CC BY
6
Uchylyl В. — Ibid., 1974, v. 93, p. 447—452. Purdy S. Truler E. V. — Analyst, 1962, v. 87, p. 802—
Wake W. C. The Analysis of Rubber and Rubber-like Po- 809. lymers. London, 1969. Поступила 11.09.81
УДК в12.мг.З-0в:вГЗ
В. С. Новиков
К МЕТОДИКЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ В ФИЗИОЛОГО-ГИГИЕНИЧЕСКИХ ЭКСПЕРИМЕНТАХ
Изучение функциональной активности лейкоцитов в физиолого-гигиенических экспериментах имеет ряд особенностей, связанных с обследованием практически здоровых людей. При этом большое значение имеет комплексное определение количественных и качественных показателей физиологической активности лейкоцитов, что позволяет установить характер и глубину развивающихся сдвигов. Кроме того, используемые в гигиеническом варианте тесты должны быть технически просты и методически доступны врачебному персоналу, не имеющему специальной лабораторной подготовки. Указанным требованиям в определенной степени отвечает комплексный метод определения функциональной активности лейкоцитов по А. И. Шустову. Данный метод позволяет изучать две стадии фагоцитарного процесса — поглощение и переваривание микробного объекта — и одновременно определять показатели, характеризующие физико-химическую устойчивость и адгезивную способность лейкоцитов. От других способов определения поглотительной и переваривающей способности лейкоцитов (В. М. Берман и Е. М. Славская; А.И. Иванов и Б. А. Чухловин; Ф. М. Супоницкая) он отличается упрощением техники постановки реакции и позволяет комбинированно измерять количественные лейкоцитарные и функциональные фагоцитарные показатели.
Однако применение данного метода ограничено вследствие невозможности одновременного проведения исследований более чем у 7 человек. Это связано с тем, что кровь берется после приготовления микробной взвеси, которая пригодна для работы тотчас, поскольку время генерации используемого в реакции Staphylococcus aureus (№ 209 Р) не более 35—40 мин. Это время и определяет конкретные возможности лаборанта в отношении числа одновременно проводимых исследований.
Для увеличения числа одновременно выполняемых исследований, повышения надежности и точности методики мы изменили последовательность постановки реакции, конкретизировали способы оценки поглотительной и переваривающей активности микрофагов и привели расчетные формулы определения относительной потери фагоцитов и адгезивной способности лейкоцитов. Соотношения используемых в реакции ингредиентов и способы обработки полученных результатов нами не изменены.
С учетом того что в цитратной крови нейтрофиль-ные лейкоциты сохраняются лучше (Stockinger и Fresse), мы первоначально в должное число пробирок вносили по 0,01 мл свежеприготовленного раствора 9% лимоннокислого натрия1, а затем добавляли по 0,2 мл исследуемой крови и 0,01 мл стандартизированной микробной взвеси (1 млрд. микробных тел в I мл), приготовленной непосредственно перед инкубированием ингредиентов реакции. Все ингредиенты смешивали и помещали в термостат с температурой 37 "С.
При такой последовательности проведения реакции резерв времени, необходимой для взятия крови, увеличивался по сравнению с оригинальной методикой в 3—4 раза, что позволяло одновременно обследовать до 30 человек. Для определения функциональной активности лейкоцитов в мазках крови, приготовленных через 30, 90 и 120 мин термостатирования, подсчитывали лейкоцитарные формулы и одновременно отмечали число активных фагоцитов и количество поглощенных ими микробов. Учитывали комплекс объективных и субъективных признаков дегенерации и лизиса либо размножения поглощенных микробов.
Поглотительную способность фагоцитов (ПСФ) определяли по формуле:
где А — количество поглощенных на 30-й минуте микробов; Ь — число лейкоцитов в 1 мкл крови (в сотнях); 100 — число для уменьшения цифрового результата, используемое при исследовании крови с «фагоцитарным профилем»2.
Интенсивность поглощения фагоцитов (ИПФ) на 39, 90 и 120-й минутах вычисляли по отношению А к Р, где А — количество микробов, поглощенных на 30, 90 и 120-й минутах; Р — процент фагоцитов (сумма нентрофилов, эозинофилов и моноцитов) в лейкограмме на 30, 90 и 120-й минутах.
Отношением данных ИПФ 80 к ИПФ30 определялся тип реакции, который может быть завершенным (более 1), индифферентным (1) и незавершенным (менее 1) отношением данных ИПФ,20 к ИПФ30 уточнялся тип реакции и определялась ее степень.
1 При исследовании крови животных требуется 12% раствор.
2 У экспериментальных животных с «лимфоцитарным профилем» крови данное число не используется.
Если стадия поглощения не заканчивалась к концу 30-й минуты (продолжалось увеличение процента активных фагоцитов), то ПСФ рассчитывали по показателям 90-й минуты, а тип реакции и ее степень определяли отношением ИПФ,,„ к v ИПФ,0.
Для определения адгезивной способности лейкоцитов (АСЛ) через 120 мин инкубации ингредиентов реакции готовили препарат крови в виде тол-стон капли, который без фиксации окрашивали 0,01% раствором метнленового синего. АСЛ вычисляли по формуле:
Аил— 500 •
где С — число склеенных лейкоцитов, образующих группы, состоящие не менее чем из 3 клеток; 500 — общее число подсчитанных лейкоцитных клеток.
Для характеристики физико-химического состояния лейкоцитов измеряли относительную потерю фагоцитов (ОПФ) на 30, 90 и 120-й минутах. Расчет ОПФ проводили по формуле: 100 — Рд. 100
ОПФ
Р о
где Р 0 — число фагоцитов на 0-й минуте; Рх — число фагоцитов на 30, 90 и 120-й минутах.
Для сравнения данной методики с оригинальным методом проведено параллельное определение фагоцитарной активности лейкоцитов в 66 пробах крови у одних и тех же лиц. По оригинальному ме-
тоду ПСФ была 17,42±0,91, интенсивность поглощения фагоцитов — 0,45+0,03, степень фагоцитарной реакции — 0,78±0,05, адгезивная способность лейкоцитов — 4,72±0,36, относительная потеря фагоцитов на 120-й минуте — 32,16±1,12. При использовании предложенной модификации эти показатели были соответственно равны 17,24± ±0,87, 0,46±0,04 , 0,76±0,05, 4,66±0,35 и 32,28± ±1,16 при Я>0,05. Существенной разницы не оказалось и в каждом отдельном случае.
Для сокращения времени взятия крови и снижения расхода реактивов допустимо уменьшение количества используемых в фагоцитарной реакции ингредиентов (крови, антикоагулянта, микробной взвеси) в 2 раза. Объективность и достоверность результатов исследования при этом не изменяются.
Описанная методика определения функциональной активности лейкоцитов проста в методическом отношении, объективна и позволяет проводить исследования непосредственно на месте воздействия изучаемых факторов.
Литература. Берман В. М., Славская Е. М. — Ж. микробиол., 1958, № 3, с. 8—13.
Иванов А■ И., Чухловин Б. А. — Лабор. дело, 1967, № 10, с. 610—613.
Супоницкая Ф. М. — Врач, дело, 1952, № 3, с. 225—228.
Шустов А. И. — Гиг. и сан., 1965, № 8, с. 61—64.
Шустов А. И. — В кн.: Вопросы общей реактивности организма. Таллин, 1967, с. 40—43.
Stockinger W., Fresse К■ — J. exp. Med., 1933. v. 86, р. 568—580.
Поступила i'8.07.81
Обзоры
УДК в 14.777:579.в8(2в.03)<47 + 57)<048.8)
В. И. Бондаренко, Г. Г. Попович
СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА О БАКТЕРИАЛЬНОМ И ВИРУСНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ ПРИБРЕЖНОЙ ЗОНЫ МОРЕЙ
Киевский НИИ эпидемиологии, микробиологии и паразитологии
Загрязнение окружающей среды в настоящее время является одной из основных опасностей для здоровья человека. Бурное развитие промышленности, градостроительства, благоустройство населенных мест неизбежно сопровождаются ростом водопотребления и образованием большого количества сточных вод, что в свою очередь сбуслов-л ивает вероятность массового загрязнения природных водоемов. Промышленные предприятия еж егодно сбрасывают огромное количество сто-ко в, в результате чего нормальная флора водоемов уж е не может очищать воду.
Современное санитарное состояние морских вод определяется в основном выносом в них загрязняющих веществ стоками бытовой и промышленной канализации, реками или выпуском сточных вод непосредственно в акваторию, а также морскими судами, стоящими у причала и на рейде (Ф. И. Ко-мич; Г. 3. Алиев; Л. 3. Гомелаури и соавт.; Н. Н. Квитницкая и соавт.; В. Г. Субботин и соавт.; А. М. Войтенко и соавт.). Большое значение в процессах самоочищения моря от загрязнения имеют смешение и разбавление сточных вод, поступающих в море, а также факторы биохимнче-
