CC BY
6УДК 615.91:619:636.028
Т. С. Денисенко Denisenko T. S.
ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ПРЕПАРАТА «ДИМИКАР»
STUDY OF ACUTE TOXICITY OF PREPARATION «DIMIKAR»
В настоящее время более широко применяются анти-оксидантные препараты для лечения и профилактики различных заболеваний, обладающие комплексным и малотоксичным действием. Одним из таких средств является новый препарат «Димикар».
Для определения острой токсичности препарата использовали клинически здоровых лабораторных животных. При проведении опыта по определению летальных доз препарат животным вводили внутрижелудочно в возрастающих дозах с равным интервалом между ними, учитывали количество павших и выживших животных, процент летальности и ее выражение в пробитах.
Установили, что среднесмертельная доза LD50 для белых мышей составляет 5312 мг/кг, для белых крыс - 5587 мг/кг. В соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 по степени воздействия на организм препарат «Димикар» относится к 4 классу опасности - вещества малоопасные.
Ключевые слова: острая токсичность, летальность, среднесмертельная доза, белые мыши, белые крысы, анти-оксиданты.
Currently, more widely used antioxidant drugs to treat and prevent a variety of diseases that have complex and low toxic effect. One such means is a new drug «Dimikar».
To determine the acute toxicity of the drug used clinically healthy laboratory animals. In an experiment to determine the lethal doses of medication to animals injected intraperitoneally in increasing doses at regular intervals between them, we take into account the number of dead and surviving animals, the percentage of mortality and its expression in breaking through.
We found that of the mean dose LD50 for white mice is 5312 mg/kg, for the white rat 5587 mg/kg. In accordance with GOST 12.1.007-76 with regard to impact on the body of the drug «Dimikar» refers to the fourth class of hazard - low hazard substances.
Key words: acute toxicity, lethality of the mean dose, white mice, white rats, antioxidants.
Денисенко Татьяна Сергеевна -
аспирант кафедры терапии и фармакологии
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный
аграрный университет»
г. Ставрополь
Тел.: 8-963-381-31-83
E-mail: chernova_ts@mail.ru
Denisenko Tatiana Sergeevna -
Postgraduate at the Department
of the therapy and pharmacology
FSBEI HE «Stavropol State Agrarian University»
Stavropol
Tel.: 8-963-381-31-83 E-mail: chernova_ts@mail.ru
В настоящее время как в медицине, так и в ветеринарии появляются новые ан-тиоксидантные препараты, которые используются в практике более широко. Применение антиоксидантов оказывает иммуностимулирующее, мембранопротектор-ное и антигипоксическое действие практически на все органы и их системы [1, 2, 3, 4]. Одним из таких лекарственных средств является новый препарат «Димикар», разработанный на кафедре терапии и фармакологии Ставропольского государственного аграрного университета.
Одним из обязательных требований, предъявляемых к вновь созданным препаратам, является проведение доклинических исследований безопасности лекарственных средств [5, 6]. Определение острой токсичности препаратов проводят для первичной токсиметрической оценки и изучения симптомокомплекса отравления при ее однократном поступлении в организм [7, 8, 9].
Цель исследования: изучить параметры острой токсичности препарата «Димикар» на белых мышах и белых крысах.
Для определения острой токсичности препарата «Димикар» использовали клинически здоро-
вых лабораторных животных: 136 белых мышей и 112 белых крыс. Все животные были разделены на опытные и контрольные группы по 8 особей в каждой с учетом принципа аналогов.
Отправным моментом для поиска доз послужили известные литературные данные по острой токсичности аналогичных препаратов [4, 5, 8]. Белые мыши из группы № 1 являлись контрольными животными, им вводили соответствующий объем воды для инъекций. В группе № 2 стартовая доза составила 1000 мг/кг живой массы (по действующему веществу). Мышам из групп № 3-7 препарат вводили в дозах 1100, 1200, 1300, 1400, 1500 мг/кг по ДВ. За состоянием здоровья животных наблюдали 14 дней после введения препарата, при этом в 1-й день животные находились под непрерывным наблюдением.
В группах № 2-3 видимых внешних клинических изменений не отмечено, но после введения препарата наблюдалось кратковременное возбуждение, через 1,5±0,5 часа состояние животных нормализовалось. Белые мыши из группы № 4 через 20-30 минут после введения препарата испытывали угнетение, вялость, частичный отказ от воды и корма, но через 2±0,5 часа проявление данных симптомов прекратилось. В группе № 5 при введении препарата в
68
,,„ „„„„, щ ^ Ставрополья
научно-практическии журнал
дозе 1300 мг/кг массы тела у шести животных наблюдалась вялость, угнетение, частичный отказ от корма и воды, через 4±1,0 часа их состояние стабилизировалось. При наблюдении за белыми мышами из группы № 6 отмечали такие же клинические признаки, что и у лабораторных животных из группы № 5, но изменения регистрировали у всех животных. У мышей из группы № 7 после введения препарата в дозе 1500 мг/кг массы тела наблюдали кратковременные периоды возбуждения, сменяющиеся периодами угнетения, светобоязнью, отказ от корма и воды. По истечении 6,5±1,0 часов состояние животных в данной группе стабилизировалось.
Мышам из групп № 8-12 ввели препарат в дозах 1520, 1540, 1560, 1580 и 1600 мг/кг массы тела по ДВ. В группах № 8-10 все мыши испытывали глубокое угнетение, сменяющееся периодами возбуждения, при попадании яркого света интенсивно перемещались по клетке и сбивались в кучу. Мыши из группы № 10 полностью отказались от воды и корма. Животные из группы № 11 после введения препарата в дозе 1580 мг/кг по ДВ были малоподвижны, испытывали глубокое угнетение, вялость, полностью отказывались от воды и корма, но при этом гибели мышей не отмечено. При испытании дозы 1600 мг/кг по ДВ у животных из группы № 12 отмечали те же клинические изменения, что и у мышей из группы № 11. Через 1,5±1,0 часа после введения препарата в данной группе пало 2 лабораторных животных.
Белым крысам из группы № 1 вводили раствор для инъекций, так как они служили контролем. Животным из групп № 2-5 вводили препарат в дозах 1150, 1300, 1450 и 1600 мг/ кг массы тела по ДВ. У белых крыс в группах № 1-2 при введении препарата изменений в поведении не наблюдалось, животные были без видимых клинических признаков патологии. У 5 крыс из группы № 3 при введении препарата в дозе 1300 мг/кг массы тела наблюдалось вре-
менное угнетение, вялость, сменяющееся периодами агрессии, однако через 2,5±0,5 часа их состояние стабилизировалось. У животных из группы № 4 наблюдались признаки агрессии, частичный отказ от корма. Белые крысы из группы № 5 испытывали угнетение, вялость, забивались в угол, были малоподвижны. Крысам из групп № 6-10 ввели препарат в дозах 1620, 1640, 1660, 1680 и 1700 мг/кг массы тела. Животные из групп № 6-7 после введения препарата, испытывали ярко выраженное возбуждение, сменяющееся периодами угнетения, беспокойство, частичный отказ от воды и корма. Крысы из группы № 8 были угнетены, вялы, беспокойны, сбивались в одну кучу, полностью отказались от воды и корма. В группе № 9 через 1,5±1,0 часа после введения препарата пало 2 животных, а в группе № 10 - 3 крысы.
На 7-й день наблюдений в каждой испытуемой группе у 4 животных провели декапитацию под легким эфирным наркозом для последующего взятия крови и проведения гематологического исследования (табл. 1, 2).
При анализе гематологических показателей установлено, что уровень гемоглобина с увеличением вводимой дозы в группах постепенно уменьшался. Уменьшение гемоглобина составило от 3,22 до 23,01 % в сравнении с контрольной группой, а в группах № 10-12 изменения были достоверны (Р<0,05) и составили 19,22, 22,12 и 23,01 % соответственно. Аналогичные изменения наблюдались относительно количества эритроцитов в крови. Минимальные количества по данному показателю наблюдались в группах № 11-12, уменьшение составило 20,94 и 25,29 %.
С возрастанием дозы препарата происходило постепенное увеличение количества лейкоцитов в крови животных. В группе № 12 данный показатель имел достоверные изменения относительно контрольной группы, а увеличение составило 25,29 %.
Таблица 1 - Гематологические показатели крови белых мышей при определении острой
токсичности препарата «Димикар» (п=8)
№ группы Доза, мг/кг Гемоглобин, г/л Эритроциты, 1012/л Лейкоциты, 109/л Тромбоциты, 109/л
1 Контроль 158,2±7,9 9,41±0,78 9,15±0,67 250,8±13,7
2 1000 153,1±10,4 9,28±0,72 9,39±0,43 256,1±16,5
3 1100 151,3±10,9 9,06±0,45 9,51±0,63 263,9±17,3
4 1200 146,7±9,8 8,87±0,57 9,84±0,65 269,3±16,9
5 1300 139,4±10,5 8,62±0,49 10,06±0,56 275,6±16,1
6 1400 135,1±11,6 8,23±0,62 10,36±0,59 282,±16,0
7 1500 132,9±9,5 8,11±0,71 10,53±0,63 288,6±15,3
8 1520 131,8±9,9 8,02±0,68 10,62±0,65 293,1±15,8
9 1540 130,7±10,5 7,93±0,70 10,76±0,68 297,1±16,9
10 1560 127,8±9,6* 7,89±0,69 10,93±0,74 308,6±15,2*
11 1580 123,2±9,8* 7,44±0,68 11,20±0,69 313,2±15,5*
12 1600 121,8±10,2* 7,03±0,53* 11,62±0,57* 318,4±16,2*
*Р <0,05 - разница статистически достоверна между данной и контрольной группами.
Количество тромбоцитов во всех группах увеличилось от 2,11 до 26,95 %. Достоверные изменения по данному показателю были в группах № 10-12, где увеличение составило 23,05, 24,88 и 26,95 % соответственно.
При анализе результатов исследования крови белых крыс установлена аналогичная динамика по отношению к крови белых мышей. Уровень гемоглобина в группах с увеличением вводимой дозы постепенно уменьшался с 3,92 до 28,11 % в сравнении с контрольной группой. Достоверные изменения (Р<0,05) по данному показателю были в группах № 7-10, где уменьшение составило 20,45, 22,92, 24,91 и 28,11 % соответственно. Количество эритроцитов уменьшилось во всех опытных группах 2,18 до 14,99 % по отношению к контролю. Количество лейкоцитов, наоборот, постепенно увеличивалось. В группе № 10 данный показатель был статистически достоверен в сравнении с контрольной группой, а возрастание составило 26,84 %. Количество тромбоцитов во всех группах находилось в пределах нормы, досто-
верные изменения были в группах № 9-10, где увеличение составило 14,84 и 16,07 % относительно контроля соответственно.
При испытании дозы, равной 1580 мг/кг на белых мышах и 1660 мг/кг на белых крысах, были зафиксированы клинические признаки отравления, подтверждающиеся гематологическим анализом крови. Поэтому данные дозы были приняты в качестве максимально переносимой (МПД) и стартовыми для проведения опыта по определению летальных доз препарата «Димикар».
Следующим токсикологическим испытанием нового препарата явилась отработка летальных доз. Исследование проводили на 56 белых мышах и 56 белых крысах, которые разделили на группы по 8 особей в каждой. Животные первой группы служили контролем и получали соответствующий объем воды для инъекций. Мыши и крысы из групп № 2-7 получали препарат в дозе с постоянной кратностью. После введения растворов вели наблюдение за животными в течение 14 дней (табл. 3).
Таблица 2 - Гематологические показатели крови белых крыс при определении острой
токсичности препарата «Димикар» (п=8)
№ группы Доза, мг/кг Гемоглобин, г/л Эритроциты, 1012/л Лейкоциты, 109/л Тромбоциты, 109/л
1 Контроль 165,8±7,3 8,27±0,46 12,37±1,05 334,8±16,3
2 1000 159,3±11,3 8,13±0,47 12,79±0,95 342,1±17,9
3 1100 152,4±10,5 7,98±0,44 13,02±0,98 351,9±17,1
4 1200 146,2±12,3 7,82±0,49 13,53±1,02 359,8±18,9
5 1300 140,3±11,5 7,64±0,53 13,97±1,07 364,3±17,0
6 1400 137,4±11,1 7,50±0,52 14,25±0,98 369,5±17,4
7 1500 131,9±11,3* 7,39±0,45 14,54±1,09 374,8±16,9
8 1520 127,8±11,0* 7,24±0,51 14,82±1,03 380,3±17,5
9 1540 124,5±10,2* 7,16±0,54 15,19±1,01 384,5±16,1*
10 1560 119,2±9,7* 7,03±0,43 15,69±1,06* 388,6±17,7*
*Р <0,05 - разница статистически достоверна между данной и контрольной группам. Таблица 3 - Схема опыта и результаты изучения острой токсичности препарата «Димикар» (п=8)
№ группы Доза препарата, мг/кг Кол-во мышей в группе на начало опыта, ж-х Пало мышей, ж-х Выжило мышей, ж-х Летальность, % Пробиты
Белые мыши
1 Контроль 8 0 8 0 3,13
2 1580 8 0 8 0 3,13
3 3073 8 1 7 12,5 3,85
4 4566 8 2 6 25 4,33
5 6059 8 6 2 75 5,67
6 7552 8 7 1 87,5 6,15
7 9044 8 8 0 100 6,87
Белые крысы
1 Контроль 8 0 8 0 3,13
2 1659 8 0 8 0 3,13
3 3230 8 1 7 12,5 3,85
4 4802 8 3 5 37,5 4,68
5 6373 8 5 3 62,5 5,32
6 7973 8 7 1 87,5 6,15
7 9516 8 8 0 100 6,87
Ежеквартальныи „ научно-практическии
журнал
Расчет среднесмертельной дозы производили по формуле
сумма (А + В )х (М - Н)
ЛЭ50= -
200
где А и В - величины смежных доз, мг/кг;
М и Н - частоты летальных исходов смежных доз, %;
200 - постоянный коэффициент. Расчет среднесмертельной дозы для белых мышей:
ЛЭ50 =
(4653 х 12,5)+ (7639 х 12,5) + (10625 х 50) +
200
ЛЭяп =
_ (4889 х 12,5) + (8032 х 25) + (11175 х 25) +
+ (14346 х 25)+(17489 х 12,5) _
200
5592 мг/кг по ДВ.
определили величины LD16 и LD84. На рисунке на оси X отложили дозы препарата, выраженные в мг/кг живой массы, на оси У - пробиты. Произвели графические вычисления величин LD 16 и LD84, соответствующие пробитам 4 и 6 (рис. 1, 2).
Показатель ошибки средней величины дозы рассчитывали по формуле
в1^50 - ^
+ (13611 х 12,5)+ (16596 х 12,5) ___ . __ —--——--— = 5312 мг/кг по ДВ.
Расчет среднесмертельной дозы для белых крыс:
В соответствии с методикой по А. А. Ступ-никову (1975) [10] провели выражение гибели животных в пробитах. На основании полученных данных построили пробитный график, где
2п
где LD16 и LD84 - дозы эффекта, мг/кг;
п - суммарное количество животных в группах, для которых значения пробитов находятся в пределах 3,5-6,5. Расчет ошибки средней величины дозы для белых мышей:
0| ^ 7370-3190
SLD5o =-= 65,31 мг/кг.
50 2 х 32
Расчет ошибки средней величины дозы для белых крыс:
01 _ 7753-3353 .
SLD50 = -= 68,75 мг/кг.
50 2 х 32
Полученные результаты эксперимента и их анализ позволили определить параметры острой токсичности препарата «Димикар» (табл. 4).
Рисунок 1 - Острая токсичность Рисунок 2 - Острая токсичность
препарата «Димикар» для белых мышей препарата «Димикар» для белых крыс
Таблица 4 - Параметры острой токсичности препарата «Димикар» при однократном внутрижелудочном введении, мг/кг по ДВ
Вид животного Параметры токсичности S-D50
МПД ^50 ^84 -^00
Белые мыши 1580 3190 5312 7370 9044 65,31
Белые крысы 1659 3353 5587 7753 9516 68,75
Исходя из результатов опыта по изучению острой токсичности нового препарата «Дими-кар» на белых мышах и белых крысах при однократном внутрижелудочном введении установ-
лено, что в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» [11] по степени воздействия на организм препарат относится к 4 классу опасности - вещества малоопасные.
Литература
1. Влияние мебисела на систему антиокси-дантной защиты поросят / И. В. Киреев,
B. А. Оробец, В. С. Скрипкин, Е. И. Лав-ренчук // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2010. № 12 (74). С. 46-48.
2. Влияние препаратов «Мебисел» и «Эми-цидин» на систему антиоксидантной защиты организма коров в послеродовый период / И. В. Киреев, В. А. Беляев, Т. С. Денисенко, А. А. Петриченко, В. А. Оробец // Ветеринария Кубани. 2016. № 2.
C. 13-14.
3. Лавренчук Е. И., Киреев И. В., Оробец
B. А. Влияние мебисела на гематологические показатели телят // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных : сб. науч. тр. по материалам 75-й науч.-практ. конф. (Ставрополь 10-12 апреля 2011 г.). Ставрополь : АГРУС, 2011.
C. 42-43.
4. Оробец В. А., Беляев В. А., Киреев И. В. Влияние мебисела на продуктивность молодняка крупного рогатого скота // Ветеринарная практика. 2008. № 2. С. 36-38.
5. Острая токсичность дезинфицирующего средства на основе наночастиц серебра / А. И. Мирошникова, И. В. Киреев, В. А. Оробец, В. А. Беляев, Е. В. Раков-ская // Вестник АПК Ставрополья. 2014. № 2(14). С.124-127.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. чл.-корр. РАМН, проф. Р. У. Хабриева. М. : ОАО «Изд-во «Медицина», 2005. 832 с.
7. Киреев И. В. Фармако-токсикологические свойства экстраселена и его применение в ветеринарии : автореф. дис. ... канд. биол. наук. Краснодар, 2009. 22 с.
8. Оробец В. А., Беляев В. А., Киреев И. В. Отравления животных : учеб. пособие. Ставрополь, 2011. 36 с.
9. Самохин В. Т. Методические указания по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных / утв. дир. института, д.б.н., проф. В. Т. Самохин, ВНИИНБЖ. 1987.
References
1. Influence mebisela on the antioxidant defense system of piglets / I. V. Kireev, V. A. Orobets, V. S. Skripkin, E. I. Lavrenchuk // Bulletin of Altai State Agrarian University. 2010. № 12 (74). P. 46-48.
2. Effect of drugs «Mebisel» and «Emitsidin» on the system of antioxidant defense cows in postpartum / I. V. Kireev, V. A. Belyaev, T. S. Denisenko, A. A. Petrychenko, V. A. Orobets // Veterinary Medicine Kuban. 2016. № 2. P. 13-14.
3. Lavrenchuk E. I., Kireev I. V., Orobets V. A. Effect Mebisel on hematologic indices calves // Diagnostics, treatment and prevention of livestock diseases: collection of scientific paper based on the 75th scientific-practical conference (Stavropol April 10-12, 2011). Stavropol : AGRUS, 2011. P. 42-43.
4. Orobets V. A., Belyaev V. A., Kireev I. V. The impact on productivity mebisela young cattle // Veterinary Practice. 2008. № 2. P. 36-38.
5. Acute toxicity disinfectant based on silver nanoparticles / A. I. Miroshnikova, I. V. Kireev, V. A. Orobets, V. A. Belyaev, E. V. Rakovskaya // Agricultural Bulletin of Stavropol Region. 2014. № 2 (14). P. 124-127.
6. Manual on experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / under total. Ed. corr. Academy of Medical Sciences, Professor R. U. Habriev. M. : JSC «Publishing House «Medicine», 2005. 832 p.
7. Kireev I. V. Pharmaco-toxicological properties ekstraselena and its application in veterinary medicine: Abstract. dis. ... cand. biol. sciences. Krasnodar, 2009. 22 p.
8. Orobets V. A., Belyaev V. A., Kireev I. V. Poisoning animals: Training. allowance. Stavropol, 2011. 36 p.
9. Samohin V. T. Guidelines for toxicological evaluation of new drugs for the treatment and prevention of non-contagious animal diseases / approved. Dir. Institute, prof. V. T. Samokhin, ASRINAD. 1987.
72
,,„ „„„„, Jj Ставрополья
научно-практическии журнал
10. Ступников А. А. Токсичность гербицидов и арборицидов и профилактика отравлений животных. Л. : Колос, Ленингр. отд-е, 1975. 239 с.
11. ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. М., 1984. 4 с.
10. Stupnikov A. A. The toxicity of herbicides and arboritsidov and prevention of animal poisoning. L. : Kolos, Leningrad. Dep-tion, 1975. 239 p.
11. State Standard of the USSR. Occupational safety standards system. Harmful substances. Classification and general safety requirements. GOST 12.1.007-76. M., 1984. 4 p.
