CC BY
78
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2011
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА ТИОТРИАЗОЛИН НА АКТИВНОСТЬ ПРОТЕИНАЗ И ИХ ИНГИБИТОРОВ В ТКАНИ ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС ПОСЛЕ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ЭТАНОЛОМ
ХОДОС О.А.*, ГИДРАНОВИЧ Л.Г.*, САЧЕК М.М.**
УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»,
кафедра органической химии, *
ГУ «Республиканский научно-практический центр медицинских технологий, информатизации,
управления и экономики здравоохранения»**
Резюме. Исследовано влияние препарата Тиотриазолин на интенсивность протеолиза в экстракте ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке, а также сыворотке крови крыс в условиях отмены этанола после хронической алкогольной интоксикации. Показано, что препарат Тиотриазолин стабилизирует активность трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга крыс до уровня контрольных значений через 7 суток после отмены этанола, а в ткани мозжечка через 1 сутки. Под воздействием препарата Тиотриазолин дисбаланс активности цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов устраняется в ткани больших полушарий головного мозга через 3 суток, а в ткани мозжечка через 1 сутки после отмены этанола. Тиотриазолин не восстанавливает протеиназо-ингибиторный баланс сыворотки крови в изучаемые сроки отмены этанола, так как активность а1-протеиназного ингибитора даже через 7 суток остается достоверно ниже контроля.
Ключевые слова: этанол, протеиназы, ингибиторы, тиотриазолин, головной мозг.
Abstract. The influence of thiotriazolin on proteolysis intensity in brain tissue extract, cerebellum and blood serum in rats at withdrawal after chronic alcohol intoxication was studied. Thiotriazolin was shown to normalize the activity of trypsin-like proteinases and their endogenous inhibitors in cerebral hemispheres tissue of rats up to the normal levels in 7 days and in cerebellum tissue in 1 day after alcohol withdrawal. Thiotriazolin stabilizes the activity of cysteine proteinases and their endogenous inhibitors in cerebral hemispheres in 3 days and in cerebellum tissue in 1 day after alcohol withdrawal. Thiotriazolin doesn't normalize the balance of activity of proteinases and their inhibitors in blood serum because the activity of ^-proteinase inhibitor remains reliably less than the normal levels even in 7 days after alcohol withdrawal.
Интоксикация этиловым спиртом приводит к активации протеиназ [1, 2]. Наши предыдущие исследования показали, что даже на седьмые сутки после прекращения доступа экспериментальных животных к раствору этанола в ткани головного
Адрес для корреспонденции: г.Витебск, ул.Нижненабережная, д. 19, кв. 28. Тел. +375 33 329-27-20 -Ходос О.А.
мозга крыс наблюдается дисбаланс активности протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов [3]. Для восстановления про-теиназо-ингибиторного баланса целесообразно осуществление фармакологической коррекции в максимально ранние сроки [4, 5]. В последнее время достаточно интенсивно исследуется лекарственное средство Тиотриазолин [6-8]. Благодаря наличию тиогруппы тиотри-азолин способен становиться акцептором
электронов от активных форм кислорода и других нестойких соединений и принимать участие в ключевых реакциях реализации энергетического метаболизма [6, 7]. Данный препарат оказывает мощное антиоксидантное действие, блокирует окислительный стресс [6, 7]. Тиотриазолин предотвращает гибель клеток путем предупреждения обратимой и необратимой модификации белковых молекул, конкурируя за супероксидный анион цистеи-новыми и метиониновыми фрагментами протеинов биологических мембран [7]. Тиотриа-золин обладает значительным нейропротек-торным действием [9, 10], что связано с его антиоксидантным эффектом и обусловлено способностью активировать систему антиок-сидантных ферментов (супероксиддисмутаза и глутатионпероксидаза), ингибировать АФК и стабилизировать мембраны [9, 10]. Применение тиотриазолина стимулирует генную активность и активацию процессов трансляции, снижает количество случаев цитолиза нейронов в коре головного мозга [9, 10]. Способность тиотриазолина оказывать влияние на активность трипсиноподобных и цистеино-вых протеиназ, а также регулировать протео-лиз при отмене этанола после хронической алкогольной интоксикации в ткани головного мозга и сыворотке крови ранее не исследовалась.
Целью работы являлось изучение влияния препарата Тиотриазолин на интенсивность протеолиза в больших полушариях головного мозга, мозжечке и сыворотке крови крыс в условиях отмены этанола после хронической алкогольной интоксикации.
Методы
В экспериментах использовали самцов крыс линии Wistar, средней массой 360 грамм. Крыс разделяли по степени мотивации потребления растворов этанола с помощью теста « этанолового наркоза» путем однократного внутрибрюшинного введения 25% раствора этанола [11]. Для опытов отбирали животных, предрасположенных к добровольному потреблению алкоголя. Хроническую алкогольную интоксикацию осуществляли путем
предоставления животным опытных групп 15% раствора этанола ad libitum в качестве единственного источника питья [12]. Концентрацию растворов этанола увеличивали ступенчато в течение первых трех недель от 5 до 15% (5% - первая неделя, 10% - вторая неделя, 15% - третья неделя) [1З]. Экспериментальным животным контрольных групп в качестве источника питья предоставляли водопроводную воду. Длительность потребления животными раствора этанола составляла 29 недель, затем прекращали доступ к раствору этилового спирта и заменяли его на водопроводную воду. Вывод животных из эксперимента осуществляли декапитацией через 1 сутки [14], З и Т суток после прекращения доступа к раствору этанола [15]. В результате были сформированы следующие экспериментальные группы: I - контрольная группа ( интактные животные); ЙЙ - животные, потреблявшие раствор этанола в течение 29 недель, декапитация кото -рых осуществлялась через 1 (II-1 ), З (II-З) и 1 (IH) суток после отмены этанола; III - животные, потреблявшие раствор этанола 29 недель, которым внутривенно вводили препарат тиотриазолин в течение 1 (III-1), З (III-З) и Т (ПИ) суток; IV - животные, не подвергавшиеся алкоголизации, которым вводили ти-отриазолин в течение 1 (IV-1), З (IV-З) и Т (IV-Т) суток соответственно. Тиотриазолин вводили в хвостовую вену животных в дозе 5O мг/кг массы животного. Животным контрольных групп внутривенно вводили эквиобъ-емное количество физиологического раствора. Для изучения интенсивности протеолиза использовали низкомолекулярный хромогенный субстрат N-a - бензоил^^-аргинин-пара-нитроанилид (БАПНА). Для определения активности трипсиноподобных протеи-наз и их эндогенных ингибиторов в качестве базовых методик использовались методы, описанные Erlanger B. и др. [1б], а также методики, предложенные Хватовым Т. А. с соавт. и Карягиной И.Ю. с соавт. [П, 18]. Изучение активности цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов осуществляли с помощью метода Lenney J.F. [19]. Указанные методики изначально разрабатывались авторами для исследования протеолиза в сыворотке крови,
поэтому они были модифицированы нами для изучения активности трипсиноподобных и цистеиновых протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстрактах ткани головного мозга крыс.
Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета прикладных компьютерных программ. Для сравнения трех независимых групп и более применяли непараметрический метод сравнения независимых групп Краскела-Уоллиса (ANOVA по Краскелу-Уоллису). При отклонении нулевой гипотезы принимали альтернативную гипотезу о различии групп и затем проводили парное сравнение групп с использованием непараметрического теста Манна-Уитни, применяя при этом поправку Бонфер-рони при оценке значения р [20, 21].
Результаты и обсуждение
Проведенные нами исследования показали, что активность трипсиноподобных про-теиназ в экстракте ткани больших полушарий головного мозга и мозжечка через 1 сутки после прекращения доступа животных к раствору этилового спирта увеличивалась по сравнению с контролем на 94,59% (р=0,0042) и 88,01% (р=0,00бб) соответственно. Через З и 7 суток данный показатель не отличалась от контроля ни в экстракте ткани больших полушарий головного мозга (р=0,4750, р=0,1985 ), ни в мозжечке (р=0,5б77 и р=0,11б0 соответственно), (табл. 1). Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в больших полушариях головного мозга крыс уменьшалась по сравнению с контролем через 1 сутки после отмены алкоголя на 20,55% (р=0,0027), через З суток - на2З,З2% (р=0,0042), через 7 суток - на 25,б9% (р=0,0027). В мозжечке данный показатель через 1 сутки после отмены этанола был снижен на 9,41% (р=0,0027), тогда как через З и 7 суток не отличалась от контроля (р=0,0222 и р=0,11б0).
Активность цистеиновых протеиназ в больших полушариях головного мозга через 1 сутки после отмены этанола не изменялась по отношению к контролю (р=0,0222, с учетом
поправки Бонферрони р должно быть не менее 0,008З), через З суток увеличивалась на 72,34% (р=0,0042) и к 7 суткам стабилизировалась до уровня контроля (р=0,2530). В экстракте мозжечка изменения активности цисте-иновых протеиназ после хронической интоксикации этанолом не были статистически значимыми (р=0,1480). Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в ткани больших полушарий головного мозга (р=0,254б) и мозжечке (р=0,143б) не подвергалась изменениям.
В сыворотке крови общая протеолити-ческая активность после хронической интоксикации этанолом не изменялась. Активность a1-протеиназного ингибитора сыворотки крови через 1 сутки после отмены доступа животных к раствору этанола не изменялась по отношению к контролю (р=0,1043), через 3 суток снижалась на 11,44% (р=0,0027), через 7 суток - на 9,49% (р=0,0027). Активность a2-макроглобулина в сыворотке крови уменьшалась в сравнении с контролем через 1 сутки на 52,бЗ% (р=0,0044), З суток - 42,98% (р=0,0027), 7 суток - 48,24% (р=0,0027). Изменения активности эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ сыворотки крови в данных условиях не были статистически значимыми (р=0,47б2).
Таким образом, при отмене этанола после хронической интоксикации этанолом в ткани больших полушарий головного мозга, мозжечке и в сыворотке крови экспериментальных животных отмечается дисбаланс активности протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов. Восстановление про-теиназо-ингибиторного баланса до контрольных значений не происходит даже через 7 суток после отмены этанола, что может являться основанием для осуществления фармакологической коррекции.
После введения животным препарата Тиотриазолин активность трипсиноподобных протеиназ в экстрактах ткани больших полушарий головного мозга и мозжечка стабилизировалась до уровня контрольных значений (рис. 1, 2).
Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в больших по-
Таблица 1
Активность протеиназ и их эндогенных ингибиторов в экстракте ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке крыс
Показатель Контрольная группа 1 сутки после отмены этанола 1 сутки после отмены этанола + Тиотриа-золин З суток после отмены этанола З суток после отмены этанола + Ти-отриазолин 7 суток после отмены этанола 7 суток после отмены этанола + Ти-отриазолин
Большие полушария головного мозга
Активность трипсиноподобных протеиназ, нмоль/ч- мг белка 50,б04 98,472* б2,151 5б,925 72,бЗб 44,245 бЗ,544
(42,013 -б8,243) (77,794- 128,230) (50,0б7- 73,5499) (40,3б2- 87,339) (бб,012- 81,2б1) (38,б07- 55,843) (47,222- 78,437)
Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ, нмоль/с-мг белка 0,488 0,388* 0,427 0,374* 0,5б9* 0,3б3* 0,547
(0,429 -0,508) (0,352 -0,403) (0,394- 0,498) (0,353 -0,401) (0,519- 0,бЗ7) (0,343 -0,392) (0,495- 0,592)
Активность цис-теиновых протеиназ, нмоль/ч- мг белка 18,737 31,395 42,787* 32,293* 19,208 22,773 29,8бЗ
(14,844 -21,822) (21,482 38,951) (27,829- 53,317) (22,9б9- 4б,032) (3,314- б1,188) (б,240 -57,180) (1б,бЗ2- 38,844)
Активность эндогенных ингибиторов цистеи-новых протеиназ, нмоль/ч-мг белка 20,73б 19,391 25,б9б 15,557 22,770 24,335 Зб,9З7
(15,545 -29,109) (9,290 -45,0б9) (20,б82- 30,09б) (7,589 -28,17б) (12,552- 34,892) (17,804- 31,бб2) (21,б42- 42,898)
Мозжечок
Активность трипсиноподобных протеиназ, нмоль/ч- мг белка 35,054 б5,908* 32,595 34,709 29,823 28,3б7 27,274
(25,079 -49,423) (52,100 87,900) (22,139- 37,225) (27,315- 54,254) (22,551- 37,592) (24,398- 33,957) (19,279- 43,79б)
Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ, нмоль/с-мг белка 0,498 0,451* 0,491 0,444 0,538 0,481 0,533
(0,478 -0,549) (0,415 -0,4б7) (0,428- 0,548) (0,421 -0,488) (0,50б- 0,577) (0,433 -0,509) (0,499- 0,5б2)
Активность цис-теиновых протеиназ, нмоль/ч- мг белка 28,243 37,782 32,808 32,48б 32,559 27,918 Зб,9б 1
(22,914 -35,898) (28,б5б 50,073) (18,245- 43,252) (25,54б- 39,434) (25,457- Зб,948) (23,32б- 34,497) (25,237- 44,804)
Активность эндогенных ингибиторов цистеи-новых протеиназ, нмоль/ч- мг белка 2б,9б4 21,099 29,41б 24,31б 23,317 22,834 2б,312
(19,725 -31,0бб) (9,83б -25,319) (25,139- 37,298) (20,3бб- 30,339) (14,814- 29,525) (13,942- 27,048) (15,117- 34,178)
Примечания: 1. Данные представлены в виде медианы, (-95% - +95%) - доверительный интервал; 2.* - статистически значимые различия показателей по отношению к контролю.
Рис. 1. Активность трипсиноподобных протеиназ в экстрактах ткани больших полушарий головного мозга крыс при хронической алкогольной интоксикации длительностью 29 недель, нмоль/ч-мг белка. 1 - отмена этанола 1 сутки; 2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
70
60
50 ■ Контроль
40 Я Отмена этано/а
30 ц -*-1
20 Отмена этано/а+фарм. корэекдия
10
0 1 і 2 1 3 -г
Рис. 2. Активность трипсиноподобных протеиназ в экстрактах мозжечка крыс при хронической алкогольной интоксикации длительностью 29 недель, нмоль/ч-мг белка.
1 - отмена этанола 1 сутки; 2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
лушариях головного мозга крыс после применения препарата Тиотриазолин через 1 сутки отмены этанола не отличалась от контроля (р=0,3173), через 3 суток увеличивалась на 16,59% (р=0,0066), тогда как через 7 суток вновь стабилизировалась на уровне контрольных значений (р=0,0222) (рис. 3). В ткани мозжечка данный показатель после применения лекарственного средства стабилизировался на уровне контроля во все сроки отмены этанола (р=0,4750, р=0,1531, р=3173 через 1, 3 и 7 суток соответственно) (рис. 4).
При осуществлении фармакологической коррекции с помощью препарата Тиотриазолин активность кислых лизосомальных цистеино-вых протеиназ в ткани больших полушарий головного мозга через 1 сутки после отмены этанола увеличивалась на 128,35% (р=0,0011), тогда как к 3 (р=0,8356) и 7 суткам (р=0,0512) нормализовалась до уровня контроля (рис. 5). В мозжечке данный показатель соответствовал контролю во все сроки отмены (р=0,4694).
Активность эндогенных ингибиторов кислых лизосомальных цистеиновых протеи-
Рис. 3. Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в экстрактах ткани больших полушарий головного мозга крыс после хронической интоксикации этанолом длительностью 29 недель, нмоль/с-мг белка. 1 - отмена этанола 1 сутки;
2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
Рис. 4. Активность эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в ткани мозжечка крыс после хронической интоксикации этанолом длительностью 29 недель, нмоль/с-мг белка.
1 - отмена этанола 1 сутки; 2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
наз в ткани больших полушарий головного мозга (р=0,2546) и мозжечка (р=0,1436) не изменялся по сравнению с контролем вне зависимости как от срока отмены этанола, так и от применения лекарственного средства.
В сыворотке крови изменения общей протеолитической активности после введения препарата Тиотриазолин не были статистически значимыми ни через 1 сутки (р=0,1004), ни через 3 (р=0,4750) и 7 (р=0,6170) суток отмены этанола (табл. 2). Активность а1-проте-
иназного ингибитора при введении лекарственного средства через 1 сутки после отмены этанола не отличалась от контроля (р=0,0222), тогда как через 3 суток уменьшалась на 10,67% (р=0,0082), а через 7 - на 12,32% (р=0,0027) (рис. 6).
Активность а2-макроглобулина сыворотки крови после применения препарата Ти-отриазолин уменьшалась через 1 сутки отмены этанола на 59,21% (р=0,0082), но нормализовалась до контрольных значений уже че-
Таблица 2
Активность протеолитических ферментов и их ингибиторов в сыворотке крови
Показатель Конт- рольная группа 1 сутки после отмены этанола 1 сутки после отмены этанола + Тиотриа-золин З суток после отмены этанола З суток после отмены этанола + Тиотриазо-лин 7 суток после отмены этанола 7 суток после отмены этанола + Ти-отриазо-лин
Общая про-теолитиче-ская активность сыворотки крови, нмоль/с-л. 23,374 37,399 50,125 23,634 26,750 20,777 34,023
(19,927- 33,648) (30,634- 45,410) (23,484- 71,745) (14,251 -41,500) (18,345- 33,770) (11,833- 40,283) (16,431- 52,999)
Активность а1-протеи-назного ингибитора сыворотки крови, мкмоль/с-л. 5,721 5,434 5,241 5,066* 5,110* 5,178* 5,016*
(5,467- 5,796) (5,298- 5,569) (4,908- 5,536) (4,970- 5,204) (4,982-5,400) (4,794- 5,313) (4,723- 5,329)
Активность а2-макрогло-булина, мкмоль/с-л. 0,228 0,108* 0,093* 0,130* 0,151 0,118* 0,176
(0,183- 0,270) (0,090- 0,124) (0,056- 0,175) (0,101- 0,147) (0,106-0,181) (0,091- 0,136) (0,109- 0,226)
Активность эндогенных ингибиторов цистеино-вых протеиназ, отн. ед. 4030,732 4089,834 3701,298 4036,643 3889,610 4143,026 4162,337
(3791,388 4168,759) (3884,312 4423,015) (3236,857- 4200,370) (3843,400 4206,241) (3720,967- 4092,884) (3576,199- 4477,385) (3759,055- 4409,775)
Примечания: 1. Данные представлены в виде медианы, (-95% - +95%) - доверительный интервал; 2.* - статистически значимые различия показателей по отношению к контролю.
Рис. 5. Активность кислых лизосомальных цистеиновых протеиназ в экстрактах ткани больших полушарий головного мозга крыс при хронической интоксикации этанолом длительностью 29 недель, нмоль/ч-мг белка. 1 - отмена этанола 1 сутки;
2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
Рис. 6. Активность б1-протеиназного ингибитора сыворотки крови при хронической алкогольной интоксикации длительностью 29 недель, мкмоль/с-л. 1 - отмена этанола 1 сутки; 2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
Рис. 7. Активность б2-макроглобулина сыворотки крови при хронической алкогольной интоксикации длительностью 29 недель, мкмоль/с-л. 1 - отмена этанола 1 сутки;
2 - отмена этанола 3 суток; 3 - отмена этанола 7 суток.
рез 3 и 7 суток (р=0,0124 и р=0,1160 соответственно) (рис. 7).
При введении препарата Тиотриазолин активность эндогенных ингибиторов цисте-иновых протеиназ в сыворотке крови крыс данных экспериментальных групп не подвергалась изменению ни в одном из случаев независимо от срока отмены этанола (р=0,4762).
Таким образом, применение лекарственного препарата Тиотриазолин способствовало восстановлению баланса активности трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга через 7 суток, а в ткани мозжечка через 1 сутки после отмены этанола. После осуществления фармакологической коррекции дисба-
ланс активности цистеиновых протеолитичес-ких ферментов и их эндогенных ингибиторов устраняется в ткани больших полушарий головного мозга через 3 суток, тогда как в ткани мозжечка стабилизация происходит уже через 1 сутки после отмены этанола.
В сыворотке крови общая протеолитичес-кая активность, а также активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ после хронической алкогольной интоксикации не изменялись. Введение лекарственного средства стабилизировало активность а2-макроглобулина сыворотки крови до уровня контроля через 3 суток после отмены этанола. Однако, использование фармакологической коррекции с помощью препарата Тиотриазолин оказалось малоэффективным в отношении а1-протеиназного ингибитора так как даже через 7 суток после отмены этанола на фоне применения указанного лекарственного средства данный показатель остается несколько снижен по сравнению с контролем.
Стабилизирующее действие препарата Тиотриазолин на протеолиз возможно обусловлено его способностью предупреждать обратимую и необратимую модификацию белковых молекул, так как, конкурируя за суперок-сидный радикал с цистеиновыми и метиони-новыми фрагментами протеинов биологических мембран, он тем самым предотвращает гибель клеток [7]. Повышение активности эндогенных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ до контрольных значений может быть связано с активацией Тиотриазолином трансляции мРНК на рибосомах, обуславливающей усиление синтеза белка [9, 10].
Таким образом, после отмены этанола препарат Тиотриазолин способен корректировать активность протеолитических ферментов и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга и мозжечке, однако, его использование не приводит к полному восстановлению протеиназо-ингиби-торного баланса в сыворотке крови экспериментальных животных.
Заключение
1. При хронической алкогольной интоксикации в условиях отмены этанола происхо-
дит нарушение баланса активности протеоли-тических ферментов и их эндогенных ингибиторов в ткани головного мозга и в сыворотке крови экспериментальных животных.
2. Тиотриазолин стабилизирует активность трипсиноподобных протеиназ и их эндогенных ингибиторов в ткани больших полушарий головного мозга крыс до уровня контрольных значений через 7 суток после отмены этанола, а в ткани мозжечка через 1 сутки, в то время как дисбаланс активности цистеи-новых протеиназ и их эндогенных ингибиторов устраняется в ткани больших полушарий головного мозга через 3 суток, а в ткани мозжечка через 1 сутки после отмены этанола.
3. Тиотриазолин не восстанавливает протеиназо-ингибиторный баланс сыворотки крови в изучаемые сроки отмены этанола: он стабилизирует общую протеолитическая активность, активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ и а2-макроглобу-лина, однако активность а1-протеиназного ингибитора даже через 7 суток остается достоверно ниже контроля.
Литература
1. Ethanol Induces Cell Death by Activating Caspase-3 in the Rat Cerebral Cortex / J. Y. Han [et al.] // Molecules and Cells. - 2005. - Vol. 20, №2. - P. 189 - 195.
2. Самуилов, В. Д. Программируемая клеточная смерть / В.Д. Самуилов, А.В. Олескин, Е.М. Лагунова // Биохимия. - 2000. - Т. 65, № 8. - С. 1029 - 1046.
3. Ходос, О. А. Трипсиноподобные протеиназы и их эндогенные ингибиторы в больших полушариях головного мозга и мозжечке крыс после хронической алкогольной интоксикации / О. А. Ходос, Л.Г. Гидранович, М.М. Сачек // Достижения фундаментальной, клинической медицины и фармации: материалы 66-й научной сессии сотрудников университета, Витебск, 27 - 28 января 2011 г. / Витебский государственный медицинский университет; ред-кол. : В .П. Дейкало [ и др.]. - Витебск, 2011. - С. 161 -162.
4. Wang, J. The ubiquitin-proteasome system and its role in inflammatory and autoimmune diseases / J. Wang, M.A. Maldonado // Cellular and molecular immunology.
- 2006. - Vol.3, №4. - P. 255 - 261.
5. Nakashima, K. Leucine suppresses myofibrillar proteolysis by down-regulating ubiquitin-proteasome pathway in chick skeletal muscles / K. Nakashima, A. Ishida, M. Yamazaki // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2005. - Vol. 336, №2. - P. 660 - 667.
6. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) испытанию иммуномоделирующего действия фармакологических средств / М.П. Потапнев [ и др.]. - Минск, 1999. - 37 с.
7. Метаболические кардиопротекторы: фармакологические свойства и применение в клинической практике / В.А. Визир [и др.]. - Запорожье, 2006. -36 с.
8. Амосова, Е.Н. Метаболическая терапия повреждений миокарда, обусловленного ишемией. Новый подход к лечению ишемической болезни сердца и сердечной недостаточности / Е.Н. Амосова // Укр. кардиол. журн. - 2000. - № 4.- С. 86-92
9. Влияние тиотриазолина на гистоморфологические изменения нейронов коры и гиппокампа в постин-сультный период / И.Ф. Беленичев [и др.] // Медицина сегодня. [Электронный ресурс]. - 2007. - №5. -Режим доступа: http://novosti.mif-ua.com/archive/ issue-3094/article-3189/ - Дата доступа: 16.07.2010.
10. Результаты клинического применения антиоксидан-
та тиотриазолина в комплексном лечении больных с тяжелой черепно-мозговой травмой / Л. А. Дзяк [и др.] // [Электронный ресурс]. - 2003. - №78. -Режим доступа: http://www.health-ua.com/articles/ 324.html - Дата доступа: 16.07.2010.
11. Буров, Ю.В. Нейрохимия и фармакология алкоголизма/ Ю.В. Буров, Н.Н. Ведерникова. - М.: Медицина, 1985. - 240с.
12. Reduction of Alcohol Dependence in Rats after Carotid Glomectomy / O. N. Serova [et al.] // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. - 2007. - Vol. 144, No. 5. - Р. 650 - 652.
13. Nerve growth factor restores mRNA levels and the expression of neuropeptides in the suprachiasmatic nucleus of rats submitted to chronic ethanol treatment and withdrawal / M. M. Paula-Barbosa [et al.] // Journal of Neurocytology/ - 2001/ - № 30. - Р 195-207.
14. Ieraci, A. Nicotinamide protects against ethanol-induced apoptotic neurodegeneration in the developing mouse
brain / A. Ieraci, D. G. Herrera // PLoS Med. - 2006. -№3. - Р 101.
15. Пархоменко, Ю. М. Характерные метаболические нарушения в тканях крыс, вызванные длительным приемом алкоголя / Ю. М. Пархоменко, Г. В. Дон-ченко, С. Ю. Пилипчук // Укр. бюх1м. журн. - 2007. -Т.79, №3. - С. 61 - 69.
16. Erlanger, B.F. The preparation and properties of two new chromogenic substrates of trypsin / B.F Erlanger, N. Kokowsky, M. Cohen // Arch Biochem. Biophys. -1961. - Vol. 95, № 2. - Р 271-278.
17. Ускоренный метод определения основных ингибиторов протеиназ в плазме крови человека: Метод. Рекомендации. / Хватов В.Б., Белова Т. А. - М., 1981.
- 27 с.
18. Карягина, И.Ю. Использование метода комплексного определения активности трипсиноподобных протеиназ, а^антитрипсина и а2-макроглобулина в гастроэнтерологической клинике / И.Ю. Карягина, РА. Зарембский, М. Д. Балябина // Лабораторное дело.
- 1990. - №2. - С. 10 - 13.
19. Thermostable endogenous inhibitors of cathepsins B and H / JF. Lenney [et al.] // Eur J Biochem. - 1979. -Vol. 101, № 1. - Р 153 - 161.
20. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. - М.: МедиаСфера, 2003. - 312 с.
21. Фадеев, В .В. Представление данных в оригинальных работах и их статистическая обработка / В. В. Фадеев // Проблемы эндокринологии. - 2002. - Т. 48, N 3.
- С. 47 - 48.
Работа выполнена при финансовой поддержке Белорусского республиканского фонда фундаментальных исследований (договор №Б11М-049 от 15.04.2011 г.).
Поступила 04.08.2011 г. Принята в печать 02.09.2011 г.
