CC BY
19
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология инфекций Immunology infections
тели в трёх группах до лечения не различались (р^ > 0,05). После проведенного лечения между тремя группами были выявлены статистически значимые различия по четырем показателям: 1) уровню специфических антител А-изотипа в сыворотке к стафилококку (р^ = 0,0336) и 2) к клебсиелле (рмт = 0,0374), 3) уровню специфических антител А-изотипа к стафилококку в слюне (рмт = 0,0357) и 4) относительному значению NK-клеток CD16+ фенотипа (рмт= 0,0281). Для этих четырёх показателей дополнительно провели парные сравнения по критерию Манн—Уитни с поправкой Бонферрони. Статистически значимые различия по показателю 1 после проведенного лечения (рми B = 0,0123) были выявлены между группой 1 [Ме = 809,5 (448,0-3650,0)] и 2 [Ме = 4147,0 (959,015344,0)]; между группой 1 и 3 [Ме = 3200,0 (624,0-4907,0)] имелась только тенденция к отличию (рми-в = 0,0205). По показателю 2 значимо (рми в = 0,0066) отличались только группа 1 [Ме = 70,5 (5,0-141,0)] и 2 [Ме = 277,0 (112,01523,0)], а по показателю 3 имелась только тенденция к отличию (рми в = 0,0276) между группами 1 [Ме = 26,0 (2,0-251,0)] и 3 [Ме = 73,0 (66,0-400,0)]. Значение показателя 4 в группе 3 [Ме = 18,0 (15,0-32,0)] имело тенденцию к отличию от такового в группе 1 [Ме = 10,0 (7,0-25,0)] с рми-в = 0,0396 и 2 [Ме = 12,0 (4,0-21,0)] с р^ = 0,0497.
Заключение. Применение критерия множественного сравнения для анализа результатов динамического исследования в трех группах дало возможность обнаружить на малых выборках наиболее сильные эффекты воздействия на показатели иммунного статуса при использовании трех различных методов иммунотерапии бактериальными вакцинами.
ИЗУЧЕНИЕ КОЛЛЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА К ПАНДЕМИЧЕСКИМ ВИРУСАМ ГРИППА А(Н1N1)pdm СРЕДИ ПАЦИЕНТОВ РАЗНОГО ВОЗРАСТА
Сычев И.А.1, Смолоногина Т.А.1, Лернер А.А.1, Кучинская М.М.1, Краббе Н.В.1, Дешева Ю.АЛ 2
1ФГБНУ«Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБОУВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Санкт-Петербург, Россия
Введение. Пандемия гриппа 2009 г., вызванная вирусом A(H1N1)pdm, дала стимул к исследованиям перекрестно-реагирующих антител к нейраминидазе (NA) подтипа N1. Антитела, направленные против основного антигена вируса гриппа — гемагглютинина (НА) — являются вирус-
нейтрализующими, однако не защищают от инфекции при появлении в циркуляции вирусов с новым подтипом НА. В этом случае наличие у части людей перекрестно-реагирующих анти^А антител, приобретенных вследствие контактов с ранее циркулирующими вирусами гриппа, может стать решающим в снижении заболеваемости и смертности. В связи с этим в настоящее время целый ряд исследований посвящен изучению формирования и защитной функции антител к NA при инфекции вирусами гриппа и иммунизации гриппозными вакцинами.
Цель. Оценка коллективного иммунитета к НА и NA вируса гриппа A(H1N1)pdm09 и его дрейфового варианта в течение эпидемического сезона 2015-2016 гг. среди пациентов МНЦ ФГБНУ «ИЭМ». Для этого потребовалась разработка нового диагностического вируса гриппа, содержащего NA вируса гриппа А/Южная Африка/3626/2013(Н1Ш).
Материалы и методы. В исследовании изучались сыворотки крови 134 пациентов МНЦ ФГБНУ «ИЭМ» в возрасте от 24 до 84 лет, собранные в январе-марте 2016 г. согласно протоколу Локального Этического комитета при ФГБНУ «ИЭМ» № 2/16 от 12 мая 2016 г. Для определения антител к NA в твердофазной реакции ин-гибирования нейраминидазной активности (РИНА) (Смолоногина ТА. и соавт., 2011) использовались следующие реассортантные вирусы гриппа: А(Н7Ш), содержащий NA вируса А/Калифорния/07/2009(Н1Ш) pdm [H1N1pdm] и А(Н6Ш), содержащий NA вируса А/ Южная Африка/3626/2013(Н1Ш). Вирусы ШШрёт, А/Южная Африка/3626/2013(Н1Ш) и А/Новая Каледония/20/1999(Н1Ш) использовали в качестве антигенов в реакции торможения агглютинации (РТГА).
Результаты. Выявлено статистически значимое повышение средних титров антигемагглютинирующих антител к пандемическим вирусам гриппа среди лиц, перенесших ОРЗ в текущем эпидемическом сезоне, по сравнению с лицами, не имеющими ОРЗ в анамнезе (Р < 0,05). В группе пациентов 24-45 лет доли лиц с защитными уровнями антигемагглютинирующих антител (> 1:40) к вирусу A(H1N1)pdm и эпидемическому вирусу А/Новая Каледония/20/1999(Н1Ш), вышедшему из циркуляции в 2009 г., были значительно выше по сравнению с лицами старшего возраста (табл.). Это может свидетельствовать о наиболее частом инфицировании указанными вирусами в данной возрастной группе. Среди участников молодого и среднего возраста доля лиц с защитными титрами антител к НА дрейфового варианта А/Южная Африка/3626/13(НШ1) была выше по сравнению со участ-
ТАБЛИЦА. УРОВНИ КОЛЛЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА К ПОВЕРХНОСТНЫМ АНТИГЕНАМ ВИРУСОВ ГРИППА А(ЖМ) СРЕДИ ПАЦИЕНТОВ, ОБСЛЕДОВАННЫХ В ЭПИДЕМИЧЕСКОМ СЕЗОНЕ 2015-2016 гг. (К ТЕЗИСАМ СЫЧЕВА И.А.И ДР.)
Возраст Число в группе % лиц с титрами антител > 1:40
Антитела к НА (РТГА) Антитела к NA (РИНА)
ЮАР/2013 H1N1pdm Новая Каледония/1999 ЮАР/2013 H1N1pdm
24-45 24 8,3a 16,7 33,3b,c 0 17,7d
46-64 48 6,3 10,4 2,1b 2,8 8,3e
65-84 62 3,2a 6,5 4,8c 3,2 50,0de
Примечание. а - Р = 0,049; b - Р = 0,045; c - Р = 0,001; d - P = 0,01; e - P < 0,001.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
никами 65-84 лет, что также может указывать на более частое инфицирование. В то же время в группе до 45 лет не выявлено защитных уровней анти-NA антител к вирусу А/ Южная Африка/3626/13(НШ1). Наивысшая доля лиц с защитными титрами антител к NA вируса H1N1pdm (50%) выявлена среди лиц старше 65 лет, в то время как титры антител > 1:40 к НА пандемических вирусов среди этой возрастной группы встречались значительно реже в сравнении с лицами 24-45 лет. Эти данные свидетельствуют, что высокий уровень коллективного иммунитета к NA вируса H1N1pdm среди участников старше 65 лет не связан с перенесенными инфекциями пандемическими вирусами 2009 года, а опосредован перекрестно-реагирующими антителами, приобретенными, возможно, вследствие предшествующих контактов с циркулирующими до 1957 г. эпидемическими вирусами A(H1N1).
Заключение. Данные серологического обследования показали, что дрейфовый вариант вируса пандемического гриппа, подобный А/Южная Африка/3626/13(Н1Ш), циркулировал в 2015-2016 гг. на территории Санкт-Петербурга. Уровни коллективного иммунитета к НА дрейфового варианта H1N1pdm среди лиц разного возраста свидетельствует, что наиболее часто инфицированию могли подвергаться лица молодого и среднего возраста. Низкий уровень коллективного иммунитета к NA дрейфового варианта пандемического штамма может свидетельствовать о повышенной уязвимости лиц молодого и среднего возраста перед этим вирусом и указывать на необходимость проведения вакцинации.
ОЦЕНКА Т-КЛЕТОЧНОГО КОМПОНЕНТА В ФОРМИРОВАНИИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
Федорова И.М., Устинова М.А., Комбарова С.Ю., Котелева С.В., Капустин И.В., Рамазанова З.К., Скирда Т.А., Мартыненко И.Г.
ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» им. Т.Н. Габричевского, Москва, Россия
В России профилактика менингококкового менингита предполагает вакцинацию групп риска прежде всего против менингококков серогрупп А и С. В состав отечественных или зарубежных вакцин входят полисахариды: N. meningitidis, иммунный ответ на которые может реализоваться как Т-независимый. Однако поскольку достигнутый иммунный ответ не отличается значительной длительностью, воз-
растает интерес к конъюгированным вакцинам, вызывающим более выраженный Т-клеточный иммунный ответ.
Цель. Отработка оптимальной процедуры оценки специфического клеточного иммунитета на А-полисахарид (АП) N. meningitidis (дозы антигена для активации лимфоцитов, сроков взятия крови у привитых) для последующего мониторинга формирования клеточного иммунитета у лиц, привитых полисахаридной или конъюгированной менингококковой вакцинами.
Методом антигенной стимуляции выделенных из крови лимфоцитов было их культивирование (37 °С, 5% СО2) в присутствии АП, источником которого служила менингококковая группы А полисахаридная вакцина (производство НПО «Микроген», Россия). К 2 х 105 лимфоцитов добавляли 100 мкл раствора АП, с концентрацией от 5 до 25 мкг/мл. Стимуляция клеток длилась 20 часов, после чего культуральные супернатанты отбирали для определения в них концентрации IFNy, а в пуле лимфоцитов методом проточной цитометрии выявляли Т-клетки, экспрессирующие маркер ранней активации CD69. Повышение количества таких клеток, как и повышение продукции ими IFNy, является признаком антигенной активации Т-лимфоцитов. Показатели уровня антигенной стимуляции лимфоцитов сопоставляли с титром антител к N. meningitidis, который оценивали методом РНГА.
Результаты. Определение оптимальной дозы для стимуляции проводили на основе сравнения реакции на АП лимфоцитов непривитых людей и лимфоцитов лиц, привитых за 1-2 года до настоящего исследования вакциной Менцевакс ACWY (GlaxoSmithKline Biologicals, Бельгия).
Исследование исходного фона привитых и непривитых показало следующее. В группе из 16 привитых активация лимфоцитов 25 мкг/мл АП вызывала увеличение количества CD4+CD69+Т-клеток у 38% и CD8+CD69+T-клеток — у 88%, дозой 10 мкг/мл АП, — соответственно, у 25 и у 30%, дозой 5 мкг/мл АП — у 0 и у 21%. В группе из 8 непривитых стимуляция лимфоцитов АП была отмечена только у 2 человек, в сыворотке которых уже исходно определялись антитела к N. meningitidis в титре 1:20. Концентрация АП 10 мкг/мл была признана оптимальной и в дальнейшем использовалась для оценки поствакцинальной динамики Т-клеточного иммунитета.
Через 1 месяц после введения Менцевакс у 71% обследованных отмечалось 4-кратное и более увеличение титров антител к АП. В таблице можно видеть, что при этом в группе ревакцинированных становится в 1,5-2 раза больше лиц, Т-лимфоциты которых активируются в присутствии 10 мкг/мл АП. В группе первично привитых от менингококковой инфекции те или иные
ТАБЛИЦА (К ТЕЗИСАМ ФЕДОРОВОЙ И.М. И ДР.)
Признаки наличия в крови антигенспецифических Т-клеток, первично привитых % людей с наличием признака среди
ревакцинированных
Повышение при стимуляции АП количества клеток с фенотипом CD3+CD4+CD69+ 88 46
CD3+CD4+CD69+ 100 69
Повышение продукции IFNy лимфоцитами при их стимуляции АП 88 62
Заключение. Отработанный метод может служить для оценки клеточного иммунитета к менингококковому полисахариду.
