CC BY
18УДК 577.112.3: 595.787
ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ АМИНОКИСЛОТНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ПЕРВОЙ СУБЪЕДИНИЦЫ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ЦИТОХРОМОКСИДАЗЫ, КОДИРУЕМЫХ 658bp-УЧАСТКОМ ГЕНА СО!, У ВИДОВ РОДА ZYGAENA FABRICIUS, 1775
Ефетов К. А.1, Лазарева З. С.1, Паршкова Е. В.1, Тарман Г. М.2
1 Кафедра биохимии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»
2 Tiroler Landesmuseen, Ferdinandeum, Naturwissenschaftliche Abteilung, Sammlungs- und Forschungszentrum, Инсбрук, Австрия
Для корреспонденции: Ефетов Константин Александрович, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой биохимии Медицинской академии имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского», е-mail: efetov.konst@gmail.com
For correspondence: Efetov Konstantin Aleksandrovich, Professor, Head of the Department of Biochemistry, Medical Academy of Vernadsky CFU, Simferopol, е-mail: efetov.konst@gmail.com
Information about authors:
Efetov K. A., http://orcid.org 0000-0003-1468-7264 Lazareva Z. S., http://orcid.org 0000-0003-3179-3501 Parshkova Е. V., http://orcid.org 0000-0003-1304-6879 Тагтапп G. М., http://orcid.org 0000-0002-7360-5698
РЕЗЮМЕ
В работе представлен сравнительный анализ аминокислотных последовательностей участка первой субъединицы митохондриальной цитохромоксидазы, расшифрованных в результате секвенирования части гена COI в рамках международного проекта по ДНК-штрихкодированию. В последовательностях длиной 219 аминокислотных остатков выявлены три вариабельных позиции на уровне рода и несколько -подродоспецифичных. В подроде Zygaena определено наибольшее число точек аминокислотной вариабельности по сравнению с подродами Mesembrynus и Agrumenia.
Ключевые слова: ДНК-штрихкодирование; ген СО!; цитохромоксидаза; вариабельность аминокислотных последовательностей; Zygaena.
VARIABILITY OF AMINO ACID SEQUENCES CODED BY THE 658bp-REGION OF THE MITOCHONDRIAL CYTOCHROME OXIDASE FIRST SUBUNIT GENE IN SPECIES OF THE GENUS ZYGAENA FABRICIUS, 1775
Efetov K. A., Lazareva Z. S., Parshkova E. V., Tarmann G. M.
SUMMARY
The paper presents a comparative analysis of the amino acid sequences of the first subunit of mitochondrial cytochrome oxidase obtained by sequencing the 658bp-region of COI gene within the framework of the international project on DNA barcoding. Three variable positions at the genus level and several subgeneric ones have been revealed in the region of 219 amino acid residues. It has been established that the number of amino acid variability points in the subgenus Zygaena is greater than in the subgenera Mesembrynus and Agrumenia.
Key words: DNA barcoding; COI gene; cytochrome oxidase; variability of amino acids; Zygaena.
С конца XX века интенсивно ведётся поиск «молекулярных инструментов», позволяющих однозначно идентифицировать любые биологические объекты. Для некоторых групп животных, например насекомых, решение этого вопроса несёт в себе дополнительное удобство, так как позволяет идентифицировать принадлежность организма к таксономической единице на любой стадии развития [1, 2]. В 2003 году П. Д. Н. Гебертом и соавторами был предложен молекулярный маркер для определения видовой принадлежности животных - ген цитохромоксидазы. Комплекс цитохромов аа3, иначе имену-
емый цитохромоксидазой, локализуется на внутренней митохондриальной мембране и играет ключевую роль в обеспечении клетки энергией. Цитохромоксидаза является металлопротеином и состоит из нескольких субъединиц. Для анализа используется ДНК-штрихкод - 5'-концевой участок гена первой субъединицы (COI) длиной 658 пар оснований (658bp) [3]. В результате исследований различных таксонов животных было показано, что межвидовая изменчивость этого фрагмента значительно превышает внутривидовую, при этом стандартный порог дивергенции составляет около 2 %. Это позволяет анализи-
ровать данный участок митохондриального генома для определения видовой принадлежности исследуемых особей [4]. Изучение ДНК-штрихкодов и возможных путей использования полученных данных для улучшения существующей таксономии и биосистематики в настоящее время активно проводится по всему миру для всех групп живых организмов [1-4]. Эффективность ДНК-штрихкодирования была показана для определения видов-вредителей сельского хозяйства на всех стадиях развития, биоиндикаторных видов, разграничения видов-двойников, определения систематического положения вымерших видов и т. д. [1-9]. В последнее время ДНК-штрихкодирование применяется также для оценки качества продуктов питания [10].
Определенный интерес вызывает анализ аминокислотных последовательностей, кодируемых 658Ьр-участком гена СО1 (после исключения праймерных последовательностей полипептидный фрагмент, соответствующий ДНК-штрихкоду, содержит 219 аминокислот). Такие исследования недавно были проведены для отдельных пресноводных биоиндикаторных видов, а также представителей класса паукообразных и т. д. [5, 8, 9, 11]. Ранее нами анализировались нуклеотидные последовательности ДНК-штрихкодов для семейства Zygaenidae (Insecta, Lepidoptera) [12]. Отметим, что секвенирование нуклеиновых кислот в комплексе с изучением других молекулярных признаков, морфологии и биологии представителей данного семейства в последние годы привело к описанию целой серии новых для науки биологических видов, а также значительному прогрессу в систематике Zygaenidae [12-21].
В данной статье обсуждаются различия соответствующих ДНК-штрихкодам аминокислотных последовательностей участка первой субъединицы цитохромоксидазы у представителей рода Zygaena Fabricius, 1775.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Материал для изучения ДНК от представителей различных видов рода Zygaena получен в результате собственных сборов авторов, в некоторых случаях предоставлен зарубежными учеными или кураторами европейских музеев. Стерильными инструментами отделяли часть тела имаго каждого исследуемого экземпляра (высушенного или хранившегося в 96 % этаноле) и помещали в отдельную микропробирку. Выделение ДНК из образцов, амплификацию и секвенирование ДНК проводили в канадском Центре ДНК-штрихкодирования (The Canadian Centre for DNA Barcoding, Biodiversity Institute of Ontario, University of Guelph, Гуэлф, Канада)
в соответствии со стандартными протоколами [22]. ДНК из большинства образцов выделяли стандартизованным методом с протеиназой К в блоках на 96 микропробирок Eppendorf®, используя автоматический анализатор Biomek® NXP. Участок митохондриального гена цитохромоксидазы амплифицировали методом по-лимеразной цепной реакции. Объём смеси составлял 12,5 мкл и содержал: 6,25 мкл 10 % тре-галозы (Sigma); 2 мкл бидистилированной H20; 0,625 мкл 50 мМ MgCl2; 1,25 мкл 10X ПЦР-буфера; по 0,125 мкл каждого из пары праймеров (все -Invitrogen™); 0,0625 мкл 10 мМ смеси dNTP New England Biolabs®; 0,06 мкл ТядДНК-полимеразы Invitrogen™ (5 Ед/мкл) и 2 мкл матричной ДНК. Использовались стандартные праймеры: LepF1:
ATTCAACCAATCATAAAGATAT TGG, LepR1:
TAAACTTCTGGATGTCCAAAAAATCA. В качестве дополнительных использовались также следующие праймеры: MLepF1:
GCTTTCCCACGAATAAATAATA, MLepR1:
CCTGTTCCAGCTCCATTTTC, LC01490 (C_LepFolF): GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG, HC02198 (C_LepFolR): TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA. Амплификацию проводили с помощью тер-моциклера Mastercycler® ep gradient Eppendorf® по следующей программе. Начальная денатурация при 94 °C - 1 минута; 5 циклов: 94 °C - 30 секунд, отжиг при 45-50 °C - 40 секунд, элонгация при 72 °C - 1 минута; затем 30-35 циклов: 94 °C - 30 секунд, 51-54 °C - 40 секунд и 72 °C - 1 минута; финальная элонгация при 72 °C - 10 минут. Индикацию продуктов амплификации осуществляли методом электрофореза в 2 % агарозном геле E-gel®. Секвени-рование ДНК проводили с помощью 3730xl ДНК-анализатора (Applied Biosystems) полуавтоматическим методом AutoDTR™ EdgeBio®. Полученные нуклеотидные последовательности переводили в соответствующие аминокислотные. Различия в кодируемых 658bp-фрагментом гена C0I последовательностях аминокислот оценивали с помощью программы BioEdit.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В 2009 году стартовал международный проект «ZYGMO» (являющийся частью проекта «BOLD: The Barcode of Life Data Systems»), проводимый совместно с Центром ДНК-штрихкодирования (Гуэлф, Канада) и возглавляемый заведующим кафедрой биохимии
Крымского федерального университета профессором К. А. Ефетовым. К настоящему времени уже прочтены 658Ьр-фрагменты гена COI у более чем 130 экземпляров рода Zygaena Fabricius, 1775. Согласно нуклеотидным сиквенсам данного участка гена были расшифрованы аминокислотные последовательности, которые сравнивались друг с другом. Количество последовательностей для каждого вида, а также регионы сбора образцов представлены в таблице. Полученные результаты позволили выявить в исследуемом фрагменте цитохромоксидазы позиции аминокислотной вариабельности, появившиеся в
Список экземпляров, использованы
результате накопленных миссенс-мутаций в митохондриальной ДНК отдельных представителей рода. При анализе в роде Zygaena нами были обнаружены лишь единичные (точечные) вариабельные позиции. Эти данные отличаются от уже известных в литературе, так как в изученных публикациях у других групп животных показаны характерные для этого региона множественные (значительные) различия аминокислотного состава [5, 8]. Род Zygaena включает в себя три подрода: Mesembrynus Hübner, 1819, Agrumenia Hübner, 1819 и Zygaena Fabricius, 1775 [15, 20, 21]. Часть вариабельных
Таблица
для анализа аминокислотных замен
Вид Количество последовательностей Географические регионы находок
Zygaena (Mesembrynus) cuvieri 2 Армения
Zygaena (Mesembrynus) tamara 2 Армения
Zygaena (Mesembrynus) haematina S Иран
Zygaena (Mesembrynus) brizae 2 Крым
Zygaena (Mesembrynus) rubicundus 3 Италия
Zygaena (Mesembrynus) cambysea 4 Армения, Иран
Zygaena (Mesembrynus) erythrus 3 Италия
Zygaena (Mesembrynus) cynarae 2 Италия
Zygaena (Mesembrynus) laeta 3 Крым
Zygaena (Mesembrynus) punctum S Албания, Греция, Крым
Zygaena (Agrumenia) cocandica 2 Кыргызстан
Zygaena (Agrumenia) chirazica 1 Иран
Zygaena (Agrumenia) naumanni 1 Иран
Zygaena (Agrumenia) olivieri 2 Армения
Zygaena (Agrumenia) sedi 3 Крым
Zygaena (Agrumenia) escalerai 1 Иран
Zygaena (Agrumenia) formosa 1 Турция
Zygaena (Agrumenia) afghana 1 Афганистан
Zygaena (Agrumenia) carniolica 11 Греция, Италия, Крым, Турция
Zygaena (Agrumenia) viciae б Крым, Македония
Zygaena (Zygaena) nevadensis 4 Греция, Италия
Zygaena (Zygaena) romeo 3 Италия
Zygaena (Zygaena) osterodensis 1 Турция
Zygaena (Zygaena) ephialtes 3 Крым
Zygaena (Zygaena) transalpina 14 Италия
Zygaena (Zygaena) angelicae S Греция, Македония
Zygaena (Zygaena) filipendulae 41 Албания, Болгария, Греция, Италия, Крым
Zygaena (Zygaena) lonicerae S Италия, Крым
позиций выявлена во всех подродах, некоторые позиции оказались подродоспецифичными.
Так, в исследуемых последовательностях найдены отличия в позициях 10, 117, 123 у представителей видов всех трёх исследуемых подродов. В первых двух положениях обнаруживаются такие аминокислоты, как аланин и серин, в 123 положении - серин и глицин. Все эти аминокислоты характеризуются малым размером радикалов, и некоторые авторы не относят подобные замены к значимым, влияющим на функциональную активность данного белка. Однако есть и работы, в которых таким заменам придаётся больший вес [9]. Это объясняется тем, что серин является гидрофильной (полярной), а аланин -гидрофобной (неполярной) аминокислотой.
Большая часть выявленных позиций вариабельности встречались лишь у представителей одного из подродов. Так, в подроде МезвтЬгунш у всех исследованных видов в пятом положении обнаружена аминокислота лейцин, а в подроде Agrumenia в этом же положении - метионин. В подроде Zygaena в этой позиции находятся либо изолейцин, либо метионин. В позициях 104 в подроде МезетЬгупш и 161 в подроде Agrumenia отмечаются серин или аспарагин, в подроде Zygaena в обеих позициях - только серин. Присутствие исключительно лейцина в пятом положении изучаемого полипептидного фрагмента у MesemЬrynus является дополнительным аргументом в пользу монофилии этого подрода.
Кроме уже обсуждавшихся позиций в подроде Zygaena найдены следующие точки вариабельности: в 8 положении - изолейцин/валин, в 13 и 97 - лейцин/валин, в 95 - лейцин/метио-нин. Все упомянутые аминокислоты имеют неполярные (гидрофобные) радикалы. Их присутствие не оказывает значительного влияния на свойства данного участка полипептидной цепи, поэтому не должно существенно влиять на функциональную активность этой субъединицы цитохромоксидазы. Также для подрода Zygaena характерны следующие дополнительные вариабельные позиции: в 106 положении - аланин/ аспарагин, в 125 - серин/глицин, и в 187 - ала-нин/треонин. В данных положениях встречаются аминокислоты с различной полярностью радикалов, что потенциально может влиять на пространственную структуру изучаемого белка.
ВЫВОДЫ
1. При анализе аминокислотных последовательностей во всех исследуемых образцах выявлены единичные позиции вариабельности, в большинстве которых варьируют аминокислоты со схожей полярностью и/или размером радикала, что не должно
существенно влиять на функционирование митохондриальной цитохромоксидазы.
2. Наибольшее число позиций вариабельности аминокислот зарегистрировано в подроде Zygaena, что отражает высокую гетерогенность данной группы по сравнению с Agrumenia и Mesembrynus и является еще одним аргументом для дополнительной таксономической ревизии данного подрода.
Считаем своим долгом выразить благодарность профессору П. Д. Н. Геберту (Prof. P. D. N. Hebert) (Канада) и доктору Р. Руже (Dr R. Rougerie) (Франция) за плодотворное сотрудничество и техническую поддержку при проведении исследований.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
The authors have no conflict of interests to declare.
ЛИТЕРАТУРА
1. Lin X., Stur E., Ekrem T. Exploring Genetic Divergence in a Species-Rich Insect Genus Using 2790 DNA Barcodes. PLoS ONE. 2015;10(9). doi:10.1371/ journal.pone.0138993.
2. Mitchell A., Gopurenko D. DNA Barcoding the Heliothinae (Lepidoptera: Noctuidae) of Australia and Utility of DNA Barcodes for Pest Identification in Helicoverpa and Relatives. PLoS ONE. 2016;11(8). doi:10.1371/journal. pone.0160895.
3. Hebert P.D.N., Cywinska A., Ball S.L., deWaard J.R. Biological identifications through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 2003;270:313-322. doi:10.1098/rspb.2002.2218.
4. Chapple D.G., Ritchie P.A. A Retrospective Approach to Testing the DNA Barcoding Method. PLoS ONE. 2013;8(11). doi:10.1371/journal.pone.0077882.
5. Хусаинов А.М., Фролова Л.Л. Белок СО1 индикаторных зоопланктонных организмов как инструмент для оценки экологического состояния водоемов Казанского региона. Вестник Тамбовского университета. Серия Естественные и технические науки. 2015;20(1):189-192.
6. Nazari V., Schmidt B.C., Prosser S., Hebert P.D.N. Century-Old DNA Barcodes Reveal Phylogenetic Placement of the Extinct Jamaican Sunset Moth, Urania sloanus Cramer (Lepidoptera: Uraniidae). PLoS ONE. 2016;11(10). doi:10.1371/journal.pone.0164405.
7. Stein E.D., Martinez M.C., Stiles S., Miller P.E., Zakharov E.V. Is DNA Barcoding Actually Cheaper and Faster than Traditional Morphological Methods: Results from a Survey of Freshwater Bioassessment Efforts in the United States? PLoS ONE. 2014;9(4). doi:10.1371/journal. pone.0095525.
8. Ward R.D., Holmes B.H. An analysis of nucleotide and amino acid variability in the barcode region of cytochrome c oxidase I (coxl) in fishes. Molecular Ecology Notes. 2007;7:899-907. doi:10.1111/j.1471-8286.2007.01886.x.
9. Pappalardo A.M., Federico C., Sabella G., Saccone S., Ferrito V. A COI Nonsynonymous Mutation as Diagnostic Tool for Intraspecific Discrimination in the European Anchovy Engraulis encrasicolus (Linnaeus). PLoS ONE. 2015;10(11). doi:10.1371/journal. pone.0143297.
10. Deeds J.R., Handy S.M., Fry F.Jr. et al. Protocol for building a reference standard sequence library for DNA-based seafood identification. Journal of AOAC International. 2014;97(6):626-633. doi:10.5740/ jaoacint.14-111.
11. Young M.R., Hebert P.D.N. Patterns of Protein Evolution in Cytochrome c Oxidase I (COI) from the Class Arachnida. PLoS ONE. 2015;10(8). doi:10.1371/journal. pone.0135053.
12. Ефетов К.А., Кирсанова А.В., Лазарева З.С., Паршкова Е.В., Тарман Г.М. Изучение нуклеотид-ных последовательностей гена первой субъединицы митохондриальной цитохромоксидазы и решение некоторых вопросов биосистематики Zygaenidae (Lepidoptera). Таврический медико-биологический вестник. 2016;19(1):28-33.
13. Efetov K.A. Two new species of the genus Artona Walker, 1854 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 1997;48(3):165-177.
14. Efetov K.A. On the systematic position of Zygaenoprocris Hampson, 1900 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) and the erection of two new subgenera. Entomologist's Gazette. 2001;52(1):41-48.
15. Efetov K.A. Forester and Burnet Moths (Lepidoptera: Zygaenidae). The genera Theresimima Strand, 1917, Rhagades Wallengren, 1863, Zygaenoprocris Hampson, 1900, Adscita Retzius, 1783, Jordanita Verity, 1946 (Procridinae), and Zygaena Fabricius, 1775 (Zygaeninae). Simferopol: CSMU Press; 2004.
16. Efetov K.A. Nine new species of the genus Chrysartona Swinhoe, 1892 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 2006;57(1):23-50.
17. Efetov K.A., Subchev M.A., Toshova T.B., Kiselev V.M. Attraction of Zygaenoprocris taftana (Alberti, 1939) and Jordanita horni (Alberti, 1937) (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) by synthetic sex pheromones in Armenia. Entomologist's Gazette. 2011;62(2):113-121.
18. Efetov K.A., Tarmann G.M. The hypothetical ground plan of the Zygaenidae, with a review of the possible autapomorphies of the Procridinae and the description of the Inouelinae subfam. nov. Journal of the Lepidopterists' Society. 2017;71(1):20-49. doi:10.18473/ lepi.v71i1.a5.
19. Subchev M., Koshio C., Toshova T., Efetov K.A., Francke W. (2R)-butyl (7Z)-dodecenoate, a main sex pheromone component of Illiberis (Primilliberis) pruni Dyar (Lepidoptera: Zygaenidae: Procridinae)? Acta Zoologica Bulgaria. 2013;65(3):391-396.
20. Hofmann A., Tremewan W.G. A revised checklist of the genus Zygaena Fabricius, 1775 (Lepidoptera:
Zygaenidae, Zygaeninae), based on the biospecies concept. Entomologist's Gazette. 2010;61:119-131.
21. Hofmann A.F., Tremewan W.G. The Natural History of Burnet Moths (Zygaena Fabricius, 1775) (Lepidoptera: Zygaenidae). Part 1. Proceedings of the Museum Witt, Munich. 2017;6(2):1-631.
22. Ratnasingham S., Hebert P.D.N. BOLD: The Barcode of Life Data System (www.barcodinglife.org). Ecology Notes. 2007;7:355-364. doi:10.1111/j.1471-8286.2007.01678.x.
REFERENCES
1. Lin X., Stur E., Ekrem T. Exploring Genetic Divergence in a Species-Rich Insect Genus Using 2790 DNA Barcodes. PLoS ONE. 2015;10(9). doi:10.1371/ journal.pone.0138993.
2. Mitchell A., Gopurenko D. DNA Barcoding the Heliothinae (Lepidoptera: Noctuidae) of Australia and Utility of DNA Barcodes for Pest Identification in Helicoverpa and Relatives. PLoS ONE. 2016;11(8). doi:10.1371/journal. pone.0160895.
3. Hebert P.D.N., Cywinska A., Ball S.L., deWaard J.R. Biological identifications through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 2003;270:313-322. doi:10.1098/rspb.2002.2218.
4. Chapple D.G., Ritchie P.A. A Retrospective Approach to Testing the DNA Barcoding Method. PLoS ONE. 2013;8(11). doi:10.1371/journal.pone.0077882.
5. Khusainov A.M., Frolova L.L. Protein C01 as a marker for zooplankton identification for estimation of the ecological condition of water reservoirs of Kazan region. Tambov University Reports. Series Natural and Technical Sciences. 2015;20(1):189-192. (In Russ.)
6. Nazari V., Schmidt B.C., Prosser S., Hebert P.D.N. Century-Old DNA Barcodes Reveal Phylogenetic Placement of the Extinct Jamaican Sunset Moth, Urania sloanus Cramer (Lepidoptera: Uraniidae). PLoS ONE. 2016;11(10). doi:10.1371/journal.pone.0164405.
7. Stein E.D., Martinez M.C., Stiles S., Miller P.E., Zakharov E.V. Is DNA Barcoding Actually Cheaper and Faster than Traditional Morphological Methods: Results from a Survey of Freshwater Bioassessment Efforts in the United States? PLoS ONE. 2014;9(4). doi:10.1371/journal. pone.0095525.
8. Ward R.D., Holmes B.H. An analysis of nucleotide and amino acid variability in the barcode region of cytochrome c oxidase I (cox1) in fishes. Molecular Ecology Notes. 2007;7:899-907. doi:10.1111/j.1471-8286.2007.01886.x.
9. Pappalardo A.M., Federico C., Sabella G., Saccone S., Ferrito V. A COI Nonsynonymous Mutation as Diagnostic Tool for Intraspecific Discrimination in the European Anchovy Engraulis encrasicolus (Linnaeus). PLoS ONE. 2015;10(11). doi:10.1371/journal. pone.0143297.
10. Deeds J.R., Handy S.M., Fry F.Jr. et al. Protocol for building a reference standard sequence library for
DNA-based seafood identification. Journal of AOAC International. 2014;97(6):626-633. doi:10.5740/ jaoacint.14-111.
11. Young M.R., Hebert P.D.N. Patterns of Protein Evolution in Cytochrome c Oxidase I (COI) from the Class Arachnida. PLoS ONE. 2015;10(8). doi:10.1371/journal. pone.0135053.
12. Efetov K.A., Kirsanova A.V., Lazareva Z.S., Parshkova E.V., Tarmann G.M. A study of nucleotide sequences of the mitochondrial COI gene and solution of some problems of Zygaenidae (Lepidoptera) biosystematics. Tavricheskiy Mediko-biologicheskiy Vestnik. 2016;19(1):28-33. (In Russ.)
13. Efetov K.A. Two new species of the genus Artona Walker, 1854 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 1997;48(3):165-177.
14. Efetov K.A. On the systematic position of Zygaenoprocris Hampson, 1900 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) and the erection of two new subgenera. Entomologist's Gazette. 2001;52(1):41-48.
15. Efetov K.A. Forester and Burnet Moths (Lepidoptera: Zygaenidae). The genera Theresimima Strand, 1917, Rhagades Wallengren, 1863, Zygaenoprocris Hampson, 1900, Adscita Retzius, 1783, Jordanita Verity, 1946 (Procridinae), and Zygaena Fabricius, 1775 (Zygaeninae). Simferopol: CSMU Press; 2004.
16. Efetov K.A. Nine new species of the genus Chrysartona Swinhoe, 1892 (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae). Entomologist's Gazette. 2006;57(1):23-50.
17. Efetov K.A., Subchev M.A., Toshova T.B., Kiselev V.M. Attraction of Zygaenoprocris taftana (Alberti, 1939) and Jordanita horni (Alberti, 1937) (Lepidoptera: Zygaenidae, Procridinae) by synthetic sex pheromones in Armenia. Entomologist's Gazette. 2011;62(2):113-121.
18. Efetov K.A., Tarmann G.M. The hypothetical ground plan of the Zygaenidae, with a review of the possible autapomorphies of the Procridinae and the description of the Inouelinae subfam. nov. Journal of the Lepidopterists' Society. 2017;71(1):20-49. doi:10.18473/ lepi.v71i1.a5.
19. Subchev M., Koshio C., Toshova T., Efetov K.A., Francke W. (2R)-butyl (7Z)-dodecenoate, a main sex pheromone component of Illiberis (Primilliberis) pruni Dyar (Lepidoptera: Zygaenidae: Procridinae)? Acta Zoologica Bulgarica. 2013;65(3):391-396.
20. Hofmann A., Tremewan W.G. A revised checklist of the genus Zygaena Fabricius, 1775 (Lepidoptera: Zygaenidae, Zygaeninae), based on the biospecies concept. Entomologist's Gazette. 2010;61:119-131.
21. Hofmann A.F., Tremewan W.G. The Natural History of Burnet Moths (Zygaena Fabricius, 1775) (Lepidoptera: Zygaenidae). Part 1. Proceedings of the Museum Witt, Munich. 2017;6(2):1-631.
22. Ratnasingham S., Hebert P.D.N. BOLD: The Barcode of Life Data System (www.barcodinglife.org). Ecology Notes. 2007;7:355-364. doi:10.1111/j.1471-8286.2007.01678.x.
