CC BY
26Вестник фармации №1 (63) 2014 Научные публикации
ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
Т.О. Павлють, Е.В. Благун, Е.О. Полещук, А.Ю. Молчанова, Е.И. Калиновская, С.В. Маньковская
ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА
«ХОЛИНА АЛЬФОСЦЕРАТ»
ГНУ «Институт физиологии НАН Беларуси», Минск
Оценка токсичности и безопасности воспроизведенных лекарственных средств важна и способствует предупреждению возможных негативных эффектов. Проведено исследование острой токсичности лекарственного средства «Холина альфос-церат», раствор для инъекций 250 мг/мл, 4 мл № 5, разработанного и выпускаемого ОАО «Борисовский завод медицинских препаратов», г. Борисов, Республика Беларусь, при внутрибрюшинном и подкожном введении.
Показано, что данное лекарственное средство малотоксично в условиях острого опыта. Масса тела животных, объем потребленных пищи и воды существенно не изменяются. Установлены разнонаправленные (в зависимости от пола) изменения биохимических показателей сыворотки крови подопытных и контрольных животных, носившие недостоверный характер. Наиболее чувствительными к действию «Холина альфосцерата» оказались печень, селезенка и в меньшей степени легкие. Эта же зависимость сохранилась и в отношении массовых коэффициентов (отношение массы органа к массе тела).
Ключевые слова: холина альфосцерат, токсичность, безопасность, выживаемость, биохимические показатели, некропсия.
ВВЕДЕНИЕ
Холин альфосцерат - лекарственное средство, широко используемое в неврологической практике. Эффективность холина доказана в ряде крупных клинических исследований [1-6].
Холин альфосцерат - холиномиметик центрального типа действия, обладающий комплексным нейротрофическим и антиоксидантным действием. Участвуя в синтезе фосфатидилхолина (мембранного фосфолипида), холин улучшает синапти-ческую передачу, пластичность нейро-нальных мембран, функцию рецепторов, изменяет фосфолипидный состав мембран нейронов. Лекарственное средство легко проникает через гемато-энцефалический барьер (ГЭБ) и служит донором для биосинтеза нейротрансмиттера ацетилхолина в пресинаптических мембранах холинер-гических нейронов. 85% холина выводится легкими в виде диоксида углерода и 15% - с физиологическими отправлениями [1, 3 - 4, 7].
Усиление метаболических процессов в головном мозге под влиянием холина и повышение активности ретикулярной формации опосредует улучшение когнитивных, психических и поведенческих функций. Препараты холина альфосцера-та широко применяются в неврологической практике, что обусловлено в первую очередь полимодальностью действия в терапии таких заболеваний, как дисцир-куляторная энцефалопатия, острый и восстановительный периоды тяжелой черепно-мозговой травмы, ишемического и геморрагического инсульта, протекающие с очаговой полушарной симптоматикой или симптомами поражения ствола мозга. Холин альфосцерат обладает профилактическим и корригирующим действием на патогенетические факторы инволюционного психоорганического синдрома на фоне дегенеративных изменений мозга, когнитивных расстройств, в том числе при деменции и энцефалопатии, старческой псевдомеланхолии [7 - 10].
В то же время это лекарственное сред-
ство обладает побочным действием - оказывает влияние на способность управления механизмами и автотранспортом, но не воздействует на скорость психомоторных реакций [1 - 10]. Оценка токсичности и безопасности воспроизведенных лекарственных средств холина важна и способствует предупреждению возможных негативных эффектов.
На этом основании целью данного исследования явилась оценка острой токсичности лекарственного средства «Холина альфосцерат», раствор для инъекций 250 мг/мл, 4 мл № 5, разработанного и выпускаемого открытым акционерным обществом «Борисовский завод медицинских препаратов», г. Борисов, Республика Беларусь.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследования выполнены на 132-х (66 самцов и 66 самок) белых рандомбредных крысах одного возраста и массой 230-250 г и 132-х (66 самцов и 66 самок) мышах, массой 20-24 г в соответствии с международными стандартами качества планирования и проведения исследований на животных [11, 12]. Все животные содержались в отдельной комнате в контролируемых условиях окружающей среды при температуре 19-25°С и относительной влажности - 50-70%, находились на одинаковом рационе, при свободном доступе к воде и пище. В комнатах содержания животных соблюдался 12-ти часовой цикл освещения «день-ночь» [13 - 15].
Исследуемое вещество («Холина аль-фосцерат», раствор для инъекций 250 мг/ мл) вводили однократно внутрибрюшин-но (в/б) или подкожно (п/к) в следующих дозах: терапевтическая разовая (90 мг/ кг), максимальная (на основании данных литературы о ЛД50: 1 г/кг) и две промежуточные (между разовой терапевтической и максимальной: 270 и 650 мг/кг). Точность дозирования достигалась изменением объема вводимого раствора при его постоянной концентрации. Дозирование осуществляли по содержанию активного компонента. Индивидуальный объем вводимой дозы для каждого животного рассчитывали исходя из значения массы тела. Контролем служили интактные животные. Отдельной группе для сравнения вводили воду для инъекций (растворитель). Живот-
ных лишали корма вечером накануне эксперимента. Доступ к воде не ограничивали. По истечении нескольких часов после введения веществ животным давали корм.
В течение исследования каждое животное осматривали ежедневно. Осмотр включал в себя оценку поведения, общего состояния и волосяного покрова животных. При введении «Холина альфос-церата» наблюдение за животными осуществлялось непрерывно в течение одного часа после инъекции, затем ежечасно в течение 5 часов и далее ежедневно - 1 раз в день. Общий срок наблюдения составил 14 дней после инъекции. Животных взвешивали перед введением вещества и далее через день. Масса тела, определенная после ночи голодания перед некропсией, была использована для подсчета массовых коэффициентов органов. В случае гибели животных проводили их некропсию.
На 15-е сутки после введения лекарственного средства была проведена эвтаназия и последующая некропсия тел всех выживших, а также контрольных подопытных животных. Во время некропсии отбирали следующие органы: легкие, сердце, печень, селезенка, надпочечники для определения их массы и расчета весовых коэффициентов. Перед некропсией (только у крыс) проводили забор крови для проведения биохимического исследования. Определение аланинаминотранс-феразы (АлАТ), альбумина, глюкозы, креатинина и щелочной фосфотазы (ЩФ) осуществляли на автоматическом биохимическом анализаторе BS-200 (Китай) с использованием коммерческих наборов фирмы Randox (Великобритания).
Полученные результаты обработаны по параметрическому ^критерию Стью-дента с определением среднего арифметического значения и его стандартной ошибки X ± Зх . Различия считались достоверными при уровне значимостир < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При в/б и п/к введении больших доз «Холина альфосцерата» у экспериментальных животных отмечались уринация и дефекация. Токсические дозы вызывали появление клонико-тонических судорог и смерть от остановки дыхания в течение первого часа после введения, что согласуется с данными литературы [16 - 18]. Сам-
ки (крысы и мыши) оказались более чувствительны к действию токсических доз лекарственного средства, по сравнению с самцами, что выразилось в большем количестве павших животных. Непосредственно после введения исследуемого средства в течение 2 часов пало 3 крысы (самки после в/б введении максимальной дозы 1 г/ кг) и 6 мышей (2 самца и 2 самки после п/к введения дозы 1 г/кг, 1 самка после в/б инъекции максимальной дозы и 1 самка после в/б введения дозы 650 мг/кг). У выживших животных в 1-е сутки отмечались заторможенность, вялость, снижение количества потребляемого корма. В остальные дни наблюдения общее состояние и поведение экспериментальных животных не отличались от контрольной группы.
На протяжении всего эксперимента динамика изменения массы тела выживших животных была в целом положительной, темпы прироста в группах, получив-
ших «Холина альфосцерат» во всех дозах, и в контрольной группе существенно не отличались (таблицы 1 - 4).
В таблицах 5, 6 представлены данные по влиянию исследуемого лекарственного средства на основные биохимические показатели белых крыс. Установлены разнонаправленные (в зависимости от пола) изменения показателей сыворотки крови экспериментальных животных. При в/б и п/к введении лекарственного средства в максимальной дозе 1 г/кг крысам-самцам происходило увеличение концентрации альбумина и креатинина в сыворотке крови. В то же время у крыс-самок эти же показатели незначительно снижались независимо от дозы и способа введения. Изменения активности АлАТ и ЩФ также носили разнонаправленный характер: у самцов - происходило уменьшение, а у самок - увеличение данных показателей независимо от пути введения тестируемо-
Таблица 1 - Среднегрупповые показатели массы тела ( X ± М ) крыс-самцов в граммах
Группа 2 день 4 день 8 день 10 день 12 день 15 день
Контроль 233,6±12,4 242,2±13,3 249,8±12,9 262,0±11,0 269,4±10,9 262,4±11,0
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 240,0±10,0 248,0±11,7 260,8±11,2 271,2±12,2 278,3±12,4 268,2±13,9
Холина альфосцерат 1 г/кг 230,0±7,6 243,3±8,6 243,5±6,7 252,8±5,7 258,3±4,9 248,5±4,9
Холина альфосцерат 650 мг/кг 244,8±9,4 238,7±13,1 254,5±16,0 264,2±17,3 270,8±18,0 258,5±17,0
Холина альфосцерат 270 мг/кг 245,3±6,0 245,7±5,3 259,7±6,2 268,7±7,2 271,8±7,9 263,7±7,7
Холина альфосцерат 90 мг/кг 245,0±6,1 251,2±6,3 275,8±6,2 280,0±7,7 276,3±8,4 265,0±7,8
Подкожное введение
Вода для инъекций 256,7±7,0 263,3±7,8 273,8±7,2 282,8±8,4 287,7±8,2 274,7±7,7
Холина альфосцерат 1 г/кг 240,8±8,8 243,3±8,3 256,0±9,5 262,3±9,6 270,3±10,5 267,7±9,9
Холина альфосцерат 650 мг/кг 244,8±9,4 246,7±9,8 260,5±10,2 266,7±11,0 269,3±10,9 261,8±10,4
Холина альфосцерат 270 мг/кг 238,5±4,8 245,0±6,1 258,3±6,5 258,7±5,4 269,0±7,3 255,7±6,3
Холина альфосцерат 90 мг/кг 245,7±6,1 252,5±7,3 265,3±8,3 275,0±9,5 280,8±11,3 257,2±10,4
Группа 2 день 4 день 8 день 10 день 12 день 15 день
Контроль 233,6±12,4 242,2±13,3 249,8±12,9 262,0±11,0 269,4±10,9 262,4±11,0
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 240,0±10,0 248,0±11,7 260,8±11,2 271,2±12,2 278,3±12,4 268,2±13,9
Холина альфосцерат 1 г/кг 230,0 ± 7,6 243,3 ± 8,6 243,5 ± 6,7 252,8 ± 5,7 258,3 ±4,9 248,5±4,9
Холина альфосцерат 650 мг/кг 244,8±9,4 238,7±13,1 254,5±16,0 264,2±17,3 270,8±18,0 258,5±17,0
Холина альфосцерат 270 мг/кг 245,3±6,0 245,7±5,3 259,7±6,2 268,7±7,2 271,8±7,9 263,7±7,7
Холина альфосцерат 90 мг/кг 245,0±6,1 251,2±6,3 275,8±6,2 280,0±7,7 276,3±8,4 265,0±7,8
Подкожное введение
Вода для инъекций 256,7±7,0 263,3±7,8 273,8±7,2 282,8±8,4 287,7±8,2 274,7±7,7
Холина альфосцерат 1 г/кг 240,8±8,8 243,3±8,3 256,0±9,5 262,3±9,6 270,3±10,5 267,7±9,9
Холина альфосцерат 650 мг/кг 244,8±9,4 246,7±9,8 260,5±10,2 266,7±11,0 269,3±10,9 261,8±10,4
Холина альфосцерат 270 мг/кг 238,5±4,8 245,0±6,1 258,3±6,5 258,7±5,4 269,0±7,3 255,7±6,3
Холина альфосцерат 90 мг/кг 245,7±6,1 252,5±7,3 265,3±8,3 275,0±9,5 280,8±11,3 257,2±10,4
Таблица 2 - Среднегрупповые показатели массы тела (х ± £>х ) крыс-самок в граммах
Таблица 3 - Среднегрупповые показатели массы тела (X ± 8х ) мышей-самцов в граммах
Группа 2 день 4 день 8 день 10 день 12 день 15 день
Контроль 22,0±0,7 23,3±0,7 24,2±0,9 24,5±0,7 25,8±0,7 24,5±0,7
В т т зибрюшинное введение
Вода для инъекций 21,5±0,4 22,0±0,7 25,7±0,4 25,7±0,4 26,3±0,3 26,3±0,3*
Холина альфосцерат 1 г/кг 23,2±0,4 24,5±0,8 23,7±0,7 23,8±0,9 25,0±1,0 25,2±0,9
Холина альфосцерат 650 мг/кг 23,2±0,5 25,3±0,6* 26,5±0,4* 26,3±0,6 30,5±1,5* 27,7±0,7*
Холина альфосцерат 270 мг/кг 22,8±0,7 23,0±0,7 23,3±0,7 23,0±0,8 24,8±0,8 24,0±0,6
Холина альфосцерат 90 мг/кг 21,7±0,6 22,0±0,4 22,5±0,6* 22,6±0,6* 23,5±0,7* 23,7±0,6
Подкожное введение
Вода для инъекций 23,4±0,7 22,8±0,8 23,4±0,8 23,6±0,7 24,4±0,8 24,0±0,9
Холина альфосцерат 1 г/кг 22,2±0,6 25,5±0,5 25,3±0,8 24,3±2,3 26,8±3,3 26,3±0,9
Холина альфосцерат 650 мг/кг 24,0±0,7 23,8±0,6 23,8±0,7 24,0±0,7 25,3±0,7 25,3±0,6
Холина альфосцерат 270 мг/кг 23,7±0,3 25,0±0,6 24,5±0,4 23,7±0,6 25,3±0,3 24,5±0,2
Холина альфосцерат 90 мг/кг 22,1±1,0 24,8±0,9 24,8±1,1 25,5±1,1 26,3±0,7 25,5±1,2
Примечание: здесь и далее: * - достоверные отличия от контроля (р<0,05)
Таблица 4 - Среднегрупповые показатели массы тела (X ± Ъх ) мышей-самок в граммах
Группа 2 день 4 день 8 день 10 день 12 день 15 день
Контроль 20,8±0,5 20,2±0,3 21,3±0,8 22,0±1,1 22,2±1,0 21,8±0,8
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 21,0±0,3 20,8±0,3 21,0±0,5 21,3±0,4 22,5±0,4 21,7±0,3
Холина альфосцерат 1 г/кг 20,2±0,3 19,8±0,6 21,0±0,4 21,8±0,4 22,0±0,4 22,8±0,4
Холина альфосцерат 650 мг/кг 21,7±0,3 21,0±0,6* 21,6±0,8 24,2±1,2 24,4±1,3 23,4±1,7
Холина альфосцерат 270 мг/кг 20,8±0,2 20,2±0,5 22,3±0,6 23,0±0,7 23,2±0,7 21,8±0,3
Холина альфосцерат 90 мг/кг 21,0±0,9 20,2±0,7 21,3±1,0 20,5±0,6 21,5±0,6 20,8±0,6
Подкожное введение
Вода для инъекций 21,0±0,8 20,0±1,1 20,7±0,7 21,8±0,8 22,3±0,7 21,2±0,7
Холина альфосцерат 1 г/кг 21,0±0,7 20,8±0,5 21,0±0,4 21,5±1,2 22,5±0,9 21,5±0,3
Холина альфосцерат 650 мг/кг 21,7±0,6 20,8±0,4 21,8±0,3 22,7±0,8 23,0±0,6 21,5±0,5
Холина альфосцерат 270 мг/кг 20,7±0,7 19,7±0,4 20,3±0,7 20,8±0,8 21,8±0,6 21,2±0,6
Холина альфосцерат 90 мг/кг 21,7±0,6 20,8±0,4 21,8±0,3 22,2±0,4 22,7±0,6 22,2±0,7
Таблица 5 - Биохимические показатели сыворотки крови крыс-самцов (х ± Ъх)
Группа Альбумин, г/л ЩФ, Е/л Креатинин, мкмоль/л Глюкоза, ммоль/л АлАТ, Е/л
Контроль 31,4 ± 2,5 340,2 ± 49,9 58,1 ± 1,4 7,1 ± 0,9 102,1 ± 10,1
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 31,1 ± 2,1 314,0 ± 89,6 55,3 ± 4,8 7,2 ± 0,4 92,5 ± 29,1
Холина альфосцерат 1 г/кг 33,6 ± 1,8 267,5 ± 37,0 61,8 ± 6,7 6,7 ± 0,3 84,3 ± 15,2
Холина альфосцерат 650 мг/кг 32,3 ± 3,8 278,6 ± 88,3 53,6 ± 2,1 6,9 ± 0,2 95,0 ± 2,9
Холина альфосцерат 270 мг/кг 31,1 ± 1,1 301,1 ± 81,6 54,4 ± 3,3 6,9 ± 0,2 96,4 ± 4,1
Холина альфосцерат 90 мг/кг 32,1 ± 1,4 311,4 ± 90,8 55,8 ± 4,3 6,9 ± 0,3 98,0 ± 8,0
Подкожное введение
Вода для инъекций 31,6 ± 1,6 355,0 ± 22,2 55,3 ± 3,2 7,1 ± 0,2 93,0 ± 10,9
Холина альфосцерат 1 г/кг 34,0 ± 0,8 292,8 ± 48,9 63,3 ± 0,9 7,1 ± 0,2 84,0 ± 10,6
Холина альфосцерат 650 мг/кг 31,3 ± 1,2 285,6 ± 55,1 53,2 ± 5,1 7,5 ± 0,7 93,4 ± 9,3
Холина альфосцерат 270 мг/кг 32,4 ± 0,4 314,2 ± 52,2 56,8 ± 1,9 6,9 ± 0,4 95,1 ± 3,2
Холина альфосцерат 90 мг/кг 33,9 ± 0,9 324,2 ± 74,1 57,8 ± 2,6 6,8 ± 0,4 96,20 ± 2,86
Таблица 6 - Биохимические показатели сыворотки крови крыс-самок (х ± £!х )
Группа Альбумин, г/л ЩФ, Е/л Креатинин, мкмоль/л Глюкоза, ммоль/л АлАТ, Е/л
Контроль 34,4±1,6 331,2±12,4 62,2±2,9 7,3±0,3 84,7±12,1
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 27,9±3,3 325,0±21,1 58,5±5,3 6,9±0,8 74,0±12,6
Холина альфосцерат 1 г/кг 32,5±1,3 381,8±58,3 54,8±3,5 7,4±0,1 89,0±6,6
Холина альфосцерат 650 мг/кг 32,2±1,7 265,7±74,8 61,3±1,5 6,9±0,2 84,1±9,1
Холина альфосцерат 270 мг/кг 32,1±1,4 298,4±80,1 54,8±4,2 7,1±0,3 86,0±8,0
Холина альфосцерат 90 мг/кг 31,1±1,6 316,6±70,2 55,8±3,5 7,1±0,2 88,0±7,1
Подкожное введение
Вода для инъекций 29,3±4,7 338,5±88,0 53,3±3,9 6,3±0,8 76,0±14,2
Холина альфосцерат 1 г/кг 31,4±2,2 354,8±66,5 57,3±5,5 7,1±0,6 92,5±14,2
Холина альфосцерат 650 мг/кг 31,1±1,2 298,2±22,8 55,4±2,2 6,9±0,4 87,6±3,2
Холина альфосцерат 270 мг/кг 32,4±1,0 302,2±54,5 56,8±1,6 7,0±0,6 97,3±4,1
Холина альфосцерат 90 мг/кг 33,4±2,1 295,0±34,7 56,2±3,7 6,9±0,7 81,0±7,1
го средства. Однако все вышеописанные изменения оказались статистически незначимы (р > 0,05). Уровень глюкозы в сыворотке крови существенно не изменялся как у самцов, так и у самок (таблицы 5, 6).
При проведении некропсий у погибших животных, а также на 15-е сутки после введения «Холина альфосцерата», при внешнем осмотре и исследовании трупов не было установлено различий между крысами подопытных (с применением разных доз) и контрольных групп: шерстный покров был гладкий, блестящий, очагов облысения не наблюдалось. Кожа эластичная, подвижная, подкожная клетчатка умеренно выражена, видимые слизистые оболочки бледные, чистые, без изъязвлений и посторонних наложений, патологические выделения из естественных отверстий тела отсутствовали. При вскрытии грудной и
брюшной полостей отмечалось анатомически правильное расположение внутренних органов. Макроскопически различимых признаков патологии внутренних органов не установлено. Во время некропсии были получены следующие внутренние органы: легкие, сердце, печень, селезенка и надпочечники для определения их массы и расчета весовых коэффициентов (отношение массы органа к массе тела).
Установлено, что однократное введение лекарственного средства как в/б, так и п/к крысам (самцам и самкам) не приводило к достоверным изменениям массы сердца и легких, однако способствовало снижению (р < 0,05) массы печени по сравнению с интактными животными (таблицы 7, 8). Изменения массы селезенки носили разнонаправленный характер: у крыс-самцов этот показатель снижался (р < 0,05), в то
Таблица 7 - Среднегрупповые показатели массы органов ( X ± Ьх ) _ крыс-самцов в граммах__
Группа Сердце Легкие Печень Селезенка Надпочечники
Контроль 0,832±0,038 1,322±0,112 10,026±0,425 1,284±0,084 0,032±0,002
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,867±0,076 1,313±0,054 7,671±0,541 0,979±0,046 0,026±0,005
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,774±0,030 1,597±0,170 6,918±0,217* 0,796±0,099* 0,036±0,001
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,902±0,093 1,337±0,118 7,304±0,636* 1,030±0,090 0,041±0,004
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,898±0,053 1,254±0,067 7,128±0,317* 0,861±0,111* 0,036±0,003
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,951±0,058 1,313±0,046 6,909±0,439* 0,860±0,063* 0,044±0,012
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,909±0,067 1,257±0,057 7,913±0,858 0,952±0,079 0,034±0,005
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,841±0,065 1,393±0,088 7,830±0,579* 0,96±0,106* 0,038±0,003
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,890±0,033 1,372±0,059 8,408±0,591 0,708±0,033* 0,044±0,002*
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,846±0,035 1,364±0,099 7,370±0,604* 0,890±0,103* 0,036±0,002
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,802±0,049 1,086±0,048 6,198±0,268* 0,556±0,141* 0,030±0,005
Таблица 8 - Среднегрупповые показатели массы органов ( X ± Ь*х ) _крыс-самок в граммах_
Группа Сердце Легкие Печень Селезенка Надпочечники
Контроль 0,687±0,051 1,250±0,100 9,032±0,434 0,650±0,030 0,045±0,005
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,649±0,019 1,129±0,038 7,880±0,218 0,668±0,047 0,057±0,006*
Холина альфосцерат1 г/кг 0,685±0,042 1,264±0,064 6,495±0,292* 0,835±0,016* 0,067±0,005*
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,587±0,134 1,231±0,074 5,678±0,177* 0,708±0,017 0,049±0,005
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,764±0,024 1,343±0,046 6,168±0,392* 0,886±0,051* 0,062±0,008*
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,743±0,034 1,271±0,047 5,949±0,292* 0,779±0,081 0,056±0,005
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,610±0,031 1,065±0,084 8,229±0,251 0,762±0,061 0,050±0,005
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,701±0,025 1,543±0,293 5,938±0,311* 1,166±0,37* 0,072±0,003*
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,718±0,035 1,231±0,041 5,936±0,271* 0,810±0,036* 0,065±0,006*
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,707±0,075 1,340±0,175 5,494±0,390* 0,712±0,077 0,055±0,006
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,727±0,038 1,042±0,043 6,424±0,202* 0,848±0,034* 0,038±0,010
время как у крыс-самок - увеличивался (р < 0,05) по сравнению с контролем. Изменения массы надпочечников в среднем не имели достоверных отличий от контрольной группы.
Однократное введение «Холина аль-фосцерата» как в/б, так и п/к мышам-самцам не приводило к достоверным измене-
ниям массы сердца, легких, селезенки и надпочечников, в то же время отмечено увеличение (р < 0,05) массы печени по сравнению с контролем (таблица 9).
После однократного введения исследуемого средства как в/б, так и п/к мышам-самкам не было отмечено достоверных изменений массы сердца, печени и
Таблица 9 - Среднегрупповые показатели массы органов ( X ± ) _ мышей-самцов в граммах__
Группа Сердце Легкие Печень Селезенка Надпочечники
Контроль 0,122±0,015 0,185±0,016 1,018±0,030 0,100±0,001 0,005±0,002
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,129±0,005 0,181±0,003 1,220±0,129 0,107±0,018 0,003±0,001
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,149±0,003 0,153±0,012 1,379±0,036* 0,088±0,006 0,006±0,002
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,142±0,006 0,181±0,009 1,455±0,008* 0,108±0,022 0,004±0,002
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,112±0,005 0,163±0,013 1,183±0,063 0,092±0,006 0,006±0,002
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,131±0,013 0,170±0,011 0,981±0,056 0,080±0,009 0,004±0,001
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,098±0,040 0,200±0,018 1,125±0,078 0,111±0,013 0,002±0,001
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,155±0,010 0,192±0,007 1,315±0,050* 0,109±0,011 0,003±0,001
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,126±0,011 0,169±0,004 1,182±0,061 0,098±0,010 0,004±0,002
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,139±0,014 0,170±0,009 1,361±0,013* 0,084±0,004 0,004±0,002
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,135±0,006 0,199±0,028 1,204±0,132 0,101±0,012 0,002±0,000
надпочечников по сравнению с контролем. Установлены незначительные изменения массы селезенки при п/к способе введения. В целом отмечено увеличение (р < 0,05) массы легких (таблица 10).
Установлено, что массовые коэффициенты (таблицы 11, 12) для сердца, легких и надпочечников у крыс (самцов и самок) преимущественно не отличались от контроля, в то же время отношение массы
печени к массе тела достоверно снижалось. Массовые коэффициенты селезенки у крыс-самцов уменьшались (р < 0,05), а у крыс-самок в большинстве случаев увеличивались (р < 0,05) по сравнению с интакт-ными животными.
После однократного введения исследуемого лекарственного средства как в/б, так и п/к мышам-самцам массовые коэффициенты сердца, легких, селезенки и над-
Таблица 10 - Среднегрупповые показатели массы органов (X ± 5х )
мышей-самок в граммах
Группа Сердце Легкие Печень Селезенка Надпочечники
Контроль 0,102±0,009 0,127±0,004 1,040±0,162 0,058±0,006 0,008±0,003
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,104±0,002 0,157±0,003* 1,041±0,225 0,065±0,013 0,002±0,000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,108±0,003 0,152±0,009 0,943±0,104 0,073±0,005 0,007±0,001
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,120±0,003 0,150±0,008 1,072±0,048 0,073±0,002 0,007±0,002
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,112±0,006 0,165±0,008* 1,020±0,020 0,062±0,003 0,004±0,001
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,094±0,004 0,144±0,013 0,902±0,072 0,058±0,009 0,003±0,000
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,112±0,009 0,191±0,049* 0,992±0,136 0,090±0,023* 0,003±0,000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,137±0,006 0,161±0,006* 1,089±0,039 0,069±0,002 0,008±0,001
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,133±0,007 0,161±0,008* 1,118±0,035 0,088±0,002* 0,008±0,002
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,105±0,006 0,128±0,020 1,052±0,040 0,071±0,007 0,005±0,001
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,107±0,009 0,153±0,010 0,922±0,085 0,058±0,005 0,003±0,000
почечников статистически не отличались от контроля (р > 0,05), в то же время отмечено увеличение (р < 0,05) этого же показателя для печени (таблица 13).
Введение «Холина альфосцерата» мышам-самкам не приводило к достоверным изменениям весовых коэффициентов сердца, печени и надпочечников по сравнению с контролем. Установлено незначительное увеличение данных показателей для селезенки и легких (таблица 14).
При проведении исследования лекарственного средства «Холина альфос-
церат», раствор для инъекций 250 мг/мл, 4 мл № 5, были установлены следующие факты:
- самки крыс и мышей более чувствительны к действию токсических доз «Хо-лина альфосцерата»;
- однократное применение данного лекарственного средства во всех тестируемых дозах вызывало снижение массовых коэффициентов печени у крыс-самцов и самок. У крыс-самцов также отмечалось снижение массового коэффициента селезенки.
Таблица 11 - Среднегрупповые массовые коэффициенты органов крыс-самцов (X ± Ьх )
Группа Масса сердца/ массу тела Масса легких/ массу тела Масса печени/ массу тела Масса селезенки/ массу тела Масса надпочечников/ массу тела
Контроль 0,0036±0,0001 0,0056±0,0003 0,0430±0,0006 0,0055±0,0004 0,0001± 0,0000
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,0032±0,0002 0,0049±0,0002 0,0365±0,0011 0,0045±0,0001 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0032±0,0001 0,0065±0,0006 0,0285±0,0005* 0,0033±0,0004* 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0033±0,0001 0,0050±0,0002 0,0269±0,0006* 0,0038±0,0003* 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0036±0,0001 0,0046±0,0002 0,0263±0,0005* 0,0032±0,0004* 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0033±0,0002 0,0049±0,0002 0,0258±0,0007* 0,0032±0,0002* 0,0002± 0,0001
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,0033±0,0002 0,0046±0,0004 0,0353±0,0009 0,0047±0,0001 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0033± 0,0002 0,0055±0,0003 0,0305±0,0011* 0,0037±0,0004* 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0033± 0,0002 0,0051±0,0002 0,0310±0,0008* 0,0026±0,0002* 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0031± 0,0001 0,0050±0,0003 0,0271±0,0016* 0,0033±0,0003* 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0031±0,0001 0,0042±0,0001* 0,0240±0,0006* 0,0021±0,0005* 0,0001±0,0000
Таблица 12 - Среднегрупповые массовые коэффициенты органов крыс-самок (X ± Sx )
Группа Масса сердца/ массу тела Масса легких/ массу тела Масса печени/ массу тела Масса селезенки/ массу тела Масса надпочечников/ массу тела
Контроль 0,0034±0,0002 0,0063±0,0007 0,0448±0,0023 0,0032±0,0002 0,0002±0,0000
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,0032±0,0001 0,0055±0,0002 0,0387±0,0008 0,0033±0,0003 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0035±0,0002 0,0065±0,0004 0,0332±0,0008* 0,0043±0,0001* 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0028±0,0007 0,0058±0,0004 0,0269±0,0008* 0,0034±0,0001 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0035±0,0002 0,0061±0,0004 0,0276±0,0007* 0,0040±0,0002* 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0033±0,0001 0,0056±0,0003 0,0262±0,0009* 0,0034±0,0003 0,0002±0,0000
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,0031±0,0001 0,0054±0,0003 0,0465±0,0006 0,0039±0,0002 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0035±0,0002 0,0077±0,0017 0,0291±0,0009* 0,0059±0,0020* 0,0004±0,0000*
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0034±0,0002 0,0059±0,0002 0,0283±0,0009* 0,0039±0,0003 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0033±0,0002 0,0062±0,0005 0,0259±0,0008* 0,0033±0,0002 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0033±0,0001 0,0048±0,0002 0,0293±0,0007* 0,0039±0,0003 0,0002±0,0000
Таблица 13 - Среднегрупповые массовые коэффициенты органов мышей-самцов ( X ± Sx )
Группа масса сердца/ массу тела масса легких/ массу тела масса печени/ массу тела масса селезенки/ массу тела масса надпочечников / массу тела
Контроль 0,0051±0,0007 0,0077±0,0003 0,0425±0,0009 0,0042±0,0001 0,0002±0,0001
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,0049±0,0002 0,0069±0,0002 0,0464±0,0052 0,0041±0,0007 0,0005±0,0004
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0064±0,0003 0,0066±0,0005 0,0592±0,0024* 0,0038±0,0001 0,0002±0,0001
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0061±0,0003 0,0078±0,0003 0,0624±0,0009* 0,0046±0,0009 0,0002±0,0001
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0048±0,0001 0,0070±0,0004 0,0507±0,0001* 0,0039±0,0001 0,0003±0,0001
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0057±0,0005 0,0074±0,0002 0,0426±0,0008 0,0035±0,0003 0,0002±0,0000
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,0041±0,0017 0,0081±0,0007 0,0456±0,0026 0,0045±0,0004 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0061±0,0004 0,0076±0,0004 0,0517±0,0011* 0,0043±0,0004 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0056±0,0006 0,0075±0,0003 0,0526±0,0050* 0,0044±0,0006 0,00018±0,00008
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0054±0,0007 0,0066±0,0004 0,0524±0,0008* 0,0032±0,0001* 0,00015±0,00006
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0050±0,0005 0,0073±0,0008 0,0440±0,0040 0,0037±0,0004 0,00009±0,00002
Таблица 14 - Среднегрупповые массовые коэффициенты (X ± Sx ) __ органов мышей-самок _
Группа масса сердца/ массу тела масса легких/ массу тела масса печени/ массу тела масса селезенки/ массу тела масса надпочечников/ массу тела
Контроль 0,0045±0,0002 0,0056±0,0003 0,0456±0,0061 0,0026±0,0003 0,0003±0,0001
Внутрибрюшинное введение
Вода для инъекций 0,0049±0,0002 0,0053±0,0001 0,0485±0,0097 0,0030±0,0006 0,0001±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0047±0,0004 0,0066±0,0004 0,0402±0,0030 0,0032±0,0002 0,0003±0,0000
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0049±0,0002 0,0062±0,0007 0,0438±0,0037 0,0030±0,0002 0,0003±0,0001
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0045±0,0003 0,0067±0,0003 0,0415±0,0021 0,0025±0,0002 0,0002±0,0001
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0045±0,0002 0,0068±0,0003* 0,0429±0,0024 0,0028±0,0004 0,0001±0,0000
Подкожное введение
Вода для инъекций 0,0053±0,0004 0,0091±0,0024* 0,0472±0,0063 0,0043±0,0011* 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 1 г/кг 0,0061±0,0004 0,0072±0,0008 0,0486±0,0046 0,0031±0,0003 0,0003±0,0001
Холина альфосцерат 650 мг/кг 0,0051±0,0002 0,0062±0,0004 0,0432±0,0027 0,0034±0,0001* 0,0003±0,0001
Холина альфосцерат 270 мг/кг 0,0045±0,0002 0,0055±0,0010 0,0451±0,0018 0,0031±0,0004 0,0002±0,0000
Холина альфосцерат 90 мг/кг 0,0048±0,0002 0,0068±0,0002* 0,0411±0,0022 0,0026±0,0002 0,0001±0,0000
- однократное введение «Холина аль-фосцерата» во всех тестируемых дозах индуцировало повышение массовых коэффициентов печени у мышей-самцов, тогда как у мышей самок в аналогичных экспериментах установлено незначительное увеличение массовых коэффициентов селезенки и легких.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
По результатам исследования острой токсичности лекарственного средства «Холина альфосцерат»: данные токсикометрии, наблюдение за экспериментальными животными в постинтоксикационном периоде острого отравления, а также данные биохимического исследования крови и некропсии позволили отнести вышеупомянутое средство к классу малотоксичных лекарственных веществ при однократном введении. Исходя из того, что однократное внутрибрюшинное или подкожное применение «Холина альфос-церата» в дозе 1 г/кг не вызывало гибели 50% выборки животных, а, значит, ЛД50 выше 500 мг/кг, данное лекарственное средство можно отнести к классу малотоксичных, что согласуется с данными
литературы [19]. Состояние переживших острую интоксикацию животных свидетельствовало о хорошей переносимости лекарственного средства «Холина альфосцерат» в дозах, превышающих максимальные терапевтические для человека в 11 раз [19, 20].
SUMMARY
T.O. Pavlut, E.V. Blagun, E.O. Poleschuk, A.Yu. Molchanova, E.I. Kalinovskaya, S.V. Mankovskaya STUDY OF ACUTE TOXICITY OF THE DRUG «CHOLINE-ALFOSCERATE» Assessment of toxicity and safety of generic medicines is important and helps to prevent possible negative effects. The acute toxicity of the drug «Choline-Alfoscerate» (solution for injections, 250 mg /ml, 4 ml of number 5) manufactured by «Borisov factory of medical preparations», Borisov, Republic of Belarus, after intraperitoneal and subcutaneous administration was studied.
It was shown that the drug has low toxic-ity in acute experiments. Body weight of the animals, the amount of consumed food and water were not significantly changed. Changes in biochemical parameters of blood serum
of experimental and control animals were not statistically significant but depended on gender. The most sensitive to the action of the drug of interest were the liver, spleen, and to a lesser extent the lungs. The same relationship is preserved with respect to mass coefficients (the ratio of organ weight to body weight).
Keywords: choline alfoscerate, toxicity, safety, survival rate, biochemical parameters, necropsy.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аракелян, Г.В. Эффективность холина альфосцерата при цереброваску-лярных нарушениях / Г.В. Аракелян, Н.В. Стуров // Фундаментальные исследования.
- 2006. - № 1 - С. 22.
2. Изучение эффективности препарата Церетон в лечении больных пожилого возраста, страдающих хронической ишемией головного мозга / А.В. Соловьева [и др.] // РМЖ. - 2009. - Т. 17. - № 23. - С. 1522-1525.
3. Применение Церетона у больных с умеренными когнитивными расстройствами сосудистого генеза / Т.Т. Батышева [и др.] // Трудный пациент. - 2009. - Т. 7. - № 4-5. - С. 10-12.
4. Alpha-glycerophosphocholine in the mental recovery of cerebral ischemic attacks / S.G. Barbagallo [et al.] // An Italian multicenter clinical trial. Ann NY Acad. Sci.
- 1994. - Vol. 717. - P. 253-269.
5. Glyceryl-Phosphorylcholine in dementia / L. Parnetti [et al.] // Alpha. Drugs Aging. - 1993. Vol. 3. - № 2. - P. 159-164.
6. Choline alphoscerate in cognitive decline and in acute cerebrovascular disease: an analysis of published clinical data / L. Parnetti [et al.] // Mech Ageing Dev. - 2001.
- Vol. 122. - № 16. - P. 2041-2055.
7. Шмырев, В.И. Опыт применения отечественного препарата церетон у больных в остром периоде ишемического инсульта / В.И. Шмырев, С.М. Крыжанов-ский // Журнал неврологии и психиатрии.
- 2008. - № 12. - С. 53-56.
8. Холинергическая коррекция у пациентов с травматическими и ишемически-ми поражениями головного мозга / Журнал «Медицина неотложных состояний».
- 2011. - 7-8 (38-39). [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.mif-ua. com/archive/article/24194. - Дата доступа 01.11.2013.
9. Церетон в лечении когнитивных нарушений у больных дисциркуляторной и посттравматической энцефалопатией / Е.Г. Менделевич [и др.] // РМЖ. - 2009. -Т. 17. - № 5. - С. 382-387.
10. Никонов, В.В. Возможности применения холина альфосцерата для лечения постгипоксической энцефалопатии / В.В. Никонов, И.Б. Савицкая // Журнал «Медицина неотложных состояний». - 2011. - 1-2 (32-33). [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.mif-ua.com/archive/ article/16262. - Дата доступа 01.11.2013.
11.EuropeanConventionfortheProtection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes, N 123 of 18 March 1986; Protocol of Amendment to the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and other Scientific Purposes, Strasbourg, 22 June 1998; European Convention on the Protection of Pet Animals N 125 of 13 November 1987. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://ec.europa.eu/world/agreements/ prepareCreateTreatiesWorkspace/treatiesGe neralDatado?step=0&redirect=true&treatyId. - Дата доступа 17.01.2013.
12. Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP): Руководящий нормативный документ РД-126-91. - М., 1992. - 80 c.
13. Технический кодекс установившейся практики. ТКП 125-2008 (02040) Надлежащая лабораторная практика. Утверждено и введено Постановлением Министерства здравоохранения Респ. Беларусь 28 марта 2008 г. № 56. Официальное издание МЗ РБ. - 35 с.
14. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. чл.-корр. РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.
15. Санитарные правила и нормы 2.1.2.12-18 - 2006. Устройство, оборудование и содержание экспериментально-биологических клиник (вивариев). Утверждено Постановлением Главного государственного санитарного врача Респ. Беларусь 31 окт. 2006 № 131.
16. Age-related anatomical changes in the rat hippocampus: retardation by choline alfoscerate treatment / E. Bronzetti [et al.] // Arch Gerontol Geriatr. - 1991. - Vol. 13. - P. 167-178.
17. Sahu, A.P. Effect of chronic choline availability on lung and lymp nodes of rat / A.P. Sahu, R.K. Upreti // J. Biosci. - 1986. -Vol. 10. - P. 29-36.
18. Chapter «Choline», Vitamin Tolerance of Animals / Subcommittee on Vitamin Tolerance, Committee on Animal Nutrition, National Research Council // National Academy Press. Wahington DC. -1987 - P. 77-83. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.nap.edu/ catalog.php?record_id=949. - Дата доступа 17.01.2013.
19. Hodge, H.C. Clinical Toxicology of Commercial Products. Acute Poisoning /
H.C. Hodge, R.E Gosselin, R.P. Smith. - Ed. IV. - Baltimore, 1975. - 427 p.
20. Гуськова, Т.А. Токсикология лекарственных средств / Т.А. Гуськова. - М.: «Русский врач», 2003. - С. 99-116.
Адрес для корреспонденции:
220072, Республика Беларусь,
г. Минск, ул. Академическая, 28,
ГНУ «Институт физиологии НАНБеларуси»,
тел. 8(017)-284-22-71,
tanja281286@mail.ru,
Павлють Т.О.
Поступила 20.12.2013 г.
