CC BY
30
© 12Беленичев И. Ф., 1Павлюк И. В., Абрамов А. В., 12Кучеренко Л. И. УДК 616.89-48-02-091.8
1,2Беленичев И. Ф., 1Павлюк И. В., 1Абрамов А. В., 1,2Кучеренко Л. И.
ВЛИЯНИЕ АНГИОЛИНА НА МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ CA-1 ЗОНЫ ГИППОКАМПА И ПРОЦЕССЫ НЕЙРОАПОПТОЗА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ
ПРИ ЛЕЧЕБНОМ РЕЖИМЕ ВВЕДЕНИЯ 1Запорожский государственный медицинский университет (г. Запорожье) 2НПО «Фарматрон» (г. Запорожье)
Исследования выполнены в рамках темы научно-исследовательской работы кафедры фармацевтической химии Запорожского государственного медицинского университета: «Целенаправленный поиск биологически активных веществ в ряду азаге-тероциклов и создание оригинальных лекарственных средств и фиксированных комбинаций лекарственных препаратов», № регистрации - 0113 и 000802 и темы кафедры фармакологии и медицинской рецептуры ЗГМУ: «Молекулярно-биохимические механизмы формирования митохондриальной дисфункции нейронов головного мозга в условиях острой церебральной ишемии: новые мишени ней-ропротекции», № регистрации 011400797.
Вступление. Ежегодно в Украине от алкоголизма умирает свыше 40 тысяч лиц и насчитывается более чем 900 тысяч хронических алкоголиков, а также еще больше людей, которые достаточно часто употребляют алкогольные напитки [8,9,13]. Интоксикация алкоголем, длящаяся годами, вызывает стойкие морфологические изменения в различных органах [1,3,10,11]. Больным с хронической интоксикацией алкоголем свойственны диффузные изменения, распространенные по всей нервной системе, и очаговые поражения (местный паренхиматозный распад, глиозные рубцы, кровоизлияния, преимущественно расположенные в определенных местах, главным образом под эпендимой на дне III желудочка, в сильвиевом водопроводе); отмечаются также изменения в периферических нервах [3,4,10,11].
Поиск новых методов фармакокоррекции мор-фо-функциональных изменений нейро-глиальных структур головного мозга и восстановление межнейронных взаимодействий является актуальным и необходимым вопросом современной нейрофар-макологии. К сожалению, базовые ноотропы и ней-рометаболические препараты (пирацетам, милдро-нат, цитофлафин, соли янтарной кислоты) не всегда оказывают ожидаемый нейропротективный эффект [3,4,12]. Обнадеживающие результаты показали нейротрофические церебропротекторы (церебро-курин, кортексин, церебролизин) и нейрометаболи-ческий церебропротектор тиоцетам (в состав кото-
podium@bigmir.net
рого входят пирацетам с тиотриазолином), которые продемонстрировали хорошие результаты при моделировании хронической алкогольной интоксикации у крыс [1,2,3,11]. Сотрудниками НПО «Фарматрон» под руководством профессора И. А. Мазура путем химической модификации молекулы 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацета (тиотриазолина) разработан новый оригинальный нейро-и кардиопро-тектор Ангиолини ((Б)-2,6-диаминогексановой кислоты 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат). Ан-гиолин обладает выраженным влиянием на эндотелий сосудов мозга и миокарда, нейропротективны-ми, кардиопротективными, метаболитотропными, антиоксидантными, энерготропными свойствами [6,7].
Исходя из выше изложенного, целью настоящей работы явилось изучение нейропротективного действия Ангиолина при хронической алкогольной интоксикации по влиянию на морфо-функциональ-ные показатели нейронов СА, зоны гиппокампа.
Объект и методы исследования. Исследования проводились на 70 белых беспородных крысах-самцах массой 160-180 г., полученных из вивария Института фармакологии и токсикологии АМН Украины. Все манипуляции были проведены согласно положению об использовании животных в биомедицинских опытах (Страсбург, 1986 г., с изменениями, внесенными в 1998 г.). Хроническую алкогольную интоксикацию вызывали ежедневным внутрижелу-дочным введением первые 10 дней - 15% раствора этанола в дозе 4 г/кг, следующие 10 дней - 15% раствора этанола в дозе 6 г/кг, и последующие 10 дней крысам вводили 25% раствор этанола в дозе 4 г/кг. С 30 суток прекращали алкоголизацию, проводили экспериментальную терапию изучаемыми препаратами и продолжали наблюдение в течение 14 дней. Исследуемые препараты вводили 1 раз в сутки в течение 14 суток после 30-суточной алкоголизации внутрижелудочно в виде суспензии, стабилизированной Твином-80 с помощью металлического зонда: Ангиолин в дозе 100 мг/кг, Мил-дронат - 250 мг/кг [3]. В этой серии эксперимента было четыре группы животных:
1) интактные, получали физиологический раствор с Твином-80 (10 крыс);
2) контрольные - нелеченные с хронической алкогольной интоксикацией (ХАИ), получали физиологический раствор с Твином-80 (20 крыс);
3) животные с ХАИ, получавшие «Ангиолин» (20 крыс);
4) животные с ХАИ, получавшие Милдронат (20 крыс).
В работе использовались: таблетки Ангиолин 200 мг производства ПАО «Киевмедпрепа-рат» и Милдронат в капсулах по 250 мг производства АО «Гриндекс» (Латвия). По окончании эксперимента животные наркотизировались тиопентал натрием (40 мг/кг) и у них извлекался головной мозг, который помещали на сутки в фиксатор Буэна и после стандартной гистологической проводки ткань заключали в парафин. Для изучения морфологии нейронов на ротационном микротоме изготавливали срезы CA-1 зоны гиппокампа толщиной 5 микрон. Срезы гиппокампа депарафинировали и окрашивали для определения нуклеиновых кислот галлоцианин-хромовыми квасцами по Эйнар-сону [5]. Морфометрические исследования проводили на микроскопе Axioskop (Ziess, Германия), увеличение х40. Изображения нейронов в области зоны СА-1 гиппокампа, получаемые на микроскопе, с помощью высокочувствительной видеокамеры COHU-4922 (COCHU Inc., США) вводили в компьютерную программно-аппаратную систему цифрового анализа изображения VIDAS. Анализ изображений проводили в полуавтоматическом режиме. Сравнение групп проводили при помощи критерия U-Уитни-Манна. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета лицензионной программы «STATISTICA for Windows 6.1» (Stat Soft Inc., № AXX R712D833214SAN5), а также «SPSS 16.0», «Microsoft Excel 2003».
Результаты исследования и их обсуждение. Хроническая интоксикация алкоголем в течении 30 суток приводит к стойким морфологическим изменениям в СА1-зоне гиппокампа головного мозга экспериментальных животных. Токсическое влияние этилового спирта на нейроны СА-1 зоны гиппокам-па ярко проявилось в контрольной группе, которая получала только этанол. Так, плотность нейронов в этой группе снизилась на 44,2% за время насильственной алкоголизации по сравнению с группой интактных животных, на фоне уменьшения плотности нейронов на 31% и концентрации РНК в нейронах на 40,7% (табл. 1).
После 14-дневной терапии Милдронатом плотность нейронов составила на 18% больше по отношению к контролю, а после терапии Ангиолином - на 49,3% больше по сравнению с контролем. На рисунке представлены фотографии нейронов СА-1 зоны гиппокампа крыс с хронической алкогольной интоксикацией и последующим 14-дневным лечением.
Проводимая экспериментальная терапия оказывала положительное влияние на плотность нейронов СА1-зоны гиппокампа экспериментальных
Таблица 1. Влияние Ангиолина и Милдроната на плотность нейронов, площади тел нейронов, содержание РНК в зоне СА-1 гиппокампа крыс с 30-дневной алкогольной интоксикацией и последующим 14-дневным лечением
Исследуемые показатели Плотность нейронов (нейрон/мм2) Площадь нейронов (мкм2) Содержание РНК (Е ) v оп'
Интакт (n = 10) 1442,5 ± 132,1 161,6 ± 14,2 15,18 ± 1,1
Контроль (хроническая алкоголизация) (n = 10) 804 ± 80,9 111,0 ± 7,2 9 ± 0,7
Милдронат, 250мг/кг (n = 10) 951,1 ± 77,2* (+18%) 120 ± 11,7 (+8%) 9,87 ± 0,87 (+9%)
Ангиолин, 100 мг/кг (n = 10) 1201,8 ± 105,5*1 (+49,3%) 151,7 ± 15,1м (+36%) 14,82 ± 1,7* (+64%)
Примечание: * - р < 0,05 относительно контроля; 1 - р < 0,05 относительно милдроната.
животных. Так, Милдронат улучшил этот показатель только на 8% по сравнению с контролем, а Ангиолин - на 36% выше по отношению к контролю. Также повысилось содержание РНК в группе Милдроната на 9,6%, в группе Ангиолина - на 62% по отношению к контролю. Обнаруженные изменения, по нашему мнению, отражают характер повреждения нейронов в условиях хронической алкогольной интоксикации, выражавшийся в значительном уменьшении структурных и пластических компонентов клеток [12]. Курсовое назначение Ангиолина демонстрировало более выраженное нейропротективное действие, чем у Милдроната, которое характеризовалось восстановлением плотности и площади тел нейронов по сравнению с интактной группой животных, а также значительным восстановлением содержания РНК в клетках. Таким образом, по результатам морфо-гистохимического анализа нейронов СА-1 зоны гип-покампа Ангиолин демонстрировал положительные эффекты на репаративные процессы в нейроцитах, обеспечивая тем самым нейропротекцию в условиях хронической алкогольной интоксикации.
Изменение глиальных структур под влиянием алкоголя проявилось в уменьшении в группе нелечен-ных животных (контроль) плотности глиальных клеток на 32% на фоне уменьшения их площади на 28% и снижения концентрации РНК на 36,5% по сравнению с группой интакта (табл. 2). Милдронат повысил этот показатель на 3,3%, а Ангиолин - на 38,7% по отношению к контрольной группе.
Исследуемые препараты также увеличили площадь глиальных клеток: в группе Милдроната - на 6,5%, в группе Ангиолина - на 35,7% по отношению к группе контроля. Также повысилось содержание РНК в ядрах глиальных клеток: в группе Милдроната - на 3,36%, а в группе Ангиолина -
Таблица 2.
Влияние Ангиолина и Милдроната на плотность глии, площадь глии, содержание РНК в зоне СА-1 гиппокампа крыс с 30-дневной алкогольной интоксикацией и последующим 14-дневным лечением
Исследуемые показатели Плотность глиальных клеток (нейрон/ мм2) Площадь глиальных клеток (мкм2) Содержание РНК (Е ) * оп'
Интакт (п = 10) 450,3 ± 51,7 25,1 ± 3,3 6,1 ± 0,55
Контроль (хроническая алкоголизация) (п = 10) 303,9 ± 41,2 18,2 ± 2,34 3,87 ± 0,43
Милдронат, 250мг/кг (п = 10) 314 ± 85,9 (+3,6%) 19,7 ± 2,4 (+8%) 4,00 ± 0,80 (+3%)
Ангиолин, 100 мг/кг (п = 10) 421,8 ± 31,3*1 (+38,7%) 24,7 ± 3,1* (+36%) 6,23 ± 0,87* (+61%)
Рис. Картина нейродегенерации после 30-дневной алкогольной интоксикации
и последующего 14-дневного лечения (применялась окраска галоцианин-хромовыми квасцами по Эйнарсону, увеличение х40). А — СА-1 зона гиппокампа у животных группы интакта; В — СА-1 зона гиппокампа у животных контрольной группы;
С — СА-1 зона гиппокампа у животных группы Ангиолина; й — СА-1 зона гиппокампа у животных группы Милдро-ната.
Примечание: *- р < 0,05 относительно контроля; 1 - р < 0,05 относительно милдроната.
на 61,0% по отношению к группе контроля. Накопление в нейрональной клетке продуктов окислительной модификации липидов, белков, нуклеиновых кислот в условиях хронической алкогольной интоксикации, как было отмечено нами в предыдущих работах, может приводить к токсической и апоптической гибели определенной популяции нервных клеток [2,3,11]. Анализ плотности деструктивно измененных и апоптических нейронов в СА-1 зоне гиппокампа показал, что хроническая алкогольная интоксикация сопровождалась увеличением плотности поврежденных клеток на 132,0% по отношению к интакту (табл. 3).
Введение препарата Милдроната приводило к значительному снижению плотности деструктивно измененных нейроцитов (на 7,6%), не достигая при этом уровня интактной группы (78,3 ± 12,11 на 1 мм2). Терапия Ангиолином привела к значительному снижению количества апоптических и деструктивно измененных нейронов - на 38,2% меньше, чем у контрольной группы. Важно отметить, что наличие деструктивно измененных нейронов у интактной группы животных объясняется естественной гибелью клеток. В условиях хронической алкогольной интоксикации такие клетки в первую очередь подвергаются апоптозу [1,3,10]. Очевидно, что Ангиолин оказывал нейропротективное действие главным образом на функционально полноценные нейроны, упреждая в них деструктивные процессы.
После терапии Ангиолином и Милдронатом также снизилась доля апоптотических клеток: в группе Милдроната - на 14,1%, а в группе Ангио-лина - на 55,4% по отношению к группе контроля, где этот показатель составил 19,8 ± 2,21, в то время как в группе интакта доля апоптотических клеток
Таблица 3.
Влияние Ангиолина и Милдроната
на плотность апоптических и деструктивно измененных клеток в зоне СА-1 гиппокампа головного мозга крыс с 30-дневной алкогольной
интоксикацией и последующим 14-дневным лечением
составила 4,2 ± 0,80. Эти данные свидетельствуют о снижении антиапоптической защиты и активации процессов некроза и апоптоза. Нейропротектив-ные свойства Ангиолина обусловлены превращением входящего в структуру молекулы 1_-лизина в пипеколиевую кислоту, которая усиливает аффинность ГАМК-бензодиазепинового рецепторно-го комплекса, за счет чего снижаются проявления глутаматной эксайтотоксичности и может уменьшаться гибель нейронов [3]. Ангиолин проявляет
выраженные антиоксидантные свойства, активирует глутатионовое звено тиол-дисульфидной системы, повышает активность глутатионпероксида-зы и глутатионтрансферазы, снижает образование активных форм кислорода, снижает накопление маркеров оксидативного и нитрозирующего стрессов [3]. Таким образом, Ангиолин оказывает выраженное нейропротективное и антиапоптическое действие в условиях хронической алкогольной интоксикации, по силе превышающее аналогичное действие Милдроната.
Выводы
1. При формировании хронической алкогольной интоксикации у крыс в течение 30 дней в группе контроля отмечено уменьшение плотности, площади и содержания РНК в нейронах и глиальных клетках СА-1 зоны гиппокампа головного мозга, а также увеличение плотности и доли апоптотически измененных клеток.
2. Проведенная после 30-дневной алкоголизации 14-суточная терапия Ангиолином (100 мг/кг, внутрижелудочно) оказала достоверное положительное влияние на площадь и плотность как нейронов, так и глиальных клеток СА-1 зоны гиппокампа, а также на содержание в них РНК, и значительно уменьшила процессы апоптоза.
3. По силе нейропротективного и антиапоптиче-ского действия Ангиолин достоверно превосходит референс-препарат Милдронат (250 мг/кг, внутрижелудочно) по всем изучаемым показателям.
4. Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием для включения Ангио-лина в традиционную схему лечения алкоголизма.
Перспективы дальнейших исследований
В дальнейших исследованиях планируется продолжить изучение нейропротективного действия Ангиолина при хронической, а также острой, алкогольной интоксикации.
Исследуемые показатели Плотность апоптических клеток на 1 мм2 Доля апоптических клеток, %
Интакт (п = 10) 78,3 ± 8,11 4,2 ± 0,80
Контроль (хроническая алкоголизация) (п = 10) 181,6 ± 21,0 19,8 ± 2,21
Милдронат, 250мг/кг (п = 10) 167,7 ± 15,1 (-7%) 17,0 ± 2,12 (-14%)
Ангиолин, 100 мг/кг (п = 10) 112,2 ± 12,33* (-38%) 8,83 ± 0,92* (-55%)
Примечание: * - р < 0,05 относительно контроля; 1 - р < 0,05 относительно милдроната.
Литература
1. Беленичев И. Ф. Снижение апоптической гибели нейронов СА1 зоны гиппокампа крыс в условиях пренатальной хрониче-
ской алкоголизации и на фоне введения цереброкурина и тиоцетама / И. Ф. Беленичев, А. А. Егоров, О. В. Спахи // Нейро-науки: теоретические и клинические аспекты. - 2012. - Т. 8, № 2. - С. 145-151.
2. Беленичев И. Ф. Нитрозирующий стресс в головном мозге пренатально алкоголизированных крыс: эффекты Тиоцетама /
И. Ф. Беленичев, Л. И. Кучеренко, Н. В. Бухтиярова // Патология. - 2012. - № 3 (26). - С. 124.
3. Беленичев И. Ф. Нейропротекция и нейропластичность / И. Ф. Беленичев, В. И. Черний, С. В. Павлов [и др.]. - Киев: Логос,
2015. - 512 с.
4. Бонитенко Е. Ю. Моделирование токсических ком, вызванных веществами депримирующего действия. Труды института
токсикологии, посвященные 75-летию со дня основания / Под. ред. С. П. Нечипоренко, СПб. - 2010. - С. 16-30.
5. Доклиническое изучение специфической активности потенциальных нейропротективных препаратов / И. С. Чекман,
И. Ф. Беленичев, Ю. М. Колесник. - Методические рекомендации ГФЦ МЗ Украины, Киев. - 2010. - 81 с.
6. Патент 2370492 РФ, МПК C 07 D 413/00 (2006.01). Лизиний 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат, проявляющий нейропро-
тективное, ноотропное, кардиопротективное, эндотелиопротективное, противоишемическое, антиоксидантное, противовоспалительное противогипоксическое действие и обладающий низкой токсичностью / Мазур И. А., Беленичев И. Ф., Колесник Ю. М., Абрамов А. В., Кучеренко Л. И., Волошин Н. А., Чекман И. С., Мамчур В. И., Горчакова Н. А., Георгиевский Г.В., Грошовый Т. А. (UA); заявитель и патентообладатель ООО НПО «Фарматрон». - № 2007121014; заявл. 04.06.07; опубл. 20.10.09, Бюл. 29.
7. Патент 86668 УкраУна, МПК C 07 D 249/08 (2009.01), A 61 K31/4196, A 61 P 9/00, A 61 P 9/10 (2009.01), A 61 P 25/28 (2009.01).
Лiзiнiй 3-метил-1,2,4-триазолш-5-тюацетат / Мазур I. А., Белешчев I. Ф., Колесшк Ю. М., Абрамов А. В., Кучеренко Л. I., Волошин М. А., Чекман I. С., Мамчур В. Й., Горчакова Н. О., Георпевський Г. В., Грошовий Т. А.; заявник i патентовласник ТОВНВО «Фарматрон». - № а200705865; заявл. 25.05.07; опубл. 12.05.09, Бюл. 9.
8. Осыченко А. С. Особенности статистических данных отравлений алкоголем / А. С. Осыченко, А. Д. Донника // Adv. curr. nat.
sci. - 2011. - № 8. - С. 128-130.
9. Alcohol use and addiction services in Ukraine / A. V. Samokhvalov, V. S. Pidkorytov, I. V. Linsky [et al.] // International Psychiatry. -
2009. - Vol. 6, № 1. - P. 5-7.
10. Ammendola A. Gender and peripheral neuropathy in chronic alcoholism: A clinical-electro neurographic study / A. Ammendola, D. Gemini, S. lannacone // Alcohol and Alcoholism. - 2010. - Vol. 35. - P. 368-371.
11. Belenichev I. F. Pharmacological modulation of apoptosis signaling in neurons of CA1-zone of hippocampus of rats with chronic alcohol intoxication / I. F Belenichev, A. V. Abramov // Innovation Journal of Medical and Heath Science. - 2011. - Vol. 1, № 1. -P. 12-16.
12. Fulton T. Crews. Mechanisms of Neurodegeneration and Regeneration in Alcoholism / T. Crews Fulton, Kim Nixon // Alcohol and Alcoholism. - 2010. - Vol. 44, № 2. - Р. 115-127.
13. Global status report on alcohol and health - 2015 ed. / World Health Organization, 2015. - 354 р.
УДК 616.89-48-02-091.8
ВПЛИВ АНГЮЛ1НА НА МОРФО-ФУНКЦЮНАЛЬН1 ПОКАЗНИКИ CA-1 ЗОНИ Г1ПОКАМПУ I ПРО-ЦЕСИ НЕЙРОАПОПТОЗА ПРИ МОДЕЛЮВАННI ХРОНННО'Т АЛКОГОЛЬНО!' ШТОКСИКАЦП ПРИ Л1КУВАЛЬНОМУ РЕЖИМ1 ВВЕДЕННЯ
Белешчев I. Ф., Павлюк I. В., Абрамов А. В., Кучеренко Л. I.
Резюме. При формуванн хроычно! алкогольно! Ытоксикаци у щурiв протягом 30 дыв у rpyni контролю вщзначено зменшення щшьност^ пло1^ та вмюту РНК в нейронах i глiальних клггинах СА-1 зони ппокампу головного мозку, а також збшьшення щтьност i частки апоптотично змiнених клiтин. Проведена пюля 30-денно! алкоголiзацiI 14-добова тератя Ангiолiном (100 мг/кг, внутpiшныошлунково) надала достовipний позитивний вплив на площу i щiлынiсты як нейpонiв, так i глiалыних клiтин, а також на вмют у них РНК, i значно зменшила процеси апоптозу.
За силою нейропротективно! та антиапоптично! дiI Ангiолiн достовipно перевершуе референс-препарат Мтдронат (250 мг/кг, внутpiшныошлунково) за вЫма дослiджуваними показниками.
Отpиманi резулытати е експерименталыним обфунтуванням для включення Ангiолiна в тpадицiйну схему л^вання алкоголiзму.
Ключовi слова: хpонiчна алкогольна штоксика^я, нейpопpотекцiя, нейроапоптоз, Ангiолiн, Мтдронат. УДК 616.89-48-02-091.8
ВЛИЯНИЕ АНГИОЛИНА НА МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ CA-1 ЗОНЫ ГИППОКАМПА И ПРОЦЕССЫ НЕЙРОАПОПТОЗА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ПРИ ЛЕЧЕБНОМ РЕЖИМЕ ВВЕДЕНИЯ
Беленичев И. Ф., Павлюк И. В., Абрамов А. В., Кучеренко Л. И.
Резюме. При формировании хронической алкогольной интоксикации у крыс в течение 30 дней в группе контроля отмечено уменьшение плотности, площади и содержания РНК в нейронах и глиалыных клетках СА-1 зоны гиппокампа головного мозга, а также увеличение плотности и доли апоптотически измененных клеток. Проведенная после 30-дневной алкоголизации 14-суточная терапия Ангиолином (100 мг/кг внутри-желудочно) оказала достоверное положительное влияние на площадь и плотность как нейронов, так и гли-альных клеток, а также на содержание в них РНК, и значительно уменьшила процессы апоптоза.
По силе нейропротективного и антиапоптического действия Ангиолин достоверно превосходит рефе-ренс-препарат Милдронат (250 мг/кг, внутрижелудочно) по всем изучаемым показателям.
Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием для включения Ангиолина в традиционную схему лечения алкоголизма.
Ключевые слова: хроническая алкогольная интоксикация, нейропротекция, нейроапоптоз, Ангиолин, Милдронат.
UDC 616.89-48-02-091.8
THE INFLUENCE OF ANGIOLIN ON THE MORPHOLOGICAL AND FUNCTIONAL PARAMETERS OF CA1 REGION OF THE HIPPOCAMPUS AND ON THE NEUROAPOPTOSIS PROCESSES IN EXPERIMENTAL CHRONIC ALCOHOL INTOXICATION UNDER THERAPEUTIC MODE OF ADMINISTRATION Belenichev I. F., Pavlyuk I. V., Abramov A. V., Kucherenko L. I.
Abstract. Nowadays the urgent problem of pharmacology is the development of new methods of neuroprotection in chronic alcoholism. The paper deals with neuroprotective activity of new original neuroprotector and cardio-protector with endotelioprotective effect - Angiolin ((S)-2,6-diaminohexanoic acid 3-methyl-1,2,4-triazolyl-5-thio-acetate). Experiments have been performed on 70 white outbred male rats weighing 160-180 g, which received intragastric ethanol daily under the scheme: the first 10 days - 15% solution at a dose of 4 g/kg, following 10 days -15% solution at a dose of 6 g/kg, and next 10 days the rats received 25% solution in a dose of 4 g/kg. In our investigations Angiolin tablets, 200 mg, producted by JSC «Kievmedpreparat», and Mildronat capsules, 250 mg, producted by JSC «Grindeks» (Latvia) were used. At the end of the experiment the animals were anesthetized with sodium thiopental (40 mg/kg) and the brain was removed, which was placed into Bouin's fluid for one day and after standard histological procedure tissue was embedded in paraffin. To examine the morphology of neurons 5 microns microscopic sections of CA1 region of the hippocampus were prepared on rotary microtome. Hippocampus microscopic sections were de-embedded and dyed for determining the nucleic acids by Einarson gallocyanin-chrome alum. The morphometric study was carried out on Axioskop microscope (Ziess, Germany), 404magnification. Mi-
croscope images of neurons in CA1 region of the hippocampus obtained with the help of highly sensitive video camera COHU-4922 (COCHU Inc., USA) were input into computer hardware and software system of digital image analysis VIDAS. Image analysis was carried out in semi-automatic mode. Comparison of groups was performed with the Mann-Whitney U test. Under the formation of chronic alcohol intoxication during 30 days in rats in the untreated (control) group decrease of density, area and contents of RNA in neurons and glial cells of the CA-1 region of the hippocampus was noted, as well as increase of the density and the proportion of apoptotically changed cells. Angiolin 14-days therapy (100 mg/kg, intragastric) performed after 30 days alcoholization had a significant positive effect on the area and density of both the neurons and glial cells, as well as on the RNA content in them, and significantly reduced the apoptotic processes.
Angiolin neuroprotective properties are conditioned by the conversion of L-lysine, which is the part of the molecule structure, into pipecolic acid which potentizes the affinity of GABA- benzodiazepine receptor complex that results in the decrease of glutamate excitotoxicity and reduction of neuronal death.
Neuroprotective and antiapoptotic effect of Angiolin is higher in all studied parameters as compared with reference preparation Mildronate (250 mg/kg, intragastric adminictration).
The results received are experimental ground for the inclusion of Angiolin in the traditional scheme of alcoholism treatment.
Keywords: chronic alcohol intoxication, neuroprotection, neuroapoptosis, Angiolin, Mildronate.
Рецензент - проф. Дев'яткна Т. О.
Стаття надшшла 03.02.2016 року
