CC BY
35
УДК 615.27:577.125:616.33
О. П. Родина, И. Я. Моисеева
ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ ИЗМЕНЕНИЙ ЛИПИДНОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ СТРЕССОВОМ УЛЬЦЕРОГЕНЕЗЕ
Изучено состояние слизистой оболочки и липидный спектр тканевых структур тонкого кишечника при действии стрессового ульцерогенного фактора на фоне введения димефосфона.
В настоящее время многие исследователи признают роль свободнорадикального окисления липидов в патогенезе различных заболеваний. На фоне действия стрессового ульцерогенного фактора происходит стимуляция активности симпатоадреналовой системы, развивается гипоксия тканей, в результате активируется липолиз с избыточной мобилизацией жирных кислот. Увеличение количества свободных жирных кислот активизирует, в свою очередь, их свободно-радикальное окисление.
Одним из наиболее важных патогенетических механизмов, связанных с процессами свободно-радикального окисления, является способность образующихся свободных радикалов вступать в реакцию с фосфолипидами клеточных мембран. В результате наступают структурные изменения мембран, происходит обеднение фосфолипидами, нарушение проницаемости, потеря эластических свойств вплоть до разрыва мембран [1].
По данным литературы, традиционная противоязвенная терапия не приводит к нормализации процессов перекисного окисления липидов и анти-оксидантной защиты. В последние годы возникло новое направление в лечении эрозивно-язвенных поражений гастродуоденальной зоны препаратами с антиоксидантной направленностью - природными и синтетическими антиоксидантами, т.к. именно это звено патогенетических механизмов является точкой приложения их действия [2, 3].
1. Материалы и методы исследования
В основу работы положены экспериментальные исследования на 40 половозрелых белых крысах обоего пола средней массой 200-250 г. На экспериментальных животных при моделировании «стрессовой» язвы исследовали процесс ульцерогенеза, а также изменения липидного гомеостаза тканевых структур тонкого кишечника.
Моделирование язвенных дефектов производили по способу С. В. Аничкова и И. С. Заводской (1965). Крыс не кормили в течение 24 ч, затем фиксировали на доске в положении лежа на спине при пониженной температуре окружающей среды до 12 ч, вводили в передние лапы игольчатые электроды и в течение 3 ч раздражали импульсами электротока от стимулятора ППМ-1 при напряжении 5-10 В, частоте 50 Гц, продолжительностью импульса 50 мс.
Через 12 ч животных выводили из опыта путем передозировки эфирного наркоза. Производили лапаротомию и биопсию тонкого кишечника. При вскрытии оценивали состояние слизистой оболочки, определяли характер ее повреждений, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и язвы. Дифференциальную диагностику изменений со стороны слизистой
оболочки тонкой кишки осуществляли при помощи бинокулярной лупы с 6-кратным увеличением, а также путем микроскопических исследований: микропрепараты подвергались окраске гематоксилин-эозином. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки рассчитывали «язвенный индекс» Паулса. В опытной группе животных для исследования влияния на показатели ульцерогенеза и активности перекисного окисления липидов (ПОЛ) включили препарат, обладающий антиоксидантным действием, - 15 % раствор ди-мефосфона из расчета 50 мг/кг массы тела внутримышечно.
В работе применялись следующие методы исследования:
- экстракция липидов из тканей методом хроматографического анализа (тонкослойная хроматография) (Дж. А. Хиггинс, 1990; V. E. Vaskovsky et al., 1975);
- количественное определение липидов. Молекулярный анализ проводили на денситометре Model GS-670 (BIO-RAD, США) с соответствующим программным обеспечением (Phosphor Analyst/PS Software).
2. Основные результаты исследования
При анализе слизистой оболочки тонкой кишки отмечено, что деструктивные изменения наблюдались у всех животных опытной группы (таблица 1).
Таблица 1
Характер повреждений слизистой оболочки тонкой кишки при применении димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза
Показатели Виды деструкций Контрольная группа Опытная г руппа
n % n %
Количество животных в группе (п); пораженные животные (%) Точечные кровоизлияния 20 100 20 100
Эрозии 20 100 20 100
Язвы 20 100 20 100
Среднее число деструкций на одно животное, М ± т Точечные кровоизлияния 21,1 ± 1,12 14,4 ± 0,51*
100 % 68,25 %
Эрозии 16,1 ± 0,72 6,8 ± 0,31*
100 % 42,23 %
Язвы 11,0 ± 0,55 4,3 ± 0,44*
100 % 39,09 %
Индекс Паулса Точечные кровоизлияния 21,1 14,4
Эрозии 16,1 6,8*
Язвы 11,0 4,3*
Примечание. * - динамика показателей, достоверно отличающихся от контроля (р < 0,05).
По отношению к контрольной группе обнаружено уменьшение количества точечных кровоизлияний на 31,75 % (р < 0,05). Однако индекс Паулса при этом не изменялся. Выявлено снижение по отношению к контролю числа эрозий на 57,77 % (р < 0,05). Индекс Паулса для эрозий снизился в 2,4 раза и
составил 6,8. Количество язвенных дефектов в опытной группе по сравнению с контролем уменьшилось на 60,91 % (р < 0,05). Индекс Паулса при этом снизился в 2,6 раза и равнялся 4,3. Полученные данные свидетельствует о наличии протективных свойств у димефосфона, обусловленных антистрессор-ным эффектом.
По данным Е. М. Крепса [4], адаптация организма в ответ на стрессовое воздействие во многом осуществляется благодаря перестройкам в мембранах клеток, прежде всего в их липидном бислое. Поэтому по степени выраженности качественных и количественных изменений липидов клеточных мембран можно судить о характере адаптационного ответа организма и эффективности проводимой терапии.
Липидный спектр тканевых структур тонкой кишки при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования димефосфона был подвержен изменениям достоверным изменениям. Так, в ткани указанного органа по сравнению с контрольной группой наблюдалось уменьшение уровня моноацилглицеролов на 50,0 % (р < 0,05), холестерола - на 19,15 % (р < 0,05), свободных жирных кислот - на 55,02 % (р < 0,05), суммарных фосфолипидов -на 7,90 % (р < 0,05) (таблица 2). Происходило выраженное увеличение содержания нейтральных липидов - триацилглицеролов и эфиров холестерола на 243,02 и 90,68 % (р < 0,05) соответственно. Уровень диацилглицеролов нормализовался (рис. 1).
Таблица 2
Липидный спектр тканевых структур тонкой кишки при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования димефосфона (М ± т), %
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
Суммарные фосфолипиды 28,73 ± 0,37 25,43 ± 0,43* 23,42 ± 0,61*
Моноацилглицеролы 1,15 ± 0,03 3,27 ± 0,07* 1,49 ± 0,09*
Холестерол 35,21 ± 0,74 26,32 ± 0,78* 21,28 ± 0,88*
Эфиры холестерола 18,43 ± 0,74 12,77 ± 0,35* 24,35 ± 0,83*
Диацилглицерол 3,04 ± 0,10 6,48 ± 0,31* 3,42 ± 0,44
Свободные жирные кислоты 7,75 ± 0,28 21,21 ± 0,75* 9,54 ± 0,83*
Триацилглицеролы 5,37 ± 0,22 4,44 ± 0,23* 15,23 ± 0,38*
Примечание. * - достоверность изменений по отношению к норме при р < 0,05; жирный шрифт - достоверность изменений по отношению к контролю при р < 0,05.
Изменения фосфолипидного спектра ткани тонкой кишки имели следующий характер: по сравнению с контрольной группой происходило значительное уменьшение уровня лизофосфолипидов на 50,97 % (р < 0,05) (таблица 3). Значительно увеличилось содержание массивных фосфолипидов -фосфатидилинозита, фосфатидилсерина и фосфатидилхолина на 235,77; 75,76; 13,62 % (р < 0,05) соответственно. Уровень сфингомиелина и фосфати-дилэтаноламина не отличался от нормы (рис. 2).
350
300
250
200
%
150
100
50
0
Рис. 1 Качественные и количественные изменения состава липидов ткани тонкой кишки при применении димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза. Нормальные значения показателей приняты за 100 %. Звездочкой отмечены данные, изменение которых достоверно по отношению к норме
Таблица 3
Фосфолипидный спектр тканевых структур тонкой кишки при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования димефосфона (М±т), %
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
Сфингомиелин 20,42 ± 0,36 18,42 ± 0,32* 20,53 ± 0,53
Лизофосфолипиды 8,74 ± 0,34 20,17 ± 0,46* 10,28 ± 0,38*
Фосфатидилхолин 51,02 ± 1,75 39,73 ± 1,78* 45,14 ± 1,48*
Фосфатидилсерин 6,15 ± 0,16 5,28 ± 0,21* 9,28 ± 0,38*
Фосфатидилинозит 3,22 ± 0,12 1,23 ± 0,07* 4,13 ± 0,16*
Фосфатидилэтаноламин 10,36 ± 0,26 15,07 ± 0,32* 10,09 ± 0,48
Примечание. * - достоверность изменений по отношению к норме при р < 0,05; жирный шрифт - достоверность изменений по отношению к контролю при р < 0,05.
Использование димефосфона достоверно приводит к нивелированию липидных перестроек. Этот препарат, обладая антиоксидантным действием, купирует мембранодеструктивные процессы и тем самым ограничивает разрушение мембранных структур, способствующее массивному образованию язвенных дефектов. На фоне его действия увеличивается содержание суммарных фосфолипидов и фосфатидилхолина, уменьшается уровень свободных жирных кислот и лизоформ фосфолипидов, что свидетельствует о наличии у димефосфона мембранопротекторного эффекта.
Таким образом, точное представление о патофизиологических механизмах повреждения клеток тканей и органов, подвергнутых стрессу, в основе которых лежат нарушения в системах перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты, имеющих место при ульцерогенезе, диктуют необ-
СФ МАГ ХС ЭХС ДАГ
□ Норма □ Модель □ Опыт
СЖК
ТАГ
*
*
*
*
*
*
ходимость включения антиоксидантов в комплексную терапию язвеннодеструктивных заболеваний желудочно-кишечного тракта.
300 250
200 % 150
100
50
0
Рис. 2 Качественные и количественные изменения состава фосфолипидов ткани тонкой кишки при применении димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза. Нормальные значения показателей приняты за 100 %. Звездочкой отмечены данные, изменение которых достоверно по отношению к норме
Выводы
1. При действии стрессового ульцерогенного фактора в слизистой оболочке тонкой кишки развиваются язвенно-деструктивные поражения на фоне существенной модификации липидного спектра.
2. Использование димефосфона на модели стрессового ульцерогенеза приводит к уменьшению выраженности поражений слизистой оболочки тонкого кишечника.
3. Положительное влияние препарата по предупреждению язвообразо-вания сопровождается восстановлением липидного метаболизма изученных тканевых структур.
Список литературы
1. Неверов, И. В. Место антиоксидантов в комплексной терапии пожилых больных ИБС [Электронный ресурс] / И. В. Неверов. - Режим доступа:
http://www.rmj.ru/main.htm / ту/ t9/ п18/ 767.htm
2. Яковлев, А. А. Клинические аспекты фармакотерапии и презентация нового в гастроэнтерологии / А. А. Яковлев, Н. А. Лукаш // Проблемы гиполактазии. -Смоленск, 1992. - С. 218-220.
3. Воронина, Т. А. Нейропсихотропные эффекты антиоксидантов и перспективные области их клинического применения / Т. А. Воронина, Л. Д. Смирнов, К. Н. Дюмаев // Тез. докл. конг. «Человек и лекарство». - М., 1997. - С. 252.
4. Крепс, Е. М. Липиды клеточных мембран / Е. М. Крепс. - Л., 1981. - С. 44-72.
1
* * * *
* * * и гЗ Р, Ґ
і *п ■І- 1 -
СФМ ЛФЛ ФХ ФС ФИ ФЭА
□ Норма □ Модель □ Опыт
