Изучение токсического действия препарата оливамид в хроническом эксперименте на крысах Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



56 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

используются в качестве противоопухолевых препаратов. результаты. На всем протяжении эксперимента гибели Полученные таким образом гибридные антибиотики могут животных не наблюдалось, отклонений в состоянии и по-значительно отличаться от исходных соединений по био- ведении не отмечалось. Гематологические показатели у всех доступности или токсичности. подопытных животных не отличались от контроля. На материалы и методы. Полученные соединения тести- 1-е сутки после окончания курса введений препарата в вы-ровались на токсичность в отношении здоровых клеточных сокой дозе и у самцов, и у самок выявлено повышение ак-линий HEK293, а также контролировалась антибактери- тивности аспарагиновой трансаминазы (АСТ) и щелочной альная и противогрибковая активность. В настоящее время фосфатазы (ЩФ), уровня общего билирубина (Б), креати-проводится изучение цитотоксичности новых соединений нина (К) и мочевины (М). Применение препарата в низкой в отношении культур опухолевых клеток HCT-116 и K562. дозе приводило к повышению активности АСТ, содержа-результаты. Тестирование in vitro показало, что введе- ния М и К. У животных, получавших препарат в высокой ние малеимидного фрагмента значительно снижает ток- дозе, повышенный уровень АСТ и М сохранялся до 30 сут сичность производных трииндолилметилия, причем анти- после окончания курса введений. У животных, получавших бактериальная и противогрибковая активность снижается препарат в МПД, все биохимические показатели к концу в меньшей степени. наблюдения не отличались от контроля. При исследовании Заключение. С помощью модификации структуры ра- мочи на 1-е сутки после окончания курса введений отмечено нее изученных соединений, имеющих противоопухолевую появление белка и уробилиногена, увеличение удельного активность, получена серия новых веществ, обладающих веса. На 30-е сутки после отмены препарата у кроликов, различной биологической активностью, — новых потенци- получавших препарат в ЛД50, сохранялось повышенное альных цитотоксических препаратов. содержание уробилиногена. Показатели клинического Исследование выполнено анализа мочи у животных, получавших препарат в МПД, при поддержке гранта РНФ на 30-е сутки после курса не отличались от контроля. Па-(проект № 16-15-10300). томорфологическое исследование показало, что при ежедневном внутривенном введении в течение 15 дней в обе-Э.Р. Переверзева, В.А. Голибродо, М.И. Трещалин, их изученных дозах оливамид оказывает повреждающее А.Н. Тевяшова, И.Д. Трещалин действие на структуру печени и почек кроликов, которое изучение ХроничЕСкой токСичноСти выражается как в дистрофических, так и в деструктивных ПрЕПАрАтА оливАмид нА кроликАХ изменениях клеток паренхимы органов. В печени прео-ФГБНУНИИНА, Москва, Россия бладают явления вакуольной дистрофии, в почках — невведение. Блокирование низкомолекулярными инги- кротические процессы. Степень выраженности патоло-биторами мишеней, жизненно важных для опухолевого гических изменений зависит от величины примененной роста, является на сегодня самым рациональным подходом дозы. к химиотерапии онкологических заболеваний. Белок Sp1 — Заключение. Выявленные клинико-лабораторными широко известный транскрипционный фактор, влияющий и патоморфологическими методами признаки гепато-на клеточный рост, дифференциацию и апоптоз, — играет и нефротоксичности зависят от величины примененной критическую роль в пролиферации клеток и метастазиро- дозы препарата и являются обратимыми. Это позволяет вании различных видов опухолей. В ФГБНУ «НИИНА» заключить, что препарат может быть передан на дальней-разработан оригинальный противоопухолевый препарат шие этапы доклинического изучения. оливамид — производное антибиотика группы ауреоловой кислоты, ингибитор транскрипционного фактора Sp1. Э.Р. Переверзева, М.И. Трещалин, А.Н. Тевяшова, Цель исследования. Оценка токсических свойств пре- В.А. Голибродо, И.Д. Трещалин парата оливамид в хроническом эксперименте на кро- иЗУчЕниЕ ТОкСичЕСкоГО дЕйСтвия ликах. препарата оливАмид в хроническом материалы и методы. В эксперименте использовано Эксперименте на крыСАХ 36 кроликов породы «Советская шиншилла», самцов и са- ФГБНУ НИИНА, Москва, Россия мок. Для исследования в качестве суммарных доз были вы- введение. Эффективность лечения злокачественных браны дозы 0,28 мг/кг (однократная МПД для кроликов) опухолей во многом зависит от развития современной фар-и 0,63 мг/кг (однократная ЛД50 для кроликов), пересчитан- мацевтики, позволяющей использовать новые технологи-ные с учетом коэффициента кумуляции препарата. МПД ческие подходы: к созданию препаратов. В ФГБНУ «НИИНА» и ЛД50 для кроликов были получены путем пересчета разработан оригинальный метод химической трансформа-с МПД и ЛД50 для крыс с учетом коэффициента поверх- ции оливомицина и получен новый полусинтетический ности тела. Препарат в лекарственной форме вводили вну- противоопухолевый препарат оливамид с улучшенными тривенно ежедневно в течение 15 дней. Токсические реак- химиотерапевтическими свойствами. ции оценивали во время введения препарата и в течение 30 Цель исследования. Изучение хронической токсично-дней после курса. Параметры исследования: изменение сти препарата оливамид на крысах. массы тела, массовые коэффициенты внутренних органов, материалы и методы. Исследование проведено на ЭКГ, клинический и биохимический анализ крови, клини- 60 крысах Wistar, самцах и самках. Препарат вводили вну-ческий анализ мочи, патоморфологическое исследование трибрюшинно ежедневно в течение 15 дней с интервалом органов и тканей. 24 ч в разовых дозах 0,037 и 0,08 мг/кг, суммарно

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 57

составляющих МПД и ЛД50 соответственно. Период наблю- ные клетки, участвующие в ангиогенезе. Было показано, дения — 30 сут после прекращения введений препарата. Па- что опухольассоциированные Т-регуляторные лимфоциты раметры исследования: изменение массы тела, массовые (Treg) экспрессируют белки CCR4, CCR10, Neuropilin-1 коэффициенты внутренних органов, ЭКГ, клинический и би- (CD304) и VEGFR-2 и могут привлекаться опухолевыми охимический анализ крови, суточный диурез и клинический клетками с помощью лигандов CCL22, VEGF-A и CCL28 анализ мочи, патоморфологическое исследование органов на их поверхности, что способствует образованию имму-и тканей. нотолерантного микроокружения и развитию внутриопу- результаты. Препарат, введенный в обеих изученных холевого ангиогенеза. дозах, гибели животных не вызывал и не оказывал влияния Цель исследования. Изучение субпопуляции опухоль-на их состояние и поведение. Динамика прироста массы ассоциированных Treg, циркулирующих в периферической тела подопытных животных практически не отличалась крови, и механизмов их мобилизации опухолью у больных от контроля. При гематологическом исследовании у жи- саркомами мягких тканей (СМТ). вотных всех подопытных групп на всех сроках наблюдения материалы и методы. В исследование было включено отличий от контроля не выявлено. На 1-е сутки после 35 больных III—IV стадии СМТ, получавших лечение окончания курса введений препарата в высокой дозе у всех в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздра-животных выявлено повышение активности аланиновой ва России с 2013 по 2017 г. Критерии включения: 1) возраст трансаминазы (АЛТ) и щелочной фосфатазы, уровня об- старше 18 лет; 2) гистологически верифицированный ди-щего билирубина, креатинина (К) и мочевины (М). При- агноз СМТ; 3) отсутствие острых инфекционных заболева-менение препарата в низкой дозе приводило к повышению ний, аутоиммунных заболеваний в период обострения; активности АЛТ, содержания М и К. У животных, получав- 4) свободный период от приема глюкокортикоидов или ших препарат в ЛД50, повышенный уровень АЛТ и М со- других иммунодепрессантов не менее 10 дней. Гистологи-хранялся до 30 сут после курса. У животных, получавших ческая верификация позволила распределить пациентов препарат в МПД, все биохимические показатели к концу следующим образом: синовиальная саркома — 11 больных, наблюдения не отличались от контроля. При исследовании липосаркома — 11, лейомиосаркома — 5, миксофибросар-мочи у самцов и самок, получавших препарат в высокой кома — 1, внескелетная хондросаркома — 2, светлоклеточ-дозе, выявлено повышение уровня уробилиногена, белка ная саркома — 2, веретеноклеточная саркома — 2 и фи-и удельного веса, появление кетоновых тел. В группах бросаркома — 1. Больные были разделены на 2 группы. крыс, получавших препарат в низкой дозе, отмечено по- В 1-й группе забор образцов периферической крови про-вышение уровня белка и удельного веса мочи. На 30-е сут- изводился во время прогрессирования опухолевого процес-ки поле окончания курса введений препарата различий са (n = 29), во 2-й группе — при стабилизации заболевания между подопытными и контрольными группами не выяв- (n = 16). У 19 больных проведен анализ субпопуляционно-лено. Патоморфологическое исследование показало, го состава лимфоцитов и экспрессии хемокиновых рецеп-что оливамид оказывает повреждающее действие на струк- торов на поверхности ^eg: CCR4, CCR10, VEGFR-2 туру печени и почек крыс, которое выражается как в ди- и Neuropilin-1 (CD304) при прогрессировании заболева-строфических, так и в деструктивных изменениях клеток ния, у 10 больных в обоих случаях и у 6 пациентов только паренхимы органов. Характер морфологических измене- в период стабилизации (проточный цитофлуориметр BD ний не зависит от пола животных. FACSCanto™ II, моноклональные антитела BD Biosciences Заключение. Проведенные исследования показали, и BioLegend, США). Сравнительный анализ показателей что лимитирующими видами токсичности препарата явля- этих 2 групп проводился с помощью непараметрического ются гепато- и нефротоксичность, признаки которых были критерия Манна—Уитни. Различия считались статистиче-выявлены как клинико-лабораторными, так и патоморфо- ски значимыми при значенииp <0,05. Статистическая об-логическими методами. Зависимость глубины поврежде- работка данных проводилась с использованием IBM SPSS ний от величины примененной дозы и обратимость токси- Statistics 19.0 и Microsoft Excel 2010. Кроме того, в работе ческого действия позволяют рекомендовать препарат для использовали супернатанты клеточных культур СМТ (n = 21), дальнейших этапов доклинического изучения. в которых методом непрямого иммуноферментного анализа в «сэндвич»-варианте (тест-системы Bender MedSystems, Н.П. Пипиа Австрия, и R&D, США) определяли иммуносупрессирую-иЗУчЕниЕ иммУБоСУПрЕССивноГо щий белок CCL2 из семейства класса СС-хемокинов и со-ПотЕнЦиАлА Т-РЕГУЛЯТОРБЫХ судистый эндотелиальный фактор роста VEGF-A. Конт-ЛиМФОЦиТОВ В ПРоЦЕССЕ оПУХоЛЕВой ролем служили супернатанты культуры нормальных ПРоГРЕССии У БоЛЬБЫХ САРКоМАМи фибробластов кожи человека. Связь между хемокиновыми МЯГКиХ ТКАБЕй рецепторами и их лигандами (CCR4 и CCL2, VEGFR-2 ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» и Neuropilin-1 и VEGF-A) изучали с помощью корреляци-Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия онного анализа по Спирмену. Введение. Хемокины представляют собой группу не- Результаты. У больных СМТ при прогрессировании больших структурно связанных белков, которые играют заболевания в периферической крови выявлено стати-фундаментальную роль в развитии, гомеостазе и функцио- стически значимое увеличение содержания CCR4+Treg нировании иммунной системы, а также оказывают влияние (p <0,001), CCR10+Treg (p <0,001), CD304+Treg (p = 0,021) на клетки центральной нервной системы и эндотелиаль- на фоне повышения относительного числа ^eg 8,90 ± 0,92 %

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ