CC BY
18УДК: 577.212.2:595.787
изучение нуклеотидных последовательностей гена первой субъединицы митохондриальной цитохромоксидазы и решение некоторых вопросов
биосистематики zygaenidae (lepidoptera)
К. А. Ефетов1, А. В. Кирсанова1, З. С. Лазарева1, Е. В. Паршкова1, Г. М. Тарман2
1 Кафедра биохимии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»
2 Naturwissenschaftlichen Sammlungen, TirolerLandesmuseen, Ferdinandeum, г. Инсбрук, Австрия Адрес переписки: бул. Ленина 5/7, г.Симферополь, 295006, Республика Крым, Российская Федерация E- mail: efetov.konst@gmail.com
РЕЗЮМЕ
В статье приводятся отдельные результаты совместного с Biodiversity Institute of Ontario (University of Guelph, Канада) проекта «ZYGMO» по выделению, амплификации и секвенированию участка гена первой субъединицы митохондриальной цитохромоксидазы (COI) видов семейства Zygaenidae (Lepidoptera). обсуждается роль изучения строения митохондриальной ДнК в решении проблемных вопросов биосистематики и таксономии, в т. ч. для описания новых биологических видов.
Ключевые слова: баркодирование, митохондриальная цитохромоксидаза, COI, zygaenidae, биосистематика.
A STUDY OF NUCLEOTIDE SEQUENCES OF THE MITOCHONDRIAL COI GENE AND SOLUTION OF SOME PROBLEMS OF zygaenidae (LEPIDOPTERA) biosystematics
К. А. Efetov, A. V. Kirsanova, Z. S. Lazareva, E. V. Parshkova, G. M. Tarmann
SUMMARY
The article presents the results of the joint with the Biodiversity Institute of Ontario (University of Guelph, Canada) project «ZYGMO» on the extraction, amplification and sequencing of the gene of the mitochondrial cytochrome oxidase first subunit (COI) of Zygaenidae species (Lepidoptera). The role of mitochondrial DNA study in solution of biosystematics and taxonomy problems including new species descriptions is discussed.
Key words: barcoding, mitochondrial cytochrome oxidase, COI, Zygaenidae, biosystematics.
Современные биохимические методы позволя- легкость выявления гомологичных последователь-
ют изучать различные признаки живых организмов - ностей [1, 5].
как на клеточно-тканевом уровне, так и на уровне В 2003 году для улучшения идентификации отдельных молекул. С середины XX века приори- биологических видов группа исследователей во тет постепенно смещался в сторону использова- главе с канадским ученым П. Д. Н. Хебертом ния молекулярно-генетических технологий [5]. (P. D. N. Hebert) предложила использовать барко-Быстрый рост количества информации о струк- дирование (штрихкодирование) - секвенирование туре ядерных и митохондриальных генов привел участка митохондриального гена, кодирующего к появлению ее виртуальных хранилищ, таких, на- первую субъединицу цитохромоксидазы, длиной пример, как Генбанк [32] или European Nucleotide 658 нуклеотидных пар (гена COI) [34]. Проведен-Archive - база данных Европейской лаборатории ные в течение последующих лет исследования при-молекулярной биологии [29]. вели к возникновению международного проекта Молекулярно-генетические подходы оказа- BOLD: The Barcode of Life Data Systems с центром в лись весьма полезными для судебной медицины, Biodiversity Institute of Ontario (University of Guelph, микробиологии и эпидемиологии, например, для Канада) [6, 42] и показали довольно высокую эф-исследований происхождения и эволюции па- фективность метода во многих группах живых тогенов, идентификации новых инфекционных организмов [35, 40, 47]. С 2009 года К. А. Ефетов агентов и оценки их потенциальной опасности возглавляет проект «DNA barcoding of Zygaenidae [41]. Но, безусловно, наибольшую ценность изу- moths» - «ZYGMO» по баркодированию видов сечение строения информационных биополи- мейства Zygaenidae (Insecta, Lepidoptera) [3, 7, 17-20]. меров - белков и нуклеиновых кислот - представ- Данное семейство имеет всесветное распростране-ляет для эволюционной биологии, биосистемати- ние и обладает интересными биохимическими осоки и таксономии. Одной из причин, по которой бенностями [2, 4, 11, 13, 15, 21, 24, 25, 28, 31, 44-46]. белок-кодирующие участки митохондриального Следует также отметить, что среди видов этого се-генома часто анализируются в молекулярно-гене- мейства имеются как редкие и полезные виды [4], тических исследованиях, является сравнительная так и виды-вредители сельского хозяйства [9, 14].
Некоторые ДНК- и РНК-последовательности Zygaenidae были получены ранее в рамках отдельных фаунистических и биогеографических проектов [6, 38, 39]. К сожалению, эти исследования в основном коснулись видов рода Zygaena Fabricius, 1775 [38], в то время как виды других родов представлены в них единично [39]. Системное изучение последовательностей гена COI до возникновения проекта «ZYGMO» не проводилось.
В данной статье приводятся наши результаты изучения ДНК (гена COI) Zygaenidae, которые привели к уточнению биосистематики, а также тем или иным таксономическим изменениям, например, к описанию новых для науки биологических видов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материал для изучения ДНК от представителей различных видов Zygaenidae получен в результате собственных сборов авторов, в некоторых случаях предоставлен зарубежными учеными или кураторами европейских музеев.
Стерильными инструментами отделяли часть тела имаго каждого исследуемого экземпляра
(сухого или хранившегося в 96% этаноле) и помещали в отдельную микропробирку. Выделение ДНК из образцов, амплификацию и секвениро-вание ДНК проводили в канадском Центре ДНК-штрихкодирования (The Canadian Centre for DNA Barcoding, Biodiversity Institute of Ontario, University of Guelph, Гуэлф, Канада) в соответствии со стандартными протоколами [8]. ДНК из большинства образцов выделяли стандартизованным (glass fiber plate) методом с протеиназой К в блоках на 96 микропробирок (Eppendorf®), используя автоматический анализатор Biomek® NXP. Участок мито-хондриального гена цитохромоксидазы амплифи-цировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Объем смеси составлял 12,5 мкл и содержал: 6,25 мкл 10 % трегалозы (Sigma); 2 мкл ddH20; 0,625 мкл 50 мМ MgCl2; 1,25 мкл 10X ПЦР-буфера; по 0,125 мкл каждого из пары праймеров (все -Invitrogen™); 0,0625 мкл 10 мМ смеси dNTP (New England Biolabs®); 0,06 мкл Та^ДНК-полимеразы Invitrogen™ (5 Ед/мкл) и 2 мкл матричной ДНК. Сведения об использованных для амплификации праймерах [30, 33, 36] представлены в Таблице 1.
Таблица 1.
Сведения об использованных ДНК-праймерах
Код праймера Последовательность праймера (5'-3')
LC01490 (C_LepFo1F) GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG
HC02198 (C_LepFo1R) TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA
LepF1 ATTCAACCAATCATAAAGATATTGG
LepR1 TAAACTTCTGGATGTCCAAAAAATCA
MLepF1 GCTTTCCCACGAATAAATAATA
MLepR1 CCTGTTCCAGCTCCATTTTC
Амплификацию проводили с помощью термо-циклера Mastercycler® ep gradient (Eppendorf®) по следующей программе. Начальная денатурация при 94 °C - 1 минута, 5 циклов: 94 °C - 30 секунд, отжиг при 45-50 °C - 40 секунд, элонгация при 72 °C -1 минута, затем 30-35 циклов: 94 °C - 30 секунд, 51-54 °C - 40 секунд и 72 °C - 1 минута, с финальной элонгацией при 72 °C - 10 минут.
Индикацию продуктов амплификации осуществляли методом электрофореза в 2 % агарозном геле (E-gel®).
Секвенирование ДНК проводили с помощью 3730x1 ДНК-анализатора (Applied Biosystems) полуавтоматическим методом AutoDTR™ (EdgeBio®).
Различия в последовательностях гена COI оценивали с помощью программного инструментария BOLD 3.0 [6] с применением NJ-алгоритма [43] и двухпараметрической модели Кимуры (Kimura 2-Parameter distance model) [37]. Данная модель различает два типа нуклеотидных замен в после-
довательностях - транзиции (замена нуклеотида с пуриновым основанием на пурин-содержащий, или нуклеотида с пиримидиновым основанием на пиримидин-содержащий) и трансверсии (замена нуклеотида с пуриновым основанием на пирими-дин-содержащий или наоборот). При этом предполагается, что частота встречаемости всех оснований одинакова (т. е. равна 0,25). Эволюционные дистанции между последовательностями (DK2P) рассчитывали по формуле: DK2P = - (1/2) ln {(1 -2P - Q)}, где P - доля транзиций, Q - доля трансверсий [37].
Под межвидовыми генетическими дистанциями подразумевали минимальные дистанции при попарных межвидовых сравнениях последовательностей (minimum pairwise distances). Для характеристики внутривидовой изменчивости использовали максимальные дистанции между последовательностями внутри видов (maximum pairwise distances).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В рамках международного проекта «ZYGMO», стартовавшего в 2009 году, мы изучали нуклеотид-ные последовательности фрагмента ДНК мито-хондриального гена цитохромоксидазы I (COI) у различных представителей семейства Zygaenidae, а также оценивали возможности использования этих данных для идентификации биологических видов и выяснения их филогенетических взаимоотношений. К настоящему моменту определена 1031 COI-последовательность особей, относящихся к 242 видам семейства. В подавляющем большинстве случаев (94,2 %) обнаружена высокая видовая специфичность COI-последовательностей.
Полученные нами данные не противоречат представлениям о монофилии рода Rhagades Wallengren, 1863, а также подродов Molletia Efetov, 2001 (род Zygaenoprocris Hampson, 1900), Procriterna Efetov & Tarmann, 2004, Tarmannita Efetov 2000 (род Adscita Retzius, 1783), Tremewania Efetov & Tarmann, 1999, Roccia Alberti, 1954 (род Jordanita Verity, 1946). Этот результат соответствует ранее выдвинутой гипотезе [9, 12], основанной на изучении белков гемолимфы, морфологических и биологических признаков. Согласно первичной структуре гена COI, виды родов Jordanita, Adscita и Zygaenoprocris образуют общую ветвь, тогда как роды Rhagades и Theresimima Strand,1917 являются сестринскими по отношению к ним (Рис. 1). Полученные молекулярные данные также служат дополнительным доказательством идеи о филогенетической близости родов Rhagades и Theresimima к роду Illiberis Walker, 1854 [9]. Комплекс видов Jordanita + Adscita + Zygaenoprocris относительно обособлен согласно анализу первичной структуры гена COI.
Theresimima
Rhagades Zygaenoprocris
Adscita
Jordan it а
Рис. 1. Взаимоотношения между некоторыми родами подсемейства Procridinae (Zygaenidae) по К. А. Ефетову [9].
Ниже мы приводим краткий обзор роли исследований последовательности гена СOI для некоторых уточнений в биосистематике и таксономии Zygaenidae, сделанных в последние годы.
В 2009 году (27 июня и 8 июля) в двух разных локалитетах Афганистана украинским энтомоло-
гом И. Г. Плющом была собрана серия из трёх самцов и одной самки Adscita (Procriterna) sp. Самцы демонстрировали небольшие различия в строении гениталий (количество корнутусов варьировало от трех до пяти). Необходимость определения видовой принадлежности данных экземпляров требовала разрешения двух вопросов: 1. Принадлежат ли к одному виду самцы с разным количеством корнутусов, собранные в разных местах и в разное время? 2. Если да, то принадлежит ли самка к тому же виду, что и самцы?
Результаты исследования ДНК показали идентичность COI-последовательностей самки и самцов из обеих местностей, а также значительную генетическую дистанцию (4,91 %) от этих экземпляров до ближайшего вида - Adscita (Procriterna) subdolosa (Staudinger, 1887). Этот результат позволил сделать вывод о конспецифичности исследуемых самцов и самки. Поскольку последняя демонстрировала значительные морфологические отличия в строении гениталий от А. (Р.) subdolosa, после получения результатов исследования гена COI все упомянутые выше экземпляры были включены в типовую серию нового для науки биологического вида - Adscita (Procriterna) pligori Efetov, 2012 [10].
При изучении гена COI Adscita (Adscita) albanica (Naufock, 1926) выяснилось, что последовательности экземпляров данного «вида» формируют две ветви с генетической дистанцией между ними, сопоставимой со средними межвидовыми дистанциями в роде Adscita. Одна ветвь включала в себя образцы A. (A.) albanica из Крыма, а другая - экземпляры из Италии. Дистанция между этими ветвями составляла 1,95 %, что существенно превышало дистанцию между экземплярами каждой ветви (0 % между крымскими и 0,3 % между итальянскими). Интересно, что генетическая дистанция между экземплярами A. (A.) albanica из Крыма и Италии была значительно больше, чем между крымскими A. (A.) albanica и Adscita (Adscita) geryon (Hübner, 1813). Причем первая даже превышала дистанцию между другими хорошо различимыми европейскими видами (например, Adscita (Tarmannita) mannii (Lederer, 1853) и Adscita (Tarmannita) bolivari (Agenjo, 1937)). К. А. Ефетов и Г. М. Тарман в 2013 году провели детальное изучение экземпляров A. (A.) albanica (в том числе из типовых серий), собранных в различных европейских биотопах. В результате были выявлены системные отличия в морфологии имаго, в частности, в строении гениталий. Итогом этих исследований стало описание нового вида Adscita (Adscita) dujardini Efetov & Tarmann, 2014, встречающегося в Италии, Франции, Швейцарии и Словении [22].
В мае 2011 года в северном Таиланде был найден экземпляр мужского пола с признаками, по-
зволяющими отнести его к подроду Alterasvenia Alberti, 1971 рода Illiberis. При определенном сходстве в строении гениталий этот экземпляр отличался морфологически от материала, собранного в июне и июле 2011 года на территории Мьянмы и Китая. Исследования ДНК подтвердили конспе-цифичность (100 %) пяти самцов и двух самок из Мьянмы и Китая и выявили большую дистанцию между ними и самцом из Таиланда (7,54 %). Экземпляры обоих новых видов образовали общую ветвь с остальными видами Illiberis (Alterasvenia). В результате были описаны Illiberis (Alterasvenia) oernyi Efetov & Tarmann, 2013 [27] и Illiberis (Alterasvenia) banmauka Efetov & Tarmann, 2014 [26].
Общую ветвь с другими видами подрода Alterasvenia образовал еще один экземпляр Illiberis sp. nov., обнаруженный в Мьянме в июле 2011 года. Хорошие морфологические отличия и дистанция 5,7 % до ближайшего вида группы позволили описать в 2016 году новый вид - Illiberis (Alterasvenia) kislovskyi Efetov & Tarmann, 2016 [23].
В 2010 году болгарским профессором М. Суб-чевым (M. Subchev) с соавторами были синтезированы половые аттрактанты - аналоги природных феромонов Illiberis (Primilliberis) rotundata Jordan, 1907 [45]. В Афганистане в июле 2011 года с использованием этих аттрактантов немецким исследователем А. Хофманом (A. Hofmann) была собрана серия самцов Zygaenoprocris sp. Место сбора находилось на 40 км северо-восточнее типовой местности Zygaenoprocris (Zygaenoprocris) eberti (Alberti, 1968), до настоящего времени известного только по одной самке (голотипу). Голотип этого вида был собран немецким исследователем Г. Эбертом (G. Ebert) в 1966 году, и полную СО1-последовательность данного экземпляра получить не удалось. Длина прочитанного фрагмента составила 307 пар нуклеотидов. Тем не менее, все изученные экземпляры мужского пола образовали одну ветвь с самкой-голотипом (генетическая дистанция 1,99-3,13 %). Как правило, хорошо различимые и морфологически однородные виды рода Zygaenoprocris имеют высокие значения внутривидовых дистанций (например, максимальная внутривидовая дистанция для вида Zygaenoprocris (Zygaenoprocris) taftana (Alberti, 1939) составляет 5,43 %). Т. е. полученные нами результаты исследования ДНК не противоречили конспецифичности изученных экземпляров, что, наряду с морфологическими признаками, позволило описать ранее не известных самцов Z. (Z.) eberti [16].
В целом, полученные нами данные позволили решить многие вопросы биосистематики и таксономии Zygaenidae, описать несколько новых для науки биологических видов [3, 7, 10, 16-20, 22, 23, 26, 27]. COI-штрихкодирование позволяет создавать доступные библиотеки ДНК-последовательностей,
удобные для идентификации видов, помогает не только правильно устанавливать конспецифич-ность исследуемых экземпляров и уточнять ошибочные определения и таксономический статус объектов, но и обнаруживать случаи полового диморфизма, выявлять криптические виды, уточнять границы ареалов и т. д. Этот метод является не только быстрым и экономичным для изучения биоразнообразия, но и предоставляет дополнительные данные для научных решений в области эволюционной биологии, биогеографии, задает новые направления исследований.
ВЫВОДЫ
1. В рамках международного проекта «ZYGMO» по изучению гена COI различных видов семейства Zygaenidae определена 1031 ДНК-последовательность особей, относящихся к 242 видам. В подавляющем большинстве случаев (94,2 %) обнаружена высокая видовая специфичность COI-последовательностей.
2. Секвенирование гена COI имеет высокую информативность и большую практическую значимость. Использование данного молекулярного подхода наряду с морфологическими признаками позволило решить некоторые проблемы биосистематики Zygaenidae, описать ранее не известных самцов Zygaenoprocris (Zygaenoprocris) eberti (Alberti, 1968), а также новые для науки виды: Adscita (Procriterna) pligori Efetov, 2012; Adscita (Adscita) dujardini Efetov & Tarmann, 2014; Illiberis (Alterasvenia) eernyi Efetov & Tarmann, 2013; Illiberis (Alterasvenia) banmauka Efetov & Tarmann, 2014; Illiberis (Alterasvenia) kislovskyi Efetov & Tarmann, 2016.
БЛАГОДАРНОСТИ
Выражаем благодарность профессору П. Д. Н. Хеберту (P. D. N. Hebert, Канада) и доктору Р. Руже (R. Rougerie, Франция) за всестороннюю помощь в проведении исследований.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абрамсон Н.И. Молекулярная и традиционная филогенетика. На пути к взаимопониманию. Труды Зоологического института РАН. 2013;(прил. 2):219-229.
2. Ефетов К.А., Бекетов А.А., Паршиков В.А. Синтез и биологическая активность вторичного бутилового эфира лауриновой кислоты. Таврический медико-биологический вестник. 2012;15(1):345-347.
3. Ефетов К.А., Кирсанова А.В., Лазарева З.С., Паршкова Е.В. Филогенетический сигнал в гене митохондриальной цитохромоксидазы у представителей семейства Zygaenidae. Украинский биохимический журнал. 2010;82(4):25-26.
4. Назаров В.В., Ефетов К.А. Участие пестрянок (Lepidoptera, Zygaenidae) Крыма в опылении орхидеи Anacamptis pyramidalis (Orchidaceae). Зоологический журнал. 1993;72(10):54-67.
5. Павлинов И.Я. Введение в современную филогенетику (кладогенетический аспект). М.: Изд-во КМК; 2005.
6. BOLD: The Barcode of Life Data System. Доступно по: http://www.boldsystems.org/index.php/ databases. Ссылка активна на 10.01.2016.
7. BOLDSYSTEMS: Public Data Portal -Record List [ZYGMO]. Доступно по: http://www. boldsystems.org/index.php/Public_SearchTerms?taxon = &searchMenu=records&query=ZYGMO. Ссылка активна на 25.01.2016.
8. CCDB Protocols. Доступно по: http://www. ccdb.ca/resources.php. Ссылка активна на 25.01.2016.
9. Efetov K.A. A Review of the Western Palaearctic Procridinae (Lepidoptera: Zygaenidae). Simferopol: CSMU Press; 2001.
10. Efetov K.A. Adscita (Procriterna) pligori sp. nov. (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) from Afghanistan. Entomologist's Gazette. 2012;63(2):99-105.
11. Efetov K.A. An annotated check-list of Forester moths (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 2001;52(3):153-162.
12. Efetov K.A. Forester and Burnet moths (Lepidoptera: Zygaenidae). The genera Theresimima Strand, 1917, Rhagades Wallengren, 1863, Zygaenoprocris Hampson, 1900, Adscita Retzius, 1783, Jordanita Verity, 1946 (Procridinae), and Zygaena Fabricius, 1775 (Zygaeninae). Simferopol: CSMU Press; 2004.
13. Efetov K.A. Nine new species of the genus Chrysartona Swinhoe, 1892 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 2006;57(1):23-50.
14. Efetov K.A. The Zygaenidae (Lepidoptera) of the Crimea and other regions of Eurasia. Simferopol: CSMU Press; 2005.
15. Efetov K.A., Can F., Toshova T.B., Subchev M. New sex attractant for Jordanita anatolica (Naufock) (Lepidoptera: Zygaenidae: Procridinae). Acta Zoologica Bulgarica. 2010;62(2):315-319.
16. Efetov K.A., Hofmann A., Tarmann G.M. Application of two molecular approaches (use of sex attractants and DNA barcoding) allowed to rediscover Zygaenoprocris eberti (Alberti, 1968) (Lepidoptera, Zygaenidae, Procridinae), hitherto known only from the female holotype. Nota Lepidopterologica. 2014;37(2):151-160.
17. Efetov K.A., Kirsanova A.V., Lasareva Z.S., Parshkova E.V., Tarmann G.M., Rougerie R. Early results in DNA barcoding of Zygaenidae (Lepidoptera). In: Can F., ed. XII International symposium of Zygaenidae (Hatay, May 2010). Hatay, Turkey; 2010:7-8.
18. Efetov K.A., Kirsanova A.V., Lasareva Z.S., Parshkova E.V., Tarmann G.M., Rougerie R., Hebert P. Zygaenidae taxonomy and a DNA study: status quo. In: 17th European Congress of Lepidopterology (Luxembourg, May 2011). Luxembourg; 2011:50.
19. Efetov K.A., Kirsanova A.V., Lazareva Z.S., Parshkova E.V., Tarmann G.M., Rougerie R., Hebert P.D.N. Variations in sequences of the 658-bp region of the COI mitochondrial gene and their importance for the investigation of the Zygaenidae (Lepidoptera). In: XIII International Symposium on Zygaenidae (Innsbruck, 16-23 September 2012). Innsbruck, Tirol, Austria; 2012:11-12.
20. Efetov K.A., Kirsanova A.V., Lazareva Z.S., Parshkova E.V., Tarmann G.M., Rougerie R., Hebert P.D.N. DNA barcoding as an efficient tool for the Zygaenidae study. In: XVIII European Congress of Lepidopterology (Blagoevgrad, Bulgaria, 29 July - 4 August 2013). Sofia; 2013:35-36.
21. Efetov K. A., Tarmann G. M. A checklist of the Palaearctic Procridinae (Lepidoptera: Zygaenidae). Simferopol: CSMU Press; 2012.
22. Efetov K. A., Tarmann G. M. A new European species, Adscita dujardini sp. nov. (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) confirmed by DNA analysis. Entomologists Gazette. 2014;65(3):179-200.
23. Efetov K.A., Tarmann G.M. A new Illiberis species: I. (Alterasvenia) kislovskyi (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) from Myanmar. Entomologists Gazette. 2016;67:137-142.
24. Efetov K.A., Tarmann G.M. An annotated check-list of the Palaearctic Procridinae (Lepidoptera: Zygaenidae), with descriptions of new taxa. Entomologists Gazette. 1995;46(1):63-103.
25. Efetov K.A., Tarmann G.M. Forester moths. The genera Theresimima Strand, 1917, Rhagades Wallengren, 1863, Jordanita Verity, 1946, and Adscita Retzius, 1783 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Stenstrup: Apollo Books; 1999.
26. Efetov K.A., Tarmann G.M. Illiberis (Alterasvenia) banmauka sp. nov. (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) from China and Myanmar. Entomologists Gazette. 2014;65(1):62-70.
27. Efetov K.A., Tarmann G.M. Illiberis (Alterasvenia) cernyi sp. nov. (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) from northern Thailand. Entomologist's Gazette. 2013;64(1):33-39.
28. Efetov K.A., Tarmann G.M., Hayashi E., Parshkova E.V. New data on the chaetotaxy of the first instar larvae of Procridini and Artonini (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 2006;57(4):229-233.
29. European Nucleotide Archive of European Molecular Biology Laboratory. EMBL-EBI website. Доступно по: http://www.ebi.ac.uk/ena. Ссылка активна на 11.01.2016.
30. Folmer O., Black M., Hoeh W., Lutz R., Vrijenhoek R. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates. Molecular Marine Biology and Biotechnology. 1994;3:294-299.
31. Furstenberg-Hagg J., Zagrobelny M., Olsen C.E., Jorgensen K., Moller B.L., Bak S. Transcriptional regulation of de novo biosynthesis of cyanogenic glucosides throughout the life-cycle of the burnet moth Zygaena filipendulae (Lepidoptera). Insect Biochemistry and Molecular Biology. 2014;49:80-89.
32. GenBank. Доступно по: http://www.ncbi. nlm.nih.gov/genbank/. Ссылка активна на 10.01.2016.
33. Hajibabaei M., Janzen D.H, Burns J.M., Hebert P.D.N. DNA barcodes distinguish species of tropical Lepidoptera. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2006;103:968-971.
34. Hebert P.D.N., Cywinska A., Ball S.L., deWaard J.R. Biological identifications through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 2003;270:313-322. Доступно по: www.urbanbarcodeproject.org/images/ pdf/Biological-identifications-through-DNA-barcodes.pdf. Ссылка активна на 25.01.2016.
35. Hebert P.D.N., deWaard J.R., Landry J.-F. DNA barcodes for 1/1000 of the animal kingdom. Biology Letters. 2010;6(3):359-362. Доступно по: http://rsbl. royalsocietypublishing.org/content/ 6/3/359. Ссылка активна на 25.01.2016.
36. Hebert P.D.N., Penton E.H., Burns J.M., Janzen D.H., Hallwachs W. Ten species in one: DNA barcoding reveals cryptic species in the neotropical skipper butterfly Astraptes fulgerator. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2004;101:14812-14817.
37. Kimura M. A simple method for estimating evolutionary rates of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences. Journal of Molecular Evolution. 1980;16(2):111-120. Доступно по: http://eclass.uoa.gr/modules/document/file.php/ D473/Biß\ioypaq>ia/Phylogeny/Kimura_1980.pdf. Ссылка активна на 25.01.2016.
38. Niehuis O., Hofmann A., Naumann C.M., Misof B. Evolutionary history of the burnet moth genus Zygaena Fabricius, 1775 (Lepidoptera: Zygaenidae) inferred from nuclear and mitochondrial sequence data: phylogeny, host-plant association, wing pattern
evolution and historical biogeography. Biological Journal of the Linnean Society. 2007;92:501-520.
39. Niehuis O., Yen Sh.-H., Naumann C.M., Misof B. Higher phylogeny of zygaenid moths (Insecta: Lepidoptera) inferred from nuclear and mitochondrial sequence data and the evolution of larval cuticular cavities for chemical defence. Molecular Phylogenetics and Evolution. 2006;39:812-829.
40. Pecnikar Z.F., Buzan E.V. 20 years since the introduction of DNA barcoding: from theory to application. Journal of Applied Genetics. 2014; 55(1):43-52. Доступно по: https://www.researchgate. net/ publication/258 350156_20_years_since_the_ introduction_of_DNA_barcoding_From_ theory_to_ application. Ссылка активна на 25.01.2016.
41. Podsiadlo L., Polz-Dacewicz M. Molecular evolution and phylogenetic implications in clinical research. Annals of Agricultural and Environmental Medicine. 2013;20(3):455-459.
42. Ratnasingham S., Hebert P.D.N. BOLD: The Barcode of Life Data System (www.barcodinglife.org). Ecology Notes. 2007;7:355-364.
43. Saitou N., Nei M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic tree. Molecular Biology and Evolution. 1987;4(4):406-425. Доступно по: http://mbe.oxfordjournals.org/ content/4/4/406.full.pdf+htm. Ссылка активна на 25.01.2016.
44. Subchev M.A., Koshio C., Toshova T.B., Efetov K. A. Illiberis (Primilliberis) rotundata Jordan (Lepidoptera: Zygaenidae: Procridinae) male sex attractant: Optimization and use for seasonal monitoring. Entomological Science. 2012;15:137-139.
45. Subchev M., Efetov K.A., Toshova T., Parshkova E.V., Toth M., Francke W. New sex attractants for species of the zygaenid subfamily Procridinae (Lepidoptera: Zygaenidae). Entomologia Generalis (Stuttgart). 2010;32(4):243-250.
46. Tarmann G.M. Zygaenid moths of Australia: A revision of the Australian Zygaenidae (Procridinae: Artonini). Collingwood: CSIRO PUBLISHING; 2004.
47. Vernooy R., Haribabu E., Muller M.R., Vogel J.H., Hebert P.D.N., Schindel D. E., Shimura J., Singer G.A.C. Barcoding life to conserve biological diversity: beyond the taxonomic imperative. PLoS Biology. 2010;8(7):e1000417. Доступно по: http://journals. plos.org/plosbiology/article?id=10.1371/journal. pbio.1000417. Ссылка активна на 14.11.2015.
