CC BY
80- Тематический номер «Птицеводство» бизнес-партнер номераальбит-бмов
www.agroyug.ru
DOI: 10.24411/9999-007А-2019-1040 УДК 636.5:619:579
Новикова А. Ф., Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства — филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН, старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук Новикова О. Б., Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства — филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН, кандидат ветеринарных наук, ksuvet@mail.ru
Павлова М. А., Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства — филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН
Сёмина А. Н., Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства — филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН, кандидат ветеринарных наук
Титова Т. Г., кандидат ветеринарных наук, ФГБУ «Ленинградская МВЛ»
изучение орнитобактериоза птиц в экспериментальных условиях
70
Annotation. One of the main problems in poultry farming is respiratory diseases. Among them the special place occupies — Ornithobacterium rhinotracheale (ORT). From poultry farms for the production of eggs and broiler meat, we isolated and studied in experimental conditions the causative agent of Ornithobacterium rhinotracheale.
Keywords: respiratory syndrome, Ornithobacterium rhinotracheale, laboratory diagnosis, virulence properties
Аннотация. Одна из основных проблем в птицеводстве — это респираторные болезни. Среди них особое место занимает — орнитобактериоз (ORT).
Из птицехозяйств по производству яйца и мяса бройлеров нами выделен и изучен в экспериментальных условиях возбудитель орнитобактериоза птиц Ornithobacterium rhinotracheale.
Ключевые слова: респираторный синдром, орнитобактериоз птиц, лабораторная диагностика, вирулентные свойства
Одной из особенностей эпизоотологии бактериальных болезней на современном этапе является развитие смешанных (ассоциированных) инфекций. Доминирующими клиническими признаками при этом является развитие респираторного синдрома,природа которого поли-этилогична [1].
Van Empe P. C.M and Hafez H. M. [2] указывают на то, что респираторные инфекции являются наиболее опасной группой болезней, поражающих домашнюю птицу, сопровождающиеся большими экономическими потерями, связанными с повышенным падежом и выбраковкой птицы, снижением яйценоскости, ухудшением качества яичной продукции, низким процентом выводимости, большими затратами на лечение. В бройлерном производстве — это прямые потери высококачественного диетического мясного продукта.
Клиническая картина респираторного синдрома — воспаление тканей в области головы, синуситы, воспаление серёжек, межчелюстного пространства, трахеит, пневмония — характерна для многих вирусных и бактериальных инфекций. Болезни бактериальной этиологии, протекающие со сходной клиникой: респираторный мико-плазмоз, пастереллёз, стафилокок-коз, стрептококкоз, колибактериоз, гемофилёз, орнитобактериоз и другие, а также их ассоциации.
Орнитобактериоз — это высококонтагиозная инфекция, часто встречающаяся у кур и индеек, особенно мясных пород, и племенной птицы. У молодой птицы болезнь характеризуется слабыми респираторными симптомами. Основной ущерб промышленному птицеводству наносится за счёт высокого уровня выбраковки птицы (до 50%), из-за отставания в росте. При патологоанатомическом осмотре наблюдают аэросаккулиты (часто с «йогуртоподобным» экссудатом), пневмонию, пенистые скопления в грудной полости, анемичность, перикардиты и перитониты, иногда артриты [3].
Ornithobacterium rhinotracheale присутствует не только на предприятиях коммерческого птицеводства различных стран мира, но и среди диких птиц. Присутствие орнитобактерий в России было установлено серологическими методами. Литературные источники содержат сведения о том, что От^ЬюЬаС:епит гЫпо^асЬюа1.е может быть выделена от многих видов птиц: куропаток, уток, гусей, чаек, страусов, фазанов, голубей, перепелок, грачей. Наиболее чувствительны к данному заболеванию индейки и мясные куры [4].
Возбудитель — микроорганизм Ornithobacterium гЫпс-tracheale, представитель семейства Flavobacteriaceae, род Ornithobacterium.
Первые упоминания об орни-тобактерии датируются 1981 годом, когда Ornithobacterium rhinotracheale была впервые выделена в Германии от 5-недельных индюшат с признаками поражения органов дыхания, но способность Ornithobacterium rhinotracheale вызывать инфекцию подтверждена только в начале 90-х годов. В настоящее время заболевание, вызываемое Ornithobacterium rhinotracheale, зарегистрировано в Южной Африке, Германии, Нидерландах, Франции, США, Израиле, Англии, Бельгии и других странах [4].
Ornithobacterium rhinotracheale это грамотрицательная, неподвижная, полиморфная палочка длиной 0,2-0,9 мкм, шириной 1,0-3,0 мкм, спор не образует, медленно растёт на питательных средах и требует специальных условий культивирования. Оптимальный рост получают на питательной среде с добавлением 5% дефибринированной крови барана или на шоколадном агаре в аэробных, микроаэрофиль-ных и анаэробных условиях при наличии 7,5-10% С02 в камере инкубатора при температуре 30-37оС. Через 24-48 ч образуются очень мелкие колонии менее 1 мм в диаметре, округлые, матовые, выпуклые от серого до серовато-белого цвета, иногда с красным ореолом, выделяют особый запах, напоминающий масляную кислоту, края колоний ровные. Орнитобакте-
ЭФФЕКТИВНОЕ № 4 май
2019
животноводство 2019
инновационная кормовая добавка
Альбит-БИО www.albit.vet
Фото 1.
Цыплята, заражённые Ornithobacterium rhinotracheale: птица тяжело дышит с открытым клювом
рии зоны гемолиза не образуют, на среде Эндо не растут, и, в отличие от возбудителей гемофилё-за, NAD независимые микроорганизмы.
Ornithobacterium rhinotracheale имеют положительную реакцию на цитохромоксидазу; индол и сероводород не образуют; цитрат не утилизируют. При ферментации углеводов положительная реакция на лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, маннозу [5].
Устойчивость возбудителя в носовом экссудате невысокая, при температуре 45-50оС микроб погибает в течение 1 мин. При длительном культивировании на питательных средах быстро теряет свою вирулентность.
Источником инфекции являются больные и переболевшие птицы — бактерионосители. Заражение происходит воздушно-капельным и алиментарным путем. Возможно заражение при контакте больных со здоровыми, через предметы ухода и тару.
Орнитобактериоз часто протекает в форме смешанной инфекции бактериальной и вирусной этиологии (пастереллёз, гемофилёз, респираторный микоплазмоз, ор-нитоз, колибактериоз, метапневмо-вирусная инфекция и др.).
Предварительный диагноз на орнитобактериоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, па-тологоанатомических изменений, окончательный — по результатам микробиологических и серологических исследований.
Исследования патологического материала включает микроскопию мазков-отпечатков со слизистой оболочки носовой полости, подглазничных синусов, конъюн-
Фото 2. Поражение суставов конечностей, артриты у цыплят, заражённых Ornithobacterium rhinotracheale (слева), справа — контрольный незаражённый цыплёнок
ктивального мешка, лёгких, селезёнки, костного мозга; выделение чистой культуры возбудителя, её идентификацию, определение вирулентных свойств на цыплятах 25-30-дневного возраста. Возбудитель орнитобактериоза идентифицируют от сходных микроорганизмов с учётом таксономических признаков.
Следует обратить особое внимание, что выделение культур возбудителя орнитобактериоза возможно только в начальный период болезни.
Для более ранней диагностики проводят исследования сывороток крови птиц разного возраста с использованием метода имму-ноферментного анализа (ИФА) с наборами для диагностики ORT. Для идентификации генома Ornithobacterium rhinotracheale используется полимеразная цепная реакция (ПЦР). Следует отметить, что молекулярно-биологические методы дополняют, но не заменяют классические бактериологические методы исследования.
Орнитобактериоз дифференцируют от гемофилёза, пастереллё-за, орнитоза, колибактериоза, ме-тапневмовирусной болезни птиц, болезни Ньюкасла, гриппа птиц, инфекционного бронхита птиц, инфекционного ларинготрахеита.
Материалы и методы. Нами были проведены исследования по выделению возбудителя орнитобактериоза на двух крупных птицефабриках промышленного типа: одной по производству яйца и одной — бройлерной. На яичной птицефабрике исследовали взрослых кур, на бройлерной — цыплят 32-35-дневного возраста.
Высевы делали соскобов тканей трахеи. Посевы материала
Фото 3.
Отёк слизистых оболочек гортани, скопление слизи в ротовой полости у цыплёнка, заражённого Огш^оЬайепит гЫпо^а^еа1е
производили на плотную питательную среду в чашках Петри — колумбийский агар с кровью барана и антибиотиком гентамицин. Для приготовления среды к расплавленному колумбийскому агару в объёме 200 мл добавляли гентамицин в дозе 10 мкг/мл и 10 мл размороженной крови барана. Кровь предварительно дефи-бринированную разлили по 20 мл, прогрели при 56 °С 30 мин и заморозили при -20 °С.
Посевы инкубировали в термостате в микроаэрофильных условиях при температуре +37оС в течение суток.
Результаты исследований. Через сутки на поверхности питательной среды были обнаружены мелкие росинчатые колонии округлой формы с ровными краями. При микроскопии мазков, окрашенных по Граму выявлены гра-мотрицательные коккобактерии и палочки, расположенные одиночно и парами.
Реакция на каталазу культур, подозрительных на ОгпиЬоЬа^епит гЫпоиасЬеа1е, — отрицательная.
В результате исследований установлено, что культуры, выделенные из трахеи, на колумбийском агаре с бараньей кровью и гента-мицином, по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам соответствуют бактерии ОгпиЬоЬа^епит гЫпо^асЬеа1е.
Дальнейшие исследования для подтверждения вида выделенных культур были проведены в реакции ПЦР (полимеразная цепная реакция). Из образцов исследуемого биологического материала готовили 10% суспензию на 0,85% физиологическом растворе. ДНК выделяли из суспензии клеток при помощи набора
71
