CC BY
114
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2011
ВОЗДЕЙСТВИЕ ЭТИЛМЕТИЛГИДРОКСИПИРИДИНА СУКЦИНАТА И ТИОТРИАЗОЛИНА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ ОРГАНИЗАЦИЮ ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС ПОСЛЕ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ЭТАНОЛОМ
ХОДОС О.А.*, САМСОНОВА И.В.**, ГИДРАНОВИЧ Л.Г.*, САЧЕК М.М.***
УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»,
кафедра органической химии, * кафедра патологической анатомии,**
ГУ «Республиканский научно-практический центр медицинских технологий, информатизации,
управления и экономики здравоохранения»***
Резюме. В эксперименте на крысах- самцах линии Wistar исследована структурно-функциональная организация головного мозга крыс после хронической алкогольной интоксикации на фоне отмены этанола и при использовании препаратов этилметилгидроксипиридина сукцинат и тиотриазолин.
Показано, что отмена этанола после хронической алкогольной интоксикации сопровождается глубокими гемодинамическими нарушениями со стороны микроциркуляторного русла ткани мозга и, как следствие, нарастанием в динамике метаболических и необратимых дистрофических изменений атрофического (карио- и цитопикноз) и некротического (карио- и цитолизис, кариорексис) характера, что определяет нарушение функциональной активности головного мозга.
Введение препаратов тиотриазолин и этилметилгидроксипиридина сукцинат после отмены этанола оказывает вазо- и нейропротекторное действие на ткань головного мозга, что определяется их модулирующим влиянием на метаболизм в ткани головного мозга и состояние гемодинамики, определяет снижение выраженности деструктивных изменений нейроцитов.
Ключевые слова: этанол, этилметилгидроксипиридина сукцинат, тиотриазолин, головной мозг.
Abstract. Histological structure of brain after chronic alcohol intoxication and ethylmethylhydroxypyridine succinate and thiotriazolin influence was investigated in experiments on Wistar line male-rats.
It has been shown that abstinence syndrome is accompanied by severe hemodynamic disorders in the brain microcirculatory bed, increase of metabolic and irreversible dystrophic disturbances of atrophic (kario- and cytopyknosis) and necrotic (kario- and cytolysis, karyorrhexis) character. These changes provide for the brain functional activity lesions.
The administration of Ethylmethylhydroxypyridine succinate and Thiotriazolin leads to decrease of destructive changes due to their vaso- and neuroprotective influence resulting from their positive effect on brain tissue metabolism and microcirculation.
Интоксикация этанолом вызывает значительные изменения гистологической структуры и функциональной ак-
Адрес для корреспонденции: г.Витебск, ул.Нижненабережная, д. 19, кв. 28. Тел. +375 33 329-27-20 -Ходос О.А.
тивности головного мозга [1-3], приводит к его дегенеративным изменениям [4]. Согласно литературным данным, под действием этанола в ткани головного мозга наблюдается гиперемия капилляров, а также дистрофические изменения нейронов и клеток глии [5]. Наиболее уязвимы для алкоголя нейроны, так как
этиловый спирт обладает нейротоксическим действием [3, 6].
В настоящее время достаточно активно изучаются лекарственные средства этилме-тилгидроксипиридина сукцинат (Мексибел, Мексидол) и тиотриазолин. Этилметилгид-роксипиридина сукцинат ингибирует свободно-радикальные процессы окисления липидов, оказывает модулирующее влияние на активность мембраносвязанных ферментов и ионных каналов [7], улучшая микроциркуляцию и метаболизм в ткани головного мозга [7, 8]. Поэтому он применяется в качестве средства для лечения острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения, в том числе церебральных инсультов, дисцир-куляторной энцефалопатии, вегетососудистой дистонии, черепно-мозговой травмы, эпилепсии, полиневропатии, а также при интоксикациях этанолом и синдроме отмены алкоголя [7-9].
Тиотриазолин обладает высокими восстановительными свойствами благодаря наличию в его структуре тиогруппы, поэтому данный препарат способен становиться акцептором электронов от активных форм кислорода и других нестойких соединений и принимать участие в ключевых реакциях реализации энергетического метаболизма [10]. Ти-отриазолин обладает также значительным ней-ропротекторным действием [11, 12], что связано с его антиоксидантным эффектом и обусловлено способностью активировать систему антиоксидантных ферментов (супероксиддис-мутаза и глутатионпероксидаза), ингибировать АФК и стабилизировать мембраны [11, 12]. Применение тиотриазолина стимулирует генную активность и активацию процессов трансляции [11, 12], активирует трансляцию мРНК на рибосомах, что приводит к усилению процессов синтеза белка [11, 12].
Однако особенности действия этилме-тилгидроксипиридина сукцината и тиотри-азолина при отмене этанола после хронической алкогольной интоксикации и их способность оказывать влияние на структурнофункциональную организацию головного мозга при данной патологии изучена недостаточно.
Целью работы было изучение структурно-функциональной организации головного мозга крыс после хронической алкогольной интоксикации на фоне отмены этанола и оценка влияния препаратов этилметилгидрок-сипиридина сукцинат и тиотриазолин в данных условиях.
Методы
В опытах использовали самцов крыс линии Wistar, средней массой тела 360 грамм. Для экспериментов отбирали здоровых животных с чистым и гладким шерстным покровом, а также нормальной поведенческой активностью. Животных содержали на нормированном полноценном рационе в стандартных условиях вивария при естественном световом режиме, что обуславливало нормальный биологический фон. Так как отдельные особи крыс отличаются по степени алкогольной мотивации [13, 14], предварительно оценивали чувствительность центральной нервной системы к действию этанола и для экспериментов отбирали животных, предрасположенных к добровольному потреблению алкоголя. Распределение крыс на предпочитающих раствор этанола и отвергающих его, а также оценку суммарной активности этанол-ме-таболизирующих систем и чувствительности центральной нервной системы к действию этилового спирта проводили с помощью теста «этанолового наркоза» путем внутрибрю-шинного введения 25% раствора этанола [13].
Экспериментальная модель хронической алкогольной интоксикации достигалась путем предоставления животным опытных групп 15% раствора этанола ad libitum в качестве единственного источника питья [15]. В современной литературе также отмечается, что данная модель (спаивание 15% раствора этанола в качестве единственного источника питья крысам, предварительно отобранным по признаку предпочтения этилового спирта, в течение длительного времени) является наиболее схожей с алкоголизмом у людей [16]. Для адаптации животных к вкусу и фармакологическому действию этилового спирта концентрацию растворов этанола ступенчато увели-
чивали в течение трех недель от 5 до 15% (5% - первая неделя, 10% - вторая неделя, 15% -третья неделя) [13, 17]. Раствор этанола у подопытных крыс-самцов находился в поилках клеток круглосуточно. Животные контрольной группы в качестве источника питья получали водопроводную воду. Экспериментальные животные потребляли раствор этанола не менее 29 недель. Регулярно контролировали объем выпитого животными раствора этанола и воды, еженедельно осуществляли взвешивание крыс. Далее прекращали доступ животных к раствору этанола и заменяли его на водопроводную воду.
Введение лекарственных препаратов опытным группам крыс осуществлялось в хвостовую вену в следующих дозах: этилметил-гидроксипиридина сукцинат - 10 мг/кг массы тела животного, тиотриазолин - 50 мг/кг массы тела животного [10]. Контрольным группам животных внутривенно вводили экви-объемное количество физиологического раствора. Животных выводили из эксперимента декапитацией через 1, 3 и 7 суток после прекращения доступа к раствору этанола [16]. Таким образом, были сформированы следующие группы экспериментальных животных:
1. Контрольная группа (интактные животные, потреблявшие водопроводную воду).
2. Животные, потреблявшие раствор этанола в течение 29 недель, забой которых осуществлялся через 1, 3 и 7 суток после лишения доступа к раствору этанола.
3. Животные, потреблявшие раствор этанола в течение 29 недель, которым внутривенно вводили препарат этилметилгидрокси-пиридина сукцинат в течение 1, 3 и 7 суток после лишения доступа к раствору этанола.
4. Животные, потреблявшие раствор этанола в течение 29 недель, которым внутривенно вводили тиотриазолин в течение 1, 3 и 7 суток после лишения доступа к раствору этанола.
Животных выводили из эксперимента путем одномоментной декапитации. После фиксации головного мозга в 10% нейтральном формалине и стандартной гистологической проводки изготавливали гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и
эозином и по Нисслю. Структурно-функциональную организацию в срезах коры головного мозга экспериментальных животных изучали микроскопически при увеличении х10, 20, 40, 100, 200, 400.
Результаты и обсуждение
Алкогольная интоксикация с последующей резкой отменой алкоголя приводила к развитию вазомоторных нарушений в микроцир-куляторном русле вещества головного мозга.
Последнее выражалось в развитии на 1ые сутки дистонии микрососудов с их полнокровием, появлении участков спазмирования и оптически пустых капилляров, развитии от слабо до выраженного периваскулярного отека (рис. 1).
С увеличением сроков (3 и 7 сутки) после отмены алкоголя на фоне сохранения полнокровия сосудов, явлений сладжирования и стаза появлялись разрывы стенок емкостных сосудов с очаговыми мелкими кровоизлияниями в нейропиль (рис. 2).
В большинстве сосудов микроциркуля-торного русла отмечались десквамация эндотелия, явления фибриноидного набухания, появление очагов фибриноидного некроза с развитием в нервной ткани спонгиоза и глиоза.
Первоначальное появление участков спаз-мирования сосудов сменялось их расширением с нарастанием периваскулярного отека.
Следствием вазомоторных нарушений явились диффузный отек нервной ткани (с перицеллюлярным отеком) и структурные изменения нейроцитов (рис. 3).
Становились очевидными глубокие повреждения плазматической мембраны, исчезновение или выраженная деформация ядра, ядрышка.
Повреждения структуры части нейроци-тов коры полушарий мозга с развитием в них необратимых дистрофических изменений атрофического (карио- и цитопикноз) и некротического (карио- и цитолизис, кариорексис) характера определяло нарушение соотношения между количеством видимо неизмененных и патологических нейронов (в том числе появлении клеток-«теней» и мест выпадения ней-
Рис. 1. Изменения микроциркуляторного русла вещества головного мозга на 1 сутки после отмены
алкоголя. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 400.
Рис. 2. Микрокровоизлияния в веществе головного мозга на 3 сутки после отмены алкоголя.
Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 200.
Рис. 3. Выраженные периваскулярный и перицелллярный отек вещества головного мозга и дистрофические изменения нейроцитов на 7 сутки после отмены алкоголя.
Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 200.
ронов) в сторону увеличения последних. Мы полагаем, что гибель клеток и появление значительного количества мест выпадения ней-роцитов обусловлены их длительной интоксикацией, недостаточностью кислорода и питательных веществ, а также неполным выведением продуктов обмена веществ вследствие возникших застойных явлений в микроцир-куляторном звене.
С увеличением сроков после отмены алкоголя выраженность структурных изменений нейроцитов нарастала. Это свидетельствует, надо полагать, о дальнейшем прогрессировании метаболических нарушений и функциональных сдвигов в них, связанных с дезорганизацией энергетического метаболизма при развитии абстинентного синдрома.
Это подтверждала визуальная оценка срезов мозга, окрашенных по методу Ниссля, которая показала значительное снижение содержания и перераспределение тигроида в нейроцитах. При этом глыбки тигроида были резко измельчены, в большей части клеток тиг-роид не определялся в околоядерной зоне (центральный хроматолиз) или по всей цитоплазме (тотальный хроматолиз) (рис. 4).
Наряду с этим у животных данной группы появлялись крупные гипохромные и пик-нотичные гиперхромные (гиперхроматоз) клетки с перицеллюлярным отеком вокруг.
На фоне введения животным опытной группы лекарственного препарата «Тиотриазолин» в ткани мозга сохранялись вазомоторные нарушения во всех его звеньях в виде полнокровия микрососудов, сладжирования и застоя крови в обменном и венулярном звеньях (капилляро- и венулостазы), расстройств сосудистого тонуса с неравномерным расширением сосудов, а также появлении периваску-лярного отека во всех слоях коры и реактивных изменений со стороны нейроглии в виде сателлитоза и диффузного глиоза (рис. 5).
Изменения сосудистой стенки в виде набухания эндотелиоцитов и отека сосудистой стенки, утолщения базальной мембраны капилляров были выражены слабо (1 и 3 сутки) или не определялись (7 сутки).
При этом в белом веществе полушарий мозга на 3 сутки определялись признаки на-
бухания, начальные явления спонгиоза и в отдельных полях микрогеморрагии с глиальной реакцией по периферии.
Гистологически установлено, что введение тиотриазолина после хронической алкогольной интоксикации на фоне отмены этанола способствовало уменьшению выраженности в нейроцитах дистрофически-атрофи-ческих и дистрофически-некротических изменений. На фоне диффузного поражения ткани головного мозга уменьшалось количество клеток с явлениями кариопикноза, кариорексиса, карио- и цитолизиса, количество клеток-»те-ней» и мест выпадения клеток , увеличивалось количество гипертрофированных и ги-перхромных нейроцитов (рис. 6).
В перинейрональном окружении увеличивалось количество глиальных элементов (са-теллитоз), выявлялся умеренно выраженный перицеллюлярный отек.
Известно, что глиальные элементы принимают непосредственное участие в нейрон-капиллярных взаимоотношениях. Возрастание количества перинейрональной и периваску-лярной глии в наших экспериментах может отражать активирующее воздействие тиотри-азолина на глию, что является, возможно, следствием истинного прироста числа глиальных элементов в результате их деления, миграции и перераспределени клеток глии в ткани мозга с перемещением их к телам функционирующих нейронов [18].
Исследование характера распределения вещества Ниссля в нейроцитах показало увеличение количества клеток с повышенным его содержанием на фоне значительно количества клеток с явлениями хроматолиза различной степени и локализации (центральный, тотальный), с исчезновением характерного глыбча-того распределения тигроида в цитоплазме клеток (рис. 7).
При этом в гипертрофированных клетках обращал на себя внимание прежде всего глыбчатый характер его распределения с образованием вокруг ядра «капюшона».
Известно, что изменение количества рибонуклеопротеидов в теле нервной клетки носит характер вторичных реакций, направленных на восстановление структур нейрона,
Рис. 4. Явления хроматолиза в нейроцитах вещества головного мозга на 3 сутки после отмены алкоголя. Окр. по Нисслю. Ув. 400.
Рис. 5. Периваскулярый отек и реактивные изменения со стороны нейроглии в виде сателлитоза и диффузного глиоза на З сутки после отмены этанола на фоне введения тиотриазолина.
Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 200.
Рис. 6. Гипертрофия и гиперхромия нейроцитов коры головного мозга на 7 сутки после отмены этанола на фоне введения тиотриазолина. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 200.
Рис. 7. Явления гиперхроматоза в нейроцитах мозжечка мозга на 7 сутки после отмены этанола на фоне введения тиотриазолина. Окр. по Нисслю. Ув. 400.
разрушаемых в ходе его специфической деятельности. Повышение в наших экспериментах продукции вещества Ниссля в перикарио-нах нервных клеток являлось, надо полагать, результатом активации тиотреазолином синтеза РНК и белка и определяло развитие ком -пенсаторных реакций биосинтетического аппарата функционирующих нервных клеток на деструкцию клеточных белков
Применение этилметилгидроксипири-дина сукцината у опытных животных сопровождалось положительным его воздействием на состояние сосудов микроциркуляторного русла и метаболизм клеток. Это выражалось, главным образом, в нормализации сосудистого тонуса с исчезновением участков спазми-рования сосудов, оптически пустых капилляров, уменьшении степени периваскулярного отека уже к исходу 1 суток после его введения.
Большинство сосудов артериального звена микроциркуляторного русла оставались полнокровными, что, надо полагать, было направлено на улучшение трофики ткани головного мозга. Наряду с этим в сосудах обменного и венулярного звеньев уменьшалась выраженность явлений сладжирования и застоя крови (капилляро- и венулостазы) (рис. 8).
Характерной реакцией явилось нарастание глиоза и сателлитоза (рис. 9).
Реактивные изменения со стороны нейроглии в виде сателлитоза имели место не только вокруг нейроцитов, но также и около сосудов. Учитывая важную роль глии в функционировании нервной ткани, а также данные о нарушении нейроглиальных и глиально-сосудистых взаимоотношений в наших экспериментах, можно заключить, что имевшая место структурная перестройка нейроглии явилась следствием ее активации вводимым препаратом и была направлена на обеспечение функциональной активности нейроцитов после алкогольной интоксикации в условиях абстинентного синдрома. Известно, что дополнительные сателлиты могут способствовать увеличению возбудимости нейронов, связывая и перераспределяя ионы, осуществлять быстрый транспорт продуктов обмена между нервными клетками и капиллярами мозга, а также снабжать нейроны собственными метаболитами [18].
На фоне выраженных дистрофически-атрофических и дистрофически-некротичес-ких изменений нейроцитов в ткани головного мозга увеличивалось по сравнению с опытной группой количество клеток с явлениями компенсаторно-приспособительного характера. Это выражалось в увеличении количества гипертрофированных нейроцитов, утолщении
Рис. 8. Изменения микроциркуляторного русла вещества головного мозга на 1 сутки после отмены этанола на фоне введения этилметилгидроксипиридина сукцината. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 400.
Рис. 9. Нарастание глиоза и сателлитоза в коре головного мозга на 3 сутки после отмены этанола на фоне введения этилметилгидроксипиридина сукцината. Окр. гематоксилином и эозином. Ув. 200.
их отростков, а также увеличении количества клеток с высоким содержанием тигроида (ги-перхромных нейроцитов) (рис. 10).
Это свидетельствует, надо полагать, о стимулирующем действии этилметилгидрок-сипиридина сукцината на процессы метаболизма в нервной ткани и повышении уровней энергетического и пластического обмена в клетках.
Возрастание же синтеза как внутриядерного, так и цитоплазматического (вещество Ниссля) белка в клетках является, очевидно, проявлением процесса внутриклеточной регенерации и есть, по-видимому, компенсаторная реакция нейроцитов в ответ на поддержание функциональной целостности мозга.
Таким образом, нарастание гиперхроматоза и повышение содержания вещества Ниссля при введении мексибела свидетельствуют о его положительном влиянии на развитие компенсаторно-восстановительных и адаптивных реакций в сосудисто-нервных образованиях головного мозга при абстинентном синдроме на уровне отдельной нервной клетки.
Заключение
Таким образом, на основании выполненного исследования можно сделать следующие выводы:
1. Отмена этанола после хронической алкогольной интоксикации сопровождается
Рис. 10. Явления гиперхроматоза в нейроцитах мозжечка на 3 сутки после отмены этанола на фоне введения этилметилгидроксипиридина сукцината. Окр. по Нисслю. Ув. 200.
глубокими гемодинамическими нарушениями в микроциркуляторном русле головного мозга и, как следствие, нарастанием в динамике метаболических ( снижение содержания в нейроцитах вещества Ниссля) и необратимых дистрофических изменений атрофического (ка-рио- и цитопикноз) и некротического (карио-и цитолизис, кариорексис) характера, что определяет нарушение функциональной активности головного мозга.
2. Введение тиотриазолина нормализует энергетический метаболизм в нервной ткани, оказывает стимулирующее действие на синтетические процессы в клетках, определяет повышение синтеза рибонуклеопротеидов с увеличением содержания вещества Ниссля и снижение выраженности деструктивных изменений нейроцитов.
3. Этилметилгидроксипиридина сукци-нат на фоне отмены этанола после хронической алкогольной интоксикации оказывает вазо-и нейропротекторное действие на ткань головного мозга, что определяется его модулирующим влиянием на метаболизм в ткани головного мозга и состояние гемодинамики, о чем свидетельствовали повышение содержания вещества Ниссля, снижение деструктивных процессов в нейроцитах и вазомоторных нарушений в микроциркуляторном русле.
Литература
1. Sullivan, E.V Neurocircuitry in alcoholism: a substrate of disruption and repair / E.V. Sullivan, A. Pfefferbaum // Psychopharmacology. - 2005. - № 180. - Р 583-594.
2. Ventricular expansion in wild-type Wistar rats after alcohol exposure by vapor chamber / А. Pfefferbaum [et al.] // Alcoholism, clinical and experimental research. - 2008. - Vol. 32, №8. - Р 1459-1467.
3. Rajgopal, Y. Differential modulation of apoptosis associated proteins by ethanol in rat cerebral cortex and cerebellum / Y. Rajgopal, C.S. Chetty, М.С. Vemuri // Eur. J. Pharmacol. - 2003. - Vol. 470, № 3. - P. 117 -124.
4. Distinct cell proliferation events during abstinence after alcohol dependence: microglia proliferation precedes neurogenesis / К. Nixon [et al.] // Neurobiology of disease. - 2008. - Vol. 31, №2. - Р 218
- 229.
5. Jaatinen, Р Mechanisms of ethanol-induced degeneration in the developing, mature, and aging cerebellum / P. Jaatinen, J. Rintala // The Cerebellum. -2008. - Vol. 7, № 3. - Р 332-347.
6. Разводовский Ю. Е. Алкогольное поражение мозга./ / Медицинские новости. - 2006. - №1. - С. 13 - 16.
7. Воронина, Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол: основные эффекты, механизм действия, применение / Т.А. Воронина. - М., 2004.
- 21 с.
8. Мексидол - отечественный препарат нового поколения. Рекомендации по применению. - М., 2005. - 19 с.
9. Воронина, Т.А. Ноотропные и нейропротекторные средства / Т.А. Воронина, С.Б. Середенин // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2007.
- Т. 70, № 4. - С 44 - 57.
10. Метаболические кардиопротекторы: фармакологические свойства и применение в клинической практике / В.А. Визир [и др.]. - Запорожье, 2006. -36 с.
11. Влияние тиотриазолина на гистоморфологические изменения нейронов коры и гиппокампа в постин-сультный период / И.Ф. Беленичев [и др.] // Медицина сегодня. [Электронный ресурс]. - 2007. - №5. -Режим доступа: http://novosti.mif-ua.com/archive/ issue-3094/article-3189/ - Дата доступа: 16.07.2010.
12. Результаты клинического применения антиоксиданта тиотриазолина в комплексном лечении больных с тяжелой черепно-мозговой травмой / Л. А. Дзяк [и др.] // [Электронный ресурс]. - 2003. - №78. -Режим доступа: http://www.health-ua.com/articles/ 324.html - Дата доступа: 16.07.2010.
13. Буров Ю.В. Нейрохимия и фармакология алкоголизма/ Ю.В. Буров, Н.Н. Ведерникова. - М.: Медицина, 1985. - 240 с.
14. Dyr, W Warsaw high-preferring (WHP) and Warsaw low-preferring (WLP) lines of rats selectively bred for high and low voluntary ethanol intake: preliminary phenotypic characterization / W. Dyr, W. Kostowski /
/ Alcohol. - 2008. - Vol. 42, №3. - Р 161 - 170.
15. Museridze, D. P. Metabolic Activity of Cells in Brain Cortex after Alcohol Intoxication and Correction of Changes with Dolivin / D. P. Museridze, T. V Sanikidze, I. K. Svanidze // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. - 2006. - Vol. 142, No. 3. - Р 283 - 285.
16. Пархоменко, Ю. М. Характерные метаболические нарушения в тканях крыс, вызванные длительным приемом алкоголя / Ю. М. Пархоменко, Г. В. Дон-ченко, С. Ю. Пилипчук // Укр. біохім. журн. - 2007. -Т.79, №3. - С. 61 - 69.
17. Nerve growth factor restores mRNA levels and the expression of neuropeptides in the suprachiasmatic nucleus of rats submitted to chronic ethanol treatment and withdrawal / M. M. Paula-Barbosa [et al.] // Journal of Neurocytology/ - 2001/ - № 30. - Р. 195-207.
18. Гейнисман Ю.Я. Структурные и метаболические проявления функции нейрона.- М.: Наука, 1974.- 207 с.
Работа выполнена при финансовой поддержке Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований (договор №Б11М-049 от 15.04.2011 г.).
Поступила 08.08.2011 г. Принята в печать 02.09.2011 г.
