CC BY
32
© В.А. Омельченко, В.К. Шорманов, 2007 УДК 615.21.21;340.6
В.А. Омельченко, В.К. Шорманов ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ИЗОЛИРОВАНИЯ 2,4,6-ТРИНИТРОМЕТИЛБЕНЗОЛА
ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Курский государственный медицинский университет (ректор — проф. А.И. Лазарев)
В качестве изолирующего агента для извлечения 2,4,6-тринитрометилбензола из биологического материала предложен ацетонитрил. Определены оптимальные условия изолирования 2,4,6-тринитрометилбензола из ткани трупной печени человека ацетонитрилом и дана количественная оценка результатов изолирования. ключевые слова: 2,4,6-тринитрометилбензол, изолирование.
THERE ARE SpECIFICATIONS OF 2,4,6-TRINITROMETHYLBENzENE ISOLATION FROM BIOLOGICAL MATERIAL
V.A. Omelchenko, V.K. Shormanov Acetonitrile was taken as an isolating agent for the extraction of 2,4,6-trinitromethylbenzene from biological material. Optimal conditions of the 2,4,6-trinitromethylbenzene isolation from the tissue of human corpseliver by the acetonitrile were determined, and the quantitative estimation of the isolation results was given. Keywords: 2,4,6-trinitromethylbenzene, 2,4,6-trinitrotoluene, isolation.
2,4,6-Тринитрометилбензол (2,4,6-тринитротолуол, 2,4,6-ТНТ, ТНТ, тротил, тол) — желтоватое кристаллическое вещество с температурой плавления 80,85оС. Растворяется в органических растворителях, плохо растворяется в воде (0,013%) [2]. Давно и широко используется в качестве взрывчатого вещества [2, 4]. 2,4,6-Тринитрометилбензол токсичен по отношению к теплокровным животным и человеку. ЛД20 2,4,6-тринитрометилбензола для мышей составляет 250 мг/кг, ЛД50 для крыс — 510 мг/кг [3, 6]. Известны случаи отравления данным веществом, в том числе с летальным исходом [4, 5, 6].
Большой объём промышленного производства 2,4,6-тринитрометилбензола, его широкое применение, токсичность, наличие случаев летального отравления обусловливает необходимость изучения этого соединения в судебно-химическом отношении. Вместе с тем многие вопросы химико-токсикологичекого анализа 2,4,6-тринитро-метилбензола остаются недостаточно разработанными.
цель данного исследования — определение оптимальных условий изолирования 2,4,6-тринитрометилбензола из трупного материала.
экспериментальная часть. Объектом исследования явился 2,4,6-тринитрометилбензол — стандарт — с содержанием основного вещества не менее 99,9 %.
В процессе исследования изучали особенности извлечения 2,4,6-тринитрометилбензола из биологического материала изолирующими агентами различной химической природы (ацетонитрилом, гексаном, диоксаном-1,4, хлороформом, ацетоном, метанолом, этилацетатом, ледяной уксусной кислотой, ДМФА, диэтиловым эфиром, водой, 8%-ым раствором уксусной кислоты). Готовили модельные смеси 2,4,6-тринитрометилбензола с мелкоизмельчённой тканью трупной печени человека из расчёта 25 мг исследуемого вещества в 25 г биологической ткани. Осуществляли двукратное изолирование 2,4,6-тринитрометилбензола из его модельных смесей с тканью трупной печени человека при соотношении изолирующего агента и биологического материала 2:1 (по массе). Продолжительность каждого настаивания составляла 60 минут. Отдельные извлечения, полученные из каждой модельной смеси, объединяли. Часть объединенного извлечения наносили на пластину типа «Силуфол» иУ-254 и хроматографировали в присутствии вещества-свидетеля, используя в качестве подвижной фазы систему растворителей гексан-пропанол-2 (8:2). Хроматограммы детектировали в УФ-свете. Анализируемое вещество идентифицировали по величине Ш, совпадающей с величиной КГ вещества-свидетеля (0,67±0,03). Участок хроматограммы с пятном анализируемого вещества вырезали, помещали в пробирку и
элюировали 2,4,6-тринитрометилбензол этанолом в течение 10 минут. Оптическую плотность полученного этанольного элюата измеряли при длине волны 228 нм. Расчёты количественного содержания осуществляли, используя уравнение градуировочного графика.
Применяя описанную выше схему изолирования, очистки и определения 2,4,6-тринитрометилбензола, исследовали зависимость величины степени извлечения рассматриваемого соединения из биологического материала от продолжительности контакта изолирующей жидкости с биологическим объектом, кратности настаивания и количественного соотношения изолирующего агента и биологической ткани.
Изучена зависимость степени извлечения 2,4,6-три-нитрометилбензола ацетонитрилом от концентрации анализируемого соединения в биологическом объекте. В каждом случае 25,00 г мелкоизмельченной трупной печени человека, содержащей определенное количество 2,4,6-тринитрометилбензола (от 2,50 до 75,00 мг), заливали 50 г ацетонитрила и выдерживали в течение 45 минут при периодическом перемешивании. Извлечения сливали, а процесс настаивания повторяли по описанной выше схеме. Отдельные извлечения объединяли и при необходимости упаривали в 4 раза. Часть объединенного извлечения наносили на хроматографическую пластину «Силуфол» иУ-254, и осуществляли хроматографирование в стеклянной камере, используя в качестве элюента систему растворителей гексан пропанол-2, взятых в соотношении 8:2 по объёму в присутствии вещества-свидетеля. Участок хроматограммы с анализируемым веществом вырезали и элюировали вещество 5 мл этанола. Оптическую плотность элюата измеряли на спектрофотометре СФ-46 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при аналитической длине волны 228 нм. В качестве фона использовали элюат, полученный в контрольном опыте. Количественное содержание рассматриваемого вещества рассчитывали с помощью уравнения градуировочного графика.
Результаты и их обсуждение. Результаты изолирования из трупной печени различными растворителями представлены в таблице 1. Сравнение результатов изолирования показало, что наибольшая степень извлечения рассматриваемого вещества достигается при использовании в качестве этилацетата.
Установлено, что максимальная степень извлечения 2,4,6-тринитрометилбензола из трупной печени достигается при продолжительности настаивания 45 минут.
Исследование зависимости степени извлечения 2,4,6-тринитрометилбензола от кратности настаивания
Таблица 1.
зависимость степени извлечения 2,4,6-тринитрометилбензола из ткани печени от природы изолирующего агента (двукратное изолирование, соотношение изолирующего агента и биологического материала 2:1 (по массе))
Как свидетельствуют данные эксперимента, представленные в таблице 3, увеличение содержания 2,4,6-тринитрометилбензола в модельных смесей в достаточно широком интервале концентраций (2,50-75,00 мг) при постоянной массе навески ткани печени (25,00 г) сопровождается лишь незначительным изменением значений степени извлечения, не превышающим 2%.
Таблица 3.
Результаты изолирования 2,4,6-тринитрометилбензола различных концентраций из ткани печени трупа человека
Изолирующий агент Степень извлечения х ±Д х
Ацетонитрил 90,38+2,85
Гексан 39,15+1,51
Диоксан-1,4 62,08±4,63
Хлороформ 74,33±5,01
Ацетон 83,90±3,23
Метанол 87,21±4,56
Этанол 66,26+3,38
Толуол 55,56+2,16
Этилацетат 81,52±4,42
Ледяная уксусная кислота 76,25±5,29
Диэтиловый эфир 45,94+2,65
Вода 6,52+0,83
8%-ый раствор уксусной кислоты 19,18+1,75
Внесено 2,4,6-тринитрометилбензола на 25 г ткани печени (мг) Найдено,% (п=5, р=0,95)
X в А X
2,5 89,85 3,48 1.56 4,33
5,0 89,94 3,05 1,36 3,78
10,0 90,25 2,67 1,19 3,30
25,0 90,42 2,33 1,04 2,89
50,0 90,56 2,10 0,94 2,61
75,0 90,31 1,82 0,81 2,25
показало, что для достаточно полного извлечения рассматриваемого вещества из трупной печени необходимо двукратное настаивание биологического материала с изолирующим агентом при условии, что количество изолирующей жидкости в каждом случае должно превышать количество биологического материала как минимум в два раза по массе (таблица 2).
Использование в качестве изолирующего агента ацетонитрила и предложенные условия изолирования позволяют достичь достаточно высокой степени извлечения анализируемого вещества из ткани печени трупов. Открываемый минимум составляет 2 мг 2,4,6-тринитро-метилбензола в 100 г биологического материала. Предложенная методика хорошо воспроизводима, отличается простотой выполнения, не требует применения сложной аппаратуры и значительных затрат времени на воспроизведение. Она может быть использована в практике при
Таблица 2.
зависимость степени извлечения 2,4,6-тринитрометилбензола из ткани трупной печени от количественного соотношения изолирующего агента и биологического материала и кратности изолирования
Навеска Содержание Количество Порядковый Найдено 2,4,6-
биологического 2,4,6-тринитро-метилбензола изолирующего номер тринитрометил-бензола
материала, г в навеске, мг агента, г настаивания мг %
5,00 1 2,0055 40,11
5,00 2 1,2175 24,35
1+2 3,2230 64,46
5,00 5,00 5,00 3 0,9325 18,65
1+2+3 4,1555 83,11
5,00 4 0,4545 9,09
1+2+3+4 4,6100 92,20
10,00 1 3,3210 66,42
10,00 2 1,1515 23,03
1+2 4,4725 80,45
5,00 5,00 10,00 3 0,3105 6,21
1+2+3 4,7830 95,66
10,00 4 0,0970 1,94
1+2+3+4 4,8800 97,60
12,50 1 3,4425 68,85
12,50 2 1,0965 21,93
1+2 4,5390 90,78
5,00 5,00 12,50 3 0,2560 5,12
12,50 1+2+3 4,7950 95,90
4 0,0630 1,26
1+2+3+4 4,8580 97,16
15,00 1 3,6030 72,06
15,00 2 0,9375 18,75
1+2 4,5405 90,81
5,00 5,00 15,00 3 0,2470 4,94
1+2+3 4,7875 95,75
15,00 4 0,0470 0,94
1+2+3+4 4,8345 96,69
20,00 1 3,8380 76,76
20,00 2 0,8545 17,09
1+2 4,6925 93,85
5,00 5,00 20,00 3 0,1840 3,68
1+2+3 4,8765 97,53
20,00 4 0,0180 0,36
1+2+3+4 4,8945 97,89
проведении экспертизы в случае отравления 2,4,6-трини- 2. Определены оптимальные условия изолиро-
трометилбензолом. вания 2,4,6-тринитрометилбензола данным раство-
выводы рителем.
1. Показана целесообразность применения ацетони- 3. Дана количественная оценка изолирования аце-
трила в качестве изолирующего агента при химико-токси- тонитрилом рассматриваемого вещества из модельных кологическом исследовании 2,4,6-тринитрометилбензола. смесей с тканью печени. литература:
1. Гадаскина и.д., Филов Б.А. Превращения и определение промышленных органических ядов в организме. — Л.: Медицина, 1971. — С. 254-255.
2. грушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных выбросах в атмосферу. — Л.: Химия, 1986. — 207 с.
3. Нзмеров н.Ф., Саноцкий Н.Б., Сидоров к.к. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. — М.: Медицина, 1977. — 240 с.
4. комаров п.п., котлярова э.л., Сергеев С.н. Методика обнаружения тринитротолуола в биологических объектах // Судебно-медицинская экспертиза. — 1990. — Т. 33. — № 3. — С. 26-27.
5. лудевиг Р., лос к. Острые отравления. — М.: Медицина, 1983. — 559 с.
6. Могош г. Острые отравления. — Бухарест: Медицинское издательство, 1984. — 580 с.
© А.Л. Ураков, Н.С. Стрелков, Н.А. Уракова, Н.А. Михайлова, С.В. Суслонова, Т.Б. Пчеловодова, 2007 УДК 615.216.2.015.45:616-003.2
А.Л. Ураков, Н.С. Стрелков, Н.А. Уракова, Н.А. Михайлова, С.В. Суслонова, Т.Б. Пчеловодова ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ПРАВИЛЬНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МЕСТНЫХ АНЕСТЕТИКОВ ПРИ ПОВЕРХНОСТНОЙ И ИНФИЛЬТРАЦИОННОЙ АНЕСТЕЗИИ
Кафедра общей и клинической фармакологии (зав. — проф. А.Л.Ураков), кафедра хирургических болезней детского возраста (зав. — проф. Н.С.Стрелков) Ижевской государственной медицинской академии
В качестве критериев оценки в дополнение к существующим стандартам качества лекарственных средств предлагается учитывать их осмотическую, температурную, противомикробную, противовоспалительную активность, а также инъекционную и постинъекционную безопасность.
ключевые слова: экспертиза качества, местные анестетики.
ADDITIONAL CRITERIONS OF CORRECTNESS Usage OF LOCAL ANESTHETICS IN SUpERFICIAL
AND INFILTRATION ANESTHESIA A.L. Urakov, N.S. Strelkov, N.A. Urakova, N.A. Mikhailova, S.V. Suslonova, T.B. Pchelovodova
There are suggested to take into account such characteristics of local anesthetics as their osmotic, temperature, antimicrobial and anti-inflammatory activity, and also their injection and postinfection safety.
Key words: quality examination, local anesthetics.
Растворы местных анестетиков до сих пор применяются для анестезии различных частей тела без наличия соответствующих стандартов их осуществления. В этой ситуации врачам ничего не остается, как руководствоваться рекомендациями частного характера. Анализ их свидетельствует о том, что многие из них сводятся к усредненным (общим) указаниям, лишенным точных названий, концентраций, доз и показателей качества лекарственных средств, а также их производителей, что противоречит требованиям Федерального закона «О лекарственных средствах» № 86-Ф3 от 22 июня 1998 года и приказа МЗ РФ № 82 от 29 февраля 2000 года о введении в действие отраслевого стандарта «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» [3].
Более того, большинство рекомендаций лишено информации о локальной клинической фармакокинетике и локальной клинической фармакодинамике конкретного лекарственного средства при определенной методике местной анестезии определенной ткани в определенной клинической ситуации, что лишает врача возможности качественного информированного выбора лекарств, а пациента — информированного согласия на применение того или иного лекарственного средства, как того требует Федеральный закон «Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан» № 5487-1 от 22 июля 1993 года.
В частности, широко распространенной в России является инфильтрационная анестезия тканей по методу А.В.Вишневского или методу тугой ползучей инфильтрации. Данную анестезию рекомендуется проводить с применени-
ем 500-1000 мл 0,125-0,250% раствора новокаина (прокаина гидрохлорида), к которому прибавляют раствор адреналина гидрохлорида (эпинефрина гидрохлорида) (0,1%) по 1 капле на каждые 2 - 5 - 10 мл раствора новокаина [2].
Проведенный нами анализ физико-химических особенностей взаимодействия раствора новокаина с кожей и подкожно-жировой клетчаткой при указанном методе ин-фильтрационной анестезии позволил выявить следующие его недостатки. Традиционная технология инфильтрацион-ной анестезии понижает температуру инфильтрированной области, поскольку раствор новокаина вводится в ткани без согревания его до температуры тела, поэтому он имеет температуру комнаты или холодильника. Возникающая при этом локальная гипотермия может быть названа как гипотермия по незнанию, по неопытности или по ошибке. Помимо этого, указанный раствор новокаина оказывает водное повреждение клеток (в частности клеток крови), поскольку его осмотичность в 8-9 раз меньше нормальной осмотично-сти тканей (280-290 мОсм/л воды). По сути дела возникает локальная гипоосмия, которую также можно охарактеризовать как гипоосмия по незнанию, по неопытности или по ошибке. Кроме этого, интенсивная инфильтрация тканей значительным объемом лекарственного средства увеличивает объем тканей, разводит в них межклеточную жидкость, кровь, лимфу и снижает концентрацию иммуноглобулинов и иных молекулярных и клеточных компонентов защитной системы. Такой гидродинамический отек тканей, происходящий при одновременной гипотермии и гипоосмии, способствует присоединению не только неспецифического
