ИЗУЧЕНИЕ ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА В УСЛОВИЯХ АЛКОГОЛЬНОЙ КАРДИОМИОПАТИИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

loplasmin by 6.3% ± 0.41%, 12,66 ± 0.83% and 12,0% respectively, compared to the patients who worked in healthier occupational environment. The patients with chronic bronchitis working at various places did not differ in catalase activity, but differed in the content of ceruloplasmin (the employees working in harmful conditions its content was higher by 12.0%). In chronic obstructive pulmonary disease, the effect of harmful occupational factors contributed to the activation of lipid peroxidation in the form of a significant increase in serum ß-lipoprotein content by 6.45 ± 0.63%, as well as increase in the level of spontaneous erythrocyte haemolysis by 20.35 ± 1.8% and malonic dialdehyde by 10.11 ± 0.47 % compared to the employees working in the healthy occupational environment. Disturbance of antioxidant supply in these patients were manifested by reduced catalase activity by 20.74 ± 1.39% and increased content of ceruloplasmin, by 14, 32 ± 0.84% compared with those working in the safe environment. In general, both in chronic bronchitis and chronic obstructive pulmonary disease, the effect of occupational harmful factors has contributed to the additional activation of lipid peroxidation and the reduction of the body antioxidant provision, more pronounced in chronic obstructive pulmonary disease. Conclusions. Thus, the influence of occupational harmful factors leads to a more severe clinical course of chronic bronchitis and chronic obstructive pulmonary disease accompanied by more pronounced disorders of free-radical lipid oxidation, which adversely affect the cardiovascular system.

DOI 10.31718/2077-1096.20.1.49

УДК 616.831-092:616.89-008.441.3-036.12-085.272.4.014.4]-092.9 Супрун Э. В., Терещенко М. С.

ИЗУЧЕНИЕ ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА В УСЛОВИЯХ АЛКОГОЛЬНОЙ КАРДИОМИОПАТИИ

Национальный фармацевтический университет МОЗ Украины, г. Харьков

В последнее время в связи распространением алкогольной кардиомиопатии среди трудоспособного населения промышленно развитых стран актуальной необходимостью является поиск новых лекарственных препаратов строго направленного действия, с учетом комплекса механизмов повреждающего действия этилового алкоголя на миокард. В этом отношении интерес представляет комбинированное средство L-аргинина с тиотриазолином (разработка НПО «Фарматрон»), а также Милдронат, Мексидол и Тиотриазолин. Целью настоящего исследования явилось изучение эндотелиопротективного действия комбинированного лекарственного препарата L-аргинина с тиотриазолином (4:1) (Аргитрил) в сравнении с классическими метаболитотропнми препаратами Милдронат, Мексидол, Тиотиразолин по влиянию на морфо-функциональные характеристики эн-дотелиоцитов и уровень ST2 в условиях моделирования алкогольной кардиомиопатии. Алкогольную кардиомиопатию вызывали внутрижелудочным введением с помощью металлического зонда 20% раствора этанола в дозе 8 г/кг в течение 90 суток. Все животные были разделены на 5 групп по 10 особей в каждой. Исследуемые препараты вводили в течение 30 суток внутрибрюшинно -предлагаемое средство ^-аргинин 100 мг/мл + тиотриазолин 25 мг/мл (4:1)) - 200 мг/кг (в пересчете на L-аргинин); Милдронат (Гоиндекс, Латвия) - 250 мг/кг; Мексидол (ООО «НПК «Фарма-софт», Россия) - 200 мг/кг, Тиотриазолин (ПАО «Галичфарм», Украина) - 50 мг/кг. Определяли следующие показатели: площадь ядра эндотелиоцитов (мкм2); плотность ядер эндотелиоцитов (как показатель количества ядер клеток на 1мм2 площади ткани миокарда) и относительную площадь эндотелиоцитов (%), белок ST2. В результате проведенных исследований было установлено, что на 30 сутки после 90-суточной алкоголизации у животных формируется алкогольная кардиомиопатия. Отмечено достоверное снижение у животных контрольной группы площади ядер эндотелиоцитов на 32,38%, плотности ядер эндотелиоцитов на 7% и относительной площади ядер эндотелиоцитов на 21,89%, повышение концентрации белка ST2 в 3,34 раза по сравнению с интактными животными, что отражает формирование эндотелиальной дисфункции. Экспериментально доказано, что по силе эндотелио- и кардиопротективного эффектов (влияние на показатели площади и плотности ядер эндотелиоцитов; концентрацию белка ST2) комбинированное средство L-аргинин/тиотриазолин достоверно превосходит референс-препараты Милдронат, Мексидол и Тиотриазолин.

Ключевые слова: экспериментальная алкогольная кардиомиопатия, комбинированное средство L-аргинина с тиотриазолином, милдронат, мексидол, тиотриазолин.

Введение считают себя больными [8]. В Украине на про-

„ тяжении последних 20 лет наркологическая си-

По данным ВОЗ, в настоящее время в мире ¡- ^

,гп "1С I- туация остается стабильно напряженной, и ко-

живут более 150 млн. лиц, страдающих алко- ^.асот, о.аиттпи псм^жсппим,

3 - ^ Пс07 ^ - личество пациентов, состоящих на учете в нар-

гольнои зависимостью, из них 95% людей упот- ^ , 3 ^

ребляют алкоголь на протяжении жизни, а78% кологических Диспан серах (по Данным ста™ сти-^ ^ ки) достигает 1 млн человек. Установлено, что

не обращаются за медицинской помощью и не

употребление алкоголя среди населения не

только способствует развитию патологических изменений различных органов и систем организма, но и повышает риск смертности на 30%. Анализ структуры соматической летальности больных хроническим алкоголизмом свидетельствует о том, что её основной причиной является именно алкогольная кардиомиопатия (АКМП), которая вызывает 1/5 всех случаев внезапной сердечной смерти. По данным разных авторов распространенность заболевания колеблется в пределах от 3,8% до 40% всех кардиомиопатий [4].

АКМП представляет собой специфическую дилатационную кардиомиопатию (МКБ-142.6), которая как по патогенезу, так и по особенностям своей клинической картины в значительной мере отличается от других наиболее распространённых заболеваний сердечно-сосудистой системы [14]. Это связано с тем, что в основе АКМП лежит некоронарогенное, невоспалительное моноэтиологическое алкоголь-обусловленное токсическое повреждение сердечной мышцы, тонкие механизмы которого до настоящего времени окончательно не изучены. В широком смысле данный термин может также обозначать обширный спектр сердечнососудистых расстройств, развивающихся на фоне острой или хронической алкогольной интоксикации и рассматриваемых в рамках так называемой алкогольной болезни сердца [11].

Патогенез АКМП до конца не исследован, но основным является прямое токсическое воздействие этанола и его первого и главного метаболита — ацетальдегида — на миокард в сочетании с характерными для хронической алкогольной интоксикации изменениями нервной регуляции и микроциркуляции. Ацетальдегид повреждает сократительную функцию миокарда, нарушает метаболизм липидов и функции митохондрий, транспорт и связывания кальция, сопряжение между возбуждением и торможением и способствует оксидативному повреждению и пере-кисному окислению липидов [1].

Несмотря на всю значимость этой проблемы, сколько-нибудь эффективной схемы терапии АКМП до настоящего времени не существует [7,12]. В настоящее время комплекс мероприятий, направленных на лечение больных с алкогольной кардиомиопатией, сводится к прекращению потребления алкоголя, проведению симптоматической и общеукрепляющей. Лечение сопутствующей АКМП хронической сердечной недостаточности (ХСН), проводимое по схемам, используемым при терапии ХСН другой этиологии [7,15], ограничивается применением адре-ноблокаторов, блокаторов кальциевых каналов, витаминных препаратов и метаболитотропных кардиопротекторов и, как правило, малоэффективно [10].

Вместе с тем, учитывая, что в патогенезе АКМП значительную роль играет окислительный стресс, нарушения метаболизма и транспорта свободных жирных кислот, патогенетически

обоснованной при этом заболевании является метаболическая терапия [15]. В комплексной терапии алкогольной кардиомиопатии в качестве метаболитотропных кардиопротекторов широкое применение нашли препараты Милдронат [5] и Мексидол [8]. Однако в реальной клинической практике при назначении этих средств не всегда удается достичь адекватного клинического эффекта [13].

Несовершенство существующих концепций медикаментозной терапии структурно-функциональных нарушений миокарда на фоне хронической алкогольной интоксикации определяет настоятельную необходимость поиска и создания новых лекарственных препаратов строго направленного действия, с учетом комплекса механизмов повреждающего действия этилового алкоголя на миокард. Особый интерес представляет метаболический прекурсор оксида азота (N0) - L-аргинин, который увеличивает концентрацию N0 в тканях, вызывает расширение сосудов и может оказывать проти-воишемическое и кардиопротективное действие. Несомненный интерес представляет поиск возможностей усиления протекторных свойств L-аргинина за счет комбинирования с веществами, способными улучшить энергообеспечение ишемизированного миокарда и повысить биодоступность образуемого из L-аргинина N0. К таким веществам относят тиотриазолин, который обладает свойствами оказывать протектив-ное действие в отношении транспорта N0 за счет сохранения восстановленных тиолов [16]. В этом отношении несомненный интерес представляет комбинированное средство L-аргинина с тиотриазолином в оптимальной комбинации L-аргинина с тиотриазолином - 4:1, получивший название «Аргитрил» (разработка НПО «Фарма-трон»), который проявляет кардиопротективное действие при экспериментальном инфаркте миокарда.

Целью настоящего исследования явилось изучение эндотелиопротективного действия комбинированного лекарственного препарата L-аргинина с тиотриазолином (4:1) (Аргитрил) в сравнении с классическими метаболитотропны-ми препаратами Милдронат, Мексидол, Тиот-риазолин по влиянию на морфо-функциональные характеристики эндотелиоци-тов капилляров миокарда крыс и уровень маркера молекулярных нарушений миокарда (биомаркер ST2) в условиях моделирования алкогольной кардиомиопатии.

Материалы и методы исследования

В эксперименте участвовало 50 белых без-породных белых крыс самцов массой 170-180 г., полученных из питомника Института фармакологии и токсикологии АМН Украины, которые содержались в виварии при свободном доступе к пище (стандартный гранулированный корм) и воды, при естественной смене дня и ночи. Все

экспериментальные процедуры осуществляли в соответствии с «Положением об использовании животных в биомедицинских исследованиях», Общими принципами работы на животных, одобренными 1-м Национальным конгрессом по биоэтике (Киев, Украина, 2001) и согласованными с положением Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, Франция, 1985).

Алкогольную кардиомиопатию вызывали внутрижелудочным введением с помощью металлического зонда 20% раствора этанола в дозе 8 г/кг в течение 90 суток. Данная модель воспроизводит структурные, функциональные и обменные нарушения миокарда, характерные для АКМП [6]. Все животные были разделены на 5 групп по 10 особей в каждой. Исследуемые препараты вводили внутрибрюшинно — предлагаемое средство (L-аргинин + тиотриазолин (4:1)) - 200 мг/кг (в пересчете на L-аргинин); Милдронат (Гриндекс, Латвия) — 250 мг/кг; Мек-сидол (ООО «НПК «Фармасофт», Россия) — 200 мг/кг, Тиотриазолин (ПАО «Галичфарм», Украина) — 50 мг/кг [10]. Контрольная и интактная группы получали физиологический раствор. По окончании эксперимента животные выводились из эксперимента через 2-4 мин. после инъекции этаминала натрия (40 мг/кг) (до потери рефлекса выпрямления) с целью минимализации ней-рометаболических нарушений. Верхушечную часть сердца помещали в фиксатор Карнуа на 24 часа. После стандартной процедуры обезвоживания ткани и её пропитки хлороформом и парафином, миокард заливали в парапласт (MkCormick, США). На ротационном микроскопе Microm-325 (Microm Corp., Германия) готовили серийные гистологические срезы толщиной 5мкм. Морфометрический анализ эндотелиоци-тов проводили на микроскопе Axioskop (Ziess, Germany) при помощи видеокамеры COHU -4922 (USA), вводили в систему цифрового анализа изображения VIDAS-386 (Kontron Elektronic, Germany) и определяли следующие показатели: площадь ядра эндотелиоцитов (мкм2); плотность ядер эндотелиоцитов (как показатель количества ядер клеток на 1мм2 площади ткани миокарда) и относительную площадь эндотелиоцитов (в %) [17].

Для биохимических исследований сердце промывали охлажденным 0,15 М KCl (4°С) 1:10, а затем измельчали в жидком азоте до порошкообразного состояния и гомогенизировали в 10-кратном объеме среды при (2°С), содержащей (в ммолях): сахарозы - 250, трис-НС1-буфера - 20, ЭДТА - 1 (рН 7,4). При температуре (+4оС) методом дифференциального центрифугирования на рефрижераторной центрифуге Sigma 3-30k (Германия) выделяли цитозольную фракцию [17]. В цитозоле определяли молекулярный маркер поражения миокарда белок ST2 твердофазным им-муносорбентным сэндвидж-методом ELISA по на-

бору фирмы Critical Diagnostics Presage ST2 Assay kit (REF#BC-1065).

Результаты исследования рассчитывали с помощью стандартного статистического пакета лицензионной программы «STATISTICA for Windows 6.0» (StatSoftInc,

№AXXR712D833214FAN5). Нормальность распределения оценивали по критерию ShapiroWilk. Данные представлены в виде среднего значения. Достоверность различий между средними значениями определяли по критерию Стьюдента при нормальном распределении. В случае распределения, отличного от нормального, или анализа порядковых переменных использовали критерий U Mann-Whitney. Для сравнения независимых переменных в более чем двух выборках применяли дисперсионный анализ (ANOVA) при нормальном распределении или критерий Kruskal-Wallis для распределения, отличного от нормального. Для всех видов анализа статистически значимыми считали различия р<0,05 (95 %).

Результаты и их обсуждение

В результате проведенных исследований было установлено, что на 30 сутки после 90-суточной алкоголизации у животных формируется алкогольная кардиомиопатия (АКМП) - гистологически выявлены деструктивные изменения кардиомиоцитов, проявляющиеся в виде фуксинофилии, анизотропии, накоплении в саркоплазме свободных липидов. Наряду с данными изменениями в миокарде обнаруживались явления пролиферации соединительно-тканных элементов и очаговое ожирение миокарда и развитие выраженного периваскулярного кардиосклероза, а также появляется дисфункция эндотелия - изменения морфо-функциональных показателей эндотелиоцитов сосудов сердца крыс (табл.1).

Роль эндотелия несомненна в патологии микроциркуляции миокарда при АКМП. Эндотелий способен вырабатывать вазодилятаторы (азот, простациклин, брадикинин и др.), вазокон-стрикторы-эндотелин, простагландин А2, модуляторы коагуляции — ангиотензин 2-про, анти-тромбмодулин, активаторы плазминогена, факторы роста. Концепция эндотелиальной дисфункции всё более завоёвывает популярность в качестве механизма патогенеза атеросклероза и алкогольной ангиопатии, что связано как с увеличивающимся объемом знаний о функции и патологии эндотелия, так и с трудностями иных, классических теорий атерогенеза и ангиопатий. Развитие при СН эндотелиальной дисфункции как дисбаланса между эндотелиальными вазо-дилататорами и вазоконстрикторами в сторону последних также связано с повышенным содержанием цитокинов (IL-1 ß, ФНОа), что свидетельствует о медиаторном повреждении сосудистого эндотелия при развитии коронарной сосудистой реакции.

Таблица 1

Морфофункциональные показатели эндотелиоцитов сосудов сердца крыс с алкогольной кардиомиопатией (АКМП)

Группы животных Площадь ядер эндотелиоцитов, мкм2 Плотность ядер эндотелиоцитов на 1 мм2 площади среза миокарда Относительная площадь эндотелиоцитов в %

Интакт (n=10) 5,606±0,245 1262,976±119,706 0,708±0,072

Контроль (АКМП) (n=10) 3,791±0,226* 1355,515±137,778 0,553±0,069*

АКМП+Милдронат, 250 мг/кг (n=10) 4,990±0,276*К2,3 1224,704±138,348 0,611±0,065*К3

АКМП+Мексидол, 200 мг/кг (n=10) 5,360±0,261 К 1242,100±184,401 0,666±0,088 К

АКМП+Тиотриазолин, 50 мг/кг (n=10) 5,74±0,23 *К1 1287,29±167,40 0,673±0,082 К

АКМП+ Аргитрил (Аргинин/тиотриазолин (4:1)), 200 мг/кг (n=10) 5,646±0,310 К1 1211,694±149,027 К 0,684±0,080 К1

Примечание:1) *- изменения достоверны по отношению к интактным животным (р<0,05);

2) К- изменения достоверны по отношению к животным контрольной группы (р<0,05);

3) 1 - изменения достоверны по отношению к группе животных, получавших Милдронат (р<0,05);

4) 2- изменения достоверны по отношению к группе животных, получавших Тиотриазолин (р<0,05);

5) 3- изменения достоверны по отношению к группе животных, получавших Аргитрил (р<0,05);

6) п - количество животных в группе.

Результаты, полученные в нашем эксперименте и представленные в таблице, демонстрируют ишемическое повреждение эндотелия сосудов миокарда и формирование эндотелиаль-ной дисфункции, о чем свидетельствует снижение площади ядер эндотелиоцитов на 32,38%, плотности ядер эндотелиоцитов на 7% и относительной площади ядер эндотелиоцитов на 21,89% по сравнению с группой интактных животных.

Введение препаратов сравнения при АКМП оказывало в разной степени выраженный эндо-телиопротективный эффект. Курсовое введение Милдроната в дозе 250 мг/кг и Мексидола в дозе 200 мг/кг приводило к менее выраженному, по сравнению с группой контроля, снижению площади ядер эндотелиоцитов соответственно на 31,63 и 41,39% и относительной площади ядер эндотелиоцитов на 10,49 и 20,43%. Выявленные данные свидетельствуют о том, что Милдронат и Мексидол оказывал умеренное влияние на признаки эндотелиальной дисфункции миокарда при алкогольной кардиомиопатии. В миокарде животных, получавших Тиотриазолин и Аргит-рил, наблюдали достоверное повышение площади ядер эндотелиоцитов сосудов соответственно на 51,41 и 48,93% по сравнению с группой нелеченных животных. Таким образом, в результате проведенных исследований установ-

лено, что комбинированный препарат тиотриа-золина и L-аргинина (Аргитрил) по такому показателю как площадь ядер эндотелиоцитов оказывает достоверно более выраженное эндоте-лиопротективное действие по сравнению с Милдронатом, Мексидолом и Тиотриазолином в условиях АКМП.

Принципиально важным процессом является ремоделирование сердца. Это понятие включает в себя: нарушение структуры сократительного аппарата кардиомиоцитов, их функциональную асимметрию, изменение межклеточных взаимодействий, интерстициальный фиброз, деспирализацию хода мышечных пучков и изменение формы полостей сердца. Подтверждение чему было увеличение в цитозоле миокарда контрольных крыс (табл.2) концентрации белка ST2 в 3,34 раза по сравнению с группой интакта. ST2 (Supression of tumorogenicity 2, Growth Stimulation expressed gene 2, стимулирующий фактор роста, экспрессирующийся геном 2, он же IL1RL1) - член суперсемейства рецепторов IL-1, который является рецептором IL-33 [2]. ST2 - маркер фиброза и ремоделирования сердечной ткани, высвобождается кардиомиоцитами и фибробластами [3]. Повышение концентрации ST2 свидетельствует о ремоделировании сердца и сердечной недостаточности у животных с АКМП.

Таблица 2

Концентрация белка ST2 в цитозоле миокарда крыс с алкогольной кардиомиопатией (АКМП)

Группы животных Концентрация ST2, нмоль/мг белка

Интакт (n=10) 1,42±0,21

Контроль (АКМП) (n=10) 4,75±0,32*

АКМП+Милдронат, 250 мг/кг (n=10) 3,93±0,42* К3,4

АКМП+Мексидол, 200 мг/кг (n=10) 3,51±0,32*К4

АКМП+Тиотриазолин, 50 мг/кг (n=10) 3,23±0,21*К1,4

АКМП+ Аргитрил (Аргинин/тиотриазолин (4:1)), 200 мг/кг (n=10) 2,71±0,16*К1,2,3

Примечание: 1) *- изменения достоверны по отношению

2) К- изменения достоверны по отношению

3) 1 - изменения достоверны по отношению

4) 2 - изменения достоверны по отношению

5) 3 - изменения достоверны по отношению

6) 4 - изменения достоверны по отношению

7) п - количество животных в группе.

к интактным животным (р<0,05); к животным контрольной группы (р<0,05); к группе животных, получавших Милдронат (р<0,05); к группе животных, получавших Милдронат (р<0,05); к группе животных, получавших Тиотриазолин (р<0,05); к группе животных, получавших Аргитрил (р<0,05);

Введение Милдроната и Мексидола снижало концентрацию ST2 соответственно на 17,2 и 26,1% в миокарде крыс АКМП. В результате терапии Тиотриазолином в дозе 50 мг/кг у крыс с экспериментальным алкоголизмом восстанавливались транскрипционные процессы в эндо-телиоцитах, о чем судили по достоверному снижению концентрацию ST2 на 32% в миокарде крыс с АКМП. Введение комбинированного средства L-аргинин/тиотриазолин приводило к выраженному снижению концентрации ST2 на 43% в цитозоле миокарда крыс АКМП.

Наличие более выраженного эндотелио- и кардиопротективного действия у комбинированного препарата тиотриазолина и L-аргинина по сравнению с L-аргинином можно объяснить следующим. Тиотриазолин способен выступать в роли транспортной молекулы N0, образуя нитрозотиолы [16]. L-aргинин оказывает прямое стимулирующее действие на активность N0-синтазы и продукцию N0. Поэтому комбинированный препарат тиотриазолина и аргинина обладает уникальными свойствами оказывать протективное действие в отношении синтеза и транспорта N0, его биодоступности, что приводит к потенцированию таких свойств L-аргинина. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для дальнейших доклинических исследований потенциального препарата «Аргитрил».

Выводы

1. Моделирование алкогольной кардиомио-патии (АКМП) путем 90-суточного внутрижелу-дочного введения 25% этанола (8г/кг) приводит через 30 суток после отмены этанола к морфологическим изменениям эндотелиоцитов у экспериментальных животных - снижению площади ядер эндотелиоцитов, их плотности и относительной площади, а также к увеличению концентрации маркера фиброза и ремоделирования сердечной ткани (белка ST2) по сравнению с группой интакта.

2. Курсовое 30-суточное внутрижелудочное введение животным с АКМП метаболитотроп-ных кардиопротекторов в лечебном режиме — комбинированное средство L-аргинин/тиотриазолин (200 мг/кг), Милдронат (250 мг/кг), Мексидол (200 мг/кг) и Тиотриазолин (50 мг/кг) - приводит к торможению формирования морфогистологических признаков дисфункции эндотелия (повышение плотности и площади ядер эндотелиоцитов, снижение концентрации ST2 по сравнению с группой контроля) в миокарде крыс с алкогольной кардиомиопатией,

при этом Аргитрил проявлял достоверно более выраженный эндотелиопротективный эффект.

3. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для применения Ар-гитрила в комплексной терапии алкогольной кардиомиопатии.

Перспективы дальнейших исследований заключаются в дальнейшем изучении особенностей кардиопротективного действия Аргитрила и его преимуществ по сравнению с известными кардиопротекторами при экспериментальной алкогольной кардиомиопатии.

Литература

1. Aberle NS, Burd L, Zhao BH. Acetaldehyde-induced cardiac contractile dysfunction may be alleviated by vitamin B1 but not by vitamins B6 or B12. Alcohol & Alcoholism. 2014; 5(39): 450-4.

2. Boisot S, Beede J, Isakson S, Chiu A, Clopton P, Januzzi J, Maisel AS, Fitzgerald RL. Serial sampling of ST2 predicts 90-day mortality following destabilized heart failure. J Card Fail. 2008; 14(9): 732-8.

3. Daniels LV, Bayes-Genis A. Using ST2 in cardiovascular patients: a review. Future Cardiol. 2014; 10(4): 525-39.

4. Hookana E, Junttila MJ, Puurunen VP. Causes of nonischemic sudden cardiac death in the current era. Heart rhythm: the official journal of the Heart Rhythm Society. 2011; 8: 1570-5.

5. Kalvinsh lYa. Mildronate: mode of action and prospects of its application. Riga, 2012. 132 р.

6. Lieber Charles S. Medical and Nutritional Complications of Alcoholism: Mechanisms and Management. Springer, N.Y., 1992. 677 p.

7. Piano MR, Phillips ShA. Alcoholic cardiomyopathy: Pathophysiologic insight. Cardiovasc. Toxicol. 2014; 14: 4: 291308.

8. WHO to meet beverage company representatives to discuss health-related alcohol issues. Available at: http://www.who.int/mediacentre/news/releases/2003/pr6/en/. Accessed by 10.12.2014.

9. Aleksandrov AA. Vyiyavlenie rasstroystv, vyizvannyih upotrebleniem alkogolya, v obschemeditsinskoy praktike [Identification of disorders caused by alcohol consumption in general medical practice]. Meditsina. 2007; 1 (56): 12-15. (Russian)

10. Belenichev IF, Cherniy VI, Nagorna EA, Pavlov SV, Buhtiyarova N.V. Neyroprotektsiya i neyroplastichnost [Neuroprotection and Neuroplasticity]: Monografiya Kiev: Logos, 2015. 512 p. (Russian)

11. Bohan NA, Mandel AI, Maksimenko NN, Mihaleva LD. Smertelnyie ishodyi pri alkogolnoy zavisimosti [Fatalities in alcohol addiction]. Narkologiya. 2007; 12: 37-40. (Russian)

12. Drapkina O, Ashihmin Ya, Ivashkin V. Problema alkogolnoy kardiomiopatii [The problem of alcoholic cardiomyopathy]. Vrach. 2005;8:48-50. (Russian)

13. Drapkina OM. Problema alkogolnoy kardiomiopatii. Effektivnaya farmakoterapiya v kardiologii i angiologii [The problem of alcoholic cardiomyopathy. Effective pharmacotherapy in cardiology and angiology]. 2008; 1: 30-34. (Russian)

14. Moiseev VS, Shelepin AA. Alkogol i bolezni serdtsa: rukovodstvo [Alcohol and heart disease: a guide.]. M.: GEOTAR-Media. 2009. 235 p. (Russian)

15. Ryabenko D.V., Kornienko T.M. Alkogolnaya kardiomiopatiya [Alcoholic Cardiomyopathy]. Ukrainskiy kardiologichniy zhurnal. 2010; 4: 91-7. (Russian)

16. Toporkov AS, Topchiy NV. Vozmozhnosti primeneniya Tiotriazolina v kachestve sredstva metabolicheskoy terapii [Possibilities of using thiotriazolin as a means of metabolic therapy]. Russkiy meditsinskiy zhurnal. 2015; 15: 890-4. (Russian)

17. Chekman IS, Belenichev IF, Nagornaya EA, Buhtiyarova NV, Kucherenko LI. Doklinicheskoe izuchenie spetsificheskoy aktivnosti endotelioprotektivnyih preparatov. Metodicheskie rekomendatsii GETs MZ Ukrainyi [Preclinical study of the specific activity of endothelioprotective drugs. Methodical recommendations of the SCE of the Ministry of Health of Ukraine]. Kiev, 2014. 60 s. (Ukrainian)

Реферат

ВИВЧЕННЯ ЕНДОТЕЛЮПРОТЕКТИВНО1ДИ КОМБ1НОВАНОГО Л1КУВАЛЬНОГО ЗАСОБУ В УМОВАХ АЛКОГОЛЬНО!

КАРДЮМЮПАТП

Супрун Э. В., Терещенко М. С.

l<™40Bi слова: експериментальна алкогольна кардюмюла™, комбiнований 3aci6 L-apriHiHy з тютриазолшом, мiлдронат, мексидол, тiотриазолiн.

Останшм часом у зв'язку поширенням алкогольно'1' кардюмюпатп серед працездатного населення промислово розвинених кра'н актуальною потребою е пошук нових л1карських препарат1в строго спрямовано''' дИ, з урахуванням комплексу механ1зм1в ушкоджуючо'' дIY етилового алкоголю на мюкард. В цьому вщношены 1нтерес представляе комб1нований зас1б 1-арг1н1ну c Т1отриазол1ном (розробка НВО «Фарматрон»), а також Милдронат, Мексидол i Т1отриазол1н. Метою цього дослщження було ви-вчення ендотелюпротективно''' дм комбiнованого лiкарського препарату L-аргiнiну з Тютриазолшом (4:1) (Арптрил) в порiвняннi з класичними метаболiтотропними препаратами Мтдронат, Мексидол, Тiотiразолiн за впливом на морфо-функцюнальы характеристики ендотелiоцитiв i рiвень ST2 в умовах моделювання алкогольно' кардюмюпатп. Алкогольну кардюмюпатш викликали внутршньошлунковим введенням за допомогою металевого зонда 20% розчину етанолу в дозi 8 г/кг протягом 90 дiб. Ва тва-рини були роздтеы на 5 груп по 10 особин у кожнш. Дослiджуванi препарати вводили протягом 30 дiб внутршньочеревно - пропонований засiб (L-аргiнiн 100 мг/мл + тютриазолш 25 мг/мл (4:1)) - 200 мг/кг (в перерахунку на L-аргшш); Мтдронат (Гриндекс, Латвiя) - 250 мг/кг; Мексидол (ТОВ НПК «Фарма-софт», Роая) - 200 мг/кг, Тютриазолш (ПАТ «Галичфарм», Укра'на) - 50 мг/кг. Визначали наступи по-казники: площа ядра ендотелiоцитiв (мкм2); щтьнють ядер ендотелiоцитiв (як показник кшькосп ядер клiтин на 1мм площi тканини мiокарда) i вiдносну площу ендотелюцтчв (%), бiлок ST2. В результат проведених дослiджень було встановлено, що на 30 добу пюля 90-добово''' алкоголiзацil у тварин формуеться алкогольна кардюмюпа™. Вщзначено достовiрне зниження у тварин контрольно' групи площi ядер ендотелюци^в на 32,38%, щшьносп ядер ендотелiоцитiв на 7% i вщносно''' площi ядер ендотелiоцитiв на 21,89%, пщвищення концентрацп бiлка ST2 в 3,34 рази в порiвняннi з штактними тваринами, що вщображае формування ендотелiальноl дисфункцп. Експериментально доведено, що за силою ендотелю- i кардiопротективного ефектiв (вплив на показники площi i щiльностi ядер ендотелюци^в; концентрацiю бiлка ST2) комбiнований зааб L-аргiнiн/тiотриазолiн достовiрно перевершуе референс-препарати Милдронат, Мексидол i Тiотриазолiн.

Summary

STUDY OF ENDOTHELIOPROTECTIVE ACTION OF COMBINED MEDICINE UNDER ALCOHOLIC CARDIOMYOPATHY Suprun E.V., Tereshchenko M.S.

Key words: experimental alcoholic cardiomyopathy combined L-arginine and thiotriazoline, mildronate, mexidol, thiotriazolin.

At present, due to spreading of alcoholic cardiomyopathy among the able-bodied population of industrialized countries, there is an urgent need to search for new medicines possessing a strictly targeted effect, taking into account the complex mechanisms of the damaging effects produced by ethyl alcohol on the myocardium. Therefore, the combination of L-arginine and thiotriazolin (developed by "Farmatron" scientific production association) is of great clinical interest. The same is relevant for Mildronate, Mexidol and Thiotriazolin. The aim of this research was to study the endothelioprotective effect of the medicine combining L-arginine with thiotriazoline (4: 1) (Argitril) in comparison with the standard metabolites as Mildronate, Mexidol, and Thiotirazoline on the morphological and functional characteristics of endotheliocytes and ST2 level in modelled cardiomyopathy and alcohol cardiomyopathy. Alcoholic cardiomyopathy was caused by intragastric administration of 20% ethanol solution in a dose of 8 g/kg for 90 days. All animals were divided into 5 groups, 10 animals in each. All the studied substances were administered intraperitoneally for 30 days: the combined medicine (L-arginine 100 mg/ml + thiotriazolin 25 mg/ml (4:1)) - 200 mg/kg (in recalculation for L-arginine); Mildronate (Grindeks, Latvia) - 250 mg/kg; Mexidol (NPK Farmasoft, Russia) - 200 mg/kg, Thiotriazolin (Galichfarm, Ukraine) - 50 mg/kg. The control and intact groups received physiological saline. The following indicators were assessed: endothelial cell nucleus area (^m2); the density of the nuclei of endotheliocytes (as an indicator for the number of cell nuclei per 1 mm2 of myocardial tissue area) and the relative area of endotheliocytes (%), ST2 protein.

The study has shown that on the 30th day after 90 days of the development of alcohol addiction, the animals were found out to have alcoholic cardiomyopathy. A significant decrease, by 32.38%, in the area of the nuclei of endotheliocytes was observed in the animals of the test group, the density of nuclei of the endotheliocytes lowered by 7% and the relative area of the nuclei of the endotheliocytes reduced by 21.89%. An increase in the concentration of ST2 protein was observed in 3.34 times compared with the intact animals that evidences the presence of endothelial dysfunction.

It has been experimentally proved that the combination of L-arginine/thiotriazolin significantly exceeds the reference medicines as Mildronate, Mexidol and Thiotriazolin in terms of endothelioprotective and cardioprotective effects (effect on the area and density of nuclei of endotheliocytes; concentration of ST2 protein).