CC BY
36
УДК: 615.27:577.125:616.33
О. П. Родина, И. Я. Моисеева
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ДИМЕФОСФОНА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ И ЛИПИДНЫЙ СПЕКТР ТКАНИ ЖЕЛУДКА НА МОДЕЛИ СТРЕССОВОГО УЛЬЦЕРОГЕНЕЗА
Изучено морфофункциональное состояние и липидный спектр тканевых структур желудка при действии стрессового ульцерогенного фактора на фоне введения димефосфона. Были выявлены значительные изменения в липидном спектре тканевых структур. При использовании димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза происходит восстановление липидного метаболизма, что подтверждается снижением числа поражений слизистой оболочки желудка.
В последние годы все больше исследователей наряду с классическими общепринятыми механизмами признают роль свободнорадикальных кислородных и липидных процессов в патогенезе язвенной болезни (ЯБ) желудка и ЯБ двенадцатиперстной кишки [1-5].
Это обусловлено тем, что главные составляющие патогенеза ЯБ (корковые, гуморальные, сосудистые, метаболические, иммунологические, кислотнопептическая агрессия, нарушения моторики, бактериальные влияния) опосредуются через клеточное звено - деструкцию липидов клеточных мембран. Последняя зависит от дисбаланса с преобладанием разрушительных процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов (ПОЛ) над активностью антиоксидантных систем [2].
Признавая ПОЛ одним из факторов патогенеза в развитии ЯБ желудка и двенадцатиперстной кишки, большинство исследователей склонны полагать, что корректоры свободнорадикальных реакций окажутся весьма эффективными в лечении данной патологии. Однако в большинстве исследовательских работ использовались только природные антиоксиданты, такие как токоферол. Работы по исследованию протективной функции синтетических антиоксидантов при лечении язвенно-деструктивных поражений желудочнокишечного тракта имеются, но они малочисленны.
По данным Е. М. Крепса [6], адаптация организма в ответ на стрессовое воздействие во многом осуществляется благодаря перестройкам в мембранах клеток и прежде всего в их липидном бислое. Поэтому по степени выраженности качественных и количественных изменений липидов клеточных мембран можно судить о характере адаптационного ответа организма и эффективности проводимой терапии.
1. Материалы и методы исследования
В основу работы положены экспериментальные исследования на 40 половозрелых белых крысах обоего пола средней массой 200-250 г. На экспериментальных животных при моделировании «стрессовой» язвы исследовали процесс ульцерогенеза, а также изменения липидного гомеостаза тканевых структур желудка.
Моделирование язвенных дефектов производили по способу С. В. Аничкова и И. С. Заводской (1965). Крыс не кормили в течение 24 ч, затем фик-
сировали на доске в положении лежа на спине при пониженной температуре окружающей среды до 12 ч, вводили в передние лапы игольчатые электроды и в течение 3 ч раздражали импульсами электротока от стимулятора ППМ-1 при напряжении 5-10 В, частоте 50 Гц, продолжительностью импульса 50 мс.
Через 12 ч животных выводили из опыта путем передозировки эфирного наркоза. Производили лапаротомию и биопсию желудка. При вскрытии оценивали состояние слизистой оболочки желудка, определяли характер ее повреждений, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и язвы. Дифференциальную диагностику изменений со стороны слизистой оболочки желудка осуществляли при помощи бинокулярной лупы с 6-кратным увеличением, а также путем микроскопических исследований: микропрепараты подвергались окраске гематоксилин-эозином. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки рассчитывали «язвенный индекс» Паулса. В опытной группе животных для исследования влияния на показатели ульце-рогенеза и активности ПОЛ включили препарат, обладающий антиоксидант-ным действием - 15% раствора димефосфона из расчета 50 мг/кг массы тела внутримышечно.
В работе применялись следующие методы исследования:
- экстракция липидов из тканей методом хроматографического анализа (тонкослойная хроматография) (Хиггинс Дж. А., 1990; Vaskovsky V. E. et al., 1975);
- количественное определение липидов. Молекулярный анализ проводили на денситометре Model GS-670 (BIO-RAD, США) с соответствующим программным обеспечением (Phosphor Analyst/PS Software).
2. Основные результаты исследования
При патологоанатомическом исследовании экссудата в брюшной полости не обнаружено.
Серозная оболочка желудка у экспериментальных животных была незначительно отечной с полнокровными сосудами, в ряде случаев при вскрытии пищеварительной трубки в полости желудка определялась примесь желчи.
При осмотре слизистой оболочки выявлена ее атрофия, бледность, сглаженность складок, расширение сосудов.
Более тщательное исследование структурных изменений слизистой оболочки желудка показал, что точечные кровоизлияния определялись у всех животных (таблица 1).
Однако по сравнению с контролем их количество уменьшилось на 62,50% (р < 0,05). Индекс Паулса при этом снизился в 2,7 раза и составил 3,0. Эрозии на слизистой оболочке желудка наблюдались в 75% случаев. По отношению к контролю их количество уменьшилось на 72,41% (р < 0,05). Индекс Паулса для эрозий снизился в 4,8 раза и был равен 1,2. Язвенные поражения выявлялись в 85% случаев. Их доля по сравнению с контролем уменьшилась на 55,26% (р < 0,05), при этом индекс Паулса снизился в 2,7 раза и составил 1,4.
Таким образом, анализируя представленные данные можно предположить, что димефосфон обладает антистрессорным эффектом, который проявляется в снижении патогенного воздействия стрессора при моделировании язвенных дефектов, что приводит к нормализации изучаемых морфологических показателей в ткани желудка.
Таблица 1
Характер повреждений слизистой оболочки желудка при применении димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза
Показатели Виды деструкций Контрольная группа Опытная группа
п % п %
Количество животных в группе (и), % -пораженные животные Точечные кровоизлияния 20 100 20 100
Эрозии 20 100 15 75
Язвы 20 100 17 85
Среднее число деструкций на одно животное, М ± т Точечные кровоизлияния 8,0 ± 0,52 3,0 ± 0,29*
100% 37,5%
Эрозии 5,8 ± 0,38 1,6 ± 0,28*
100% 27,59%
Язвы 3,8 ± 0,35 1,7 ± 0,27*
100% 44,74%
Индекс Паулса Точечные кровоизлияния 8,0 3,0*
Эрозии 5,8 1,2*
Язвы 3,8 1,4*
Примечание. * - динамика показателей, достоверно отличающихся от контроля (р < 0,05).
Включение в эксперимент димефосфона на фоне действия стрессового ульцерогенного фактора снизило его патогенное действие на липидный обмен в тканевых структурах желудка. На фоне введения димефосфона по отношению к контролю увеличилось содержание нейтральных липидов - холе-стерола и эфиров холестерола на 9,44 и 15,11% (р < 0,05) соответственно (таблица 2), а уровень свободных жирных кислот уменьшился на 22,67% (р < 0,05). Также при введении димефосфона нормализовался уровень моно-ацилглицеролов, диацилглицеролов, триацилглицеролов и суммарных фосфолипидов (рис. 1).
Таблица 2
Липидный спектр тканевых структур желудка при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования димефосфона (М ± т), в процентах
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
Суммарные фосфолипиды 26,73 ± 0,39 23,47 ± 0,36* 26,89 ± 0,53
Моноацилглицеролы 4,46 ± 0,21 6,43 ± 0,17* 4,85 ± 0,29
Холестерол 36,48 ± 0,47 29,35 ± 0,73* 32,12 ± 0,61*
Эфиры холестерола 15,42 ± 0,39 10,72 ± 0,32* 12,34 ± 0,42*
Диацилглицерол 2,09 ± 0,06 4,33 ± 0,15* 1,92 ± 0,21
Свободные жирные кислоты 8,71 ± 0,28 20,38 ± 0,47* 15,76 ± 0,58*
Триацилглицеролы 5,45 ± 0,19 4,41 ± 0,11* 6,34 ± 0,32
Примечание. * - достоверность изменений по отношению к норме при р < 0,05; жирный шрифт - достоверность изменений по отношению к контролю при р < 0,05.
300 250 200 % 150 100 50 0
Рис. 1 Качественные и количественные изменения состава липидов ткани желудка при применении димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза. Нормальные значения показателей приняты за 100%. Звездочкой отмечены данные, изменение которых достоверно по отношению к норме
Фосфолипидный спектр тканей желудка на фоне использования диме-фосфона изменился следующим образом: по отношению к контролю уменьшился уровень лизофосфолипидов на 21,55% (p < 0,05), содержание мембранных фосфолипидов - фосфатидилэтаноламина и фосфатидилинозита -снизилось на 34,96 и 19,72% (p < 0,05) соответственно (таблица 3). Нормализующее действие димефосфона проявилось также в повышении уровня фос-фатидилсерина и фосфатидилхолина (рис. 2).
Таблица 3
Фосфолипидный спектр тканевых структур желудка при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования димефосфона (M ± m), в процентах
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
Сфингомиелин 16,73 ± 0,32 15,79 ± 0,38 18,56 ± 0,48
Лизофосфолипиды 4,38 ± 0,17 8,12 ± 0,31* 6,37 ± 0,42*
Фосфатидилхолин 45,79 ± 1,22 38,15 ± 1,35* 44,23 ± 1,72
Фосфатидилсерин 12,42 ± 0,36 10,12 ± 0,36* 12,25 ± 0,64
Фосфатидилинозит 6,76 ± 0,27 4,26 ± 0,19* 3,42 ± 0,32*
Фосфатидилэтаноламин 13,75 ± 0,46 23,40 ± 0,45* 15,22 ± 0,63*
Примечание. * - достоверность изменений по отношению к норме при р < 0,05; жирный шрифт - достоверность изменений по отношению к контролю при р < 0,05
СФ МАГ ХС ЭХС ДАГ СЖК ТАГ □ Норма □ Модель □ Опыт
СФМ ЛФЛ ФХ ФС ФИ ФЭА
□ Норма □ Модель □ Опыт
Рис. 2 Качественные и количественные изменения состава фосфлипидов ткани
желудка при применении димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза.
Нормальные значения показателей приняты за 100%. Звездочкой отмечены данные, изменение которых достоверно по отношению к норме
Анализируя представленные данные, можно предположить, что при использовании димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза происходит восстановление липидного метаболизма, что подтверждается снижением числа поражений слизистой оболочки желудка.
Использование димефосфона достоверно приводит к снижению количества деструктивных поражений слизистой оболочки желудка. Этот препарат, обладая антиоксидантным действием, купирует мембранодеструктивные процессы, сглаживает патогенетический характер липидных перестроек и тем самым ограничивает разрушение мембранных структур, способствующее массивному образованию язвенных дефектов. На фоне его действия увеличивается содержание суммарных фосфолипидов и фосфати-дилхолина, уменьшается уровень свободных жирных кислот и лизоформ фосфолипидов, что свидетельствует о наличии у димефосфона мембранопротекторного эффекта.
Выводы
1. При действии стрессового ульцерогенного фактора в слизистой оболочке желудка развиваются язвенно-деструктивные поражения на фоне существенной модификации липидного спектра.
2. Использование димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза приводит к уменьшению выраженности поражений слизистой оболочки желудка.
3. Положительное влияние препарата по предупреждению язвообразо-вания сопровождается восстановлением липидного метаболизма тканевых структур желудка.
Список литературы
1. Хуцишвили, М. Б. Свободнорадикальные процессы и их роль в патогенезе некоторых заболеваний органов пищеварения (часть 1) / М. Б. Хуцишвили, С. И. Рапопорт // Клиническая медицина. - 2002. - № 10. - С. 10-16.
2. Баранская, Е. К. Патогенез язвенной болезни. Болезни органов пищеварения / Е. К. Баранская // Российский медицинский журнал. - 2000. - № 2. - С. 29-35.
3. Черногубова, Е. А. Нарушение антиоксидантноой системы крови и их коррекция при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки : дис. ... канд. биол. наук / Е. А. Черногубова. - Ростов-на-Дону, 1998. - 169 с.
4. Коломоец, М. Ю. Свободнорадикальное окисление и защитные системы организма при язвенной болезни у больных различного возраста / М. Ю. Коломоец, А. И. Федив // Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1995. - № 3. -С. 116-117.
5. Эседов, Э. М. Влияние моно- и комбинированной терапии язвенной болезни на перекисное окисление липидов и антиоксидантную защиту в ульцерогенной зоне /
Э. М. Эседов, С. Н. Мамаев // Клиническая медицина. - № 1. - 1998. - С. 29-30.
6. Крепс, Е. М. Липиды клеточных мембран / Е. М. Крепс. - Л., 1981. - С. 44-72.
