ферментов АСТ, АЛТ, амилазы, уменьшение концентрации фермента щелочной фосфатазы и глюкозы. Также у животных нарушается пигментный и белковый обмен (повышение содержания общего белка и общего билирубина в сыворотке крови), уменьшается содержание лимфоцитов в крови.
Литература
1. Боляхина С.А. Токсикологическая характеристика противо-паразитарных кормовых гранул / С.А. Боляхина, Е.А. Ефремова, В.А. Марченко [и др.] // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2008. № 7. С. 88—94.
2. Верещагина Л.А., Виолин Б.В. Острая и субхроническая токсичность антигельминтного препарата на основе мебендазола и празиквантела // Аграрная наука. 2005. № 11. С. 22—24.
3. Емельянова Н.Б. Острая пероральная и накожная токсичность противопаразитарных солевых брикетов на лабораторных животных // Российский паразитологический журнал. 2013. № 4. С. 97—99.
4. Эшимбеков Т.Т. Острая токсическая характеристика Али-века // Вестник Кыргызского национального аграрного университета имени К.И. Скрябина. 2017. № 1. С. 70—74.
5. Сидоров Ю., Абрамов В.Е. Острая и субхроническая токсичность комбинированного препарата на основе левами-зола и триклабендазола // Российский паразитологический журнал. 2009. № 4. С. 109—113.
6. Фазулзянова А.М., Лутфуллин М.Х., Хамзина Е.В. Острая, хроническая токсичность и раздражающее действие состава «Дегельм-КД» // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. 2013. Т. 3. № 6. С. 278—280.
7. Токарев А.Н., Енгашев С.В. Острая токсичность препарата Дельцид // Вопросы нормативно-правогого регулирования в ветеринарии. 2010. № 4. С. 122—124.
8. Степанова ЕА., Якубовский М.В. Новый противопаразитар-ный комплексный препарат с иммуностимулирующими свойствами для профилактики ассоциативных паразитозов животных // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер. науч.-практич. конф. М., 2014. Вып. 15. С. 291—294.
9. Бурякина А.В. Острая токсичность Ронтанокса, обладающего антигельминтной активностью / А.В. Бурякина, Ф.С. Михайлицын, Д.П. Севбо [и др.] // Российский паразитологический журнал. 2011. № 1. С. 108—111.
10. Тоимбетов М.Т. Острая токсичность альмегума // Вестник Кыргызского аграрного университета имени К.И. Скрябина. 2006. Т. 3. С. 34—36.
11. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве (извлечения из нормативных и методических дркументов, утверждённых Министерством здравохранения СССР, ВАСХНИЛ, Главным управлением ветеринарии Госагро-прома СССР). М., 1986.
12. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. М.: Медицина, 2005.
