CC BY
27
УДК 615.27:577.125:616.33
О. П. Родина, И. Я. Моисеева
ВЛИЯНИЕ РЕАМБЕРИНА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ТКАНИ ЖЕЛУДКА НА МОДЕЛИ СТРЕССОВОГО УЛЬЦЕРОГЕНЕЗА
Аннотация. Изучено состояние слизистой оболочки, липидный спектр, пере-кисное окисление липидов и активность фосфолипазы А2 тканевых структур желудка при действии стрессового ульцерагенного фактора на фоне введения препарата с антиоксидантной активностью - реамберина. Были выявлены липидные модификации, активация процессов ПОЛ и фосфолипазы А2 в изученных тканевых структурах. При использовании реамберина на модели стрессового ульцерогенеза происходит нормализация исследуемых показателей, что подтверждает наличие у данного препарата гастропротективных свойств.
Ключевые слова: антиоксидант, ульцерогенез, слизистая оболочка желудка.
Abstract. The condition of a mucous membrane, spectrum of lipids, POL and activity phospholipase A2 fabric structures of a stomach is studied at action stressful ulcerogenic factor on a background of introduction of a preparation with antioxydant activity - reamberine. Have been revealed lipids updatings, activation of processes POL and phospholipase A2 in the studied fabric structures. At use reamberine on model stressful ulcerogenesis there is a normalization investigated magnituds, that confirms presence at the given preparation gastroprotective properties.
Keywords: antioxidant, ulcerogenesis, gastric mucosa.
По данным литературы одним из пусковых факторов повреждения слизистой оболочки желудка и тонкой кишки в условиях стресса является гипоксия [1-3]. Гипоксия, в свою очередь, индуцирует процессы перекисного окисления липидов в тканях пораженных органов [4]. Поэтому для коррекции возникших изменений будет логичным использование препарата, способного нивелировать возникшие сдвиги.
Янтарная кислота относится к субстратным антигипоксантам. В основе лечебно-профилактического действия янтарной кислоты и ее соединений лежит модифицирующее влияние на процессы тканевого метаболизма, пере-кисное окисление липидов, а конечный результат выражается в оптимизации параметров их функционирования. Кроме того, имеются сообщения о наличии у нее антистрессовых свойств за счет антигипоксического эффекта.
Высокая антигипоксическая и антиоксидантная активность янтарной кислоты нашла применение в 1,5 % растворе реамберина для инфузий.
1 Материалы и методы исследования
В основу работы положены экспериментальные исследования на 40 половозрелых белых крысах обоего пола средней массой 200-250 г. На экспериментальных животных при моделировании «стрессовой» язвы исследовали процесс ульцерогенеза, а также изменения липидного гомеостаза тканевых структур тонкого кишечника.
Моделирование язвенных дефектов производили по способу С. В. Аничкова и И. С. Заводской (1965). Через 12 ч животных выводили из опыта путем
передозировки эфирного наркоза. Производили лапаротомию и биопсию тонкого кишечника. При вскрытии оценивали состояние слизистой оболочки, определяли характер ее повреждений, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и язвы. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки рассчитывали «язвенный индекс» Паулса. В опытной группе животных для исследования влияния на показатели ульцерогенеза и активности перекисного окисления липидов включили препарат, обладающий антиокси-дантным действием. Реамбарин вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг трехкратно: за 2 ч до их фиксации, через 2 и 6 ч после фиксации.
В работе применялись следующие методы исследования:
- экстракция липидов из тканей методом хроматографического анализа (тонкослойная хроматография) (Хиггинс Дж. А., 1990; Vaskovsky V.E. et al., 1975);
- количественное определение липидов. Молекулярный анализ проводили на денситометре Model GS-670 (BIO-RAD, США) с соответствующим программным обеспечением (Phosphor Analyst/PS Software);
- содержание малонового диальдегида (МДА) оценивали в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой. Для определения антиокислительной активности липидов предварительно проводили индукцию липопереокисления раствором сульфата железа в концентрации 5 мкмоль в течение часа;
- активность каталазы определяли фотометрическим методом, основанным на способности перекисей образовывать с молибдатом аммония стойкий окрашенный комплекс. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре при длине 410 нм. Активность каталазы выражали в мг Н202/мин/г белка;
- активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли в реакции с нит-росиним тетразолием (Гуревич В. С. и др., 1990);
- активность фосфолипазы А2 оценивали в среде, содержащей 10 ммоль трис-НСЬ-буфер (pH 8,0), 150 ммоль тритон Х-100, 10 ммоль CaCl2 и субстрат (1,2 ммоль). В качестве субстрата использовали фосфатидилхолины яичного желтка. Регистрацию каталитической деятельности фермента проводили титрометрическим методом по мере образования свободных жирных кислот. Расчет проводили по калибровочной кривой, построенной по пальмитиновой кислоте и выражали в мкмоль/с/г белка (Трофимов В. А., 1999).
2 Основные результаты исследования
При включении реамберина в эксперимент на фоне действия стрессового ульцерогенного фактора наблюдалось улучшение патологоанатомической картины. Так, после лапаротомии при применении реамберина явления воспаления в брюшной полости уменьшались, при ее вскрытии экссудата обнаружено не было. Серозная оболочка внутренних органов была обычного цвета, блестящая.
При вскрытии полых органов было выявлено, что слизистая оболочка желудка в ряде случаев диффузно гиперемирована, продольные складки утолщены.
При более тщательной оценке морфологических изменений слизистой оболочки желудка обнаружено, что точечные кровоизлияния наблюдались у всех животных опытной группы (табл. 1).
Таблица 1
Характер повреждений слизистой оболочки желудка при применении реамберина на модели стрессового ульцерогенеза
Показатели Виды деструкций Контрольная группа Опытная группа
п % п %
Количество животных в группе (п), % (пораженные животные) точечные кровоизлияния 20 100 20 100
эрозии 20 100 18 90
язвы 20 100 15 75
Среднее число деструкций на одно животное, М ± m точечные кровоизлияния 8,0 ± 0,52 3,0 ± 0,24*
100 % 37,5 %
эрозии 5,8 ± 0,38 2,9 ± 0,33*
100 % 50 %
язвы 3,8 ± 0,35 1,1 ± 0,18*
100 % 29,3 %
Индекс Паулса точечные кровоизлияния 8,0 3,0*
эрозии 5,8 2,6*
язвы 3,8 0,8*
* Динамика показателей, достоверно отличающихся от контроля: p < 0,05.
По отношению к контрольной группе количество кровоизлияний уменьшилось на 62,50 % ^ < 0,05). Индекс Паулса для данного вида повреждений снизился в 2,7 раза и составил 3,0. Эрозии слизистой оболочки желудка отмечались в 90 % случаев. По отношению к контролю их число снизилось на 50,00 % ф < 0,05). При этом индекс Паулса уменьшился в 2,2 раза и равнялся 2,6. Язвы наблюдались в 75 % случаев. По сравнению с контролем произошло снижение их количества на 71,05 % ^ < 0,05). Индекс Паулса для язвенных дефектов уменьшился в 4,75 раза и составил 0,8.
В ткани желудка при применении реамберина по отношению к контрольной группе отмечались менее выраженные липидные перестройки. Так, в частности, происходило достоверное уменьшение уровня моноацилглице-ролов и свободных жирных кислот на 8,86 и 39,50 % ^ < 0,05) соответственно (табл. 2).
Таблица 2
Липидный спектр (%) тканевых структур желудка при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования реамберина (M ± m)
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
Суммарные фосфолипиды 26,73 ± 0,39 23,47 ± 0,36* 25,45 ± 0,52
Моноацилглицеролы 4,46 ± 0,21 6,43 ± 0,17* 5,86 ± 0,28*
Холестерол 36,48 ± 0,47 29,35 ± 0,73* 30,13 ± 1,04*
Эфиры холестерола 15,42 ± 0,39 10,72 ± 0,32* 17,12 ± 0,47
Диацилглицерол 2,09 ± 0,06 4,33 ± 0,15* 2,17 ± 0,13
Свободные жирные кислоты 8,71 ± 0,28 20,38 ± 0,47* 12,33 ± 0,56*
Триацилглицеролы 5,45 ± 0,19 4,41 ± 0,11* 6,87 ± 0,22*
* Достоверность изменений по отношению к норме при p < 0,05; жирный шрифт -достоверность изменений по отношению к контролю при p < 0,05.
Обращает на себя внимание факт повышения уровня триацилглицеро-лов на 55,79 % ^ < 0,05). Наблюдалась нормализация содержания эфиров хо-лестерола, диацилглицеролов и суммарных фосфолипидов (рис. 1).
Рис. 1 Качественные и количественные изменения состава липидов ткани желудка при применении реамберина на модели стрессового ульцерогенеза. Нормальные значения показателей приняты за 100 % (звездочкой отмечены данные, изменение которых достоверно по отношению к норме)
Фосфолипидный спектр тканевых структур желудка при применении реамберина также подвергся изменениям. По отношению к контролю снизился уровень фосфатидилэтаноламина, фосфатидилинозита и лизофосфо-липидов - на 21,32, 22,07 и 10,10 ф < 0,05) соответственно (табл. 3). Уровень фосфатидилхолина и фосфатидилсерина повысился и соответствовал норме (рис. 2).
Таблица 3
Фосфолипидный спектр (%) тканевых структур желудка при моделировании стрессового ульцерогенеза на фоне использования реамберина ^ ± m)
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
Сфингомиелин 16,73 ± 0,32 15,79 ± 0,38 15,64 ± 0,57
Лизофосфолипиды 4,38 ± 0,17 8,12 ± 0,31* 7,30 ± 0,41*
Фосфатидилхолин 45,79 ± 1,22 38,15 ± 1,35* 44,12 ± 1,62
Фосфатидилсерин 12,42 ± 0,36 10,12 ± 0,36* 12,33 ± 0,48
Фосфатидилинозит 6,76 ± 0,27 4,26 ± 0,19* 3,32 ± 0,24*
Фосфатидилэтаноламин 13,75 ± 0,46 23,40 ± 0,45* 18,41 ± 0,56*
* Достоверность изменений по отношению к норме при p < 0,05; жирный шрифт -достоверность изменений по отношению к контролю при p < 0,05.
Под действием реамберина в тканях желудка отмечено достоверное снижение по отношению к контролю уровня МДА на 38,88 % (р < 0,05), Бе-индуцированного МДА на 39,23 % (р < 0,05) (табл. 4). Фосфолипазная активность снизилась на 38,02 % (р < 0,05). Обнаружено значительное повышение активности СОД - на 50,63 % (р < 0,05). По сравнению с нормой отмечено достоверное изменение данных показателей (рис. 3).
250
СФМ ЛФЛ ФХ ФС ФИ ФЭА
□ Норма □ Модель ШОпыт
Рис. 2 Качественные и количественные изменения состава фосфолипидов ткани желудка при применении реамберина на модели стрессового ульцерогенеза. Нормальные значения показателей приняты за 100 % (звездочкой отмечены данные, изменение которых достоверно по отношению к норме)
Таблица 4
Показатели ПОЛ, АОЗ и активности фосфолипазы А2 в тканевых структурах желудка на модели стрессового ульцерогенеза при применении реамберина (M і m)
Показатель Норма Контрольная группа Опытная группа
МДА (нМоль/г белка) 2,39 і 0,06 8,23 і 0,15* 5,03 ± 0,18*
Бе-индуцированный МДА (нмоль/г белка) 3,42 і 0,09 12,44 і 0,24* 7,56 ± 0,32*
Активность фосфолипазы А2 (мкмоль/с/г белка) 0,73 і 0,022 1,92 і 0,047* 1,19 ± 0,039*
Активность каталазы (мг Н2О2/мин/г*белка) 1,63 і 0,04 2,71 і 0,12* 2,53 і 0,18*
Супероксиддисмутаза (усл.ед./мг белка) 6,21 і 0,14 3,18 і 0,18* 4,79 ± 0,31*
* Достоверность изменений по отношению к норме при p < 0,05; жирный шрифт -достоверность изменений по отношению к контролю при p < 0,05.
450
400
МДА Fe МДА Катала за ФЛА2 СОД
□ Норма □ Модель ЩОпыт
Рис. 3 Показатели ПОЛ, АОЗ и активности фосфолипазы А2 желудка под влиянием реамберина на модели стрессового ульцерогенеза. Исходные данные приняты за 100 % (звездочкой отмечены данные, достоверно измененные по отношению к норме)
Качественные и количественные изменения липидного и фосфолипид-ного спектра, нормализация процессов перекисного окисления липидов, активности фософлипазы А2 на фоне применения реамберина при моделировании «стрессовой» язвы носят выраженный характер, что может служить подтверждением наличия выявлено у данного препарата мембранопротективных свойств, благодаря наличию у него антигипоксических и антиоксидантных свойств.
Выводы
1. При действии стрессового ульцерогенного фактора в слизистой оболочке желудка развиваются язвенно-деструктивные поражения на фоне активации процессов перекисного окисления липидов и фосфолипазы А2.
2. Введение реаберина на модели стрессового ульцерогенеза приводит к уменьшению выраженности поражений слизистой оболочки желудка.
3. Антиульцерогенный эффект реамберина сопровождается нормализацией липидного гомеостаза, снижением в исследованных тканевых структурах уровня МДА и Fe-МДА и уменьшением активности фосфолипазы А2.
Список литературы
1. Бондаренко, Ю. И. Нейрогуморальные, метаболические и микроциркулятор-ные нарушения в патогенезе стрессовых повреждений желудка и их коррекция : автореф. дис. ... доктора мед. наук / Ю. И. Бондаренко. - М., 1988.
2. Мурашко, В. В. Патология желудка и двенадцатиперстной кишки / В. В. Мурашко, А. С. Балалыкин, И. И. Ильина. - М., 1986. - С. 7-9.
3. Потапов, Л. В. Ишемическая болезнь органов пищеварения / Л. В. Потапов, М. Д. Князев, А. М. Игнатов. - М., 1985.
4. Погромов, А. П. Гипоксический фактор и его значение в формировании гастродуоденальных заболеваний / А. П. Погромов, А. В. Лашкевич // Клиническая медицина. - 1996. - № 1. - С. 3-6.
Родина Олеся Петровна кандидат медицинских наук, доцент, кафедра общей и клинической фармакологии, Медицинский институт, Пензенский государственный университет
E-mail: [email protected]
Моисеева Инесса Яковлевна доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой общей и клинической фармакологии, Медицинский институт, Пензенский государственный университет
E-mail: [email protected]
Rodina Olesya Petrovna Candidate of medical sciences, associate professor, sub-department of general and clinical pharmacology, Medical institute, Penza State University
Moiseeva Inessa Yakovlevna Doctor of medical sciences, professor, head of sub-department of general and clinical pharmacology, Medical institute, Penza State University
УДК 615.27:577.125:616.33 Родина, О. П.
Влияние реамберина на морфофункциональное состояние ткани желудка на модели стрессового ульцерогенеза / О. П. Родина, И. Я. Моисеева // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2009. - № 1 (9). - С. 41-47.
