Обнаружение у людей кроссреактивных антител и Т-клеток иммунологической памяти к антропонозным и зоонозным подтипам вируса гриппа а Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Medical Immunology (Russia)/ Медицинская иммунология ОрЫгЫНаЛЬНЬ1@ C^fttt^ftbW Meditsinskaya Immunologiya 2015, Т. 17, № 4, стр. 347-358 * ^ . . . . . 2015, Vol. 17, No 4, pp. 347-358

© 2015, СПбРО РААКИ Original articles © 2015, SPb RAACI

ОБНАРУЖЕНИЕ У ЛЮДЕЙ КРОССРЕАКТИВНЫХ АНТИТЕЛ И Т-КЛЕТОК ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАМЯТИ К АНТРОПОНОЗНЫМ И ЗООНОЗНЫМ ПОДТИПАМ ВИРУСА ГРИППА А

Лосев И.В., Донина С.А., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Григорьева Е.П., Дорошенко Е.М., Руденко Л.Г., Найхин А.Н.

ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Резюме. Существует реальная угроза прорыва в человеческую популяцию зоонозных (птичьих и свиных) вирусов гриппа А. В этом случае тяжесть таких пандемий зависит от состояния иммунитета населения к этим возбудителям. В мировой литературе неоднократно декларировалось положение о полном отсутствии у людей иммунитета к данным возбудителям. Мы исследовали состояние системного, локального и Т-клеточного иммунитета взрослых людей разного возраста к потенциально пандемическим зоонозным (H3N2sw, H5N1, H5N2, H7N3 и H7N9) и антропонозному (H2N2) вирусам гриппа А. Полученные результаты свидетельствуют, что у обследованных лиц существует (i) гетеросубтипический локальный (IgA-АТ) и Т-клеточный (CD4+ и CDS+Т-клетки центральной (Tcm) и периферической (Tem) иммунологической памяти) иммунитет, но отсутствует системный иммунитет (антигемагглютинирующие и вируснейтрализующие сывороточные антитела) к птичьим вирусам гриппа А; (ii) локальный иммунитет (IgA-АТ) к циркулировавшему в 1957-1968 гг. антропонозному вирусу А (H2N2) не только у ранее праймированных лиц, но и людей, родившихся после 1968 г; (iii) полноценный системный и локальный иммунитет к потенциально пандемическому свиному вирусу А (H3N2sw). Вывод: для научно обоснованного прогноза эпидемиологической ситуации и планирования объема противоэпидемических мероприятий по потенциально пандемическим вирусам гриппа А необходим периодический мониторинг состояния коллективного иммунитета населения к этим возбудителям по всем его адаптивным параметрам. В этом плане опора только на данные молекулярно-биологического анализа возбудителей может приводить к существенным ошибкам.

Ключевые слова: вирус гриппа, иммунизация, гетеросубтипический иммунный ответ, живая гриппозная вакцина

Адрес для переписки:

Лосев Игорь Владимирович

ФГБУ «Институт экспериментальной медициныI» 197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12. Тел.: 8(812) 234-42-92. E-mail: iemlosev@gmail.com

Образец цитирования:

И.В. Лосев, С.А Донина, Г.Д. Петухова, Д.А Кореньков, Е.П. Григорьева, Е.М. Дорошенко, Л.Г. Руденко, АН. Найхин, «Обнаружение у людей кроссреактивньа антител и Т-клеток иммунологической памяти к антропонозным и зоонозным подтипам вируса гриппа А» // Медицинская иммунология, 2015. Т. 17, № 4. С. 347-358. doi: 10.15789/1563-0625-2015-4-347-358

© Лосев И.В. и соавт., 2015

Address for correspondence:

Losev Igor V.

Research Institute of Experimental Medicine 197376, Russian Federation, St. Petersburg, Acad. Pavlov str., 12. Phone: 7 (812) 234-42-92. E-mail: iemlosev@gmail.com

For citation:

I.V. Losev, SA. Donina, G.D. Petukhova, D.A Korenkov, E.P. Grigorieva, E.M. Doroshenko, L.G. Rudenko, A.N. Naykhin, "Crossreactive antibodies and memory T cells to human and zoonotic influenza A viruses in volunteers ", Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya, 2015, Vol. 17, no. 4, pp. 347-358. doi: 10.15789/1563-0625-2015-4-347-358

DOI: http://dx.doi.org/10.15789/1563-0625-2015-4-347-358

CROSSREACTIVE ANTIBODIES AND MEMORY T CELLS TO HUMAN AND ZOONOTIC INFLUENZA A VIRUSES IN VOLUNTEERS

Losev I.V., Donina S.A., Petukhova G.D., Korenkov D.A., Grigorieva E.P., Doroshenko E.M., Rudenko L.G., Naykhin A.N.

Research Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russian Federation

Abstract. There exists a real hazard of transferring zoonotic influenza A viruses, either swine, or avian, into human population. In such case, severity of such pandemics depends on the pathogen-specific immunity in the population. Virtual absence of such immunity in humans was declared in the literature. In this work, we assessed systemic, local, and T-cell immunity to potentially pandemic H3N2sw, H5N1, H5N2, H7N3, H7N9 and H2N2 influenza A viruses in a group of healthy adults of different age. Our results indicate that these subjects develop the following immune reactions: (i) local (i.e., nasal IgA) and cellular (CD4+ and CD8v memory T cells) heterosubtypic immunity, in absence of detectable virus-specific serum antibodies to avian influenza A viruses; (ii) Local immune responses (as nasal IgA) to human A (H2N2) virus which circulated in 1957-1968 were detected both in subjects who could be primed at that time, but also in subjects born after 1968; (iii) full-scale systemic and local immunity to potentially pandemic A (H3N2sw) swine virus was found in the group. Conclusion. In order of proper epidemiological forecasts and planning appropriate preventive measures for potentially pandemic Influenza A viruses, a regular monitoring of collective immunity should be performed using different adaptive markers. In this respect, any conclusion based on molecular analysis only could lead to considerable mistakes, and should be accomplished by the mentioned immunological studies.

Keywords: influenza virus, live vaccine, immunization, heterosubtypic immunity

Введение

На протяжении многих десятилетий проблема гриппа А привлекает пристальное внимание ученых и средств массовой информации. Это связано, с одной стороны, с приобретенным опытом тяжелых последствий для человечества реальных пандемий, с другой — постоянной угрозой прорыва в человеческую популяцию вирусов гриппа А, циркулирующих среди птиц и животных. На сегодняшний день зарегистрировано 18 подтипов вируса гриппа А с гемагглютининами от Н1 до Н18 и нейраминидазами от N1 до N11. Все эти подтипы принято делить на антропонозные, то есть циркулирующие среди людей, и зоонозные, поражающие птиц и животных. К первым относятся подтипы А (ШШ), А (Н2Ш) и А (Н3Ш), вступающие попеременно в новые пандемические циклы. Зоонозные вирусы могут существовать как в латентном, так и в активном состоянии, периодически вызывая эпизоотии преимущественно среди диких и домашних птиц, а также свиней (птичьи и свиные вирусы гриппа А). Однако в двухтысячных годах среди людей были зарегистрированы вспышки гриппа, вызванные птичьими вирусами с гемагглютинином Н5,Н6, Н7 и Н9. Особенно тяжелые последствия имели вспышки гриппа А(Н5Ш) 2003-2005 гг., и А(Н7Ю) в 20132014 гг., когда смертность достигала 30-60% [18, 23]. В 2011 г. отмечено локальное распростра-

нение среди людей свиного гриппа А (swH3N2) [19]. В то же время не было ни одного научно доказанного случая передачи этих зоонозных вирусов от человека к человеку. В 2009 г. приобрел пандемическое распространение вирус гриппа А (НШ1) pdm 2009, имевший генетическое родство со свиными и птичьими вирусами [23]. Все эти события породили вполне закономерную озабоченность научного сообщества, реализовавшуюся в решении Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) о разработке арсенала резервных вакцин против потенциально пандемических зоонозных вирусов гриппа А [22]. В значительной степени это решение базировалось на довольно распространенном мнении о катастрофических последствиях развития ситуации в случае приобретения тем или иным зоонозным вирусом способности к активной трансмиссии среди людей, то есть полной адаптации к человеку. Главным аргументом в пользу возможности быстрой смены хозяина зоонозным вирусом служили бесспорные данные о способности вирусов гриппа А к генетической межтиповой реассортации и к активному эволюционному мутагенезу их РНК-генома. Поэтому основное внимание вирусологов было сосредоточено на исследовании молекулярно-генетических аспектов проблемы, включающих поиск и анализ геномных последовательностей, отвечающих за патогенность и трансмиссивность потенциально пандемических вирусов гриппа А.

При этом состояние популяционного иммунитета — важнейшего звена эпидемического процесса — было изучено значительно слабее, поскольку подразумевалось полное отсутствие у населения иммунной защиты от зоонозных вирусов гриппа А [9, 21]. В настоящем исследовании проанализирован вопрос о правомерности такой точки зрения с позиции формирования у людей гетеросуб-типического противогриппозного иммунитета.

Материалы и методы

Волонтеры

Сыворотки крови, секреты верхних дыхательных путей, а также мононуклеары периферической крови (МПК) были отобраны у волонтеров 18-45 лет, учавствовавших в 2000-2014 гг. в клинических испытаниях различных гриппозных вакцин (фоновые образцы), а также у лиц 11-85 лет, обследовавшихся в 2011-2012 гг. в различных лабораторных центрах по поводу диагностики соматических заболеваний.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) РТГА воспроизводили по стандартной методике [13]. Сыворотки крови обрабатывали RDE (receptor destroid enzime). Рабочая доза антигенов составляла 2АЕ, поскольку в предварительных исследованиях было показано ее преимущество перед 4АЕ. Применяли параллельно 1% взвесь человеческих эритроцитов 0(1) группы крови и эритроцитов лошади. Достоверной конверсией титров антител считали его поствакцинальное увеличение в 4 и более раза по отношению к до-вакцинальному.

Реакция микронейтрализации (РМН) РМН выполняли стандартным методом [13] на культуре клеток MDCK в концентрации 200 тыс. клеток/мл. Рабочее разведение вируса составляла 100 TCD50/50 мкл. Достоверным считали увеличение титра сывороточных антител в 4 и более раза в поствакцинальный период по отношению к довакцинальному.

Иммуноферментный анализ (ИФА) IgA- и IgG-антитела в сыворотке крови и IgA-антитела в секретах верхних дыхательных путей выявляли в ИФА по ранее описанной методике [2]. На планшете сорбировали 16АЕ вирусов, очищенных центрифугированием в градиенте плотности сахарозы (30-60%). За титр сывороточных и локальных антител принимали наибольшее разведение исследуемого материала, при котором оптическая плотность (ОП) лунки с образцами превышала среднюю ОП в контрольных лунках (все ингредиенты реакции, не содержащие исследуемый материал) в 2 и более раза. За достоверный прирост титров антител в сыворотке крови и в СВДП принимали его увеличение в 4 и более раза.

Определение вирусспецифических CD4+ и CD8+Т-клеток иммунологической памяти

Эти клетки тестировали в проточной цитоме-трии общепринятым методом внутриклеточного окрашивания цитокинов (IFNy) после стимуляции клеток in vitro 12 MOI очищенного ультрацентрифугированием вакцинного штамма [3]. Мононуклеары периферической крови выделяли стандартным способом на градиенте плотности HISTOPAQUE-1077, отмывали и хранили до проведения анализа в жидком азоте. Для определения спонтанной продукции IFNy вместо стимуляции вирусом к клеткам добавляли соответствующий объем питательной среды RPMI-1640 (отрицательный контроль). В качестве положительного контроля использовали стимуляцию клеток поликлональным стимулятором — стафилококковым энтеротоксином В. После раз-морозки порции клеток волонтеров, отобранные во всех временных интервалах, были способны к активации продукции IFNy. При анализе данных показатели отрицательного контроля вычитались из аналогичных показателей, полученных для вирусстимулированных клеток. Показатели всех контролей были адекватны. В проточной цитометрии маркерами Т-лимфоцитов центральной (Tcm) и периферической (Tem) иммунологической памяти CD4+ и CD8+ клеток служили меченные флюорохромом мононуклеарные антитела к, соответственно, CCR7+CD45RA-и CDR7-CD45RA- (Beckman Coulter, Becton Dickinson). Достоверным увеличением уровня клеток у привитых считали 3 стандартных отклонения от уровня тех же клеток у лиц контрольной группы, получавших препарат плацебо.

Антигены

В РТГА, РМН и ИФА использовали приготовленные в отделе вирусологии НИИЭМ апа-тогенные вакцинные штаммы вирусов А/17/ Калифорния/2009/38(НШ1) — в международной классификации A(H1N1)pdm 2009; А/17/индюк/Турция/05/133 (H5N2) - авторы И.В. Киселева и Н.В. Ларионова; А/17/ утка/Потсдам/86/92 (H5N2); А/17/дикая утка/ Нидерланды/00/95(Н7Ш) - автор Ю.А. Дешева; А/17/Ануи/2013/61(ШЮ) - автор И.Н. Ис-кова-Сивак. Штамм NIBRG-23 — (А/индюк/ Турция/1/2005=га/8) получен из ВОЗ.

Статистическая обработка результатов

Использовали программное обеспечение Statistica и Graph Pod Prizm 5. Для сравнения данных применяли Wilcoxon Mathed Paire Test, Friaman ANOVA и Fisher exact (two-tailed).

Результаты

В таблице 1 представлены данные об обнаружении у взрослых людей сывороточных и локаль-

ных IgA-антител к различным птичьим вирусам гриппа А и к вирусу А (H1N1) pdm 2009 перед началом его циркуляции в 2009 году. Обращают на себя внимание два момента. Во-первых, средний геометрический титр (СГТ) сывороточных и локальных IgA-антител к вирусу А (H1N1) pdm 2009 в предэпидемический период оказался намного выше, чем СГТ антител к птичьим вирусам. Аналогичная закономерность наблюдалась и в отношении сывороточных антигемагглюти-нирующих антител. Во-вторых, СГТ всех типов антител (за исключением антигемагглютинирую-щих) к вирусам А (H5N1) и А (H5N2) были выше, чем к вирусам А (H7N3) и A (H7N9).

Таблица 2 отражает результаты выявления сывороточных и локальных IgA-антител к птичьим вирусам гриппа А (H5N1) и А (H7N3) у людей разного возраста от 18 до 84 лет. Данные приведены по двум показателям: СГТ антител и число (%) лиц со значимыми и защитными титрами антител.

Сывороточные антигемагглютинирующие антитела к этим вирусам во всех возрастных группах не были обнаружены. По данным о СГТ локальных антител в СВДП и слюне наблюдалась тенденция к их возрастному увеличению. При этом по всем показателям отмечались четкие отличия у людей, родившихся до и после 1969 г., то есть, соответственно, 1947-1957 и 1969-1995 гг. рождения. У части лиц, родившихся как до, так и после 1969 г., фиксировались защитные титры локальных антител к вирусам гриппа А (H5N2) и А (H7N3), но у первых показатели были выше.

Таким образом, данные таблицы 2 свидетельствуют, что сывороточные антигемагглю-тинрующие антитела к птичьим вирусам гриппа А (H5N2) и А (H7N3) отсутствовали у всех лиц, независимо от их возраста. Однако у тех же людей выявлялись локальные антитела к этим вирусам, причем у родившихся до 1969 г. в больших концентрациях, чем у родившихся после 1969 г. Обращает на себя внимание то, что первые были праймированы вирусом А (H2N2) в 1957-1968 гг., а вторые не встречались по возрасту с этим возбудителем.

Таблица 3 включает данные о присутствии сывороточных и локальных антител к другому потенциально пандемическому антропонозному вирусу — А (H2N2). Количественные показатели этих антител оценивали у лиц, праймированных и непраймированных этим вирусом (соответственно, родившихся до 1967 г. и после 1968 г).

Сывороточные антигемагглютинирующие антитела выявлялись только у праймированных людей и в весьма высоких титрах. Локальные антитела определялись и у тех, и у других, но у прай-мированных — в более высоких концентрациях.

Таблица 4 дает представление о состоянии системного гуморального иммунитета (сывороточные антитела по данным РТГА) к потенциально пандемическому свиному вирусу А (swH3N2) у людей разного возраста от 11 до 85 лет. Параллельно у них тестировали эти антитела к человеческому актуальному вирусу того же подтипа.

Повозрастной профиль серограммы по всем количественным данным об антителах к обоим вирусам был очень сходным и отражал поражае-мость разных возрастных контингентов актуальным вирусом гриппа А (H3N2) в эпидемический сезон. При этом у значительной части лиц активного возраста были выявлены антитела к свиному вирусу даже и в защитных титрах.

В таблице 5 приведены сравнительные данные, отражающие постэпидемические изменения СГТ локальных антител к пяти вирусам гриппа А: циркулирующим А (H1N1) и А (H3N2), к потенциально пандемическому человеческому А (H2N2) и к птичьим А (H5N2) и А (H7N3).

Наибольшая кратность прироста СГТ в постэпидемический период по отношению к пред-эмидемическому отмечалась к этиологическому агенту эпидемии, то есть вирусу А (H1N1) — 5,4. В то же время кратность повышения СГТ антител к нециркулирующим вирусам А (H2N2), А (H5N2) и А (H7N3) была довольно высокой — от 1,8 до 2,4.

Данные рисунка 1 отражают обнаружение у обследованных взрослых людей 18-45 лет ви-русспецифических CD4+ и CD8+Т-клеток иммунологической памяти к неактуальному человеческому вирусу A(H2N2), и к птичьим вирусам А (H5N1), А (H5N2) и А (H7N3), а также к вирусу А (H1N1) pdm 2009 до его вступления в эпидемическую циркуляцию. Эти данные свидетельствуют, во-первых, о наличии у части лиц этих клеток, во-вторых, о значительных индивидуальных отличиях в их количественных показателях.

Обсуждение

Долговременная иммунологическая память к вирусам гриппа А является главным компонентом адаптивного иммунитета к этим возбудителям. Она формируется двумя путями. Первый путь — праймирование людей актуальными циркулирующими вирусами гриппа А при инфицировании или вакцинации. При этом иммунологическая память образуется не только непосредственно к праймирующему вирусу определенного подтипа (гомологичный иммунитет), но и к вирусам других подтипов за счет синтеза клеток памяти к консервативным им-мунодоминантным эпитопам наружных и, особенно, внутренних белковых структур вириона (прямой гетеросубтипический иммунитет) [4].

ТАБЛИЦА 1. ОБНАРУЖЕНИЕ СЫВОРОТОЧНЫХ И ЛОКАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ У ВОЛОНТЕРОВ 18-45 ЛЕТ К РАЗЛИЧНЫМ СЕРОПОДТИПАМ ВИРУСА ГРИППА А

Вирусы гриппа А Обратная величина средних геометрических титров антител**

РТГА (сыв. крови) РМН (сыв. крови) ИФА-1дА (сыв. крови) ИФА-1дА (СВДП)****

Н11\11рс1т2009* 7,11 ни*** 99,б3 71,17

Н51М1 2,52 5,53 27,б4 7,18

Н5Ы2 утка 3,4 5,33 31,54 9,78

Н5Ы2 индюк 2,б2 5,33 25,44'5 6,б8

Н7ЫЗ 2,72 4,5 18,44 3,28

Н7№ 2,б2 3,04 11 44,6 2,98

Примечание. * - биологический материал отобран до вступления в циркуляцию вируса в 2009 г. ** - в каждой позиции обследовано от 48 до 110 человек. *** -не исследовали. **** - секреты верхних дыхательных путей.

Цифры 1 -8 означают наличие статистически значимых по тесту Манна-Уитни (1-6) или тесту Вилкоксона (7-8) отличий между показателями: 1-2 р < 0,05; 3-4 р < 0,01 и р > 0,001; 5-6 р < 0, 01; 7-8 р < 0,01 и р > 0,001.

ТАБЛИЦА 2. ОБНАРУЖЕНИЕ АНТИТЕЛ К ПТИЧЬИМ ВИРУСАМ ГРИППА А Н5№ И Н7МЗ У ВЗРОСЛЫХ ЛЮДЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА

Антитела к вирусам гриппа

Годы рожд. Возраст (лет) Число лиц А(Н5№) индюк А (Н7МЗ)

РТГА ИФА-1дА в СВДП*** ИФА-1дА в слюне РТГА ИФА-1дА в СВДП*** ИФА-1дА в слюне

СТР > 1:40** СТР > 1:64** СТР > 1:16** СТГ > 1:40** СТР > 1:64** СТР > 1:16**

1989-1995 18-24 26 2,5 0 3,01 0 3,6 0 2,5 0 3,3 0 7,1 2 (8%)

1979-1988 25-34 18 2,6 0 4,21 0 4,8 2 (11%) 2,5 0 3,2 0 6,7 1 (6%)

1969-1978 35-44 24 2,6 0 3,21 0 2,6 1 (4%) 2,5 0 3,2 0 8,0 9 (38%)

1947-1956 57-66 26 2,5 0 14,22 4 (15%) 11,3 13 (50%) 2,5 0 5,6 3 (12%) 9,1 12 (46%)

1937-1946 67-76 24 2,5 0 25,7 8 (33%) 17,4 17 (71%) 2,5 0 6,8 1 (4%) 11,6 16 (67%)

1927-1936 77-84 21 2,5 0 11,3 4 (19%) 13,1 12 (46%) 2,5 0 5,2 1 (5%) 14,6 13 (62%)

Примечание. * - обратная величина средних геометрических титров антител. ** - число и % лице обозначенными титрами антител. *** - СВДП - секреты верхних дыхательных путей.

ТАБЛИЦА 3. ОБНАРУЖЕНИЕ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ГРИППА А (Н2№) У ЛЮДЕЙ, РАНЕЕ ПРАИМИРОВАННЫХЭТИМ ВИРУСОМ В 1957-1968 гг. И НЕ ВСТРЕЧАВШИХСЯ С НИМ

Годы рождения Число лиц Антитела

Сывороточные (РТГА) Локальные IgA в СВДП* ИФА Локальные IgA в слюне ИФА

CT Г* Титры CT Г* Титры СТР* Титры

<1:10 >1:20 >1:40 < 1:16 >1:32 >1:64 <1:4 >1:8 >1:16

До 1968 38 21,1 12 (32%) 26 (68%) 10 (26%) 7,7 28 (74%) 10 (26%) 6(16%) 8,8 16 (42%) 22 (58%) 19 (50%)

После 1968 40 2,8 0 0 0 2,8 37 (93%) 3 (8%) 1 (3%) 3,7 26 (65%) 14 (35%) 6 (15%)

Ь ta о о4

2 л

< Ой R

Примечание. * - секреты верхних дыхательных путей. ** - средние геометрические титры антител.

ТАБЛИЦА 4. ОБНАРУЖЕНИЕ У ЛЮДЕЙ СЫВОРОТОЧНЫХ АНТИГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ К СВИНОМУ И ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ВИРУСАМ ГРИППА А (НЗМ2)

Годы рождения Возраст (лет) Число лиц Титры антител поданным РТГА*

Свинной А/Индиана/10/2011 (swH3N2) Человеческий A/17/Перт/ 87 (H3N2)

СТР* Титры СТР* Титры

>1:20 >1:40 >1:20 >1:40

1991-2000 11-20 30 13,8 12 (40%) 8 (26,7%) 21,47 29 (96,8%)9 10 (33,3%)11

1981-1990 21-30 30 33,21 24 (80%)3 16 (53,3%)5 30,17 14 (46,7%) 9 (30,0%)11

1951-1960 51-60 30 9,32 6 (20%)4 3 (10%) 10,58 11 (36,7%)10 4 (13,3%)

1041-1950 61-70 30 9,12 7 (35%)-!23,3 1 (3,3%)6 12,0 9 (30,0%)10 5 (16,7%)

1926-1940 71-85 37 8,б2 7 (18,9%)4 3 (8,1%)6 9,58 2 (5,4%)10 2 (5,4%)12

I

о' й

Ь

§ о

Sa

R

§

ö. üj

К: R

Й Ä

S' R

& ж

??* о

а «

^ §

§ ж

о &

^ F

а io

Примечание. * - сыворотки крови отобраны в апреле-мае 2011г. ** - обратные величины средних геометрических титров антител. *** - цифры 1 -12 означают наличие статистически значимых отличий между показателями: 1-2 р < 0,01; 3-4 р < 0,01 или 0,001; 5-6 р < 0,01; 7-8 р < 0,05; 9-10 р < 0,05 или 0,01; 11-12 р < 0,05.

ТАБЛИЦА 5. ОБНАРУЖЕНИЕ ЛОКАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ У ЛЮДЕЙ 18-50 ЛЕТ К РАЗЛИЧНЫМ СЕРОПОДТИПАМ ВИРУСА ГРИППА А В ДО- И ПОСТ- ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ СЕЗОН 2012-2015 гг.

Число лиц Время отбора СВДП Средние геометрические титры (СГТ) локальных lgA-антител в СВДП*

А (H1N1)pdm2009 А (H3N2) А (H2N2) А (H5N2) - индюк А (H7N3)

71 Октябрь 2012 12,9 9,9 8,4 9,0 7,1

Апрель 2013 69,7 5,4** 19,7 2 Q** 17,8 2 ** 16,2 1,8** 17,2 2 4**

Примечание. * - секреты верхних дыхательных путей. ** - кратность прироста СГТ антител в пандемический период (апрель 2013 г.) по отношению к доэпидемческому периоду (октябрь 2012 г.).

CD4

ПППпг

1,G G,B G,6 G,4 G,2 G,G

CDB

ПППппппп

Пппг

A(H1N1) pdm 2QQ9

CD4

ППППпппппг-

CD4

G,5 G,4 G,3 G,2 G,1 G,G

4,G 3,G 2,G 1,G G,G

CDB

ПППППППппппппппппппппППГ1|

A(H2N2)

CDB

A(H5N1)

CD4

ПППппппп

G,4 G,3 G,2 G,1 G,G

CDB

[ППППпПпп!

A(H5N2)

CD4

ППППППППППППппппп J

ПППППППППППППППп

1,5 1,G G,5 G,G

CDB

пш

A(H7N3)

Рисунок 1. Обнаружение у взрослых людей 18-45 лет CD4+ и CD8+Т-клеток к человеческим и птичьим вирусам гриппа А

Второй путь — ретроспективное праймирование населения выбывшими из циркуляции подтипами вируса гриппа А (анамнестический гете-росубтипический иммунитет). На сегодняшний день — это вирус А (H2N2), циркулировавший в 1957-1968 гг., а в 1977 вирус А (H1N1), рецир-кулировавший после двадцатилетнего перерыва. Прямой и анамнестический гетеротипический

иммунитет, носителями которого являются крос-среактивные В- и Т-клетки иммунологической памяти, служат действенными механизмами регуляции эпидемического процесса. Так, первый повышает клиренс возбудителя и снижает тяжесть гриппозной инфекции при инфицировании людей новыми дрейфовыми или шифтовыми вариантами вируса гриппа А [4], второй — защи-

щает от заболевания при рециркуляции старых подтипов этого возбудителя, как это наблюдалось в 1977 г. при возвращении в циркуляцию вируса A(H1N1). О присутствии у людей крос-среактивной В- и Т-клеточной памяти к конкретному подтипу вируса гриппа А можно судить по обнаружению вирусспецифических антител и Т-клеток памяти фенотипов CD4+ (Т-хелперы) и CD8+ (цитотоксические лимфоциты).

В настоящей работе было изучено состояние иммунитета у людей к вирусу A(H1N1)pdm 2009, начавшему пандемическое распространение в эпидемический сезон 2009 г. В начале пандемии превалировало мнение о том, что его глобальное распространение приведет к катастрофическим последствиям для человечества, поскольку этот вирус представлял собой реассортант между свиным, птичьим и человеческим вирусами гриппа А (H1N1) [20]. Кроме того, считалось, что у подавляющей части населения, за исключением лиц пожилого возраста, иммунитет к этому возбудителю отсутствует, так как у них не выявлялись сывороточные антигемагглютинирующие и ви-руснейтрализующие антитела [21]. Однако, этот прогноз не оправдался, поскольку пандемия носила весьма умеренный характер [12]. Естественно, возник вопрос о причине такой умеренности.

Наши результаты показали, что перед вступлением в циркуляцию вируса А (H1N1)pdm 2009 у взрослых людей действительно не обнаруживались антитела данного типа, но выявлялись в значительных концентрациях перекрестноре-агирующие локальные IgA — антитела и вирус-специфические CD4+ и CD8+Т-клетки иммунологической памяти. Безусловно, что те и другие индуцировались при контактах с предшествующими актуальными вирусами А (H1N1). Вполне вероятно, что наличие у населения хорошо выраженного локального и Т-клеточного иммунитета снижало интенсивность эпидемического процесса при гриппе A (H1N1)pdm 2009.

Вирус гриппа А (H2N2) считается наиболее вероятным претендентом на новый рециркуляционный цикл [11]. Нами изучено состояние гуморального иммунитета к этому вирусу в двух группах людей: встречавшихся с ним в 1957-1968 гг. и родившихся после 1068 г., то есть у непрай-мированных лиц.

Сывороточные антигемманглютинирующие антитела к вирусу A (H2N2) у праймированных лиц фиксировались в довольно высоких титрах, а у непраймированных они отсутствовали. Эти данные подтверждают сохранение хорошо выраженной системной В-клеточной иммунологической памяти к данному возбудителю у людей, встречавшихся с ним ранее. В отличие от анти-гемагглютинирующих, локальные IgA-антитела

выявлялись и у праймированных и у непрайми-рованных людей, но у первых их уровень был выше, чем у вторых. Это свидетельствует, что существует не только долговременная системная, но и долговременная локальная В-клеточная иммунологическая память. По сравнению с системной памятью ее некоторая стертость проявления объясняется за счет фиксации в ИФА у непраймированных лиц коссреактивных IgA — антител к общим антигенным структурам вируса гриппа А. Ранее существование долговременной локальной В-клеточной памяти относили к неизученной проблеме [7].

В 2011 г. появились сообщения о локальных заболеваниях людей свиным вирусом А/ Индиана/10/2011(swH3N2) с инкорпорирова-ным геном матриксного белка от вируса А (H1N1) pdm2009 [8]. В связи с этим настораживающим фактором даже возник вопрос о создании специальной вакцины против этого вируса [14]. Проведенные исследования (табл. 4) показали, что повозростной профиль уровня выявленных сывороточных антигеммаглютинирующих антител к человеческому и данному свиному вирусам гриппа А (H3N2) почти полностью совпадает. Это свидетельствует о том, что иммунная система людей практически не отличает оба вируса, то есть при встрече человека с актуальным вирусом гриппа А (H3N2) В-клетки секретируют антитела не только против праймирующего человеческого, но и свинного варианта этого вируса. Учитывая факт длительной циркуляции вирусов гриппа А(H3N2) и, как следствие, формирование к нему мощной иммунологической памяти у населения, зоонозные вирусы с аналогичными антигенными формулами не имеют шанса вызвать тяжелые пандемии. Это подтвердилось в отношении «свиного» вируса A(H1N1)pdm2009. Об этом же свидетельствуют наши и зарубежные [14] данные об обнаружении антител к свиному вирусу А (swH3N2).

Нами проанализирован вопрос о гетеросубти-пическом локальном иммунитете к потенциально-пандемическим птичьим вирусом с гемагглю-тининами Н5 и Н7. При этом одна группа вирусов имела нейраминидазу, общую с циркулирующими подтипами вируса гриппа А (N1 и N2), а у другой это сходство отсутствовало (N3 и N9).

У взрослых людей были выявлены кроссреак-тивные локальные IgA-антитела ко всем изученным птичьим вирусам, а у части даже в защитных титрах (табл. 1 и 2). При этом сывороточные антигемагглютинирующие и вируснейтрализу-ющие антитела отсутствовали, что подтверждает данные других авторов [9, 16]. В отношении локальных IgA антител к птичьим вирусам обращает на себя внимание три момента. Во-первых,

сам факт их обнаружения, во-вторых, их уровень был намного ниже уровня этих антител к вирусу A(H1N1)pdm2009 в предвакцинальный период времени, в-третьих, СГТ данных антител к птичьим вирусам с общими с циркулирующим вирусом нейраменидазами N1 и N2 превосходили по значению аналогичные показатели к вирусам с отличающимися нейраменидазами N3 и N9. Последнее обстоятельство подчеркивает индивидуальный вклад нейраменидазы в индукцию локальных антител к потенциально пандемическим птичьим вирусам гриппа А.

Возраст людей является одним из главных фе-нотипических признаков, влияющих на формирование противогриппозного иммунитета. Ранее нами показано существование прямой зависимости между возрастом и напряженностью локального иммунитета к дрейфовым вариантам вируса гриппа А(НШ1) и А(Н3№) [1]. Этот вопрос в отношении птичьих вирусов оставался открытым.

Наши данные (табл. 2) об обнаружении локальных ^А-антител к вирусам А(Н5№) и А(Н7№) среди людей разного возраста от 18 до 84 лет показали наличие точно такой же зависимости, то есть с увеличением возраста возрастали и СТГ локальных антител. Однако привлекает внимание другой момент — довольно резкое отличие в обнаружении в СВДП ^А-антител у лиц, родившихся до и после 1968 г., то есть у праймированных и не праймированных вирусом А(Н2№). Так, у вторых их уровень был минимальным, а у первых оказался значительно выше. В большей степени это относилось к антителам к вирусу А(H5N2), чем к А(Н7№). Данное обстоятельство можно объяснить только с точки зрения существования праймирующего эффекта вируса А(H2N2) на секрецию локальных антител к птичьим вирусам. Сравнительно недавно показано присутствие общих иммунодоминантных Т-клеточных эпитопов в составе гемагглютини-нов Н5 и Н2, запускающих продукцию вирусспе-цифических CD4+Т-клеток [8, 17]. Известно, что эти клетки регулируют локальный гуморальный иммунный ответ [7].

Нами изучено состояние локального иммунитета у взрослых людей до и после эпидемии гриппа А(ШШ) 2012-2013 гг. (табл. 5). Полученные данные однозначно свидетельствуют о том, что эпидемия гриппа сопровождалась повышением у обследованных лиц не только уровня локальных ^А-антител к ее возбудителю, то есть к вирусу гриппа А(НШ1), но и к нециркулиру-ющим вирусам А(Н2Ш), А(Н5Ш) и А(Н7Ю). Эти данные весьма важны для представления о механизме формирования гетеросубтипическо-го локального гуморального иммунитета в есте-

ственных условиях эпидемического процесса при гриппе А.

В дополнение к данным о гуморальном иммунитете нами проведено количественное определение у взрослых людей 18-53 лет циркулирующих в крови CD4+ и CD8+Т-клеток долговременной иммунологической памяти к вирусу A(H1N1)pdm2009 до его эпидемического распространения, а также к нециркулирующим вирусам А(Н2Ш), А(Н5Ш), А(ШШ) и А(Н7Ш) - рисунок 1. Полученные данные четко свидетельствуют о наличии у части обследованных волонтеров этих клеток, специфических ко всем перечисленным вирусам. Такие кроссреактивные клетки стимулируются при контактах с актуальными вирусами А(НШ1) и A(H3N2) за счет наличия консервативных иммунодоминантных Т-клеточных эпитопов в структуре гемагглютинина, нейра-минидазы, матриксного белка и нуклеопротеина у всех подтипов вируса гриппа А [4, 8]. Ранее нами показана способность живых гриппозных моновакцин А(Н1Ш^т2009, А(ШШ) и А(Н7Ш) стимулировать продукцию перекрестнореагиру-ющих локальных антител и Т-клеток иммунологической памяти внутри этих подтипов вируса гриппа А [3, 5, 6].

Обобщая представленные материалы, можно отметить следующее:

Впервые проведено комплексное исследование состояния у взрослых людей системного гуморального, локального гуморального и Т-клеточного иммунитета к потенциально пандемическим антропонозным и птичьим вирусам гриппа А. Собственные и литературные данные по этому вопросу позволяют сделать ряд выводов, а именно:

У взрослых людей отсутствует системный гуморальный иммунитет ко всем перечисленным вирусам, опосредованный сывороточными анти-гемагглютинирующими и вируснейтрализующи-ми антителами. Однако у этих людей обнаруживаются такие составляющие гетеросубтипической иммунной защиты, как кроссреактивные локальные IgA антитела (локальная В-клеточная память) и кроссреактивные CD4+ и CD8+Т-клетки, специфические к этим вирусам (Т-клеточная память). Продукция этих антител и Т-клеток поддерживается за счет контактов с актуальными подтипами вируса гриппа А. Индукторами данных антител и клеток являются консервативные участки белков вириона, имеющиеся у всех подтипов вируса гриппа А вне зависимости от их хозяина. Активность стимуляции кроссреактивных локальных ^А-антител зависит от трех факторов: от возраста людей (прямая зависимость), от анамнестического праймирования организма выбывшим из циркуляции потенциально пандемическим

подтипом вируса (например, А (Н2№)) и от соответствия антигенной формулы потенциально пандемического и актуального вируса. Наиболее интенсивно кроссреактивные локальные IgA-антитела против потенциально пандемических вирусов гриппа А продуцируются при полном совпадении их антигенной формулы с циркулирующими подтипами (вирус А (H1N1)pdm2009), менее интенсивно — при отличии по гемагглю-тинину и совпадении по нейраминидазе (вирусы А (Н5№), А (^N2)) и с наименьшей интенсивностью — при полном отличии антигенных формул (вирусы А (Н7Ш), А (Н7Ш)).

И, наконец, о самом главном вопросе, требующем отдельного обсуждения — существует ли естественно приобретенная иммунная защита людей от потенциально пандемических зооноз-ных вирусов гриппа А в случае полного преодоления ими межвидового барьера с беспрепятственной передачей от человека к человеку? Абсолютно точно ответить на этот вопрос можно только при развертывании реальных событий. Но, на наш взгляд, существуют три важных момента, которые склоняют в пользу утвердительного ответа.

Во-первых, на примере пандемии гриппа А (Н2№) 1957-1968 доказано, что люди с высоким уровнем сывороточных антител к предшествующему варианту, то есть к вирусу А (НШ1), были защищены значительно лучше, чем лица, у которых эти антитела отсутствовали, либо их титр был низким [15]. В данном случае сывороточные антитела являлись не столько прямыми протекторами, сколько маркерами общего состояния гетеросубтипического иммунитета, в том числе опосредованного кроссреактивны-ми локальными антителами и вирусспецифиче-скими Т-клетками. Но в то время, естественно, исследования этих факторов иммунитета не могли проводиться. По аналогии с высокой долей вероятности можно предположить, что данный феномен может иметь место при пандемическом распространении любых новых сероподтипов вируса гриппа А, в том числе и зоонозных с полностью отличающейся антигенной формулой. В этом случае наличие перекрестнореагирующих В- и Т-клеток может служить фактором, смягчающим тяжесть пандемии.

Во-вторых, пандемическое распространение «свиного» вируса гриппа А (НШ1) в 2009 г. отнюдь не сопровождалось предсказываемыми катастрофическими последствиями. В этом случае относительная мягкость пандемии была связана с наличием у большинства населения иммунитета, приобретенного вследствие длительной циркуляции предшествующих штаммов данного подтипа вируса [6]. Это показано нами на примере состояния локального и Т-клеточного имму-

нитета у взрослых людей перед началом его эпидемического распространения (табл. 1, рис. 1). Также по аналогии можно предсказать, что при «прорыве» в человеческую популяцию зооноз-ного вируса гриппа А с антигенной формулой, полностью совпадающей с циркулирующим вирусом, не следует ожидать тяжелой пандемии.

В-третьих, обнаруженные нами кроссреактив-ные локальные антитела и вирусспецифические Т-клетки к птичьим подтипам вируса гриппа А должны снижать тяжесть эпидемического процесса, если эти вирусы начнут глобальное распространение среди людей. В большей стпепени это касается птичьих вирусов с общей с циркулирующим вирусом нейраминидазой.

Таким образом, по нашему глубокому убеждению, гетеросубтипический локальный гуморальный и Т-клеточный противогриппозный иммунитет является мощным природным фактором защиты человеческой популяции при внедрении в нее любых новых шифтовых вариантов вируса гриппа А, включающих все известные подтипы, в том числе и зоонозные. Однако он не столь совершенен, как гомологичный иммунитет, так как его воздействие ограничивается клиренсом вируса и смягчением инфекционного процесса [4]. Но и в этом случае его роль велика, поскольку при полном его отсутствии заражение людей сопровождалось бы очень высокой летальностью и даже почти поголовным вымиранием, как это наблюдалось в 16-19 веках при заносах гриппа в длительно изолированные коллективы аборигенов Латинской Америки и отдаленных островов. Сказанное ни в коей мере не отрицает значения вакцинопрофилактики населения против потенциально пандемических вирусов гриппа А. Безусловно, такие резервные вакцины нужны, поскольку они индуцируют у людей более совершенный тип иммунитета — гомологичный штам-моспецифический. Знания о закономерностях естественно приобретенного гетеросубтипиче-ского иммунитета к этим возбудителям и периодический мониторинг данного процесса нужны для прогнозирования особенностей развития эпидемического процесса, а, сделовательно, и объема профилактических мероприятий среди разных возрастных групп населения в случае возникновения угрожающей ситуации. Кроме того, в этом случае данные о постинфекционной и поствакцинальной индукции гетеросубтипического иммунитета разными подтипами вируса гриппа А могут ориентировать в оптимальном выборе уже имеющихся сезонных и резервных вакцин для экстренной профилактики гриппа в зависимости от антигенной формулы нового пандемического варианта [3, 5, 6, 10].

Список литературы / References

1. Баранцева И.Б., Найхин А.Н., Донина С.А., Степанова Л.А., Рекстин А.Р., Григорьева Е.П., Дешева Ю.А., Руденко Л.Г. Гуморальный и местный иммунный ответ на гриппозные вакцины у лиц пожилого и молодого возраста // Вопросы вирусологии, 2003. Т. 48, № 2. С. 32-36. [Barantseva !В., Naikhin A.N., Donina S.A., Stepanova L.A., Rekstin A.R., Grigoryeva E.P., Desheva Yu.A., Rudenko L.G. The humoral and local immune response to influenza vaccine in the elderly and young. Voprosy Virusologii = Problems in Virology, 2003, Vol. 48, no. 2, pp. 32-36. (In Russ.)]

2. Донина С.А., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Григорьева Е.П., Кузнецова С.А., Лосев И.В., Руденко Л.Г., Найхин А.Н. Локальный и гуморальный иммунный ответ у больных гриппом и у лиц, привитых против сезонных и пандемических вирусов гриппа А // Вопросы вирусологии, 2013. Т. 58, № 3. С. 37-42. [Donina S.A., Petukhova G.D., Korenkov D.A., Grigorieva E.P., Kuznetsova S.A., Losev I.V., Rudenko L.G., Naykhin A.N. Local Antibody Immune Responses in Influenza Patients and Persons Vaccinated with Seasonal, Pre-pandemic, and Pandemic Live Attenuated Influenza Vaccines. Voprosy Virusologii = Problems in Virology, 2013, Vol. 58, no. 3, pp. 37-42. (In Russ.)]

3. Найхин А.Н., Чиркова Т.В., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Донина С.А., Руденко Л.Г. Стимуляция гомо- и гетерологичной Т-клеточной иммунологической памяти у волонтеров, привитых живой реассортантной гриппозной вакциной типа А(Н5№) // Вопросы вирусологии, 2012. Т. 57, № 1. С. 38-42. [Naikhin A.N., Chirkova T.V., Petukhova G.D., Korenkov D.A., Donina S.A., Rudenko L.G. Stimulation of homo-and heterologic T-cell immunological memory in volunteers inoculated with live influenza A (H5N2) reassortant vaccine. Voprosy Virusologii = Problems in Virology, 2012, Vol. 57, no. 1, pp. 38-42. (In Russ.)]

4. Найхин А.Н. Гетеросубтипический иммунитет к вирусам гриппа А: эпидемиологические данные, вовлеченность разных иммунологических факторов, вакцинация // Вопросы вирусологии, 2012. Т. 57, № 3. С.4-9. [Naikhin A.N. Heterosubtypic immunity to influenza A viruses: epidemiological data, involvement of different immunological factors, vaccination. Voprosy Virusologii = Problems in Virology, 2012, Vol. 57, no. 3, pp. 4-9. (In Russ.)]

5. Найхин А.Н., Донина С.А., Лосев И.В., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Стукова М.А., Ерофеева М.К., Коншина О.С., Смолоногина Т.А., Дорошенко Е.М., Григорьева Е.П., Руденко Л.Г. Гомологичный и гетероло-гичный гуморальныйи Т-клеточный иммунный ответ людей на живые реассортантные гриппозные вакцины А(Н5№) и А(Н7№) // Медицинская иммунология, 2015. Т. 17, № 1. С. 59-70. [Naykhin A.N., Donina S.A., Losev I.V., Petukhova G.D.,Korenkov D.A., Stukova M.A. Erofeeva M.K Konshina O.S. Smolonogina T.A., Doroshenko Е.М., Grigorieva E.P., Rudenko L.G. Homological and heterological antibody and T- cell immune responses to live attenuated influenza vaccine A (H5N2) and A (H7N3). Meditsinskaya Immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2015, Vol. 17, no. 1, pp. 59-70. doi: 10.15789/1563-0625-2015-1-59-70 (In Russ.)]

6. Найхин А.Н., Донина С.А., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Дорошенко Е.М., Григорьева Е.П., Суворова М.А., Руденко Л.Г. Гуморальный и клеточный иммунный ответ у людей к вирусу гриппа А/Калифорния/07/2009(ШN1)pdm2009 // Вопросы вирусологии, 2013. Т. 58, № 2. С.38-42. [Naikin A.N., Donina S.A., Petuhova G.D., Korenkov D.A., Doroshenko E.M., Grigorieva E.P.,Suvorova M.A., Rudenko L.G. Humoral and Cell-mediated Immune Responses in Humans to the A/California/ 07/ 2009 (H1N1) Virus, A(H1N1)pdm2009. Voprosy Virusologii = Problems in Virology, 2013, Vol. 58, no. 2, pp. 38-42. (In Russ.)]

7. Ярилин А.А. Иммунология: учебник. М.: Гэотар-Медиа, 2010. 749 с. [Yarilin A.A. Immunology]. Moscow: Geotar-Media, 2010. 749 p.

8. Babon J.A., Cruz J., Ennis F.A., Yin L., Terajima M. A human CD4+ T cell epitope in the influenza hemagglutinin is cross-reactive to influenza A virus subtypes and to influenza B virus. J. Virol., 2012, Vol. 86, no. 17,

pp. 9233-9243.

9. Broberg Eeva, Angus Nicoll, and Andrew Amato-Gauci Virus - Where Are We? Seroprevalence to Influenza A(H1N1) 2009. Clin. Vaccine Immunol, 2011, Vol. 18, no. 8, p. 1205.

10. Chirkova T.V., Naykhin A.N., Petukhova G.D., Korenkov D.A., Donina S.A., Mironov A.N., Rudenko L.G. Memory T-cell immune response in healthy young adults vaccinated with live attenuated influenza A (H5N2) vaccine. Clin. Vaccine Immunol., 2011, Vol. 18, no. 10, pp. 1710-1718.

11. Dowdle W. Influenza A virus recycling revisited. Bull World Health Organ., 1999, Vol. 77, no. 10, pp. 820-828.

12. Maritz J., Maree L., Preiser W. Pandemic influenza A (H1N1) 2009: the experience of the first six months. Clin. Chem. Lab Med., 2010, Vol. 48, no. 1, pp. 11-21.

13. Rowe T., Abernathy R.A., Hu-Primmer J. Detection of antibody to avian influenza A(H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assay. J. Clin. Microbiol., 1999, Vol. 37, pp. 937-943.

14. Skowronski D.M., De Serres G., Janjua N.Z., Gardy J.L., Gilca V., Dionne M., Hamelin M.E., Rheaume C., Boivin G. Cross-reactive antibody to swine influenza A(H3N2) subtype virus in children and adults before and after immunisation with 2010/11 trivalent inactivated influenza vaccine in Canada, August to November 2010. Euro Surveill., 2012, Vol. 17, no. 4.

15. Slepushkin A. N.. The effect of a previous attack of A1 influenza on susceptibility to A2 virus during the 1957 outbreak. Bull World Health Organ., 1959, Vol. 20, no. 2-3, pp. 297-301.

16. Talaat K.R., Karron R.A., Callahan K.A., Luke C.J., DiLorenzo S.C., Chen G.L., Lamirande E.W., Jin H., Coelingh K.L., Murphy B.R., Kemble G., Subbarao K. A live attenuated H7N3 influenza virus vaccine is well tolerated and immunogenic in a Phase I trial in healthy adults. Vaccine, 2009, Vol. 27, no. 28, pp. 3744-3753.

17. Terajima M., Babon J.A., Ennis F.A. Epidemiology of the influenza A virus H5N1 subtype and memory of immunity to the H2N2 subtype. MBio., 2012, Vol. 3, no. 4.

18. Tokiko Watanabe, Shinji Watanabe, Eileen A. Maher, Gabriele Neumann and Yoshihiro Kawaoka. Pandemic potential of avian influenza A (H7N9) viruses. Trends in Microbiology, 2014, Vol. 22, Iss. 11, pp. 623-631.

19. Update: influenza A(H3N2) transmission and guidelines - five states, 2011. Morb. Mort. Weekly Rep. 2012/60(51). pp. 1741-1744.

20. World Health Organization: Influenza A(H1N1) press briefings. http://www.who.int/mediacentre/ influenzaAH1N1_presstranscript_20090611.pdf?ua=1

21. WHO Seroepidemical studies of pandemic influenza A (H1N1)2009 virus - Weekly Epidemiological Record, 2010, Vol. 85, no. 24, pp. 229-236.

22. Who global action plan vaccine supple for influenza vaccine. 2006, Geneva, Belgium. WH0/IVB/06.13. WH0/0DS/EPR/GIP/2006.1.

23. (http:www.who.int/csr/disease/avianinfluenza/country/cases.table2008.03.18/en/indexhtml)

Авторы:

Лосев И.В. — научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Донина С.А. — к.м.н., старший научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Петухова Г.Д. — к.б.н., старший научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Кореньков Д.А. — к.м.н., старший научный сотрудник, лаборатория иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Григорьева Е.П. — к.м.н., старший научный сотрудник, отдел вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Дорошенко Е.М. — к.м.н., научный сотрудник, отдел вирусологии им. акад. РАМН А.А. Смородинцева, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Руденко Л.Г. — д.м.н., профессор, руководитель отдела вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Найхин А.Н. — д.м.н., профессор, заведующий лабораторией иммунологиии и профилактики вирусных инфекций отдела вирусологии, ФГБУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия

Поступила 25.06.2015 Принята к печати 02.07.2015

Authors:

Losev I.V., Research Associate, Laboratory of Immunology and Prophylactics of Viral Infections, Departament of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Donina S.A., PhD (Medicine), Senior Research Associate, Laboratory of Immunology and Prophylactics of Viral Infections, Departament of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Petukhova G.D., PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Immunology and Prophylactics of Viral Infections, Departament of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Korenkov D.A., PhD (Medicine), Senior Research Associate, Laboratory of Immunology and Prophylactics of Viral Infections, Departament of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Grigorieva E.P., PhD (Medicine), Senior Research Associate, Laboratory of General Virology, Department of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Doroshenko E.M., PhD (Medicine), Research Associate, Laboratory of Vaccine Strains, A.Smorodintsev Department of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, NorthWest Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Rudenko L.G., PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Department of Virology, Research Institute of Experimental Medicine,North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Naykhin A.N., PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Laboratory of Immunology and Prophylaxis of Viral Infections, Department of Virology, Research Institute of Experimental Medicine, North-West Branch, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russian Federation

Received 25.06.2015 Accepted 02.07.2015

Medical Immunology (Russia)/ Медицинская иммунология ОЮЫгЫНаЛЬНЫ@ C^fttt^ftbW Meditsinskaya Immunologiya 2015, Т. 17, № 4, стр. 359-366 F ^ . . . . . 2015, Vol. 17, No 4, pp. 359-366

© 2015, СПбРО РААКИ Original articles © 2015, SPb RAACI

УРОВНИ ОСНОВНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ И ИХ СВЯЗЬ С КЛЕТОЧНЫМ И ГУМОРАЛЬНЫМ ЗВЕНОМ АНТИЭНДОТОКСИНОВОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ

Шадуро Д.В., Белоглазов В.А., Гордиенко А.И.

Медицинская академия им. С.И. Георгиевского; ФГАОУВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского», г. Симферополь, Республика Крым, Россия

Резюме. Системная красная волчанка на современном этапе занимает ведущее место среди системных аутоиммунных патологий. Несмотря на существенный прогресс в понимании основных звеньев патогенеза системной красной волчанки, многие аспекты субтильных механизмов прогрессирования волчаночного воспаления по-прежнему остаются неизвестными. На роль персистентных факторов самоподдержания аутоиммунного воспаления может претендовать липополисахарид или эндотоксин граммнегативных кишечных бактерий. Цель работы заключалась в изучении уровней основных субпопуляций лимфоцитов, их возможной связи со специфическими антиэндотоксиновыми антителами и эндотоксин-нейтрализующими рецепторами гранулоцитов и моноцитов периферической крови больных системной красной волчанкой. В исследовании участвовало 48 больных СКВ. Методами проточной цитофлуорометрии и иммуноферментного анализа был определен уровень субпопуляций лимфоцитов, уровни экспрессии антиэндотоксиновых рецепторов на моноцитах и гра-нулоцитах, а также уровни общих и антиэндотоксиновых иммуноглобулинов. В ходе исследования нами выявлено увеличение уровня общих, активированных и цитотоксических Т-лимфоцитов, снижение В-лимфоцитов и NK-клеток, снижение эндотоксин-связывающих рецепторов на моноцитах и гранулоцитах, увеличение антиэндотоксиновых антител класса G. Выявлены корреляционные связи между уровнем эндотоксин-связывающих рецепторов на лейкоцитах и уровнем В-лимфоцитов, антиэндотоксиновых антител класса М с уровнем В-лимфоцитов и цитотоксических Т-лимфоцитов, антиэндотоксиновых антител класса G с уровнем CD4+ лимфоцитов. Существенные нарушения в состоянии антиэндотоксинового иммунитета у больных СКВ свидетельствуют, что данный дисбаланс может играть важную роль в механизмах формирования и прогрессирования аутоиммунной патологии.

Ключевые слова: эндотоксин, системная красная волчанка, лимфоциты, иммуноглобулины, антиэндотоксин-связывающий потенциал

Адрес для переписки:

Шадуро Денис Владимирович Медицинская академия им. С.И. Георгиевского; ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского»

295003, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, бул. Ленина, 5/7. Тел.: 8(978) 823-99-76. E-mail: shadden@mail.ru

Address for correspondence:

Shaduro Denis V.

S.I. Georgievsky Medical Academy; V.I. Vernadsky Crimean Federal University

295003, Russian Federation, Republic of Crimea, Simferopol, Lenin Blvrd, 5/7. Phone: 7 (978) 823-99-76. E-mail: shadden@mail.ru

Образец цитирования:

Д.В. Шадуро, В.А Белоглазое., А.И. Гордиенко, «Уровни основных субпопуляций лимфоцитов и их связь с клеточным и гуморальным звеном антиэндотоксинового иммунитета у больных системной красной волчанкой»//Медицинская иммунология, 2015. Т. 17, № 4. С. 359-366. doi: 10.15789/1563-0625-2015-4-359-366

© Шадуро Д.В. и соавт., 2015

For citation:

D.V. Shaduro, V.A. Beloglazov, A.I. Gordienko, "Major lymphocyte subpopulations in patients with systemic lupus erythematosus and their associations with cellular and humoral anti-endotoxin immunity", Medical Immunology (Russia)/ Meditsinskaya Immunologiya, 2015, Vol. 17, no. 4, pp. 359-366. doi: 10.15789/1563-0625-2015-4-359-366

DOI: http://dx.doi.org/10.15789/1563-0625-2015-4-359-366