CC BY
17ИЗУЧЕНИЕ КОМПЛЕКСА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ХАТЬМЫ ТЮРИНГЕНСКОЙ ТРАВЫ И КОРНЕЙ, ЗАГОТОВЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ АЛТАЙСКОГО КРАЯ
Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул
Мызникова О.А., Федосеева Л.М.
В статье представлены результаты проведения реакций на различные группы БАС хатьмы тюрингенской травы и корней, а также результат использования высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в разделении и идентификации фенольных соединений. Ключевые слова: хатьма, БАС, хроматография
The article presents the results of the reactions to various groups of HAS of the Thurlingian herb and roots, as well as the result of the use of high-performance liquid chromatography (HPLC) in the separation and identification of phenolic compounds.
Key words: hathma, BAS, chromatography
Поиск новых источников лекарственного растительного сырья -актуальная проблема фармации. В народной медицине накоплен опыт применения растений для лечения различных заболеваний [1]. Корни хатьмы тюрингенской (Lavaterae thuringiacae radices) издавна используются в качестве отхаркивающего, обволакивающего, противовоспалительного средства [4]. Для сохранения растения в природе целесообразно использование надземных органов. Поэтому целью работы явилось изучение комплекса биологически активных соединений (БАС) хатьмы тюрингенской травы и корней.
Задачи исследования:
1. проведение качественных реакций на различные группы БАС хатьмы тюрингенской травы и корней;
2. разделение и идентификация фенольных соединений хатьмы тюрингенской травы и корней методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Материалы и методы
Объекты исследования - хатьмы тюрингенской трава и корни. Траву заготавливали в период цветения (июль 2016 г.), корни - после плодоношения (сентябрь 2016 г.) на территории Бийского района Алтайского края.
Состав комплекса БАС исследуемых объектов устанавливали с помощью химических и физико-химических методов. Проводили реакции на
следующие группы соединений: полисахариды, сапонины, дубильные вещества, флавоноиды, кумарины [3]. Для этого получали извлечения в соотношении «сырьё-экстрагент» - 1:10. В качестве экстрагента при исследовании полисахаридов, сапонинов, дубильных веществ использовали воду очищенную, при исследовании кумаринов и флавоноидов - спирт этиловый 70%.
Наличие полисахаридов в сырье подтверждали путём их осаждения спиртом этиловым 96%. Обнаружение сапонинов проводили с помощью реакций пенообразования, Лафона, реакций со свинца ацетата раствором, натрия нитрата раствором; обнаружение дубильных веществ - с помощью реакций с железа (III) аммония сульфата раствором 1,0%, хинина гидрохлорида раствором 1%, желатина раствором 1%. На флавоноиды проводили цианидиновую пробу, борно-лимонную реакцию, реакции с аммиака раствором 10%, свинца(П) ацетата основного раствором, ванилина раствором 1%, алюминия хлорида раствором спиртовым 5%; на кумарины -лактонную пробу, реакции сублимации и образования азокрасителя (таблица 1).
Для разделения и идентификации фенольных соединений спиртовые извлечения травы и корней исследовали методом ВЭЖХ на микроколоночном жидкостном хроматографе «МилиХром А-02» с УФ-детектором. Условия анализа: хроматографическая колонка 2,0 х 75 мм; сорбент NucleoSIL-120-5-С18 с размером частиц 5 мкм; элюент А -
раствор кислоты трифторуксусной водный 0,01%, элюент Б - ацетонитрил. Скорость подачи элюента - 100 мкл/мин, объём пробы - 2 мкл, температура колонки 35°С; градиент 5-55% элюента Б за 30 мин. Детектирование веществ проводили при длинах волн 220, 254, 268, 300, 324, 360 нм. Соединения идентифицировали по временам удерживания (т) и спектральным характеристикам (Хтах) путём сравнения их с аналогичными показателями стандартных образцов «Sigma-Aldrich» и литературными данными [2, 3, 5, 6].
Результаты и обсуждение
В ходе работы установлено, что в траве и корнях хатьмы тюрингенской содержатся полисахариды, сапонины, конденсированные дубильные вещества, флавоноиды групп флавона, флавонола и кумарины, о чём свидетельствуют положительные результаты качественных реакций.
При дальнейшем исследовании методом ВЭЖХ на хроматограммах спиртовых извлечений травы зарегистрировано 14 пиков, спиртовых извлечений корней - 4 пика.
Соединения спиртового извлечения травы идентифицированы как производное хлорогеновой кислоты (т=9,6 мин; Хтах=213; 235пл; 305пл; 330 нм), флавоноиды группы флавона (т=11,5 мин; Хтах=202; 268; 330 нм; т=15,3 мин; Атах=200; 270; 335 нм; т=15,7 мин; Атах=200; 270; 330 нм; т=16,5 мин; ^тах=200; 270; 330 нм; т=16,7 мин; Атах=200; 268; 335 нм; т=21,0 мин;
А,тах=222пл; 268; 315 нм; т=21,5 мин; Атах=268; 310 нм), соединения кумаринового ряда (т=12,0 мин; Атах=198; 215пл; 270; 328 нм; т=12,5 мин; Хшах=196; 213пл; 275; 298пл; 330 нм; т=13,5 мин; Хтах=198; 212пл; 270; 328 нм), производные катехина (т=14,8 мин; Хтах=200; 270 нм; т=18,0 мин; ^тах=200; 275 нм; т=18,3 мин; Атах=200; 270 нм).
Соединения спиртового извлечения корней: производное хлорогеновой кислоты (т=9,5 мин; Хтах=212; 235пл; 305пл; 330 нм), производные умбеллиферона (т=12,2 мин; Хтах=220пл; 315 нм; т=13,6 мин; ^тах=218пл; 330 нм), производное кофейной кислоты (т=13,1 мин; Атах=219; 235пл; 330 нм).
Таблица 1
Результаты качественных реакций на различные группы БАС хатьмы
тюрингенской травы и корней
Наименование реакции / реактива Положительные результаты реакций
Извлечение травы Извлечение корней
Полисахариды
Реакция осаждения спиртом этиловым 96% Выпадение хлопьевидных сгустков
Сапонины
Реакция пенообразования Образование пены
Реакция осаждения со свинца ацетата раствором Выпадение аморфного осадка жёлтого цвета
Реакция Лафона Слабое сине-зелёное окрашивание
Натрия нитрата раствор 10%, серная кислота концентрированная Красное окрашивание
Дубильные вещества
Железа(Ш) аммония сульфата раствор 1,0% Чёрно-зелёное окрашивание
Хинина гидрохлорида раствор 1% Образование аморфного осадка
Желатина раствор 1% Образование белой мути
Флавоноиды
Цианидиновая проба Оранжево-красное окрашивание (флавонолы, флавоны, флаваноны)
Борно-лимонная реакция Жёлтое окрашивание, жёлто-зелёная Отсутствие окрашивания
флюоресценция (5-оксифлавоны, 5-оксифлавонолы)
Аммиака раствор 10% Жёлтое окрашивание (флавонолы, флавоны, флаваноны, флаванонолы)
Реакция осаждения со свинца(П) ацетата основного раствором Жёлтый осадок (флавоны, халконы, ауроны)
Ванилина раствор 1 % Коричневое окрашивание (катехины) Отсутствие окрашивания
Алюминия хлорида раствор спиртовый 5% Жёлтая флюоресценция (флавоны, флавононолы, халконы)
Кумарины
Лактонная проба Жёлтое окрашивание, помутнение раствора
Реакция образования азокрасителя Оранжевое окрашивание
Реакция сублимации Образование маслянистого сублимата оранжевого цвета
Заключение
Комплекс БАС травы хатьмы тюрингенской представлен полисахаридами, сапонинами, дубильными веществами, оксикоричными кислотами (производными хлорогеновой кислоты), флавоноидами групп флавона и катехина, кумаринами; комплекс БАС корней представлен полисахаридами, сапонинами, дубильными веществами, оксикоричными кислотами (производными кофейной и хлорогеновой кислот), флавоноидами, кумаринами (производными умбеллиферона). Это подтверждает перспективность изучения сырья. Следующий этап исследования - сравнение количественного содержания БАС в различных органах хатьмы тюрингенской.
Список литературы:
1. Кукес В.Г., Стародубцев А.К., Блинков И.Л., Сидоренкова Н.Б. и др. Клиническая фармакология и фармакотерапия: учебник для вузов / Москва, 2003.
2. Природные флавоноиды / Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А., Музычкина Р.А., Толстиков Г.А. Новосибирск: Гео, 2007. 232 с.
3. Химический анализ лекарственных растений: учеб. пособие для фармац. вузов / Ладыгина Е.Я., Сафронович Л.Н., Отряшенкова В.Э., Под ред. Гринкевич Н.И. М.: Высшая школа, 1983. 176 с.
4. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. Саратов: Приволжское книжное издательство, 1993. 544 с.
5. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The systematic identification of Flavonoids. Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlag, 1970. 354 c.
6. Wagner H., Bauer R., Melchart D., Xiao P.-G., Staudinger A. Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines. Wien-New York: Springer Wien New York, 2011. 1012 c.
